柴胡疏肝散对慢性应激抑郁大鼠模型海马组织代谢通路的调控

摘要

目的：考察中药复方柴胡疏肝散的抗抑郁作用，阐述抑郁症形成机理及复方柴胡疏肝散起效机制。rn 方法：运用经典的慢性应激模型研究中药复方柴胡疏肝散的抗抑郁效应。首次引入代谢组学研究方法，应用超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF MS）对海马组织样品进行分析，运用多元统计分析方法对内源性产物的代谢轮廓进行描述，考察柴胡疏肝散对慢性应激所致抑郁大鼠海马组织中内源性代谢产物轮廓的变化：并寻找潜在的生物标志物。采用蛋白免疫印迹分析（Western-blot），考察柴胡疏肝散对慢性应激模型大鼠大脑海马组织大脑神经营养因子（BDNF）的表达及相关的MEK-ERK-CREB 信号转导通路调控[cAMP 反应结合蛋白（CREB）、胞外信号调节激酶（ERK）以及磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK）的表达]的影响，进一步探讨柴胡疏肝散的抗抑郁作用机制。rn 结果:中药复方柴胡疏肝散对慢性不可预见性应激所致抑郁大鼠行为学指标有改善趋势。通过模式识别，病理模型组与正常组海马组织中内源性产物代谢轮廓显著不同，而柴胡疏肝散复方给药组海马组织中内源性产物代谢轮廓与病理模型组显著区分，而与正常组很接近。对代谢轮廓进行加载处理后，初步鉴定了16 个代谢产物，它们分别是肌酸、烟酰氨、次黄嘌呤、苯丙氨酸、吲哚丙烯酸、9Z-十六烯酰丙三醇、二十二烯酰丙三醇、肉豆蔻酸、3-羟基十六烷酸、1-十六酰基甘油-3-磷酸胆碱、葡萄糖醛酸-6,3-内酯、N-乙酰基天冬氨酸、肌苷、1-十五酰基-甘油-3 磷酸胆碱、1-十六酰基-甘油-3 磷酸胆碱、二十二碳六烯酸和辛酸。它们对各组代谢轮廓的区分起重要作用，这些潜在的生物标志物分别与能量代谢、神经递质的合成、色氨酸代谢、脂肪酸代谢等代谢途径相关。应激模型组大鼠海马组织BDNF、ERK1/2、pERK1/2 表达水平与对照组相比均明显降低，CSGS 给药后与模型组相比能显著上调应激模型组大鼠海马组织BDNF、ERK1/2、pERK1（44kD）表达水平。rn 结论：复方柴胡疏肝散对慢性应激所致大鼠抑郁具有干预作用，且该作用与调节能量代谢、神经递质的合成、色氨酸代谢、脂肪酸代谢等等代谢途径的异常相关。CSGS 临床的抗抑郁效应可能与其神经营养作用相关，同时，调节MEK-ERK-CREB 信号转导通路的失调有可能是CSGS 抗抑郁效应神经生物学机制的重要组成部分之一。研究表明将代谢组学方法应用于中药复方的研究具有科学性与可行性。