甲胎蛋白AFP的原核表达、纯化及鉴定

摘要

为实现甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）在原核系统中高效表达,在GenBank上查找AFP全基因序列（GenBank登录号:NM001134.2）,分析AFP基因序列及大肠杆菌密码子偏好性优化,化学合成AFP全基因。以pET28a（+）作为原核表达载体并转化至BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达。利用镍柱纯化AFP重组蛋白,并对纯化的AFP重组蛋白进行SDS-PAGE纯度分析、BCA蛋白浓度测定、Western-blot特异性鉴定。结果表明:AFP重组质粒经过Nde I、Xhol I双酶切鉴定,在1 875 bp处出现特异性条带,与预期相符合;当诱导条件为30℃,0.1 m M的IPTG,诱导8 h,AFP重组蛋白可大量表达; BCA法测得AFP重组蛋白浓度达0.923 9 mg/m L;纯化后的AFP重组蛋白与市售的AFP单抗进行Western blot鉴定,结果显示在75 k D处有明显的蛋白印迹,pET28a（+）/BL21（DE3）空白组无条带,表明AFP重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,且经Ni柱纯化后具有良好的特异性。研究实现了AFP重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续AFP的检测、以AFP为分子靶点的抗癌药物筛选奠定了基础。