黄粉甲抗冻蛋白AFP84a原核表达条件的优化和纯化

摘要

为纯化黄粉甲抗冻蛋白AFP84a,对已构建的重组大肠埃希菌TBI诱导表达,对诱导温度、初始菌浓度、IPTG浓度及诱导时间等表达条件进行优化后,纯化该重组蛋白.通过分析比较,建立了目的蛋白表达的最优条件:温度25℃,初始菌OD600=0.6;IPTG终浓度0.5 mm01/L,时间8 h.SDS-PAGE及Bandscan4.3软件分析表明,融合蛋白含量超过总可溶蛋白的40%.融合蛋白经Amylose柱亲和纯化,Factor Xa酶切,电泳显示获得的目的蛋白呈单一条带.本研究结果为进一步对抗冻蛋白的性质和应用研究提供了有用的实验材料.