斑点叉尾鮰源鲁氏耶尔森氏菌p1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

摘要

根据GenBank中公布的鲁氏耶尔森氏菌p1基因(yrp1)序列设计特异性引物,采用PCR方法扩增出分离自患病斑点叉尾鮰的鲁氏耶尔森氏菌的p1基因,将其克隆到pMD19-T载体上,通过Amp抗性筛选、菌落PCR和单/双酶切鉴定之后送大连宝生物公司测序,然后亚克隆至pET-32a(+)载体,转化BL21(DE3)表达宿主菌,IPTG诱导并对表达条件进行优化。结果显示:重组表达质粒经IPTG诱导后,表达出约70kDa的融合蛋白,主要以包涵体的形式大量存在于沉淀中。最佳的诱导条件为IPTG浓度0.8mmol/L,37℃诱导表达4h。