摘要：目的：隐匿管状线虫作为一种人兽共患寄生虫病的病原体,其对实验动物的感染危害严重.本研究的目的是为了对无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)和清洁级实验动物隐匿管状线虫进行分子鉴定和感染调查,为国家标准的修订提供参考依据. 方法：4649只SPF实验动物(包括：小型猪25只,猴5只,兔40只,地鼠296只,豚鼠186只,大鼠438只,小鼠3629只,鸡25只,鸭5只)和1304只清洁级实验动物(包括：兔3只,地鼠26只,豚鼠147只,大鼠229只,小鼠897只)来自全国不同的厂家.应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,对实验动物的隐匿管状线虫进行筛查.应用多重PCR和测序技术,鉴定分离自实验动物的隐匿管状线虫cox1(细胞色素C过氧化物酶亚基1)、cytb(细胞色素b)、nad1(NADH脱氢酶亚单位1)、nad5(NADH脱氢酶亚单位5)、rrnL(核糖体RNA大亚基)和28S rRNA(28S核糖体RNA)基因,从分子水平上确证隐匿管状线虫感染. 结果：应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,从实验动物中检出数量众多隐匿管状线虫的虫卵、幼虫和成虫.根据隐匿管状线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种.应用多重PCR测序技术,能从分离自实验动物的单个隐匿管状线虫的虫卵、幼虫和成虫中鉴定出cox1、cytb、nad1、nad5、rrnL和28S rRNA基因,与其他不同种属的寄生虫无交叉反应.在研究中,通过对确定的阳性样本测序保证了引物的特异性,探究了隐匿管状线虫分离株间核苷酸的可变性,排除了可能由于鼠管状线虫和四翼无刺线虫造成的假阳性结果.应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,从4649份SPF实验动物和1304份清洁级实验动物样本中分别检出隐匿管状线虫阳性样本96份和35份.应用多重PCR和测序技术,鉴定证明这些阳性样本中确实含有隐匿管状线虫特异性的DNA.测序结果显示,自不同SPF实验动物和清洁级实验动物分离获得的隐匿管状线虫的cox1、cytb、nad1、nad5、rrnL和28s rRNA部分基因序列核苷酸相似性达100％.SPF实验动物和清洁级实验动物的隐匿管状线虫感染率分别为2.1％和2.7％. 结论：应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术联合多重PCR测序技术能够快速精准检测鉴定出隐匿管状线虫.实验动物常会感染一些人兽共患寄生虫,隐匿管状线虫的人兽共患本质可以视作为公共卫生的一个预警.因此,良好的实验动物质量控制对保护人类身体健康和保障人民用药安全具有重要作用.本研究首次对中国SPF和清洁级的实验动物隐匿管状线虫进行了分子鉴定和感染调查.
