重组钙网蛋白原核表达条件优化及蛋白纯化

摘要

目的:构建重组钙网蛋白(CRT)原核表达质粒并优化其在大肠杆菌中表达的条件.方法:采用RT-PCR从总RNAs中克隆小鼠CRT的cDNA并构建原核表达重组质粒(pET15b-CRT).将构建成功的质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,检测在不同温度,不同诱导时间及不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)条件下重组CRT的表达水平.结果:成功构建重组CRT原核表达载体;诱导重组CRT的最佳条件是不加IPTG在30℃培养20 h,此条件下重组蛋白表达水平比加入IPTG诱导高大约6.29倍;经过镍柱纯化后的CRT重组蛋白具有良好的抗原性,可被特异性抗体识别.结论:成功在大肠杆菌内表达重组CRT并明确了其最佳的表达条件,这种方法的建立为后续CRT功能研究奠定了一定的基础.