钙网蛋白

摘要： 机体免疫系统通过识别自身组织或细胞释放的危险信号做出免疫应答。损伤相关分子模式(DAMPs)是受损组织或死亡细胞释放的内源性分子,即危险信号,与模式识别受体(PRRs)结合后,激活免疫应答,诱导炎症反应。除感染、损伤外,活细胞在伤害应激、代谢失衡等情况下也能主动释放DAMPs。最近研究发现,DAMPs在急性损伤后的组织修复中发挥重要作用。本文将对已知DAMPs的分类及其在组织修复中的应用进行简要综述。

摘要： 目的:探究3个月的中等强度有氧运动对APP/PS1小鼠海马Aβ病理及内质网应激-细胞自噬偶联的影响。方法:将3月龄雄性野生型小鼠和APP/PS1转基因小鼠分为野生型对照组(WT-Sed)、野生型运动组(WT-Exe)、APP/PS1对照组(APP/PS1-Sed)和APP/PS1运动组(APP/PS1-Exe)。APP/PS1-Exe组和WT-Exe组小鼠进行为期3个月的有氧跑台运动干预。运动干预结束后,采用免疫组织化学检测海马Aβ斑块、APP与GRP78共标、CRT与LC3共标;Simple Western、Western blotting检测海马PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、LC3、P62和CRT的蛋白表达水平;Real-time PCR检测海马BECN1、ATG5、ATG7和ATG12的mRNA水平。结果:与WT-Sed组相比,APP/PS1-Sed组小鼠海马Aβ斑块水平、APP/GRP78共定位水平以及APP和GRP78的平均荧光强度显著增加;p-PERK、p-eIF2α和ATF4的蛋白水平显著升高;BECN1和ATG7的mRNA水平显著降低,ATG12的mRNA水平、LC3Ⅱ和P62的蛋白水平显著升高;CRT的mRNA、蛋白水平以及平均荧光强度显著降低,LC3的平均荧光强度显著增加。与APP/PS1-Sed组相比,APP/PS1-Exe组小鼠海马Aβ斑块水平、APP/GRP78共定位水平、GRP78的平均荧光强度显著降低;p-PERK、p-eIF2α、ATF4的蛋白水平显著降低;ATG12的mRNA水平显著升高,P62的蛋白水平显著降低;CRT的蛋白水平和平均荧光强度显著增加。结论:跑台运动可以减少APP在小鼠内质网中积累,缓解内质网应激并抑制PERK/eIF2α过度激活,进而提高自噬活性并上调CRT介导的内质网应激-细胞自噬偶联,从而有益于减少AD脑内错误折叠蛋白质的生成和聚集。

摘要： 目的探究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中钙网蛋白(Calreticulin)、牛痘相关激酶1(VRK1)、F框/WD40域蛋白7(Fbxw7)的表达及诊断价值。方法选取2019年3月到2021年3月在秦皇岛第一医院病理科保存60例DLBCL组织以及瘤旁组织标本为DLBCL组,选取同期保存的正常的淋巴组织为正常组。采用荧光定量RT-PCR检测Calreticulin、Fbxw7,免疫组织化学法检测组织中VRK1表达。结果弥漫大B细胞淋巴瘤组织Calreticulin、VRK1表达高于瘤旁组织和正常组织,Fbxw7表达低于瘤旁组织和正常组织(P2、LDH升高、有淋巴结转移者Calreticulin、VRK1的表达量高于无淋巴结转移、结外病灶个数≤2、LDH正常者;而Fbxw7则相反(P<0.05)。ROC分析Calreticulin、VRK1、Fbxw7预测弥漫大B细胞淋巴瘤的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.650、0.659、0.711、0.731。结论Calreticulin、VRK1在弥漫大B细胞淋巴瘤组织高表达,Fbxw7在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中低表达,三者联合对弥漫大B细胞淋巴瘤患者的诊断价值显著。

摘要： 钙网蛋白(calreticulin,CRT)在真核生物中广泛表达,是重要的分子伴侣和钙离子结合蛋白,参与调控Ca2+稳态、钙依赖信号、内质网质量控制、植物生长发育、免疫反应和逆境应答等多种生物学过程.甘蔗(Saccharum spp.hybrid)中CRT应答甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)侵染尚未见报道.本研究从热带种Badila(S.offi-cinarum)中克隆了1个CRT1/CRT2亚型的CRT编码基因,命名为ScCRT1.该基因开放读码框(open reading frame,ORF)长度为1281 bp,编码长度为426 aa的蛋白.生物信息学分析表明,ScCRT1具有典型的CRT蛋白结构域,为稳定的亲水性蛋白,其N端有一个信号肽,具有典型的跨膜结构域,C端有典型的内质网定位信号;二级结构多为无规则卷曲;系统进化树分析表明,该蛋白是典型的C RT蛋白,在单子叶和双子叶植物中具有明显的分化.亚细胞定位表明ScCRT1定位于内质网.实时荧光定量PCR分析发现,ScCRT1基因在甘蔗各组织中都有表达,在第8节间中的表达量最低,在心叶中的表达量较高;该基因在SCMV侵染早期表达量上调,后期下调表达.酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验表明,ScCRT1与SCMV-6K2蛋白互作.推测SCMV-6K2通过与ScCRT1互作调控钙离子稳态进而便于SCMV侵染.

摘要： 为表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其进行初步鉴定及结构与补体结合功能分析.本研究以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,通过PCR扩增目的基因,克隆至pcDNA3.3-Myc载体,构建重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT;PCR、酶切及测序鉴定其正确后,以脂质体转染法转染Hela细胞,运用Western blot、细胞免疫荧光方法检测重组蛋白在细胞中的表达情况;应用生物学软件分析mCRT结构与功能特点.结果 显示:成功构建了重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT,其在Hela细胞中可高效表达重组钙网蛋白,表达产物约为46 kDa;预测该蛋白N端含有1个18aa的信号肽序列,与其他寄生虫CRT氨基酸序列同源性高达41％～56％,存在4个C1q潜在结合位点.本研究结果为抗包虫疫苗和新药的研制提供重要的理论基础.

摘要： 目的 探讨RP11-495P10.1在MIT诱导下对肝癌细胞HepG2中DAMPs的释放及细胞免疫原性反应的产生的影响,为肝癌的治疗提供新的免疫治疗手段.方法 CCK-8检测MIT在HepG2细胞中的IC50;MIT处理细胞,免疫荧光、ATP试剂盒、流式细胞术、Western印迹检测CRT膜转位、ATP分泌、细胞凋亡及细胞外HMGB1、Cleaved-PARP、p-eIF2α蛋白的表达;MIT处理下调RP11-495P10.1后的细胞,再次检测上述各指标,并用RT-PCR检测RP11-495P10.1的表达.结果 ①MIT引起HepG2细胞的凋亡,Cleaved-PARP蛋白表达升高;②CRT发生膜转位,ATP和HMGB1向细胞外分泌,p-eIF2α蛋白表达升高;③ 与单独用MIT处理组相比,MIT处理并下调RP11-495P10.1后的细胞,RP11-495P10.1的表达不受任何影响,而细胞凋亡更加明显,CRT的膜转位量、ATP、HMGB1的分泌量和p-eIF2α蛋白的表达均显著升高.结论 RP11-495P10.1在MIT诱导下影响肝癌细胞DAMPs的释放,进而促进免疫原性细胞死亡的发生,此研究将为肝癌的治疗提供新的免疫治疗手段.

摘要： 目的 探讨miR-206通过钙网蛋白(calreticulin,CALR)调控乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响及其机制.方法 乳腺癌MDA-MB-231细胞培养培养完成后,MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力.将miR-206 mimics和/或Ad-CALR分别转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞术检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡情况;Western blotting实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR、E-cadherin和N-cadherin的表达.结果 作用48 h后,miR-206mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR的表达被明显抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达则均明显提高(P<0.05),MTT检测结果显示细胞增殖抑制率为(52.96±3.12)％,与空白对照组比较有明显的统计学意义(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(26.64±1.78)％和(24.17±1.56)％,与空白对照组比较差异均有明显统计学意义(P<0.05).miR-206 mimics作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率为(21.96±1.72)％,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-206mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231干细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(6.93±0.41)％和(7.12±0.67)％,与空白对照组比较差异均统计学意义(P<0.05).与空白对照组比较,miR-206 mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被增强,而N-cadherin的表达被抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被明显抑制,而N-cadherin的表达被明显增强(P<0.05).结论 miR-206可以通过降低乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达来抑制乳腺癌干细胞的恶性生物学行为.

摘要： 目的:检测钙网蛋白(CRT)、驱动蛋白超家族蛋白5A(KIF5A)在三阴性乳腺癌组织中的表达,并分析CRT、KIF5A蛋白表达与临床病理特征及预后的关系.方法:收集2013年1月—2014年12月125例三阴乳腺癌患者的癌组织和癌旁正常组织的石蜡样本,患者均为女性.采用免疫组织化学法检测CRT、KIF5A蛋白的表达情况,分析癌组织中CRT、KIF5A蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系,Kaplan Meier法分析CRT、KIF5A蛋白表达对患者术后5年总生存率的影响.结果:三阴性乳腺癌组织中,CRT、KIF5A蛋白的阳性表达率为54.40％(68/125)、60.00％(75/125),均分别高于癌旁正常组织的8.80％(11/125)、10.40％(13/125),差异有统计学意义(P<0.05).三阴性乳腺癌组织中,CRT蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期相关(P<0.05);KIF5A蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期相关(P<0.05).Kaplan Meier结果显示,CRT阳性表达组的术后5年总生存率低于CRT阴性表达组(P<0.05),KIF5A阳性表达组的术后5年总生存率低于KIF5A阴性表达组(P<0.05).结论:三阴性乳腺癌组织中CRT和KIF5A蛋白阳性表达率高,且均与患者不良临床病理特征和较低术后5年总生存率相关.CRT和KIF5A具有作为三阴乳腺癌治疗靶标的潜能.

摘要： 目的探讨miR-206通过钙网蛋白(calreticulin,CALR)调控乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法乳腺癌MDA-MB-231细胞培养培养完成后,MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力。将miR-206 mimics和/或Ad-CALR分别转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞术检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡情况;Western blotting实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR、E-cadherin和N-cadherin的表达。结果作用48 h后,miR-206mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR的表达被明显抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达则均明显提高(P<0.05),MTT检测结果显示细胞增殖抑制率为(52.96±3.12)%,与空白对照组比较有明显的统计学意义(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(26.64±1.78)%和(24.17±1.56)%,与空白对照组比较差异均有明显统计学意义(P<0.05)。miR-206 mimics作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率为(21.96±1.72)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-206mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231干细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(6.93±0.41)%和(7.12±0.67)%,与空白对照组比较差异均统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,miR-206 mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被增强,而N-cadherin的表达被抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被明显抑制,而N-cadherin的表达被明显增强(P<0.05)。结论miR-206可以通过降低乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达来抑制乳腺癌干细胞的恶性生物学行为。

摘要： 植物寄生线虫是一类专性活体寄生物,主要寄生植物根部,严重影响植物生长发育,给我国农业生产造成巨大的损失.钙网蛋白是一种定位于真核细胞内质网中的多功能蛋白,具有3个功能结构域:N-功能域、P-功能域、C-功能域.迄今已发现的植物寄生线虫钙网蛋白主要来自于南方根结线虫、禾谷孢囊线虫、水稻干尖线虫、香蕉穿孔线虫、马铃薯茎线虫和松材线虫等.本文通过对植物寄生线虫钙网蛋白的结构特点、体内转录位点、抑制防御反应和促进寄生等方面进行了综述,以加深对钙网蛋白在线虫侵染植物过程中功能的了解,为植物线虫病害防治方法提供理论基础.

摘要： 目的：探讨钙网蛋白(calreticulin CRT)对人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2增殖及侵袭能力的影响.rn 方法：利用siRNA沉默肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2 CRT的表达.通过免疫荧光技术及Wertern blot方法检测CRT siRNA转染效果,Cell counting kit-8(CCK-8)检测细胞的增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡能力变化;运用Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力;Wertern blot方法检测p-Akt、Akt蛋白表达.rn 结果：siRNA实验组SMMC-7721、HepG2细胞24、36、48h相对生长抑制率分别为(41.0±2.2)％、(46.5±1.6)％、(59.7±2.2)％;(36.8±2.7)％,(47.3±1.8)％、(61.5±3.2)％,与空白组及阴性对照组比较,siRNA实验组增殖能力明显降低(p＜0.05).沉默CRT36h后SMMC-7721、HepG2细胞的凋亡率分别(45.2±9.1)％、(48.9±8.0)％,与空白组及阴性对照组比较较,siRNA实验组凋亡能力上调(p＜0.05).Transwell实验证实:沉默CRT36h后SMMC-7721、HepG2细胞穿膜个数空白组、阴性对照组、siRNA实验组分别为:(96.8±7.3)、(95.6±5.4)、(34.0±4.2);(124.0±9.9)、(121.6±7.0)、(70.4±9.5),与空白组及阴性对照组比较,实验组侵袭能力降低(p＜0.05).沉默CRT 36h后,与空白组及阴性对照组比较,p-Akt蛋白表达水平均下调,(p＜0.05).rn 结论：沉默肝癌细胞CRT后,对细胞的增殖、侵袭能力有明显的抑制作用,同时可诱导细胞的凋亡,且与PI3K/Akt信号通路相关.

摘要： 最近,应用同源重组基因靶向技术产生了钙网蛋白缺陷的ES细胞,这是第一次利用同源重组敲掉一种编码内质网腔蛋白的基因.ES细胞削弱了整合蛋白介导的粘附作用.用细胞粘附数量实验作定量评价,认为细胞表达钙网蛋白的改变会影响细胞的粘附功能.钙网蛋白缺陷的ES细胞可以明显的减少整合蛋白介导的细胞外钙离子的进入,而这正是因为整合蛋白介导的细胞粘性改变引起的.

摘要： 目的：观察心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的影响及通心络的干预作用. 方法：制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液：正常内皮细胞条件培养液(N-CM),同型半胱氨酸诱导损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液(H-CM)和通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液(T-CM).将心肌细胞随机分为4组：正常对照组、N-CM组、T-CM组及H-CM组,采用相应培养液培养.倒置显微镜观察心肌细胞形态,酶联免疫吸附法检测细胞上清液心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量,JC-1试剂盒测定细胞中线粒体膜电位(MMP),Western blot法检测细胞色素C(CytC)和钙网蛋白(CRT)蛋白表达. 结果：与正常对照组比较,N-CM组细胞形态无明显变化,细胞上清液cTnT含量、MMP水平、CRT及CytC蛋白表达无明显变化(P＞0.05);与N-CM组比较,H-CM组细胞皱缩,细胞边缘模糊,有大量坏死细胞漂浮,细胞上清液cTnT含量、CRT及CytC蛋白表达升高,MMP水平降低(P＜0.01);与N-CM组比较,T-CM组细胞无明显皱缩,细胞边缘较清楚,坏死漂浮细胞减少,细胞上清液cTnT含量、CRT及CytC蛋白表达降低,MMP水平升高(P＜0.05,P＜0.01). 结论：受损心肌微血管内皮细胞的条件培养液可损伤心肌细胞,其损伤机制可能与CRT介导的线粒体功能受损有关,通心络可抑制该损伤过程.

摘要： 本发明提出一种酪蛋白钙磷微球胶原蛋白填充剂及其制备方法以及酪蛋白钙磷微球的制备方法，本发明采用新型材料酪蛋白钙磷微球，提升了传统胶原填充剂的有效性和维持时间，生物安全性高，且能够刺激自身胶原蛋白的表达，具有极高的应用前景和价值。本发明使用去端肽动物胶原蛋白或基因重组人胶原蛋白，材料免疫原性低，材料采购/制备成本低，适合大规模工业化生产。本发明在填充剂中加入辅助成分，如甘油或小分子透明质酸，能够改善填充剂的流变特性，使其填充性能更强且更容易注射。本发明提供的工艺具有应用前景广阔，成本低，不产生有害废物，能够工业化生产，实用性高等优点。

摘要： 一种钙网蛋白-可溶性程序性死亡受体1的融合蛋白及其制备方法和用途，本发明提供了小鼠钙网蛋白C区部分截除与可溶性程序性死亡受体1胞外段的融合蛋白CRT

摘要： 本发明提供了人钙网蛋白与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的融合蛋白(Calreticulin-TRAIL融合蛋白)，编码该融合蛋白的DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，用基因工程制备该融合蛋白的方法，以及含该融合蛋白的药物组合物。本发明的Calreticulin-TRAIL融合蛋白既具有Calreticulin抑制肿瘤新生血管内皮细胞生长的功能，又具有TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的作用，可以用于如肿瘤等疾病的治疗。

摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，具体公开一种诱导H22细胞表达钙网蛋白的组合物及利用该组合物产生钙网蛋白的方法。所述诱导H22细胞表达钙网蛋白的组合物包括香菇酸性多糖和氯化钾。本发明提供的诱导H22细胞产生钙网蛋白的方法，通过以香菇酸性多糖作为诱导物，并通过分阶段pH调整以及K离子细胞调节的协同作用，对H22细胞进行诱导产生诱导蛋白，对诱导蛋白中产生的钙网蛋白进行分离纯化，可制备得到高表达量的钙网蛋白，且制备过程中采用的试剂成本低廉，为钙网蛋白的工业制备以及应用提供了有效保障，具有较高的推广应用价值。

摘要： 本发明涉及分子生物学领域，具体的说是牙鲆钙调蛋白和钙网蛋白表达质粒的制备和应用。所述表达钙调蛋白和钙网蛋白的质粒pCNCam和pCNCrt在抗细菌感染中应用。本发明的钙调蛋白和钙网蛋白表达质粒注射鱼类后能够显著提高鱼类抵抗细菌感染的能力。

摘要： 一种钙网蛋白-可溶性程序性死亡受体1的融合蛋白及其制备方法和用途，本发明提供了小鼠钙网蛋白C区部分截除与可溶性程序性死亡受体1胞外段的融合蛋白CRT

摘要： 本发明是提供一种钙网蛋白(Calreticulin)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的融合蛋白，提供一种钙网蛋白与VEGFR2融合蛋白在抗肿瘤血管生成以抑制肿瘤生长方面的用途。所述的Calreticulin－VEGFR2融合蛋白兼有两者的生物学活性，通过抑制肿瘤血管内皮细胞生长而起抗肿瘤作用，并且在两者的协同下增强了抗肿瘤的效果。

摘要： 本发明涉及一种具有钙网蛋白特异性的融合蛋白，及以该蛋白为活性成分的药物及在制药行业中的应用。本发明的融合蛋白由人表皮生长因子与血小板因子－4融合而成，该融合蛋白的编码基因具有人表皮细胞因子的核苷酸序列及血小板因子－4的核苷酸序列。提供一种新的以本发明的融合蛋白为活性成分的抗肿瘤的药物，特别是乳腺癌、肺癌及肝癌。

摘要： 本发明提供了人钙网蛋白与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的融合蛋白(Calreticulin－TRAIL融合蛋白)，编码该融合蛋白的DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，用基因工程制备该融合蛋白的方法，以及含该融合蛋白的药物组合物。本发明的Calreticulin－TRAIL融合蛋白既具有Calreticulin抑制肿瘤新生血管内皮细胞生长的功能，又具有TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的作用，可以用于如肿瘤等疾病的治疗。

摘要： 公开了多功能分子，其包括i)结合钙网蛋白的抗原结合结构域；以及以下的一项、两项或全部：(ii)免疫细胞衔接物(例如，选自NK细胞衔接物、T细胞衔接物、B细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物)；(iii)细胞因子分子；和/或(iv)基质修饰部分。还公开了编码其的核酸、生产上述分子的方法和使用上述分子治疗癌症的方法。