刺参AIF-1的原核表达、抗血清制备及表达

摘要

制备了刺参免疫相关因子AIF-1抗血清并检测AIF-1蛋白水平的表达。提取刺参呼吸树组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增AIF-1基因编码区,大小与预期相符。PCR产物测序结果与Genebank报道序列一致。基因序列经密码子优化,体外合成并构建重组表达载体pET-29b(+)-AIF-1-his,成功诱导了可溶性重组AIF-1蛋白的表达。镍离子金属螯和层析纯化重组AIF-1蛋白,纯化产物可见单一条带。以纯化的重组AIF-1蛋白注射小鼠进行免疫,制备鼠抗AIF-1多抗血清,间接ELISA法检测抗血清效价为1∶102400。荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析结果检测到刺参内源性AIF-1蛋白的表达。灿烂弧菌体腔注射AIF-1后,刺参呼吸树和AIF-1的转录和蛋白水平表达均显著增加。