抗虫基因

摘要： 随着转基因技术的发展,快速、稳定和简单的转基因作物检测技术的开发一直是热点。开发了以溴百里酚蓝为显色剂的基于环介导等温扩增的抗虫基因超灵敏比色生物传感器,该方法可以通用检测Cry1Ac和Cry1Ab/Ac基因,具有较好的特异性。新型pH指示剂溴百里酚蓝对于LAMP影响小,通过一步法闭管可视检测,解决了LAMP容易污染的问题,实现了自然光下裸眼可视化半定量检测。最终优化的体系为Tris终浓度3.25 mmol/L,0.1%溴百里酚蓝添加量1.5μL,在此条件下1 h内可检测到单拷贝靶标基因。该方法兼具灵敏性、特异性和稳定性,操作简单,适合现场检测,提供了Cry1Ac和Cry1Ab/Ac基因通用检测的具体操作方法和新的LAMP比色信号输出方式,不仅完善了转基因产品的检测体系,也丰富了LAMP生物传感器信号输出方式。

摘要： 为明确抗感褐飞虱Nilaparvata lugens水稻遗传群体在细胞水平的生理变化差异,通过蛋白质组学法对抗褐飞虱水稻遗传群体16W19-1-1和感稻飞虱水稻遗传群体16W45水稻叶片的差异蛋白质组进行研究,采用串联质谱标签标记和液相色谱-串联质谱联用仪进行差异蛋白质谱分析,利用Mascot search results软件进行搜库以确定差异表达蛋白,应用qPCR技术对差异蛋白关联基因在抗感褐飞虱遗传群体中的表达情况进行验证分析.结果 表明,从抗感褐飞虱遗传群体中共鉴定出7 625个蛋白,其中差异蛋白229个,涉及上调蛋白156个,下调蛋白73个,主要集中在代谢蛋白、氧化还原蛋白和应激蛋白,主要参与了氰胺基酸代谢、牛磺酸代谢、聚糖降解、脂肪酸链伸长等通路.最终找到9个关键蛋白,关联6种酶,分别为γ-谷氨酰基转移酶、β-葡糖苷酶、β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖酶、谷氨酸脱羧酶、甚长链烯酰-CoA还原酶和甚长链3-氧酰辅酶,对应8个基因.表明以上6种酶与植物抗虫性关系密切,可能在上述水稻品系抗褐飞虱中起着重要作用.

摘要： [目的]分析转BtCry1Ac欧洲黑杨外源基因插入位点,从而进一步完善抗虫转基因杨树的背景信息,推进抗虫转基因杨树的安全评价及应用.[方法]以转BtCry1Ac欧洲黑杨株系n12、n222为试验材料,使用高效热不对称交错PCR法(hiTAIL-PCR)分离外源基因插入位点侧翼序列,比对毛果杨基因组序列确定插入位点.根据插入位点处的侧翼序列设计2对特异性PCR检测引物,建立转BtCry1Ac欧洲黑杨外源基因特异性PCR检测方法,并利用实时荧光定量PCR技术分析插入位点周边基因表达情况.[结果]PCR及半定量PCR结果表明,转基因欧洲黑杨株系的BtCry1Ac基因稳定表达.通过比对毛果杨基因组序列确定转基因杨n12 T-DNA插入基因组Chr15的10162773位点即Potri.015G076600第2个内含子,其碱基组成AT含量为65％;n222整合位点为基因组Chr01基因间隔区41596184位点,其碱基组成AT含量为69％.特异性PCR检测显示,n12能扩增出709 bp(转基因)和1 159 bp(非转基因)特异性条带,n222及其与丹红杨杂交子代能扩增出1 265 bp(转基因)和1 827 bp(非转基因)特异性条带,而对照仅能扩增非转基因特异性片段.n12 T-DNA插入造成插入位点的丝氨酸蛋白激酶(SPK) Potri.015G076600基因表达量上调4.3倍,而附近的共济失调毛细血管扩张症突变蛋白(ATM) Potri.015G076700表达量下调20倍,从而可能调节杨树生长速度.n222插入位点上下游基因异黄酮-7-O-β-葡萄糖苷6"-O-丙二酰转移酶(IBG) Potri.001G395700和光敏色素互作因子解旋酶(PIF) Potri.001 G395800表达量均上调.[结论]转BtCry1Ac欧洲黑杨T-DNA偏好插入富含AT区域,同时T-DNA载体边界序列缺失,并引起插入位点附近基因表达量变化.建立转BtCry1Ac欧洲黑杨特异性检测方法,为转BtCry1Ac欧洲黑杨的管理与监测提供参考.

摘要： 作为一枚新鲜的水果,最害怕的事情是什么呢?当然是失去''鲜''味儿啦。当可爱的小葡萄鲜嫩的小脸蛋失去水分变得皱巴巴的时候,当水灵灵的诱人的大蜜桃脸上长出可怕的霉斑的时候,当甜蜜蜜的有着鼓鼓小肚子的桔子逐渐干瘪时,当清香美味又营养的香蕉过度成熟散发着异味的时候,它们就只能被丢弃在垃圾桶里啦.其实,你看,关于水果保鲜这回事,最重要的就是三点。

摘要： 玉米是世界重要的粮食作物、饲料来源和能源作物,在食品、化工、医疗等各产业中均占有重要地位,而每年因虫害导致的产量损失约占玉米总产量的10％以上.大刍草是栽培玉米的祖先,长期生长在各种逆境中,对多种胁迫如病虫害、不良生境有较强的抗性,是扩充玉米种质资源的天然基因库.因此,利用野生资源提高玉米单产、提高玉米抗病、抗虫等性状具有重要的意义.研究利用转录组测序的方法对大刍草与栽培玉米品种进行了接种黏虫处理不同时段叶片的转录组测序,通过生物信息学分析,剖析了2个物种在基因转录、基因表达以及合成和积累抗虫相关次生代谢产物方面的差异,筛选出了5个抗虫候选基因并进行简要分析,以期为挖掘玉米抗虫基因提供参考依据.

摘要： 长期以来,棉花深受虫害影响,导致棉花减产。随着分子生物学及重组DNA技术的迅速发展,利用基因工程技术将外源杀虫基因导入棉花获得转基因抗虫棉已成为解决棉花虫害的手段之一。本文综述了常用外源杀虫基因的种类、杀虫机理及在生产实践中的应用,并探讨了抗虫棉遇到的一些问题及今后的发展趋势。

摘要： Insect-resistant Cry1Ac/Ab fusion expression vector was transformed into soybean cultivar GP03-8-23 by Agrobacterium tumefaciens infection of cotyledonary nodes,and transgenic soybean lines containing Cry1Ac/Ab fusion genes showed resistance to insects.At the beginning,1 540 soybean cotyledonary node explants were transformed.Through molecular examination of the transgenic soybean plants,85 positive transgenic plants were obtained,and transformation rate was 5.47％.The results of Quantitative Real Time PCR (qRT-PCR) showed that the expression levels of CrylAc/Ab fusion genes were the highest in the leaves,higher in the roots,and high in stems and seeds.The resistance of one T1 transgenic soybean line to soybean pod borer was significantly higher than the control,which will provide new germplasm materials for breeding new soybean varieties with insect-resistant characteristics.%利用农杆菌介导的子叶节遗传转化体系,将Cry1Ac/Ab融合抗虫基因表达载体导入栽培大豆品种GP03-8-23中,通过Cry1Ac/Ab融合基因在大豆中的表达,获得了抗虫转基因大豆新材料.试验共转化子叶节外植体1 540个,再生转化苗经PCR、Southern杂交和Bar试纸条检测,获得85株阳性转基因植株,平均转化率为5.47％.利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了目标基因在转基因大豆不同株系及不同组织中的表达量.结果表明:不同转基因株系表达量存在显著差异,目标基因在大豆根、茎、叶、子粒中均有表达,在叶中的表达量最高,根中的表达量较高,茎和子粒中的表达量最低.经室内抗食叶性害虫离体鉴定,获得抗虫性较好的T1代转Cry1Ac/Ab基因大豆材料,其中1份表现为高抗,抗虫性显著优于对照,可为培育抗虫大豆新品系提供新的种质材料.

摘要： 抗虫转基因水稻的培育和利用为水稻害虫控制提供了一条最为有效、经济的途径,但抗虫转基因水稻是否安全一直备受瞩目,以近期发表的文献为基础,从稻田蜘蛛、天敌昆虫和无尾两栖动物等三方面,综述抗虫转基因水稻对天敌的影响.已有研究表明,抗虫转基因水稻对捕食性天敌生物学特征无明显不利的生态效应,但会影响其部分基因的表达;抗虫转基因水稻对寄生性天敌个体数量等参数影响较大,但并非Bt毒蛋白直接影响所致,而可能因为靶标害虫种群和体内营养的变化,此方面有待进一步研究.

摘要： 红麻(Kenaf)为锦葵科(Malvaceae)木槿属(Hibiscus)一年生韧皮纤维作物,是麻纺和造纸工业的重要原料.红麻的抗除草剂和抗虫特性的获得,不仅能降低红麻的生产成本,而且可以提高产量和品质.本文在优化红麻的高效再生系统的同时,通过对双价抗虫基因转化红麻子叶,将外源抗虫基因整合到了红麻基因组DNA中.成熟的红麻高效再生体系技术,在缩短红麻育种年限的同时,也可为红麻转基因等分子育种奠定基础；农杆菌介导的红麻遗传转化研究也为今后更进一步的转基因育种工作奠定了基础.

摘要： 为了解决棉铃虫大暴发给棉花产业造成巨大损失的难题,在国家“863”计划的支持下,我国启动了“棉花抗虫基因工程育种研究”项目. 通过分子育种法，用遗传稳定的优良双抗除草剂转基因棉花新品系与抗虫棉品种杂交，系统选育获得了抗虫双抗除草剂转基因棉花新品系，为培育抗虫抗除草剂转基因棉花新品种提供了技术支撑。

摘要： 国欣棉11号是由河间市国欣农村技术服务总会选育的转双价抗虫基因常规棉品种，2009年通过国家农作物品种审定委员会审定，审定编号2009001。该品种产量高，品质优，适应广，在黄河流域棉区具有较强的竞争优势，应用前景十分广阔。

摘要： 利用两份不结球白菜抗虫种质‘599’和‘508’及一份感虫种质‘114’配置两个抗感组合‘599’×114’和‘508’ב114’，并构建六世代群体。采用离体鉴定和六世代联合分析法，从抗生性角度，研究了两份不结球白菜抗虫种质的遗传规律。结果表明，不结球白菜抗生性属于数量性状，受“主基因+多基因”共同控制，感虫性为部分显性。其中，‘599’ב114’组合的抗虫性遗传规律符合“两对加性-显性-上位性主基因+加性-显性-上位性多基因”模型，两对主基因均表现负向加性效应，两对主基因的显性效应呈正向。第一对主基因的遗传以显性效应为主，第二对主基因的遗传以加性效应为主。rn 两对主基因存在明显的交互作用。BC1P1、BC1P2、F2群体的主基因遗传率分别为69.52%、74.09%和75.49%，BC1P1群体的多基因遗传率为12.25%，BC1P2和F2群体的多基凶遗传率均为0.‘508’×114’组合的抗虫遗传规律符合“一对加性-显性主基因+加性-显性多基因模型”，主基因的加性效应和显性效应均呈负向，多基因的显性效应为正，而且为超显性。BC1P1、BC1P2、F2群体的主基凶遗传率分别为51.13%、65.87%和79.06%，多基因遗传率分别为32.69%、17.21%和0.以同样的材料,采用网室鉴定法和六世代联合分析法，主要从排趋性的角度，研究两份种质的抗虫遗传规律。结果表明，两个抗感组合‘599’ב114’和‘508’ב114’的排趋性遗传规律均符合“一对加性-显性主基因+加性-显性多基因”模型，在‘599’ב114’组合中，主基因的加性效应为负，显性效应为正；多基因的加性效应和显性效应均为正。F2群体的主基因遗传率最高为78.35%，多基因遗传率为0；在BC1P1、BC1P2中主基因遗传率分别为53.59%和46.21%，多基因遗传率分别为18.64%和21.65%；在‘508’ב114’组合中，主基因的加性效应为负，显性效应为正，多基因的加性效应为负，显性效应为正。F2群体的主基因遗传率为76.05%，多基因遗传率为0，在BC1P1、BC1P2中主基因遗传率分别为57.21%和25.87%；BC1P1和BC1P2的多基因遗传率分别为6.24%和27.79%。rn 初步说明两份抗源的抗性遗传背景不尽相同，同一材料的网室鉴定和离体鉴定所反映的抗虫性也不一样，它们从不同的侧面反映r抗虫性的不同方面。因此，在白菜抗虫育种的过程中，应允分利用F2群体进行早世代选择，另一方面应充分利用不同基因源的抗虫基因的增效加性效麻和显性效应，通过不同基因的聚合育种，以提高品种的抗虫性。

摘要： 转基因棉花属于高科技产品,是现代生物技术应用于中国农业生产的先锋作物。中国从1991年开始进行抗虫基因的构建工作,1992年合成了BT单价抗虫基因,成为继美国之后第二个独立构建拥有自主知识产权抗虫基因的国家。经过不断的努力,抗虫基因构建由单价到双价,由单抗棉铃虫到抗病、抗蚜虫等多抗,并开始了改良品质和提高产量等方面的基因构建工作。目前,科研主导型产业化模式占国产抗虫棉的面积比重为19％,企业主导型为15％,基地主导型为6％,协会主导型为5％,其它占55％。

摘要： 苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis,Bt,能产生杀虫晶体蛋白ICPs,从而引起昆虫代谢紊乱并导致个体死亡.目前,Bt抗虫基因主要分46个主要类群,靶标以鳞翅目、双翅目、鞘翅目的昆虫和线虫为主.转Bt基因作物的根系分泌、残体、花粉、伤口等途径均可将具有生物活性的Bt毒蛋白释放到土壤环境中,并以吸附在土壤粘土粒体及腐殖质酸上的形式存在.转Bt基因作物对土壤中有害生物的作用报道较少,对有益和中性或作用未知生物的影响是目前的研究热点,对土壤微生物、土壤酶系和土壤营养元素的影响还不明确,需进一步从更微观和更宏观的角度来研究转Bt基因作物对土壤生态区系的长期影响.本文即对上述问题进行了综述.

摘要： 鑫秋4号是山东鑫秋种业科技有限公司选育的转基因抗虫棉花新品种，文章在介绍了该品种特征特性及产量表现的情况下，对该品种的各项生产表现指标做了评价分析，同时对其高产栽培的各项技术措施做了分别论述。

摘要： 鑫秋4号是山东鑫秋种业科技有限公司选育的转基因抗虫棉花新品种，文章在介绍了该品种特征特性及产量表现的情况下，对该品种的各项生产表现指标做了评价分析，同时对其高产栽培的各项技术措施做了分别论述。

摘要： 鑫秋4号是山东鑫秋种业科技有限公司选育的转基因抗虫棉花新品种，文章在介绍了该品种特征特性及产量表现的情况下，对该品种的各项生产表现指标做了评价分析，同时对其高产栽培的各项技术措施做了分别论述。

摘要： 鑫秋4号是山东鑫秋种业科技有限公司选育的转基因抗虫棉花新品种，文章在介绍了该品种特征特性及产量表现的情况下，对该品种的各项生产表现指标做了评价分析，同时对其高产栽培的各项技术措施做了分别论述。

摘要： 一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法。以离体培养的粉纹夜蛾细胞为试材，通过转基因抗虫植物蛋白质对昆虫细胞的毒性，测定转基因抗虫植物的抗虫性。由于活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶与MTT反应生成蓝紫色结晶产物甲臜，甲瓒颜色深浅与活细胞数成正比，通过在570nm的波长下测定其OD值，测算出活细胞的数目，而死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原。利用昆虫细胞测定转基因抗虫植物的抗虫性，便于从分子水平观察分析转基因抗虫植物的杀虫机理。离体培养的昆虫细胞相对于饲养或田间的活体昆虫而言，其均一性好，不易受外界环境和活体昆虫体壁、肠道内蛋白酶活性、体液pH值等因素的影响。此法操作简单、便捷，节省人力、物力。

摘要： 本发明公开了一种用于转基因抗虫抗草甘膦棉花的特异性鉴定分子标记的引物组及其应用。所述的引物组包括两对引物对，分别为引物对ZJG80LB和引物对ZJG80rb；引物对ZJG80LB的序列为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；引物对ZJG80rb的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。本发明设计构建了引物对ZJG80LB和ZJG80rb，能特异性识别特定的抗虫抗草甘膦棉花ZJG80中的外源基因及其棉花种类。

摘要： 本发明涉及生物技术领域。更确切地说，一种用于生产转基因植物事件，特别是甘蔗(Saccharum spp.)事件的基因构建体和方法，其抵抗害虫小蔗螟(Diatraea saccharalis)的侵染，后者作为害虫被广泛知晓，描述为普通螟虫、甘蔗螟虫，或仅称为螟虫。本发明描述了该事件、事件鉴定的方法，以及插入检测方法，以在插入部分和宿主基因组之间交叉的独特区域和特征性的侧翼区域为基础。

摘要： 本发明公开了一种抗虫蛋白、抗虫融合蛋白、编码基因、载体及应用，抗虫蛋白的氨基酸序列与SEQ？ID？NO:1相比具有90％的同源性；所述抗虫融合蛋白从N端到C端依次含有BT晶体毒素Cry1蛋白和抗虫蛋白Cry2Aj；本发明首次公开了一种具有高杀虫能力的BT晶体毒素Cry2Aj蛋白，并且设计了用一个Cry1Ab晶体毒素与该Cry2Aj晶体毒素融合成的人工蛋白质分子，与原先的Cry1和Cry2晶体毒素物理混合相比，具有如下优点：杀虫活性提高了10倍以上，杀虫谱更广；本发明的杀虫蛋白质可以杀灭棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、二化螟等水稻、玉米和棉花的主要鳞翅目害虫；此外，本发明发现的融合蛋白质还可以有效的减缓害虫抗性的发生。

摘要： 一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法。以离体培养的粉纹夜蛾细胞为试材，通过转基因抗虫植物蛋白质对昆虫细胞的毒性，测定转基因抗虫植物的抗虫性。由于活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶与MTT反应生成蓝紫色结晶产物甲臜，甲瓒颜色深浅与活细胞数成正比，通过在570nm的波长下测定其OD值，测算出活细胞的数目，而死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原。利用昆虫细胞测定转基因抗虫植物的抗虫性，便于从分子水平观察分析转基因抗虫植物的杀虫机理。离体培养的昆虫细胞相对于饲养或田间的活体昆虫而言，其均一性好，不易受外界环境和活体昆虫体壁、肠道内蛋白酶活性、体液pH值等因素的影响。此法操作简单、便捷，节省人力、物力。

摘要： 本发明公开了一种用于转基因抗虫抗草甘膦棉花的特异性鉴定分子标记的引物组及其应用。所述的引物组包括两对引物对，分别为引物对ZJG80LB和引物对ZJG80rb；引物对ZJG80LB的序列为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；引物对ZJG80rb的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。本发明设计构建了引物对ZJG80LB和ZJG80rb，能特异性识别特定的抗虫抗草甘膦棉花ZJG80中的外源基因及其棉花种类。

摘要： 本发明通过对抗虫基因进行修饰，使其编码产物N端带有大豆SKTI的信号肽序列，C端加上内质网滞留信号KDEL序列，使抗虫基因转译产物最终特异性地定位到寄主植物细胞的内质网中，增加外源抗虫蛋白的稳定性，以提高外源抗虫物质在转基因植株体内的积累量，从而增强转基因植物的抗虫能力。

摘要： 本发明公开了一种黄瓜花叶病毒弱毒力载体在增强植物抗虫性能方面的应用。所述黄瓜花叶病毒弱毒力载体的构建方法包括如下步骤：1)、改造病毒CMV成缺失2b基因序列的弱病毒表达载体；具体为：将已构建好的病毒CMV侵染性克隆质粒之一pCB‑CMVF209采用酶切连接的方法改造，使2b基因缺失，并加入酶切位点，构建成为弱毒力的病毒表达载体‑‑‑弱病毒载体；2)、将抗虫基因编码区(ORF)序列插入步骤1)所得的弱病毒载体构建重组弱病毒表达载体；构建所得的含抗虫基因编码区序列的重组弱病毒表达载体用于增强植物对害虫的抗性。

摘要： 本发明公开了一种同时表达抗虫基因和耐除草剂基因的双元载体及应用，所述的双元载体含有抗虫基因vip3A和cry1F，同时含有抗除草剂基因；所述抗除草剂基因为抗草铵膦基因pat或者抗草甘膦基因gat。本发明载体同时表达vip3A、cry1F和pat/gat蛋白，用该载体转化农作物获得的转基因作物能够同时抗草地贪夜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、二化螟等农作物的主要鳞翅目害虫，扩宽了转基因作物的抗虫范围，特别的对入侵我国的草地贪夜蛾有非常好的抗性，而且还有效地延缓了害虫抗性的产生。

摘要： 本发明通过对抗虫基因进行修饰,使其编码产物N端带有大豆SKTI的信号肽序列,C端加上内质网滞留信号KDEL序列,使抗虫基因转译产物最终特异性地定位到寄主植物细胞的内质网中,增加外源抗虫蛋白的稳定性,以提高外源抗虫物质在转基因植株体内的积累量,从而增强转基因植物的抗虫能力。