Kupffer细胞

摘要： 目前,迫切需要探索免疫检查点阻断治疗的耐受机制,并确定一种联合治疗策略以提高其在HCC治疗中的有效性。作为免疫豁免器官,肝脏含有大量巨噬细胞,包括常驻细胞(例如Kupffer细胞)和募集的巨噬细胞。浸润肿瘤组织的巨噬细胞也称为肿瘤相关巨噬细胞(TAM),在功能和表型上与交替激活的(M2样)巨噬细胞相似,在肿瘤进展、免疫逃逸和ICB治疗抵抗中起重要作用。

摘要： 目的构建非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的小鼠模型,观察病理生理变化,明确Kupffer细胞在经典激活(M1)和选择性激活(M2)之间的转换与NAFLD发病机制的关系。方法30只C57BL/6J小鼠随机分配到普通饮食组、4周高脂饮食组和8周高脂饮食组,每组10只。每周评估小鼠体重、毛发、精神状态等指标。在培养时间结束后,进行肝脏组织切除和采集小鼠血液标本进行实验室检测指标(包括血糖、血脂、胰岛素、胆固醇、ALT和AST)及组织切片HE染色确立模型建立和病理生理变化特征。切除的肝脏组织同时进行分离Kupffer细胞进行原代细胞培养,通过ELISA方法检测细胞分泌TNF-α、IL-6、MCP1、IL-1β、iNOS、VEGF和IL-10各细胞因子水平评估Kupffer细胞的分化状态。结果高脂饮食组的小鼠体重高于对照组,且8周高脂饮食组体重、胰岛素、血糖、甘油三酯、胆固醇、AST和ALT水平均高于4周高脂饮食组,差异有统计学意义(P<0.05);组织切片显示高脂饮食组脂滴弥漫浸润肝细胞中,脂肪变性的肝细胞极度肿胀呈圆形,体积较正常明显增加;4周高脂饮食组和8周高脂饮食组TNF-α、IL-6、MCP1、IL-1β、iNOS及VEGF水平均高于普通饮食组,且8周高脂饮食组高于4周高脂饮食组,差异有统计学意义(P<0.05);4周高脂饮食组和8周高脂饮食组IL-10水平低于普通饮食组,且8周高脂饮食组低于4周高脂饮食组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在NAFLD中,Kupffer细胞通过经典激活途径分化为M1型巨噬细胞分泌大量促炎细胞因子,使肝脏处于高炎症状态对肝脏组织造成损伤。

摘要： 肝移植手术是目前治疗各种终末期肝病,延长患者生存时间的有效手段。Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)位于肝血窦,是机体单核-巨噬细胞系统的重要组成部分,能够有效清除异物、病原体和凋亡细胞。在肝移植术后KCs可向感染灶迁移和聚集,并参与炎症反应及免疫耐受调节。KCs对肝移植术后减轻免疫排斥反应、诱导免疫耐受形成、增加移植成活率具有重要意义,现就KCs在肝移植术后免疫耐受调控机制的研究进展进行综述。

摘要： 目的探讨丙泊酚对过氧化氢诱导的大鼠肝Kupffer细胞氧化应激损伤及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法从SD大鼠肝组织中分离出Kupffer细胞。用100μmol/L过氧化氢诱导Kupffer细胞建立氧化应激损伤细胞模型,并随机分为模型组、丙泊酚低浓度组、丙泊酚中浓度组、丙泊酚高浓度组和阳性对照组,另取正常Kupffer细胞作为对照组。对照组和模型组均以不含丙泊酚的细胞培养液培养,丙泊酚低、中、高浓度组分别以含5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L丙泊酚的细胞培养液培养,阳性对照组以含0.1μmol/L盐酸右美托咪定的细胞培养液培养。培养12 h后,检测细胞活性、细胞凋亡率,细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、活性氧簇含量、过氧化氢酶(CAT)活性、PI3K和Akt磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组Kupffer细胞活性、CAT活性、PI3K和Akt的磷酸化水平均降低,凋亡率、LDH释放量、活性氧簇含量均升高(均P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、丙泊酚低、中浓度组Kupffer细胞活性、CAT活性、PI3K和Akt的磷酸化水平均升高,凋亡率、LDH释放量、活性氧簇含量均降低(均P<0.05),而丙泊酚高浓度组Kupffer细胞CAT活性、PI3K和Akt的磷酸化水平均降低,凋亡率、LDH释放量、活性氧簇含量均升高(均P<0.05)。结论低、中浓度(5μmol/L、25μmol/L)的丙泊酚能够减轻过氧化氢诱导的Kupffer细胞氧化应激损伤,提高细胞活性,抑制细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt通路有关。

摘要： 目的:探讨化脂复肝颗粒在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对Kupffer细胞(KCs)TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3信号通路的影响。方法:将分离培养的KCs随机分为空白组、LPS干预组、LPS+空白血清组、LPS+化脂复肝组、高糖+对照组、高糖+LPS干预组、高糖+LPS+空白血清组、高糖+LPS+化脂复肝组,LPS干预浓度为100 ng/ml,高糖干预为于KCs培养基中另加入葡萄糖30 mmol/L。用CCK-8法检测各组KCs增殖情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组KCs培养基上清液中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量;反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组KCs中TLR4、MyD88、NLRP3、Caspase-1、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的基因表达情况。结果:CCK-8检测显示,空白及高糖培养对照组KCs细胞不断增殖,长势良好;LPS+化脂复肝组与高糖+LPS+化脂复肝组KCs缓慢增殖,非高糖组KCs均较含高糖组KCs增殖速率更快;而LPS或高糖+LPS诱导模型组及各加空白血清组KCs于第6小时开始出现凋亡,含高糖组KCs均较非高糖组KCs凋亡速率更快。非高糖各组与含高糖各组中促炎因子TNF-α、IL-1β含量以及炎症相关基因(TLR4、MyD88、NLRP3、Caspase-1、NF-κB/p-65、TNF-α、IL-1β、IL-18)表达水平均呈相同变化趋势,且含高糖各组上述促炎因子及炎症相关基因表达水平均较非高糖组高。以非高糖组为例,LPS诱导模型组和LPS+空白血清组的促炎因子TNF-α与IL-1β含量均显著高于对照组(P0.05);与LPS诱导模型组或LPS+空白血清组比较,LPS+化脂复肝组促炎因子TNF-α与IL-1β含量均显著降低(P<0.05),炎症相关基因TLR4、MyD88等的mRNA表达水平也均显著降低(P<0.05)。结论:化脂复肝颗粒含药血清可改善KCs活力,有效减轻KCs炎症反应,减少KCs细胞焦亡的发生,具有显著的抗炎、抗氧化损伤及保肝作用,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65/NLRP3信号通路的激活相关。

摘要： Kupffer细胞为肝脏中的特殊巨噬细胞,具有清除血液中的外来抗原、抗原–抗体复合物和细胞碎片等物质的作用。Kupffer细胞免疫功能主要在肝脏中发挥作用,近年的研究发现其免疫功能发挥与激发机制与多因素相关,且发挥着不同的作用。本文通过研究现有的文献与成果,综合分析后来阐述总结Kupffer细胞的免疫机制以及近年来其在免疫学功能上的研究进展,为以后的研究提供一定的理论参考。

摘要： 近年来,由于与肿瘤有关的巨噬细胞这一新概念的产生和出现,人们开始越来愈多地关注巨噬细胞在肿瘤的形成及其演变过程中所起到的作用。Kupffer细胞作为一类位于肝脏中的特殊巨噬细胞,是天然免疫系统的组成部分,由血液中的单核细胞黏附在肝窦壁上进行分化形成。在特殊的生理条件下,可以通过吞噬作用来快速清除血循环中的异物颗粒或红细胞;而在病理状态下,则能够促进肝脏内的星状细胞的激活,进而增强和促进肝脏组织的纤维化。此外,作为肝脏免疫细胞中的较重要的组分,Kupffer细胞在肝癌中的作用机制、以及基于Kupffer细胞的靶向治疗一直都受到人们的广泛关注。本文就目前已有的研究,综述了肝癌中Kupffer细胞的作用机制及其靶向治疗。

摘要： 本研究旨在建立一种简单有效的分离大鼠肝细胞和kupffer细胞的方法.大鼠体外肝脏灌流,采用percoll密度梯度分离法分离肝细胞与kupffer细胞,糖原染色鉴定肝细胞,墨汁吞噬实验鉴定kupffer细胞.结果表明,此方法分离的肝细胞和kupffer细胞活性都在95％以上,新分离的肝细胞鹅卵石样,贴壁能力不是特别强,24 h可分化出不同形态.Kupffer细胞具有较强的吞噬能力和贴壁能力,可看到墨汁被细胞吞噬.结论:本实验建立的分离培养方法较稳定,为开展肝细胞和kuffer细胞的相关研究提供方法依据,也为建立各种体外细胞分离培养方法提供借鉴.

摘要： 目的:探讨川陈皮素(nobiletin)对大鼠原位肝移植后缺血再灌注损伤(IRI)的作用及机制.方法:提取大鼠Kupffer细胞(KCs),分为空白对照组、LPS组、LPS+川陈皮素组,ELISA检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6浓度,Western blot检测AKT/GSK3β/NF-κB通路蛋白的表达.动物实验中构建大鼠肝移植后缺血再灌注模型,分为假手术组(Sham组)、肝移植组(LT组)、LT+川陈皮素组.分别于再灌注3 h、6 h、12 h、24 h后获取各组外周血并检测血清转氨酶水平,ELISA检测血清炎症因子水平,获取肝脏组织,提取肝组织及KCs总蛋白,检测炎症因子、凋亡蛋白、AKT/GSK3β/NF-κB通路蛋白水平,HE染色检测肝脏组织病理改变,TUNEL检测肝细胞凋亡情况,流式检测各组CD68和CD86阳性KCs比例.结果:川陈皮素抑制LPS激活的KCs促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达(P<0.05),促进抑炎因子IL-10的表达(P<0.05),同时川陈皮素抑制AKT/GSK3β/NF-κB通路磷酸化水平(P<0.05),动物实验中川陈皮素抑制AKT/GSK3β/NF-κB通路活性,LT+川陈皮素组肝脏损伤程度明显低于LT组(P<0.05),且LT+川陈皮素组肝细胞凋亡水平及M1型KCs比例均低于LT组(P<0.05).结论:川陈皮素通过AKT/GSK3β/NF-κB通路抑制KCs炎症水平,减轻大鼠肝移植后肝脏缺血再灌注损伤.

摘要： 原发性胆汁性胆管炎(PBC)发病率逐年增加,但目前尚无特效药物,发病机制复杂.Kupffer细胞作为调节免疫的关键细胞,在PBC中的作用不容忽视.肝细胞受损时,Kupffer细胞被激活,释放大量炎症因子和趋化因子,参与PBC的发生发展.从Kupffer细胞在PBC中的作用进行简要阐述和分析,为Kupffer细胞作为PBC治疗的可能靶点提供部分理论依据.

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： @@肝脏是机体代谢的重要器官，其存在大量的Kupffer细胞，其总量相当于全身巨噬细胞总量的70%。大量研究发现，Kupffer细胞在机体的全身炎症反应中起重要的平衡.作用。其功能表现在两方面：一方面是可以清除进入循环的病原体及其毒性产物，从而保护肝实质细胞及维持机体内环境恒定；另一方面Kupffer细胞过度激活可合成并释放炎症介质如前炎症细胞因子、趋化因子、氧自由基等，这些炎性介质和细胞因子反过来又可以进一步激活TLRs，介导细胞信号传导，活化Kupffer细胞引起肝损伤。

摘要： @@肝脏是机体代谢的重要器官，其存在大量的Kupffer细胞，其总量相当于全身巨噬细胞总量的70%。大量研究发现，Kupffer细胞在机体的全身炎症反应中起重要的平衡.作用。其功能表现在两方面：一方面是可以清除进入循环的病原体及其毒性产物，从而保护肝实质细胞及维持机体内环境恒定；另一方面Kupffer细胞过度激活可合成并释放炎症介质如前炎症细胞因子、趋化因子、氧自由基等，这些炎性介质和细胞因子反过来又可以进一步激活TLRs，介导细胞信号传导，活化Kupffer细胞引起肝损伤。

摘要： @@肝脏是机体代谢的重要器官，其存在大量的Kupffer细胞，其总量相当于全身巨噬细胞总量的70%。大量研究发现，Kupffer细胞在机体的全身炎症反应中起重要的平衡.作用。其功能表现在两方面：一方面是可以清除进入循环的病原体及其毒性产物，从而保护肝实质细胞及维持机体内环境恒定；另一方面Kupffer细胞过度激活可合成并释放炎症介质如前炎症细胞因子、趋化因子、氧自由基等，这些炎性介质和细胞因子反过来又可以进一步激活TLRs，介导细胞信号传导，活化Kupffer细胞引起肝损伤。

摘要： @@肝脏是机体代谢的重要器官，其存在大量的Kupffer细胞，其总量相当于全身巨噬细胞总量的70%。大量研究发现，Kupffer细胞在机体的全身炎症反应中起重要的平衡.作用。其功能表现在两方面：一方面是可以清除进入循环的病原体及其毒性产物，从而保护肝实质细胞及维持机体内环境恒定；另一方面Kupffer细胞过度激活可合成并释放炎症介质如前炎症细胞因子、趋化因子、氧自由基等，这些炎性介质和细胞因子反过来又可以进一步激活TLRs，介导细胞信号传导，活化Kupffer细胞引起肝损伤。

摘要： 药物性肝损伤是药物研发中的最重要的安全性问题之一，也是许多上市药物撤出市场的主要原因.药物性肝损伤最初是由药物或其代谢产物的直接肝毒性作用引起的.肝实质细胞的损伤激活免疫细胞，促使其释放炎症因子或肝毒性介质，并可启动针对药物相关性抗原的免疫应答。肝脏免疫系统独特的成分和反应特性是揭示药物性肝损伤发生机制的基础，只有从细胞和分子水平上了解这些基础，才能对药物性肝损伤作出有效的预测和防治。

摘要： 本发明公开了一种肝细胞与Kupffer细胞共培养体系及其应用，该共培养体系是在Millicell双层培养室中，在培养基上添加1～100ng/mL的LPS，在Millicell双层培养室的上层培养Kuffer细胞，在下层培养肝细胞；隔天更换一半新鲜的培养基，保持LPS的浓度。本发明提供的肝细胞与Kupffer细胞共培养体系，是在体外条件下，Kupffer细胞受到LPS的刺激之后，持续的分泌炎症细胞因子(如TNF-α)，肝细胞在此环境中，可产生大量的酶(如AST、ALT和GGT)，以此来模拟体内肝组织受到病毒感染之后，产生免疫/炎症应答，导致免疫反应为基础的肝损伤；并以药物对免疫因子分泌量及酶活性的影响，应用于抗免疫性肝损伤药物的筛选。

摘要： 本发明提供了一种重建肝内Kupffer细胞小鼠模型的制备方法，包括首先采用氯磷酸二钠脂质体对小鼠A进行特异性去除肝血窦腔中的Kupffer细胞，然后采用X射线对特异性去除肝血窦腔中的Kupffer细胞后的所述小鼠A进行辐射处理，得到受体小鼠A；提取小鼠B的骨髓并制备成供体骨髓悬液；最后向所述受体小鼠A体内注射所述供体骨髓悬液；从而构建成移植重建肝内Kupffer细胞小鼠模型。该方法避免了传统方法中需要构建特定基因的flox小鼠和合适的CD11b

摘要： 本发明公开了一种肝细胞与Kupffer细胞共培养体系及其应用，该共培养体系是在Millicell双层培养室中，在培养基上添加1～100ng/ml的LPS，在Millicell双层培养室的上层培养Kuffer细胞，在下层培养肝细胞；隔天更换一半新鲜的培养基，保持LPS的浓度。本发明提供的肝细胞与Kupffer细胞共培养体系，是在体外条件下，Kupffer细胞受到LPS的刺激之后，持续的分泌炎症细胞因子(如TNF-α)，肝细胞在此环境中，可产生大量的酶(如AST、ALT和GGT)，以此来模拟体内肝组织受到病毒感染之后，产生免疫/炎症应答，导致免疫反应为基础的肝损伤；并以药物对免疫因子分泌量及酶活性的影响，应用于抗免疫性肝损伤药物的筛选。

摘要： 本发明提供了一种重建肝内Kupffer细胞小鼠模型的制备方法，包括首先采用氯磷酸二钠脂质体对小鼠A进行特异性去除肝血窦腔中的Kupffer细胞，然后采用X射线对特异性去除肝血窦腔中的Kupffer细胞后的所述小鼠A进行辐射处理，得到受体小鼠A；提取小鼠B的骨髓并制备成供体骨髓悬液；最后向所述受体小鼠A体内注射所述供体骨髓悬液；从而构建成移植重建肝内Kupffer细胞小鼠模型。该方法避免了传统方法中需要构建特定基因的flox小鼠和合适的CD11b

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： 提供能保存细胞的组合物。本发明的组合物包含微小气泡。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 提供一种细胞的培养方法，在细胞培养器内向细胞导入因子，并在与上述细胞培养器相同的细胞培养器内培养导入了上述因子的细胞。另外，提供一种单核细胞的回收方法，其包括：对血液进行处理，制作至少部分地除去了红细胞而得到的处理血液；对处理血液进行稀释；使稀释后的处理血液中所含的单核细胞沉降；除去稀释后的处理血液的上清液；以及回收单核细胞。

摘要： 本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。

摘要： 含有细胞细胞外基质的制造方法包括：在具有前端开口部的移液管的内部准备含有(i)细胞外基质前体以及(ii)细胞或者细胞团的细胞外基质溶液；排出上述细胞外基质溶液，在上述移液管的前端开口部形成上述细胞外基质溶液的液滴；使上述移液管的前端开口部接近细胞培养容器的培养面，按照使上述移液管的前端开口部不与上述培养面接触的方式将上述液滴载置于上述培养面上；使上述移液管的前端开口部从上述培养面远离，将上述液滴与上述移液管的前端开口部分离；以及使上述细胞外基质溶液凝胶化，形成含有细胞细胞外基质。