CD4+CD25+T细胞

摘要： 目的 探讨免疫抑制治疗对小儿重型再生障碍性贫血CD4+CD25+T细胞及相关细胞因子表达的影响.方法 选取2017年1月至2019年4月本院收治的重型再生障碍性贫血患儿74例,采用随机数字表法分为对照组和研究组,每组37例.对照组采用环孢素A(CsA)治疗,研究组在对照组基础上采用抗淋巴细胞球蛋白(ALG)治疗,比较两组CD4+CD25+T细胞和T淋巴细胞亚群表达,血清IL-10、IL-35、TGF-β水平及治疗效果.结果 研究组CD4+T、CD25+T、CD4+CD25+T、CD4+CD25+T/CD4+T均低于对照组,血清IL-10、IL-35、TGF-β水平均低于对照组(P<0.05);研究组总有效率高于对照组(P<0.05).结论 在对小儿重型再生障碍性贫血进行治疗的过程中,免疫抑制治疗效果较为理想,对相关细胞因子的表达以及CD4+CD25+T细胞具有一定的影响,值得临床推广应用.

摘要： 目的 探讨人参皂苷Rb1对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 收集处于非活动期SLE患者(30例)和健康对照人群(30例)的外周血,采用免疫磁珠法分离CD3+T淋巴细胞,分为空白组、刀豆球蛋白A(ConA)组、ConA+Rb1组.3 H-TdR渗入法检测各组细胞增殖,并采用流式细胞术检测CD3+CD69+T细胞、CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25+FoxP3+T细胞比例,ELISA法检测T淋巴细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平.结果 当人参皂苷Rb1浓度为10μmol/L时,可抑制外周血T淋巴细胞的增殖(抑制率为40.87％ ±9.82％、53.94％ ±9.12％),且对SLE人群外周血T淋巴细胞增殖的抑制作用高于健康对照人群(P0.05).此外,健康对照组和SLE组外周血T淋巴细胞CD4+CD25+T细胞百分比(24.38％ ±5.45％、16.29％ ±3.18％)和CD4+CD25+FoxP3+T细胞百分比(32.76％ ±7.43％、26.35％ ±5.14％)较ConA组显著增加(P<0.05).人参皂苷Rb1还可促使T淋巴细胞分泌IFN-γ,同时抑制IL-4分泌.结论 人参皂苷Rb1可抑制ConA刺激的SLE患者外周血T淋巴细胞增殖活性,同时增加CD4+CD25+T细胞比例,维持Th1/Th2免疫平衡,有望成为SLE的治疗药物.

摘要： 目的 初步探讨穿龙薯蓣皂苷元对DBA1/J小鼠CD4+CD25-T细胞的影响.方法 采用MACS磁珠分选法分离DBA1/J小鼠脾CD4+CD25-T细胞,并鉴定纯度.穿龙薯蓣皂苷元作用CD4+CD25-T细胞后,采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-10的浓度,Real-Time PCR方法检测Foxp3的水平,FCM检测Treg细胞的比率.结果 免疫磁珠术分选D B A1/J小鼠脾C D4+C D25-T细胞纯度达93.89％.给药作用48h后,与对照组相比,穿龙薯蓣皂苷元组上清中IL-10的浓度显著升高(P<0.05),Foxp3 mRNA水平明显上升(P<0.05),Treg细胞比率明显升高(P<0.05).结论 穿龙薯蓣皂苷元能明显提升DBA1/J小鼠脾脏CD4+CD25-T细胞上清中细胞因子IL-10浓度,Treg细胞Foxp3 mRNA水平及Treg细胞比率.

摘要： 目的初步探讨穿龙薯蓣皂苷元对DBA1/J小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞的影响。方法采用MACS磁珠分选法分离DBA1/J小鼠脾CD4^(+)CD25^(-)T细胞,并鉴定纯度。穿龙薯蓣皂苷元作用CD4^(+)CD25^(-)T细胞后,采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-10的浓度,Real-Time PCR方法检测Foxp3的水平,FCM检测Treg细胞的比率。结果免疫磁珠术分选DBA1/J小鼠脾CD4^(+)CD25^(-)T细胞纯度达93.89%。给药作用48h后,与对照组相比,穿龙薯蓣皂苷元组上清中IL-10的浓度显著升高(P<0.05),Foxp3 mRNA水平明显上升(P<0.05),Treg细胞比率明显升高(P<0.05)。结论穿龙薯蓣皂苷元能明显提升DBA1/J小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(-)T细胞上清中细胞因子IL-10浓度,Treg细胞Foxp3 mRNA水平及Treg细胞比率。

摘要： 目的 探讨外周血调节性B细胞和调节性T细胞在Ⅰ期矽肺患者中的水平变化及意义.方法 采用流式细胞术方法,检测82例Ⅰ期矽肺患者(矽肺组)、48例具有与矽肺组相同接尘条件的健康井下接尘矿工(接尘组)及45例井上健康查体人员(正常组)外周血CD19+CD24hiCD38hiB、CD19+CD25+B及CD4+CD25+T细胞水平.结果 与接尘组和正常组比较,矽肺组CD19+CD24hiCD38hiB、CD19+CD25+B及CD4+CD25+T细胞水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01).与正常组比较,接尘组CD19+CD24hiCD38hiB细胞水平减低,差异具有统计学意义(P<0.05).肺功能轻度障碍组CD4+CD25+T细胞水平低于正常组和中重度障碍组,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01).接尘年限<20年组CD19+CD24hiCD38hiB细胞水平明显低于接尘年限20-年组和接尘年限30-年组,差异均具有统计学意义(P<0.01).相关性分析显示,正常组外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞水平与CD4+CD25+T细胞水平呈负相关(r=-0.441,P<0.05),CD19+CD25+B细胞水平与CD4+CD25+T细胞水平呈正相关(r=0.477,P<0.05),矽肺组和接尘组各指标间无相关性.结论 Ⅰ期矽肺患者外周血CD19+CD24hi CD38hi B、CD19+CD25+B及CD4+CD25+T细胞失衡并参与该病发生发展,CD4+CD25+T细胞水平可预示早期肺功能损伤,CD19+CD24hiCD38hi B水平可能与接尘时间有关.

摘要： 目的 探讨不同疗程左氧氟沙星联合四联抗结核疗法治疗结核性渗出性胸膜炎的疗效.方法 选择2015年6月-2018年6月西安市胸科医院治疗的结核性渗出性胸膜炎患者260例作为研究对象,根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组各130例.所有患者均行左氧氟沙星联合四联抗结核方案治疗,四联抗结核方案中,肌注硫酸链霉素注射液0.75 g,1次/d;口服异烟肼片0.3 g,1次/d;口服利福平片0.45 g,1次/d;口服吡嗪酰胺片1.5 g,1次/d.同时静滴盐酸左氧氟沙星注射液500mg,静滴时间≥60min,1次/d.对照组连续治疗4周,观察组连续治疗2周.观察两组患者的临床疗效、临床症状及不良反应发生情况,同时比较两组治疗前后的CD4+CD25+T细胞水平.结果 治疗后,两组的治疗总有效率比较无统计学意义.两组的积液消失时间、引流流量、穿刺次数、完全退热时间对比无统计学意义.两组治疗后的CD4+CD25+T细胞比例显著高于治疗前(P＜0.05),观察组显著高于对照组(P＜0.05).观察组治疗期间的胃肠道反应、关节痛、血小板减少、白细胞减少等发生率为1.5％,低于对照组的9.2％(P＜0.05).结论 相对于长疗程,短疗程左氧氟沙星联合四联抗结核疗法治疗结核性渗出性胸膜炎也具有很好的疗效,能促进缓解患者的临床症状,且能减少不良反应的发生,促进恢复患者的免疫功能.

摘要： 目的:探讨不同剂量雷公藤多甙对老年复发免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+/CD8+比值、CD4 CD225T细胞水平的影响,以便寻求更合适治疗剂量理论依据.方法:96例病例随机分为对照组(支持治疗)30例、雷公藤低剂量组(支持治疗+雷公藤多甙片1.0 mg/kg· d-1)34例、雷公藤高剂量组(支持治疗+雷公藤多甙片1.5 mg/kg·d)32例,连续治疗8周,用流式细胞仪分别检测治疗前1周、治疗后4、8周时CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+T细胞水平及常规监测血小板计数,并进行组内、组间比较.结果:1)对照组治疗前后CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+T细胞水平、血小板计数比较,无显著性差异(P＞0.05);与本组治疗前比较,雷公藤低、高剂量组治疗后CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+T细胞水平、血小板计数明显升高,均有显著差异 (P＜0.05).2)与同期对照组相比,治疗后4周、8周后雷公藤低、高剂量组CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+T细胞水平、血小板计数升高,均有显著差异(P＜0.05);雷公藤低剂量组与高剂量组CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+T细胞水平、血小板计数,均无显著性差异(P＞0.05);雷公藤组副作用轻微.结论:雷公藤多甙片可提高老年复发ITP患者的CD4+/CD8+比值和CD4+CD25+T细胞水平,提高血小板计数,副作用轻微,低、高剂量组间无显著差异,可选择低剂量应用.

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 目的：血吸虫虫卵抗原引起的肝肠组织肉芽肿及随之发生的纤维化是慢性和晚期血吸虫病病人的主要病理表现。对血吸虫自然感染动物模型的研究发现，宿主免疫应答经历了一个从早期Th1型免疫应答转归到虫卵期Th2型免疫应答的过程。近年来研究表明，慢性血吸虫感染诱导宿主上调表达CD4+CD25+T细胞，能够抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，下调Th1细胞水平。基于Kupffer细胞对机体的细胞免疫功能具有明显的调节作用，本研究探讨了Kupffer细胞对日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞以及肉芽肿的影响。rn 方法：实验动物与阳性钉螺，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠(清洁级)，购自中国科学院上海实验动物中心，阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所。主要试剂，流式抗体包括PE-Cy5标记的CD4、PE标记的CD25以及相应的同型对照抗体、免疫组化抗体Foxp3购自美国eBioscience公司。细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10检测试剂盒为R＆D公司产品。氯化钆购自美国Sigma公司。肝功能试剂购自北京中生生物公司。动物分组与感染，6～8周龄雌性C57BL／6J小鼠分为对照组，感染组与感染／氯化钆组3组，每组各10只，其中感染组通过腹部感染尾蚴10条／只；感染／氯化钆组为在感染尾蚴后第4周经尾静脉注射氯化钆，剂量为每次15 mg／kg，每周2次；对照组则通过尾静脉注射PBS。CD4+CD25+T细胞计数，感染第8周无菌取肠系膜淋巴结和脾脏组织，分离单个核细胞。取1×106个细胞，分别加入PE-Cy5标记的CD4和PE标记的CD25各10 μl于标本管中，室温孵育20～30 min，并振荡混匀，洗涤1次，重新悬浮细胞，上流式细胞仪检测。细胞因子检测，采用小鼠ELISA检测试剂盒测定小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TGF-β和IL-10的表达水平，按照试剂盒操作说明书进行。将不同稀释度的标准品以及待测样本加入反应孔，每个样品作双复孔。根据不同浓度下标准品的吸光度(A值)绘制标准曲线，再根据待测样本的A值计算血清细胞因子的浓度。免疫组织化学染色检测Foxp3的分布，采用免疫组织化学(SP法)染色检测Foxp3的分布。小鼠肝脏置中性甲醛溶液中，石蜡切片脱蜡、水化；3％H2O2室温孵育5～10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，5％～10％正常山羊血清封闭，室温孵育10 min；滴加10μl的抗小鼠Foxp3抗体，37°C孵育2h；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1％BSA-PBS稀释)，37°C孵育10～30 min；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37°C孵育10～30 min，DAB显色；在高倍视野(×400)下，分别随机记数5个肉芽肿周围细胞中的染色细胞数。肝功能检测，摘眼球取血后，用枸橼酸钠抗凝，日立(HITACHI)-7060型全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素。统计学处理，统计学分析采用SPSS 11.5软件包处理，两组间比较采用t检验。rn 结果：CD4+CD25+T细胞数量，本组研究显示感染组肉芽肿期CD4+CD25+T细胞数量为13.8％，对照组为6.4％，感染／氯化钆组为9.3％(P＜0.05)。Foxp3的分布，氯化钆降低肉芽肿周围表达Foxp3细胞的数量，感染组Foxp3细胞数量为(62±7)个，感染／氯化钆组为(45±4)个(P＜0.05)。细胞因子水平，感染组小鼠血清IL-10水平为41.4pg／ml，显著高于正常对照组的11.5 pg／ml，感染／氯化钆组为22.6 pg／ml(P＜0.01)。氯化钆还可降低IL-4和IL-5的水平，然但对IL-2、IFN-γ、以及TGF-β影响不明显。肝功能，对照组ALT水平为40.2 U／L，感染组为205.4 U／L，感染／氯化钆组为153.4 U／L(P＜0.05)，AST与胆红素变化不明显。组织学变化，氯化钆可减轻肉芽肿周围炎症反应程度。对照组肝组织切片镜下显示肝小叶结构正常，汇管区无虫卵沉积，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生，肝细胞索呈放射状排列：感染组病理切片示，肝组织中出现较大的虫卵肉芽肿，周围有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润；而感染／氯化钆组肝组织中虫卵肉芽肿较小，炎症细胞浸润也减少。rn 结论：本研究结果显示，Kupffer细胞参与日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成，并调节一群具有免疫抑制功能的CD4+CD25+T细胞表达，上调Th 2细胞反应。因此，抑制Kupffer细胞功能可下调血吸虫病肉芽肿期CD4+CD25+T细胞的增殖和分化以及减轻肉芽肿周围的炎症反应，这将有可能为慢性血吸虫感染及其纤维化的治疗寻找一条新的途径。

摘要： 本发明涉及一种检测CD105、CD144、CD34、KDR、Annexin V和CD63的试剂在制备检测血液中的内皮及内皮祖细胞释放的细胞外囊泡的试剂中的应用，从循环系统中分别分离出EC‑MVs、EPC‑MVs、EC‑EXs和EPC‑EXs。该方法突破了以往用单特异性抗体的方法且提取出来的细胞MVs和EXs比现有技术的特异性和敏感性高。此外，本发明利用纳米微粒追踪分析术(NTS)针对细胞MVs和EXs进行特异性抗体micro‑beads方法结合荧光量子点(Q‑dots)方法进行检测。该方法能快速，准确，客观分析复杂样本例如血液中EC‑MVs,EPC‑MVs,EC‑EXs和EPC‑EXs的水平，有传统分析方法例如流式所不具备的优势。因此，本发明为进一步研究MVs和EXs作为疾病的生物标记物提供了特异和敏感的方法。

摘要： 本发明公开了一种同时高效扩增CD3+CD56+CIK细胞和CD3‑CD56+NK细胞的方法，步骤为：用含自体血浆的无血清培养基调整分离的PBMC浓度加入Anti‑CD16抗体、IL‑2、IL‑15后转入T175培养瓶中培养，后再加入Anti‑CD3抗体、Anti‑CD137抗体，根据细胞的生长情况，每隔2天补充含自体血浆、IL‑2和IL‑15的无血清培养基，控制细胞浓度约1.5×106/ml，培养14～21天后可同时获得大量较高纯度的CD3+CD56+CIK和CD3‑CD56+NK细胞，且总细胞数量能达到临床用于肿瘤过继性细胞免疫治疗所需细胞数量的有效值。本发明简便、有效，细胞杀伤活性高。

摘要： 本发明公开了一种促进NK细胞增殖的方法。本发明提供了CD3+CD56+T细胞的新用途，为如下三种中的任一种：1)在制备促进NK细胞增殖的产品中的应用；2)在制备促进NK细胞有丝分裂的产品中的应用；3)在制备增强NK细胞抗凋亡能力的产品中的应用。本发明利用CD3+CD56+T细胞具有促进NK细胞增殖的特性，将CD3+CD56+T细胞和NK细胞这两类具有强大杀伤功能的免疫细胞共同培养，建立了NK细胞混合培养体系。本发明为NK细胞的体外大量增殖培养提供了新的思路。

摘要： 本发明目的在于提供对各种疾病发挥优异的治疗效果的新型的间充质干细胞及包含该间充质干细胞的新型的药物组合物、以及它们的制备方法。本发明为表达选自由CD201、CD46、CD56、CD147和CD165组成的组中的至少1种细胞表面标记物的间充质干细胞。表达上述特定标记物的间充质干细胞为CD29、CD73、CD90、CD105和CD166阳性，维持了未分化性。

摘要： 本发明公开了一种同时高效扩增CD3+CD56+CIK细胞和CD3-CD56+NK细胞的方法，步骤为：用含自体血浆的无血清培养基调整分离的PBMC浓度加入Anti-CD16抗体、IL-2、IL-15后转入T175培养瓶中培养，后再加入Anti-CD3抗体、Anti-CD137抗体，根据细胞的生长情况，每隔2天补充含自体血浆、IL-2和IL-15的无血清培养基，控制细胞浓度约1.5×106/ml，培养14～21天后可同时获得大量较高纯度的CD3+CD56+CIK和CD3-CD56+NK细胞，且总细胞数量能达到临床用于肿瘤过继性细胞免疫治疗所需细胞数量的有效值。本发明简便、有效，细胞杀伤活性高。

摘要： 本公开的实施方案包括与T细胞疗法的改善有关的方法和组合物。在特定的实施方案中，在CD8+T细胞中表达转基因CD8αβ共受体后，CD8+T细胞疗法得到增强。在某些实施方案中，在CD4+T细胞中表达转基因CD8αβ共受体后，CD4+T细胞具有了细胞毒性细胞功能用于过继转移。在特定的实施方案中，表达TCR和表达CD8αβ共受体的CD4+和CD8+T细胞用于过继转移。

摘要： 本发明提供：基本上由细胞表面标记物CD31及CD200呈阳性、CD45呈阴性的哺乳动物细胞组成的细胞群；基本上由细胞表面标记物CD31、CD157及CD200呈阳性、CD45呈阴性的哺乳动物细胞组成的细胞群；细胞表面标记物CD31呈阳性、CD157及CD200中的至少一者呈阳性、CD45呈阴性的哺乳动物的血管内皮干细胞；及将该细胞群或该血管内皮干细胞作为有效成分的用于血管再生的药物。

摘要： 本发明公开了一种促进NK细胞增殖的方法。本发明提供了CD3+CD56+T细胞的新用途，为如下三种中的任一种：1)在制备促进NK细胞增殖的产品中的应用；2)在制备促进NK细胞有丝分裂的产品中的应用；3)在制备增强NK细胞抗凋亡能力的产品中的应用。本发明利用CD3+CD56+T细胞具有促进NK细胞增殖的特性，将CD3+CD56+T细胞和NK细胞这两类具有强大杀伤功能的免疫细胞共同培养，建立了NK细胞混合培养体系。本发明为NK细胞的体外大量增殖培养提供了新的思路。

摘要： 本发明提供了由胎盘干细胞产生肝细胞的方法和组合物。本发明还提供了这类肝细胞在治疗和干预例如肝脏的创伤、炎性疾病和退行性疾病中的用途。本发明还提供了与纳米纤维支架和贴壁胎盘干细胞的组合有关的组合物和方法，以及使用它们修复软骨的方法。最后，本发明提供了与来自胎盘的非贴壁CD34+CD45－干细胞有关的组合物和方法。

摘要： 本发明提出了确定是否出现空肠组织炎症反应或者确定所述炎症反应程度或变化的标志物，所述标志物选自促炎性巨噬细胞亚群CD45+CD11b+F4/80+CD14+。在发生空肠组织炎性反应后，促炎性巨噬细胞亚群CD45+CD11b+F4/80+CD14+的占比(即促炎性巨噬细胞亚群CD45+CD11b+F4/80+CD14+在空肠组织所有巨噬细胞中的比例)出现了显著升高。由此，促炎性巨噬细胞亚群CD45+CD11b+F4/80+CD14+可以作为确定是否出现空肠组织炎症反应的标志物，尤其适用于60Coγ射线辐射所引发的空肠组织炎症反应。