角膜上皮细胞

摘要： 目的探讨Slit引导配体2(Slit2)对糖尿病小鼠角膜上皮和神经损伤修复的促进作用及其可能的分子机制。方法选取60只SPF级5~6周龄C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病模型组和Slit2注射组,每组20只。糖尿病模型组和Slit2注射组小鼠采用链脲霉素腹腔内注射法建立糖尿病模型。构建小鼠角膜上皮损伤修复模型,Slit2注射组于造模后即刻结膜下注射Slit2重组蛋白,糖尿病模型组小鼠结膜下注射等容量PBS,正常对照组不做处理。采用角膜荧光素染色法观察小鼠角膜上皮缺损后24、48和72 h愈合情况;采用实时荧光定量PCR法检测正常对照组和糖尿病模型组小鼠角膜上皮中Slit2及其相关受体mRNA的表达;采用角膜铺片β-tubulinⅢ荧光染色法观察小鼠角膜神经形态变化;采用免疫荧光法检测正常对照组和糖尿病模型组小鼠角膜上皮中Slit2的表达分布及修复的角膜上皮中Slit2、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、苏氨酸蛋白激酶(AKT)、β-连环蛋白(β-catenin)和Ki67的表达。将小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)分为正常对照组、高糖组和Slit2干预组。采用Western blot法检测各组细胞中p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK和β-catenin的表达;取高糖培养的TKE2,采用Western blot法检测0.01、0.1和0.5μg/ml Slit2处理10 min及0.5μg/ml的Slit2处理前和处理后10、20、30、60、120 min时p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT的表达。原代培养各组小鼠三叉神经节(TGs)细胞,采用β-tubulinⅢ免疫荧光染色法观察Slit2对于TGs细胞轴突再生的影响。结果角膜上皮刮除后48 h和72 h,与正常对照组和Slit2注射组比较,糖尿病模型组小鼠角膜上皮修复速度明显减慢。糖尿病模型组小鼠正常角膜上皮中Slit2及其Robo1、Robo2、Robo4受体mRNA相对表达量明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。糖尿病模型组损伤修复的角膜上皮中Slit2免疫荧光强度明显弱于正常对照组。角膜铺片神经荧光染色显示,与糖尿病模型组比较,角膜上皮损伤后7 d Slit2注射组角膜神经丛致密,神经纤维数量增多且分布均匀,神经末梢可见较多分支。正常对照组和Slit2注射组修复的角膜上皮中p-EGFR、p-ERK、β-catenin和Ki67荧光明显强于糖尿病模型组。高糖组TKE2细胞内p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT和β-catenin相对表达量均明显低于正常对照组和Slit2干预组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Slit2处理高糖培养TKE2细胞后10 min,p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT的相对表达量较处理前均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),随着Slit2质量浓度的增加,TKE2细胞中p-EGFR/EGFR和p-AKT/AKT相对表达量逐渐升高,Slit2质量浓度为0.5μg/ml时对EGFR和AKT信号通路的活化作用最明显。高糖组体外培养的TGs突触长度为(40.52±5.44)μm,明显短于正常对照组的(72.14±9.48)μm和Slit2注射组的(73.04±4.66)μm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Slit2通过激活EGFR信号通路对糖尿病模型小鼠角膜上皮发挥保护作用,并通过增加角膜上皮下神经丛密度和促进TGs细胞轴突生长,发挥神经保护能力。

摘要： 目的:基于JNK1/AQP5通路观察杞参方颗粒对高渗诱导的角膜上皮细胞(HCECs)保护作用,阐明其治疗干眼的作用机制。方法:通过500mOsm/L浓度渗透压作用于HCECs制造干眼细胞模型。空白组:正常条件培养的角膜上皮细胞;模型组:模型细胞加入10%空白血清;西药组:模型细胞加入0.3%玻璃酸钠滴眼液;杞参方高剂量组:模型细胞加入15%杞参方高剂量含药血清;杞参方中剂量组:模型细胞加入15%杞参方中剂量含药血清:杞参方低剂量组:模型细胞加入15%杞参方低剂量含药血清。CCK-8法检测不同药物干预对HCECs存活率的影响;ELISA法检测各组细胞外液炎性因子TNF-α、IL-6的表达;免疫细胞化学法检测各组HCECs凋亡因子caspase-1与AQP5的蛋白表达变化;Western blotting法检测各组HCECs的JNK1、p-JNK1、AQP5表达情况。结果:与空白组相比,各组HCECs存活率均显著减少(均P0.05)。结论:杞参方颗粒可降低高渗诱导HCECs的JNK1的磷酸化和AQP5的蛋白表达,降低细胞外液炎症因子TNF-α、IL-6和HCECs凋亡因子caspase-1的表达,最终有效抑制炎症反应和细胞凋亡。

摘要： 目的基于ERK1/p38MAPK通路观察杞参方对高渗诱导的角膜上皮细胞(HCECs)的保护作用。方法通过500 mOsm/L浓度渗透压作用于HCECs制造干眼细胞模型,将空白血清、玻璃酸钠滴眼液、杞参方颗粒高、中、低剂量含药血清作用于干眼模型HCECs。采用CCK-8法检测HCECs的存活率,ELISA法检测细胞外液炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-8的表达,ICC法检测凋亡因子caspase-3的蛋白表达,Western blotting法检测HCECs的ERK1、p38MAPK及磷酸化蛋白表达情况。结果与空白组相比,各组HCECs存活率均显著降低(P<0.01),各组细胞外液炎性细胞因子IL-1β、IL-8及HCECs中caspase-3、p-ERK1、p-p38MAPK蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与模型组相比,各用药组HCECs存活率显著增加(P<0.01),各用药组IL-1β和IL-8、西药组和杞参方高、中剂量组caspase-3和p-ERK1及杞参方高、中剂量组p-p38MAPK蛋白表达减少(P<0.05);与西药组相比,杞参方高剂量组HCECs存活率显著增加(P<0.01),杞参方高剂量组的IL-1β、IL-8、caspase-3、p-ERK1、p-p38MAPK与杞参方中剂量组的IL-1β、p-ERK1、p-p38MAPK及杞参方低剂量组的IL-8蛋白表达减少(P<0.05)。结论杞参方颗粒可降低高渗诱导HCECs的ERK1、p38MAPK的磷酸化蛋白表达,降低细胞外液炎性细胞因子IL-1β、IL-8和HCECs凋亡因子caspase-3的表达,最终有效抑制炎症反应和细胞凋亡。

摘要： 目的探讨外周血单核细胞作为角膜缘干细胞替代角膜上皮细胞再生的潜能。方法实验时间为2020年1月至2021年1月,实验动物为来自暨南大学生理实验室5~8月龄健康新西兰大白兔30只;外周血单核细胞体外培养及鉴定:采用密度梯度离心法分离兔外周血单核细胞,在倒置相差显微镜下观察单核细胞形态,细胞分选技术检测单核细胞表面标志物CD14。将收集的单核迁移细胞置于新鲜角膜缘和角膜上皮组织块的微环境中共培养1周,流式细胞仪检测诱导前与诱导后细胞表面特异标志物细胞角蛋白的阳性率,诱导前与诱导后细胞表面角蛋白阳性表达率指数的组间比较采用重复测量设计的方差分析。计量资料采用t检验。结果流式细胞术检测诱导前单核迁移细胞特异标志物细胞角蛋白阳性率为1.64%,诱导后单核迁移细胞特异标志物细胞角蛋白阳性率为11.30%。诱导前,实验组细胞角蛋白阳性表达率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);诱导7 d后,实验组细胞角蛋白阳性表达率为(10.298±0.996)%,与对照组(1.786±0.237)%比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论外周血单核细胞作为角膜缘干细胞的自体替代干细胞来源,被认为是角膜上皮重建的有效治疗策略。

摘要： 铁死亡是一种特殊类型的细胞死亡方式,其为依赖铁元素代谢紊乱,并以细胞内胞质和脂质的活性氧堆积为特征的调节性细胞死亡.本文综述了铁死亡概念的发展、铁死亡的机制及其在眼科疾病中的最新研究进展,包括角膜上皮、视网膜色素上皮细胞、糖尿病视网膜病变、视网膜缺血-再灌注损伤、青光眼、视网膜母细胞瘤、视网膜色素变性等,为临床上眼科医师对疾病的研究和防治开辟新的途径.

摘要： 目的 探讨不同胎牛血清(FBS)浓度培养下人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)条件培养液(hUCMSCCM)对角膜上皮细胞损伤修复的促进作用.方法 采用贴壁法培养,以含有1％,3％,5％,10％的FBS培养基培养P6代hUCMSCs并收集4种培养条件下的培养基,利用CCK-8方法检测细胞hUCMSCCM对角膜上皮细胞增殖的影响;收集4种hUCMSCCM培养损伤的角膜上皮细胞,检测其对角膜上皮细胞损伤修复的影响;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种hUCMSCCM中血小板源性生长因子(PDGF)和白细胞介素-8(IL-8)的含量.结果 ①收集的4种hUCMSCCM均能促进角膜上皮细胞增殖,随着培养时间的延长,其中1％hUCM-SCCM和3％hUCMSCCM2组条件下,角膜上皮细胞的增殖能力显著高于其他实验组和对照组;②4种hUCM-SCCM均促进角膜上皮细胞的迁移,1％hUCMSCCM在24 h促进角膜上皮细胞损伤修复最为显著,随着时间延长,除10％hUCMSCCM组外其余组均表现出显著的促进角膜上皮细胞损伤修复的能力;③4种UCMSCCM中PDGF的分泌具有差异性,随着血清浓度的增大,PDGF的含量逐渐减少;而IL-8的分泌与血清浓度的增加呈现正相关性.结论 不同浓度FBS培养的hUCMSCCM对角膜上皮细胞增殖和损伤修复具有促进作用,其中1％FBS hUCMSCCM在24 h修复和促增殖最为显著;其作用是通过分泌修复因子促进角膜上皮细胞的增殖和迁移,从而保护角膜上皮细胞.干细胞条件培养基将成为角膜上皮损伤的新治疗方法.

摘要： 角膜上皮屏障破坏是多种角膜疾病的基础,探讨其危险因素是目前研究的热点。本研究利用基因敲除技术获得了角膜上皮细胞Cdc42基因敲除小鼠,发现该小鼠角膜荧光素钠染色呈阳性,角膜屏障功能破坏。12周龄出现角膜混浊、白斑。角膜病理观察发现基因敲除导致小鼠的上皮变薄,细胞层数减少。共聚焦显微镜、扫描和透射电镜观察均发现角膜上皮细胞间隙增宽,表层细胞剥脱增加,说明Cdc42缺失导致小鼠角膜上皮屏障结构、功能破坏。

摘要： 背景角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈。目的诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal epithelial cells,CECs)。方法采用拟胚体联合小分子化合物(SB505124和IWP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人胚胎干细胞H9系(hESCs H9)进行诱导,分别于诱导10 d、15 d和20 d时观察细胞形态,用免疫荧光法和实时定量PCR法对特征性标志物OCT4、SOX2、ΔNp63、CK14、CK3和CK12进行基因及蛋白水平的检测。结果小分子化合物诱导后胚胎干细胞形态改变,类似角膜上皮细胞形态。诱导后干性标志物OCT4和SOX2表达下调(P均<0.01),角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞标志物ΔNp63、CK14、CK3和CK12表达均上调(P均<0.05)。结论通过拟胚体联合小分子化合物的方法,可以将ESCs诱导为角膜上皮样细胞。

摘要： 背景 角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈.目的 诱导人胚胎干细胞(human?embryonic?stem?cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal?epithelial?cells,CECs).方法 采用拟胚体联合小分子化合物(SB505124和IWP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic?fibroblast?growth?factor,bFGF)对人胚胎干细胞H9系(hESCs?H9)进行诱导,分别于诱导10?d、15?d和20?d时观察细胞形态,用免疫荧光法和实时定量PCR法对特征性标志物OCT4、SOX2、ΔNp63、CK14、CK3和CK12进行基因及蛋白水平的检测.结果 小分子化合物诱导后胚胎干细胞形态改变,类似角膜上皮细胞形态.诱导后干性标志物OCT4和SOX2表达下调(P均<0.01),角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞标志物ΔNp63、CK14、CK3和CK12表达均上调(P均<0.05).结论 通过拟胚体联合小分子化合物的方法,可以将ESCs诱导为角膜上皮样细胞.

摘要： 目的:探讨白藜芦醇(RSV)对人角膜上皮细胞(HCECs)炎症和氧化应激损伤的保护作用.方法:用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HCECs发生炎症反应,设对照组、TNF-α组、RSV+TNF-α组;用H2 O2诱导HCECs发生氧化应激反应,设正常组、H2 O2组、RSV+H2 O2组.采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测相关炎症因子IL-1、IL-6、IL-8的表达;免疫荧光染色法及Western blot法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)的核转位;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:在HCECs炎症反应中,RT-qPCR及ELISA结果均显示,与对照组相比,TNF-α 组的HCECs IL-1、IL-6、IL-8的表达水平均显著升高.RSV预处理细胞后,以上指标较TNF-α组显著下降;免疫荧光染色及Western blot结果均显示,TNF-α 组NF-κB p65核转位增加,而RSV预处理细胞后NF-κB p65核转位受到抑制.在HCECs氧化应激反应中,MTT和DCFH-DA荧光探针染色结果分别显示,H2 O2刺激使HCECs活力显著下降,HCECs内ROS的产生增多.而RSV预处理后,细胞活力显著上升,且RSV抑制了H2 O2诱导的HCECs内ROS的产生.结论:RSV对HCECs的炎症和氧化应激反应具有抑制作用,RSV通过抑制NF-κB通路激活以抑制炎症反应.

摘要： 目的:观察KGF-2体外对人角膜上皮细胞,人角膜基质细胞的增殖及迁移作用.rn 方法：体外培养人角膜上皮细胞,人角膜基质细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)检测细胞增殖;体外划痕试验检测KGF-2对角膜上皮细胞,基质细胞促迁移作用研究.rn 结果:KGF-2 在1ng·mL-1～100ng mL-1之间对角膜上皮细胞有促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;然而,在角膜基质细胞,KGF-2对其的促增殖作用,需要外源性肝素钠的调控;在外源肝素存在条件下,KGF-2 在1μg·mL-1 ～100μg·mL-1之间对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系.KGF-2对角膜上皮细胞和角膜基质细胞有加速细胞迁移的作用.rn 结论:KGF-2对角膜细胞的修复作用与增加了角膜上皮细胞和基质细胞的增殖与迁移有关。

摘要： 目的：研究不同相对分子质量聚乙二醇（PEG）修饰不同代数树枝状大分子聚酰胺-胺（PAMAM）得到的产物，测定其对人体角膜上皮细胞（HCECs）的毒性。rn 方法：采用硝基苯氯甲酸酯（p-NPC）将单甲氧基聚乙二醇（mPEG，相对分子质量为750, 2 000, 5 000）活化成PEG碳酸酯，对第4，5代PAMAM大分子进行修饰；目标产物用FT-IR、1H-NMR进行结构表征；采用WST-8法考察PEG修饰对PAMAM的人角膜上皮细胞（HCECs）毒性的影响。rn 结果： PAMAM经较低浓度PEG修饰后，对HCECs的毒性减弱不明显，经较高浓度PEG修饰后，对 HCECs减毒明显减弱，不同相对分子质量的PEG修饰对PAMAM的减毒作用无明显差异。rn 结论：经PEG修饰后，可以降低PAMAM对HCECs的毒性，作为新型眼部给药载体具有良好的前景。

摘要： 为进一步研究热毒清眼药水治疗HSK的疗效和安全性，作者进行了离体兔角膜上皮细胞培养、传代，和分别在兔角膜上皮细胞模型上对该药展开了药效和毒性的研究。

摘要： 目的：研究体外诱导小鼠胚胎干细(embryonic stem cell,ESC)分化为角膜上皮细胞的条件。rn 方法：通过模拟角膜上皮细胞相关微环境包括培养角膜缘上皮细胞、晶状体上皮细胞和胚眼,采用Transwell非接触共培养系统和直接接触共培养诱导ES细胞分化,倒置荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态结构以及病理切片常规组织检查,并行CK3／CKl2及p63免疫组化鉴定。rn 结果：与角膜缘上皮细胞共培养诱导的ES细胞倒置显微镜及透射电镜观察均显示典型上皮样细胞形态,表达CK3／CKl2角蛋白；与晶状体上皮细胞共培养的ES细胞,非接触共培养诱导者分化为上皮样细胞,部分表达CK3／CKl2角蛋白及Pan-CK,p63表达阴性；而直接接触培养诱导者分化后大部分表达p63,而CK3／CKl2则为阴性。rn 结论：角膜缘上皮细胞、晶状体上皮细胞均可诱导胚胎干细胞部分分化为角膜上皮样细胞。ES细胞来源的分化细胞有可能为角膜上皮缺陷性疾病进行细胞移植治疗,以及构建组织工程视网膜及生物角膜提供理想的细胞来源。

摘要： 目的：考察树枝状聚合物聚酰胺-胺(PAMAM) 对葛根素在角膜上皮（HCE）细胞毒性、摄取及渗透的影响，并对G4 PAMAM 的摄取机制进行研究。rn 方法：采用WST-8 法，考察了 PAMAM 短期细胞毒性、延迟细胞毒性以及与葛根素混合物的HCE 细胞毒性。建立HCE 细胞摄取以及渗透模型，比较了五种不同代数PAMAM 对葛根素HCE 细胞摄取和渗透的影响。采用流式细胞仪、扫描共聚焦显微镜对G4 PAMAM 摄取机制进行了初步研究。rn 结果：PAMAM 与HCE 细胞孵育30、60、90min 后显示细胞毒性呈时间、代数依赖关系，洗脱 PAMAM 后再孵育24h 未表现出延迟的细胞毒性。PAMAM 和葛根素的混合物未显示HCE 细胞毒性。整代PAMAM 可以明显促进HCE 细胞对葛根素的摄取，且呈现明显的代数、时间依赖关系，半代PAMAM 对葛根素HCE 细胞摄作用不明显。整代PAMAM 可以促进葛根素在HCE 细胞的渗透，促进作用依次为G4>G3>G5，半代PAMAM 对葛根素的HCE 细胞渗透没有影响。流式细胞术和共聚焦显微镜研究结果表明PAMAM 主要是被HCE 细胞摄取，而不是共轭连接于细胞表面。rn 结论：整代PAMAM 可促进葛根素在HCE 细胞的摄取及渗透。

摘要： 通过对角膜上皮细胞和结膜上皮细胞的研究显示,利用一定的载体,体外培养的角膜缘上皮细胞可有效改善眼表功能,为进一步的角膜移植创造条件,本文便对眼表上皮细胞的体外培养条件、细胞增殖力及调节、细胞表型和影响因素作了简单描述.

摘要： 本发明属于组织工程技术领域，具体涉及一种以类角膜上皮细胞为种子细胞构建组织工程化角膜上皮的方法与应用。本发明提供了一种采用两步法诱导皮肤来源的表皮细胞转分化为类角膜上皮细胞，以诱导获得的类角膜上皮细胞为种子细胞替代角膜缘干细胞构建组织工程化角膜上皮，制得的组织工程化角膜上皮，具有透明度良好，弹性好，可操作性强等特点，可用于移植修复人类或动物因角膜缘干细胞缺损导致视力严重下降或失明的眼表，用于因角膜缘干细胞缺损而失明的动物模型的自体移植和同种异体移植均能取得良好的效果。

摘要： 本发明公开了角膜上皮细胞和角膜支架及其制备方法和应用，涉及角膜疾病药物领域。本发明公开的角膜上皮细胞的制备方法，其通过将人胚胎干细胞接种至E6培养基进行培养，使得人胚胎干细胞分化成角膜上皮细胞，通过该制备方法可以持续地提供具有快速增殖能力的角膜上皮细胞，可用于制备角膜支架，或用于制备治疗角膜疾病药物中。

摘要： 本发明涉及干细胞诱导分化领域，尤其涉及一种诱导间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的无血清完全培养基，通过以下方法制备：每1L所述诱导分化无血清完全培养基中含有白藜芦醇5‑10μmol、淫羊藿苷2‑4μmol、阿司匹林1‑3nmol、甲状旁腺激素1‑3nmol、氢化可的松5‑10nmol、雷帕霉素1‑3mg、睾酮2‑10μg、EPO 2‑10μg、LIF 2‑10μg，余量为角膜上皮细胞无血清培养基，混匀后过滤除菌即可。本发明的一种诱导间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的无血清完全培养基，采用中药成分白藜芦醇、淫羊藿苷联合阿司匹林、甲状旁腺激素、氢化可的松、雷帕霉素、睾酮和生长因子，协同诱导间充质干细胞定向分化为角膜上皮细胞，所选用的诱导成分均无毒，诱导效率高，诱导时间短，诱导获得角膜上皮细胞活性好，细胞移植后无排斥，无伦理问题，安全性高。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种犬角膜上皮细胞永生化细胞系的构建方法和应用，包括以下步骤：将实验犬麻醉后，采集角膜组织，收集角膜上皮组织，进行上皮细胞原代培养；将纯化后的原代犬角膜上皮细胞进行携带SV40T抗原基因的病毒转染，通过单克隆获得永生化犬角膜上皮细胞。本发明方法建立的细胞易于培养，增殖快，且具有血清依赖性，无肿瘤变，有利于进行角膜相关疾病致病机理、药物开发和疾病防治的体外研究，提供基础材料制备方法。

摘要： 本发明提供了一种诱导人胚胎干细胞定向分化为角膜上皮细胞的培养方法，包括以下步骤：S1，将人胚胎干细胞复苏后在E8培养基中培养4‑6天，接种于低吸附培养皿中，使用NP培养基分化培养6‑10天后获得NP细胞；S2，将步骤S1得到的NP细胞消化，接种于贴附培养皿，使用上皮分化培养基继续分化4‑7天；S3，将步骤S2培养的细胞消化后，加入小鼠成纤维细胞系3T3细胞或接种于去上皮羊膜表面，再用上皮分化培养基进行混合培养7‑14天得角膜上皮细胞。

摘要： 本发明提供了一种利用转基因技术提高人表皮干细胞诱导为角膜上皮细胞效率的方法。其包括将EEFSEC过表达载体构建成功，并转入干细胞。EEFSEC过表达载体能安全、有效地对干细胞进行EEFSEC基因修饰，不仅能够增加干细胞的活性，还能够提高角膜上皮细胞的分化效率，具有极高的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种人表皮干细胞的体外诱导向角膜上皮样细胞分化的方法，其中使用了特定的角膜促进肽，能够显著提高角膜上皮细胞的分化效率。

摘要： 本发明属于组织工程技术领域，具体涉及一种以类角膜上皮细胞为种子细胞构建组织工程化角膜上皮的方法与应用。本发明提供了一种采用两步法诱导皮肤来源的表皮细胞转分化为类角膜上皮细胞，以诱导获得的类角膜上皮细胞为种子细胞替代角膜缘干细胞构建组织工程化角膜上皮，制得的组织工程化角膜上皮，具有透明度良好，弹性好，可操作性强等特点，可用于移植修复人类或动物因角膜缘干细胞缺损导致视力严重下降或失明的眼表，用于因角膜缘干细胞缺损而失明的动物模型的自体移植和同种异体移植均能取得良好的效果。

摘要： 本发明公开了角膜上皮细胞和角膜支架及其制备方法和应用，涉及角膜疾病药物领域。本发明公开的角膜上皮细胞的制备方法，其通过将人胚胎干细胞接种至E6培养基进行培养，使得人胚胎干细胞分化成角膜上皮细胞，通过该制备方法可以持续地提供具有快速增殖能力的角膜上皮细胞，可用于制备角膜支架，或用于制备治疗角膜疾病药物中。

摘要： 本发明提供纯化神经嵴细胞或角膜上皮细胞的方法。