小分子化合物诱导人胚胎干细胞分化为角膜上皮样细胞

摘要

背景角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈。目的诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal epithelial cells,CECs)。方法采用拟胚体联合小分子化合物(SB505124和IWP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人胚胎干细胞H9系(hESCs H9)进行诱导,分别于诱导10 d、15 d和20 d时观察细胞形态,用免疫荧光法和实时定量PCR法对特征性标志物OCT4、SOX2、ΔNp63、CK14、CK3和CK12进行基因及蛋白水平的检测。结果小分子化合物诱导后胚胎干细胞形态改变,类似角膜上皮细胞形态。诱导后干性标志物OCT4和SOX2表达下调(P均<0.01),角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞标志物ΔNp63、CK14、CK3和CK12表达均上调(P均<0.05)。结论通过拟胚体联合小分子化合物的方法,可以将ESCs诱导为角膜上皮样细胞。