人胚胎干细胞

摘要： 背景:碱性成纤维细胞生长因子是维持人胚胎干细胞长期培养的重要生长因子,提供来源可靠、无动物源性以及低成本的碱性成纤维细胞生长因子产品对维持人胚胎干细胞生长以及规模化制备至关重要.目的:为了排除动物源性或者其他细菌类的潜在干扰,该研究评估植物源性碱性成纤维细胞生长因子对人胚胎干细胞生长与分化的影响.方法:以人胚胎干细胞系(H9)作为研究材料,采用免疫荧光染色、流式细胞仪检测、碱性磷酸酶染色、RT-PCR方法比较不同质量浓度植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持干细胞特性的能力以及其向外、中、内三胚层分化和胰腺细胞分化的潜能.结果 与结论:植物源性碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L和0.4μg/L)和常规碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L)都能很好地维持人胚胎干细胞的生长和分化能力,提示植物源性碱性成纤维细胞生长因子可以作为有效支持人胚胎干细胞生长和分化的备选产品.

摘要： 背景:碱性成纤维细胞生长因子是维持人胚胎干细胞长期培养的重要生长因子,提供来源可靠、无动物源性以及低成本的碱性成纤维细胞生长因子产品对维持人胚胎干细胞生长以及规模化制备至关重要。目的:为了排除动物源性或者其他细菌类的潜在干扰,该研究评估植物源性碱性成纤维细胞生长因子对人胚胎干细胞生长与分化的影响。方法:以人胚胎干细胞系(H9)作为研究材料,采用免疫荧光染色、流式细胞仪检测、碱性磷酸酶染色、RT-PCR方法比较不同质量浓度植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持干细胞特性的能力以及其向外、中、内三胚层分化和胰腺细胞分化的潜能。结果与结论:植物源性碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L和0.4μg/L)和常规碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L)都能很好地维持人胚胎干细胞的生长和分化能力,提示植物源性碱性成纤维细胞生长因子可以作为有效支持人胚胎干细胞生长和分化的备选产品。

摘要： 目的·探究转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)家族下游的关键转录因子SMAD蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein)——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化过程中的不同作用。方法·在hESC中,通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测SMAD2和SMAD3在分化过程中的蛋白表达水平。通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术构建SMAD2敲除(SMAD2 knockout,SMAD2KO)和SMAD3敲除(SMAD3 knockout,SMAD3KO)的细胞系。利用免疫荧光染色检测SMAD蛋白丢失对多能性因子八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2),神经外胚层(neuroectoderm,NE)标志因子配对盒因子6(paired box 6,PAX6)和性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)以及中内胚层(mesendoderm,ME)标志因子SOX17的表达影响;同时使用流式细胞术鉴定SMAD2敲除或SMAD3敲除对NE标志因子PAX6以及ME标志因子SOX17、脱中胚蛋白(eomesodermin,EOMES)和C-X-C模体趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)表达的影响。在SMAD2KO和SMAD3KO细胞中分别过表达SMAD2和SMAD3质粒,通过Western blotting检测SMAD2和SMAD3蛋白回补的效果,并利用实时定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测SMAD蛋白回补后对分化过程中的ME关键因子EOMES、叉头框转录因子A2(forkhead box A2,FOXA2)和GSC同源盒(goosecoid homeobox,GSC)表达的影响。结果·虽然SMAD2和SMAD3的蛋白序列较为相似,但是SMAD2才是hESC中主要表达的蛋白因子。免疫荧光染色结果表明,SMAD2敲除和SMAD3敲除并不会影响hESC多能性因子OCT4和SOX2的表达;同时流式细胞术发现,SMAD蛋白的缺失也不会影响NE标志因子PAX6和SOX1的表达。SMAD3敲除对hESC向ME分化没有显著的影响,而SMAD2敲除严重阻碍了hESC表达ME标志因子SOX17、EOMES和CXCR4。通过qRT-PCR检测显示在SMAD2KO细胞中过表达外源性SMAD2可以有效地恢复ME基因EOMES、FOXA2和GSC的表达,而在SMAD3KO细胞中回补SMAD3对这些ME基因的表达无影响。结论·SMAD2和SMAD3在hESC向ME分化过程中的调控作用不同。SMAD2而非SMAD3是决定hESC表达ME基因的关键。

摘要： 目的探究RNA结合蛋白多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1)在人胚胎干细胞(hESC)多能性维持中的生物学功能,探索其调控hESC多能性的新机制。方法在hESC中敲低PCBP1蛋白进行克隆形成能力检测及碱性磷酸酶染色实验;qPCR检测多能性/分化标志基因的表达变化;同时分离hESC细胞核与细胞质进行RNA测序;对PCBP1蛋白敲低产生的RNA核质变化进行多层次分析。结果PCBP1蛋白敲低后显著抑制了人胚胎干细胞的克隆形成能力(P<0.01)并导致多能性相关基因RNA水平降低(P<0.01),细胞分化相关基因表达水平升高(P<0.01),同时显著影响了hESC中RNA整体核质分布及胚胎发育、细胞分化相关基因mRNA的核质分布。结论PCBP1通过调控多能性/分化标志基因的表达及mRNA的核质定位调控hESC多能性。

摘要： 目的利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型。方法构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞。结果PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致。免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5。结论成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞。

摘要： 目的·利用Crispr/Cas9基因编辑技术在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)中探索小分子多肽ELABELA(ELA)是否存在潜在的新受体。方法·收集干细胞向心肌细胞定向分化过程中不同天数(0~13 d)的细胞,检测其ELA及其受体APJ的动态表达水平。在干细胞向心肌细胞定向分化过程中加入APJ抑制剂ML221,观察心肌细胞标志物MYH6、TnnT2及NKX2.5的mRNA表达水平是否发生变化。利用人胚肾悬浮细胞(HEK-293F)表达重组ELA绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),研究ELA发挥结合作用的区域在其C末端还是N末端,构建GFP序列分别插入ELA-32序列的C末端及N末端的2种重组质粒。利用Crispr/Cas 9基因编辑技术构建ELA唯一已知受体APJ敲除的hESC并进行验证。在构建成功的敲除细胞系及正常细胞系中外源性加入2种GFP-ELA重组蛋白,通过荧光显微镜观察ELA是否能够进入细胞。结果·在干细胞向心肌细胞定向分化过程中,在干细胞时期,ELA高表达而APJ低表达;ELA表达高峰在分化第6天而APJ表达高峰出现在分化第3天。外源性加入APJ抑制剂ML221后,MYH6、TnnT2及NKX2.5的mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。经过基因DNA测序及Western blotting验证,成功构建敲除APJ干细胞系。敲除APJ后,外源性加入ELA N端荧光蛋白,仍能够进入细胞内;而ELA C端荧光蛋白未出现荧光,表示ELA C端荧光蛋白不能进入细胞。结论·hESC中存在非APJ的ELA其他受体,ELA与受体发生结合的部位主要位于C末端。

摘要： 理解卵母细胞的成熟过程和早期胚胎的发育是解决不孕不育难题的关键。过往的研究发现,在卵母细胞向胚胎的转变(oocyte-to-embryo transition,OET)以及合子基因组的激活(zygotic genome activation,ZGA)过程中,转录调控起到了关键的作用。2022年9月8日,山东大学生殖医学研究中心陈子江院士、赵涵教授团队联手清华大学颉伟教授团队在国际期刊《Science》上发表的一篇研究显示,研究通过开发一种高度敏感的核糖体图谱检测方式(Ribo-lite),结合转录组测序(RNA-seq),以同时得到翻译组和转录组信息;利用该方法对人类卵母细胞和早期胚胎进行检测,并将人胚胎干细胞作为对照组,来研究人胚胎发育过程不同阶段的翻译组和转录组的变化情况,揭示了人类卵母细胞向胚胎转变过程中的翻译调控方式,并识别了合子激活过程中的可能调控因子。

摘要： 目的·探究酶消化细胞团块法对人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的八聚体结合转录因子4(octamer-binding protein 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)蛋白水平的影响及可能的作用机制.方法·①利用Western blotting分析检测酶消化细胞团块法[分散酶Dispase或胶原酶Ⅳ(collagenase typeⅣ,COL4)]、酶消化单细胞法(细胞分离溶液Accutase或胰酶)和机械刮取法对hESC中OCT4和SOX2蛋白水平的影响.②使用金属离子螯合剂乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)破坏hESC-hESC细胞间连接,然后利用Western blotting检测EGTA单独处理或联合COL4处理对hESC中OCT4与SOX2的蛋白水平的影响.③通过基于质谱的定量蛋白质组学技术,检测COL4单独处理或与EGTA联合处理hESC细胞样本中差异表达的磷酸化蛋白和总蛋白,并进行功能富集分析.④利用Western blotting和免疫荧光染色检测蛋白酶体抑制剂bortezomib或溶酶体抑制剂氯喹预处理对COL4引起的hESC中OCT4与SOX2蛋白水平下调的影响.⑤利用Western blotting检测COL4对丝切蛋白(cofilin)的影响,以及Rac1小分子抑制剂EHT1864和EHop-016对SOX2蛋白表达水平的影响.结果·①COL4和Dispase引起OCT4和SOX2的蛋白水平下降;Accutase、胰酶和机械刮取法未观察到此作用.②EGTA处理能够抑制COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降.③蛋白质谱和功能富集分析发现,COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降可能与肌动蛋白微丝(actin filament,F-actin)、微管和溶酶体相关蛋白的变化有关.④氯喹能够抑制COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降,bortezomib则不能.⑤COL4处理或Rac1抑制剂均能下调cofilin和SOX2的蛋白水平.结论·当使用酶消化细胞团块法处理hESC时,OCT4和SOX2蛋白水平下降,Rac1/cofilin/F-actin信号通路和溶酶体可能参与其中.

摘要： 目的 在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件.方法 将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC).通过分析已发表的hESCs中的染色质互作信息,确定可能参与多能性基因调控的顺式作用元件,并以此来构建双gRNA CRISPR敲除文库.使用CIRSPR文库在低感染复数情况下感染iCas9-hESC,诱导Cas9蛋白表达,对细胞进行基因编辑.以OCT4的表达水平作为衡量多能性的标准,对基因编辑后的细胞进行OCT4的流式抗体染色与分析,确定顺式元件敲除后是否影响到hESC的多能性.结果 成功构建iCas9-hESC,且该细胞仍保持多能性状态.构建顺式元件的CRISPR敲除文库,成功感染目的细胞.对文库感染后的细胞进行OCT4表达水平的流式分析,发现基因编辑后的细胞确实存在多能性下降的部分群体.结论 建立了在hESC中通过CRISPR文库筛选参与维持多能性顺式作用元件的可行性方案.

摘要： 目的 探究RNA结合蛋白异质核核糖核蛋白A3(hnRNPA3)在人胚胎干细胞(hESCs)多能性维持中的生物学功能,揭示其在RNA运输过程中的新机制.方法 在hESC中通过核孔复合物免疫共沉淀及细胞核质分离检测hnRNPA3与核孔互作情况及定位;抑制hnRNPA3内源表达后进行克隆形成及碱性磷酸酶染色实验,qPCR检测多能性/分化标志基因的表达变化,利用RNA荧光原位杂交技术检测对polyA+RNA及OCT4 mRNA核质分布的影响;预测hnRNPA3与已知出核相关蛋白结合情况.结果 hnRNPA3定位在细胞核且与核孔互作,抑制hnRNPA3的内源表达后显著抑制了hESCs的克隆形成能力(P<0.05)并导致细胞分化标志基因表达水平升高(P<0.001),同时显著抑制了polyA+RNA及OCT4 mRNA的出核(P<0.001).蛋白质互作网络预测出hnRNPA3与约1/3的已知出核相关蛋白结合.结论 hnRNPA3通过影响mRNA出核调控hESCs多能性.

摘要： 人胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs）是多能性干细胞,几乎可以分化为人体所有种类的细胞,因此是再生医学和生物医药应用的重要的潜在细胞来源.硅酸钙（CS）是一种具有生物活性的陶瓷材料，许多研究已证实CS可以促进细胞的活性，增殖，粘附，分化和基因表达，在骨再生中应用广泛，其浸提液富含Si2+，可以促进细胞的成骨向分化以及血管向分化。在干性维持阶段，短时程条件下CS浸提液利于hESCs的干性维持，在长时程条件下CS浸提液倾向于诱导hESCs分化。在诱导分化阶段，不论在何时添加，两个浓度的CS浸提液都能够促进hESCs向内胚层分化，提示CS可以作为一种调节因子应用于ESCs的分化和再生医疗中。

摘要： 目的：通过几种经典的具有明显心脏毒性的阳性药物,对人胚胎干细胞分化的心肌细胞(hESC-CM)建立的心脏电生理功能评价模型进行验证,评价药物对hESC-CM的Nav、Cav、hERG电流以及动作电位的影响.rn 方法：研究选用不同毒性机制的心脏类药物:β受体激动剂异丙肾上腺素(ISO),氨基糖营类抗癌药阿霉素(DOX)、酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(IMA)，钙离子通道阻滞剂维拉帕米(VER)分别与hESC-CM孵育，应用标准的全细胞膜片钳技术记录各实验组心肌细胞Nav1.5, Cav1.2, hERG电流以及动作电位一些指标的变化，验证人胚胎干细胞分化的心肌细胞心脏电生理功能评价模型。rn 结果：在本实验中①ISO对动作电位振幅(APA)稍有降低作用:动作电位0相除极速率(Max dv/dt)随浓度增加有一定的降低;对Nav1.5电流作用较小，IC50大于100μmol/L;但对Cav1.2电流、hERG电流、动作电位时程(APD)、动作电位复极50%时程(APD50)以及动作电位复极90%时程(APD90)均无明显作用;②IMA对Nav1.5电流有明显抑制作用，IC50为2.00±0.49μmo1/L;对Cavl .2电流有一定的抑制作用，IC50为23.4±9.8μmo1/L; APD50, APD90以及Max dv/dt随IMA浓度增加均有一定程度的降低;对APA, hERG电流无明显作用;③DOX对APA稍有降低作用;APD50, APD90及Max dv/dt随DOX浓度增加均降低;对Nav1.5电流、Cavl.2电流及hERG电流均无明显作用④VER对Nav1.5电流有一定抑制作用，IC50为147.3±5.4μmo1/L;对Cavl.2电流有抑制作用，ICso为7.1±1.5μmol/L;对hERG电流有明显抑制作用，IC50为3.5±1.0μmol/L;APD50, APD90随浓度增加均显著升高;APA及Max dv/dt随VER浓度增加降低。rn 结论：利用人胚胎干细胞分化的心肌细胞，结合膜片钳技术可快速、灵敏、准确的评价药物对心肌细胞电生理功能的影响。

摘要： 目的：采用人胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞(human embryonic stem cells derived cardiomyocytes,hESC-CM)和实时细胞分析系统(real-time cell analysis Cardio,RTCA Cardio)建立体外药物心脏毒性早期筛选方法并进行验证.rn 方法：将不同密度的hESC-CM接种到RTCA Cardio E-Plate 96孔板(接种密度分别为30000,40000,50000和60000/孔),通过分析心肌细胞的搏动频率、幅度和搏动节律不规则性指数确定细胞最佳接种密度,建立体外药物心脏毒性早期筛选方法.并进行合理实验。rn 结果：以40000/孔的密度将hESC-CM接种到RTCA Cardio E-Plate96孔板后细胞指数(CI)值随培养时间延长而增大，48 h可观察到hESC-CM的特征性搏动图谱，60h搏动图谱达到稳定状态，68 h时细胞搏动参数稳定，频率为62±2，幅度为0.0566±0.00279，节律不规则指数为0.1±0.0299,%h搏动信号减弱，搏动频率、幅度均降低，搏动节律不规则指数显著增加。确定40000/孔为最佳接种密度，60-96 h为最适检测时段。与溶剂对照组相比，奎尼丁浓度≥12.5μmol/L时影响hESC-CM生长状态，且具有剂量依赖性。奎尼丁浓度≥3.13μmol/L时影响细胞特征性搏动图谱，且浓度越大细胞搏动恢复所需时间越长。奎尼丁浓度≥3.13μmo1/L时抑制细胞搏动频率和幅度，且具有剂量依赖性，浓度越高，对搏动频率和幅度的抑制作用越显著，搏动信号恢复所需时间越长。与溶剂对照组相比，异丙肾上腺素浓度≥0.01 μmol/L时影响hESC-CM生长状态和特征性搏动图谱，细胞搏动频率显著增加，细胞搏动幅度显著降低，且具有剂量依赖性。rn 结论：采用hESC-CM和RTCA Cardio系统建立的体外药物心脏毒性早期筛选方法可以检测出奎尼丁和异丙肾上腺素对心肌细胞搏动状况的影响，提示该方法可用于心脏毒性早期筛选。

摘要： 目的：Noggin和bFGF对于人类胚胎干细胞向神经前体细胞分化的差异比较尚没有相关研究.rn 方法：在这项研究中,100μg·L-1Noggin和20 μg·L-1的bFGF加入到无血清的神经诱导培养液用来诱导人类胚胎干细胞H14单层分化为神经前体细胞.rn 结果：诱导两周后,通过相差显微镜观察到Noggin诱导组比bFGF诱导组形成更多数量的神经花环结构.免疫荧光染色显示被诱导的细胞的巢蛋白、β-Ⅲ微管蛋白和SOX-1的表达水平高,反转录PCR显示被诱导的细胞表达巢蛋白,SOX-1和神经丝蛋白的mRNA.在Noggin诱导组的蛋白和mRNA的表达比bFGF诱导组要高.rn 结论：Noggin比bFGF诱导人胚胎干细胞单层分化为神经前体细胞具有更大的影响作用,如Noggin能够加速和增加神经前体细胞的分化.

摘要： 目的:内皮祖细胞(EPC)移植是治疗冠心病、肢体缺血等血管损伤疾病的新策略,而诱导人胚胎干细胞(hESC)分化为EPC可能提供新的细胞来源,流体剪切力(LSS)可以提高EPC的分化效率,尝试通过转基因Hath6模拟LSS作用提高hESC的内皮分化效率.rn 方法:通过LSS处理hESC确定流体剪切力对内皮分化及Hath6基因表达的调节作用.利用过表达和shRNA表达敲除的方式对hESC进行Hath6基因修饰,再以分阶段添加细胞因子的方式诱导hESC内皮分化,通过分析细胞表面标志、内皮特异基因表达、以及细胞在基质胶(matrigel)上形成血管样结构的能力判断内皮分化水平.rn 结果:Hath6基因能响应流体剪切力的作用提高表达。通过基因修饰，Hath6过表达有效提高了hESC向内皮细胞的分化效率，而抑制Hath6表达出现对应的抑制内皮分化的效果。rn 结论:诱导人胚胎干细胞可以为血管损伤类疾病的治疗提供有效的种子细胞，利用Hath6基因转染能模拟流体剪切力提高hESC的内皮分化效率，提供充足的种子细胞来源。

摘要： 本文将人胚胎干细胞(hES细胞)诱导分化为胰岛样细胞，并研究该分化过程中微小RNAs(microRNAs，miRNAs)的表达及其变化趋势。通过实验室研究得出，通过定型内胚层途径诱导方案可以将hES细胞诱导分化为胰岛样细胞，该诱导方案模拟了体内胚胎胰岛的发育过程。然而，通过该诱导分化方案所获得的胰岛样细胞成熟度不高，miR-375等胰岛特异性miRNAs表达水平低是其特征之一。因此，推测miRNAs可能参与调控胰岛β细胞分化和成熟的过程。

摘要： [目的]以胚胎干细胞体外向心脏分化为平台，研究环磷酰胺对人胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的影响，从而探讨人胚胎发育各阶段细胞对化学物质敏感性的差异，为进一步早期干预途径提供理论基础。[方法]将人胚胎干细胞通过悬浮和贴壁培养两步法体外定向诱导为心肌细胞，运用形态学、免疫荧光染色以及实时定量PCR方法鉴定心肌细胞标志物的表达，进一步在悬浮和贴壁过程中加入不同浓度的环磷酰胺，用MTT法检测环磷酰胺对人胚胎干细胞源心肌细胞的细胞毒性，以非细胞毒性浓度的环磷酰胺处理人胚胎干细胞源的心脏前体细胞和较成熟的心肌细胞，实时定量PCR分析心脏标志物表达量的变化。[结果]人胚胎干细胞PKU1.1系列体外成功诱导为心肌细胞，镜下表现为自发节律性的搏动；免疫荧光染色结果显示心肌特异性标志物阳性；实时定量PCR分析显示心脏特异性基因动力学上呈上调的变化。悬浮培养加入环磷酰胺处理后，随着浓度的增加人胚胎干细胞分化为心肌细胞的比例呈明显的下降趋势；rn 以非细胞毒性浓度的环磷酰胺处理心肌前体细胞及较成熟的心肌细胞后，实时定量PCR结果示人胚胎干细胞分化为心脏前体细胞阶段，其心脏特异性基因均呈下调趋势，而在分化为较成熟的心肌细胞阶段这些基因与对照组相比表达量无明显变化。[结论]在人胚胎干细胞体外分化过程中，环磷酰胺能抑制其向心肌细胞分化；而且心脏前体细胞与较成熟心肌细胞相比对非细胞毒性浓度的环磷酰胺更敏感。

摘要： 目的：本研究通过比较早、晚代MEF的分泌功能,及其对bFGF的反应性,探讨晚代(衰老)MEF不能维持hES正常生长的原因.方法：体外培养早代(P3)和晚代(P9)MEF,通过添加10ng/ml bFGF调节其分泌功能,实时定量PCR检测MEF表达BMP4,Greml,TGFβ1,TGFβ2和Inhba因子的相对水平.结果：P3和P9代MEF表达BMP4,Greml,TGFβ1,TGFβ2和Inhba的水平均受bFGF调节,且各种分泌因子的变化趋势一致.但相比年轻MEF(P3代),衰老MEF(P9代)表达这些因子的水平均明显升高.结论：衰老MEF保留对bFGF的反应性,但其分泌功能出现明显亢进.衰老相关分泌表型的出现,可能是晚代MEF不能维持hES正常生长的重要原因.

摘要： 本研究拟比较Nodal信号通路激动剂Activin A和Nodal诱导人胚胎干细胞(hESCs)向内胚层分化的效果。指出，Activin A诱导hESCs向内胚层分化的效率明显高于Nodal，具体机制有待进一步研究。

摘要： Ghrelin是生长激素促分泌物受体(GHS-R)的内源性配体，生物学作用主要由其受体亚型GHS-R1a介导。本研究旨在探索Ghrelin能否促进人胚胎干细胞(hESCs)分化为心肌细胞，并进一步探讨这种作用是否由GHS-R1a亚型所介导。通过实验室研究可知，Ghrelin促进hESCs向心肌细胞定向分化，但这一作用并非由GHS-R1a所介导，可能通过未知的GHS-R亚型起作用。

摘要： 本发明公开了一种诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法，该方法是将诱导形成的多潜能干细胞在分化培养基I中培养，然后再转入含有胰岛素-转铁蛋白-硒盐的分化培养基I中培养，最后在含有成纤维细胞生长因子和骨形态形成蛋白的肝细胞培养基中培养获得肝脏前体细胞，促进所述肝细胞成熟，获得肝细胞；所述分化培养基I为含有活化素A的基础细胞培养基。用本发明的诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法诱导人iPS细胞向肝脏细胞分化具有周期短、分化效率高、安全稳定的优点，分化获得的肝细胞可用于细胞移植治疗肝病、人工肝脏和药物的毒性测试等，此外整个分化过程也可用于人类早期胚胎肝脏发育的研究，应用前景广阔。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于DNA适体的分离胚胎干细胞和表面固定胚胎干细胞的方法。所述DNA适体与胚胎干细胞具有很强的结合特性和稳定性。该适体的获得是应用SELEX技术和流式细胞法的结合，以胚胎干细胞为靶目标，从随机文库中筛选出能与其特异性结合的DNA适体。该适体通过体外合成，无批间差异、合成成本低，与胚胎干细胞的结合具有高亲和力和选择性，无免疫原性或毒性作用，具有极大的应用价值。

摘要： 本发明涉及生物技术领域、具体涉及新的胚胎干细胞培养体系以及采用本发明所述培养体系提高胚胎干细胞建系效率的方法。本发明所述培养体系包括：DMEMF12、N‑2supplement、B‑27supplement、β‑巯基乙醇、谷氨酰胺、胰岛素、牛血清白蛋白、双抗(青霉素+链霉素)、Pd0325901、Chir99021、白血病抑制因子(LIF)、Knockout Serum Replacement(KoSR)、P53inhibitor、Y‑27632、P38MAPK inhibitor和Forskolin。本发明新型的培养体系及其方法既能保证得到稳定的胚胎干细胞系，又能够显著性提高胚胎干细胞的建系效率，同时还能维持胚胎干细胞的多能性，使其始终处于优良的生长状态，从而更好地推动胚胎干细胞在转基因和疾病模型领域的广泛应用。

摘要： 本发明公开了一种提高2C‑like细胞的小鼠胚胎干细胞诱导培养液及小鼠胚胎干细胞诱导培养方法，第一步是从小鼠ESCs培养体系中去除胎牛血清，使小鼠ESCs仍保持原有的多能性特征。第二步是利用视黄酸（RA）在不含有胎牛血清的培养液中提高小鼠ESCs中2C‑like细胞的比例，结果从对照组的0.2%提高到3.3%。本发明利用特定的诱导方法提高了小鼠ESCs中2C‑like细胞比例，并通过实验手段验证了小鼠ESCs在不含有胎牛血清的培养液中2C‑like基因表达水平和蛋白水平，对哺乳动物全能干细胞研究提供新思路。

摘要： 本发明涉及用于人类胚胎干细胞体外培养的饲养细胞层，以及用该饲养细胞层体外培养人类胚胎干细胞的方法。本发明提供的饲养细胞层是由人成纤维细胞构成的。并且用该饲养细胞层体外培养人类胚胎干细胞时的培养液为KNOCK－OUTEMEM+KNOCK－OUTSR。本发明成功采用人成纤维细胞作为饲养细胞，充分解决了原有培养系统中有小鼠细胞参与的不利因素。

摘要： 本发明公开了一种诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法，该方法是将诱导形成的多潜能干细胞在分化培养基I中培养，然后再转入含有胰岛素-转铁蛋白-硒盐的分化培养基I中培养，最后在含有成纤维细胞生长因子和骨形态形成蛋白的肝细胞培养基中培养获得肝脏前体细胞，促进所述肝细胞成熟，获得肝细胞；所述分化培养基I为含有活化素A的基础细胞培养基。用本发明的诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法诱导人iPS细胞向肝脏细胞分化具有周期短、分化效率高、安全稳定的优点，分化获得的肝细胞可用于细胞移植治疗肝病、人工肝脏和药物的毒性测试等，此外整个分化过程也可用于人类早期胚胎肝脏发育的研究，应用前景广阔。

摘要： 本发明公开了一种提高DNA甲基化的小鼠胚胎干细胞培养液及小鼠胚胎干细胞诱导培养方法，第一步将小鼠2i/L‑ESCs用N2B27中添加白血病抑制因子（LIF培养液）进行诱导获得只依赖LIF的小鼠胚胎干细胞（L‑ESCs），并鉴定了其多能性。第二步是将小鼠2i/LIF‑ESCs培养体系换成15%胎牛血清中添加白血病抑制因子的培养液(S/L培养液)，培养5天后，再替换成LIF培养液进行培养，高效率得到L‑ESCs。更换S/L培养液的主要目的是为了提高小鼠ESCs的DNA甲基化水平，这样可有效提高LIF依赖性ESCs的重编程效率。本发明首先诱导了只依赖LIF的小鼠ESCs，并鉴定了其特性；其次利用特定的诱导方法提高了LIF依赖性小鼠ESCs重编程效率，对哺乳动物多能干细胞体外培养提供新思路。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于DNA适体的分离胚胎干细胞和表面固定胚胎干细胞的方法。所述DNA适体与胚胎干细胞具有很强的结合特性和稳定性。该适体的获得是应用SELEX技术和流式细胞法的结合，以胚胎干细胞为靶目标，从随机文库中筛选出能与其特异性结合的DNA适体。该适体通过体外合成，无批间差异、合成成本低，与胚胎干细胞的结合具有高亲和力和选择性，无免疫原性或毒性作用，具有极大的应用价值。

摘要： 本发明是一种维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的低表达Lin28的小鼠胚胎干细胞的制备方法。该方法是将序列表中序列1的Lin28干扰序列构建在RNAi‑ReadypSIREN‑RetroQ干扰载体中，获得含有RNA‑Lin28干扰重组质粒；并通过脂质体（Lipofactamine2000）转染的方法将RNA‑Lin28干扰重组质粒转染到小鼠胚胎干细胞D3中，并通过重组载体上含有的抗药物筛选基因嘌呤霉素(puromycin)通过加入药物进行筛选并建立转基因细胞系，以所述转基因细胞进行小鼠胚胎干细胞Naive状态的各种指标监控，发现Lin28表达降低对小鼠胚胎干细胞Naive状态维持起到促进作用。本发明的方法能在转基因小鼠胚胎干细胞中内稳定干扰Lin28表达，显著提高维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的能力。

摘要： 本发明涉及生物技术领域、具体涉及新的胚胎干细胞培养体系以及采用本发明所述培养体系提高胚胎干细胞建系效率的方法。本发明所述培养体系包括：DMEMF12、N-2supplement、B-27supplement、β-巯基乙醇、谷氨酰胺、胰岛素、牛血清白蛋白、双抗(青霉素+链霉素)、Pd0325901、Chir99021、白血病抑制因子(LIF)、Knockout Serum Replacement(KoSR)、P53inhibitor、Y-27632、P38MAPK inhibitor和Forskolin。本发明新型的培养体系及其方法既能保证得到稳定的胚胎干细胞系，又能够显著性提高胚胎干细胞的建系效率，同时还能维持胚胎干细胞的多能性，使其始终处于优良的生长状态，从而更好地推动胚胎干细胞在转基因和疾病模型领域的广泛应用。