内参基因

摘要： [目的]筛选不同叶色部位稳定表达的内参基因,为后期开展‘麦缘锦楸’叶色形成的分子机制奠定基础。[方法]以‘麦缘锦楸’不同叶色部位及灰楸对应部位叶片为材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了7个候选基因(CfUBC、CfActin11、CfPP2A、CfMADH、CfGADPH、CfEF-1及CbuActin)的相对表达量,利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper等分析软件对内参基因进行了稳定性评价。分析了‘麦缘锦楸’和灰楸不同叶色部位中萜类合成相关基因(CfGES)的表达模式,验证了上述稳定性评价结果的可靠性。[结果]7个候选内参基因在‘麦缘锦楸’和灰楸叶片中均具有作为内参基因的性能,其中,CfMADH和CfEF-1在不同叶色部位的表达量最稳定,CfGADPH和CfActin11次之,CfUBC最差。以萜类合成相关基因CfGES验证内参稳定性发现,单独或组合使用CfEF-1及CfMADH为内参基因时,CfGES的表达差异与转录组数据趋势一致。[结论]单独或组合使用CfMADH和CfEF-1来校准‘麦缘锦楸’不同叶色部位的基因表达量,可显著提高实验结果的可靠性。

摘要： 【目的】分析樟叶越桔热激蛋白基因响应不同温度变化的表达模式,为阐明热激蛋白在樟叶越桔响应温度胁迫过程中的生物学功能奠定理论基础。【方法】以樟叶越桔成熟叶片为材料,从建成的转录组数据库中筛选出候选内参基因(VdARP、VdGAPDH和VdEF-1α)和热激蛋白基因(VdHSP90、VdHSP70和VdsHSP)的cDNA序列,利用RT-qPCR技术检测目的基因在不同温度(4、25和35°C)、不同时间(1、5、10和15 d)处理下的表达情况。应用软件BestKeeper、GeNorm、Normfinder和RefFinder综合分析3个候选内参基因的表达稳定性,以表达最稳定的内参基因作为参照,分析3个热激蛋白功能基因响应不同温度的表达模式。【结果】软件BestKeeper、GeNorm、Normfinder和RefFinder综合分析显示,3个候选内参基因表达稳定性为VdARP>VdGAPDH>VdEF-1α,因此以VdARP为内参基因分析热激蛋白基因的表达情况。试验中3个热激蛋白基因在25°C各时间处理组中的表达水平整体趋于稳定。4°C和35°C处理均能诱导樟叶越桔VdHSP90和VdHSP70基因在一定时间内表达水平显著增加,但VdHSP90和VdHSP70基因受4°C诱导表达的水平分别显著高于35°C。VdsHSP基因受35°C高温诱导后显著上调表达,但显著受到4°C低温的抑制而下调表达。【结论】3个热激蛋白基因VdHSP90、VdHSP70和VdsHSP在不同温度(4、25和35°C)处理的樟叶越桔叶片中均有表达,其表达水平显著受到高、低温胁迫的影响。VdHSP90和VdHSP70基因表达在高、低温度胁迫下均显著上调,且对低温胁迫的响应更显著;而VdsHSP基因仅在高温度胁迫下显著上调表达。显示HSP90和HSP70基因表达产物在樟叶越桔抵御零上低温胁迫过程发挥重要功能,而sHSP基因表达产物则主要参与了樟叶越桔对高温胁迫的响应过程。

摘要： 灰黄青霉D-756是1株灰黄霉素高产突变菌株,从转录水平揭示其灰黄霉素合成关键基因的表达情况,有助于了解其基因功能进而对菌株进行定向遗传改造。利用Primer3和Primer-BLAST设计引物,经qPCR验证,引物的扩增产物单一且扩增效率在90%~110%范围内,通过geNorm软件对TUBB、HISH3、RPS24和28S rRNA 4个候选内参基因的表达稳定性进行评价,选择评价结果中较为稳定的候选基因TUBB和RPS24作为内参基因,构建了一个适用于灰黄青霉D-756的qPCR体系。并用该体系检测灰黄青霉D-756中灰黄霉素合成关键基因gsfA在不同培养时间下的相对表达情况,为下一步研究灰黄霉素合成基因簇中各基因功能提供一个有力的工具。

摘要： 为筛选新兴经济作物香瓜茄的稳定内参基因,本研究以初花期香瓜茄不同组织部位及病害胁迫条件下苗期香瓜茄叶片为样本,选取9个候选内参基因GAPDH1、UBI、UK、β-TUB、GAPDH2、EF1α、ACT、APT、18S rRNA,通过geNorm、Norm Finder和BestKeeper等3个软件对它们在样本中的表达稳定性进行分析和评估。结果表明:通过geNorm软件分析确定最稳定的内参基因是APT;NormFinder软件分析确定稳定性最好的内参基因为APT,其次是18S rRNA和UBI;BestKeeper软件分析确定稳定内参基因为18S rRNA和UBI。综合分析结果,在香瓜茄不同组织部位和病害胁迫条件下APT基因均有良好的表达稳定性,最终确定APT基因是定量检测香瓜茄基因表达的稳定内参基因。

摘要： 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的前提条件之一是具有合适的内参基因。为筛选斑地锦(Euphorbia maculata)合适的RT-qPCR内参基因,该文利用同源克隆法克隆斑地锦GAPDH、EF-1α、act、UBQ、TUB-α、eIF-4A、CYP等基因片段,RT-qPCR检测7个候选内参基因在斑地锦不同生长期根、茎、叶和果实中的表达情况,并用geNorm、NormFinder和BestKeeper等生物学软件对各候选基因表达稳定性进行评价。结果表明:(1)克隆的GAPDH、EF-1α、act、UBQ、TUB-α、eIF-4A、CYP基因片段为729、808、753、422、233、656、313 bp,分别编码242、269、250、140、77、218、103个氨基酸,与其他植物相应氨基酸序列的最高同源性均在85%以上。(2)综合3个分析软件分析内参基因表达稳定性得出,表达稳定性排名为UBQ>EF-1α>TUB-α>eIF-4A>GAPDH>CYP>act。因此,可以选取UBQ作为斑地锦RT-qPCR分析的内参基因,用于不同生长期基因组织特异性表达研究。

摘要： 为了筛选适用于雪茄烟叶(BESNO H382)基因定量研究的内参基因,以温室栽培条件下雪茄烟叶的不同组织器官(旺长期根、茎、叶,盛花期花萼、花冠、柱头、子房、雄蕊、雌蕊及种子)及不同盐处理条件下(300 mmol/L NaCl处理不同时间)的样品为材料,采用实时荧光定量PCR技术对从雪茄烟叶转录组数据中筛选到的10个候选内参基因进行分析,同时使用geNorm、NormFinder和BestKeeper等3种软件综合评价这些候选基因的表达稳定性。结果表明,RPL14A和UBC27最适合作为雪茄烟叶不同组织的内参基因;UBC28最适合作为雪茄烟叶不同盐处理条件下的内参基因。分别以UBC27、UBC28和RPL14A为内参基因考察了胁迫相关基因脯氨酸合成酶基因(P5CS)在盐胁迫下的表达情况,发现P5CS上调表达且相对3个内参基因的表达量和变化趋势均较为一致。

摘要： 以巨菌草(Pennisetum giganteum)的叶片、茎、根为试验材料,通过分析8个基因18s rRNA、Actin、GAPDH、ACTB、EF-1α、UBQ、CYP、TUB在正常生长、干旱以及盐碱胁迫下荧光定量PCR中稳定性表达情况,筛选巨菌草的稳定内参基因。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件计算内参基因的表达稳定值并进行排序,最终通过赋值法综合排序确定稳定内参基因。结果表明,内参基因的稳定性在不同处理下存在差异。其中,ACTB稳定性好,为本研究筛选出巨菌草的内参基因。本研究筛选出的内参基因,为后续巨菌草功能基因表达分析奠定了基础。

摘要： 【目的】为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因。【方法】基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因。以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达,采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性,最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、MT、UFGT-1、UFGT-2、MYB-1、MYB-2、MYB-3、bHLH),对所选内参基因组合进行验证。【结果】4种方法分析得出的候选内参排序存在一定差异,需综合4种方法的几何平均值作为综合排序。根据geNorm软件推荐的最适内参数目为4个,即CNNM、GPR107、EF1-α、G6PD-2最稳定,PDP最不稳定。对10个目的基因表达量标准化验证发现:以CNNM、GPR107为内参组合与选用4个基因作为内参组合无显著差异,相关系数可达0.999 9,且选用双内参组合比4个内参组合的可操作性强,而不适合的内参基因(PDP)会对RT-qPCR结果产生严重偏差。【结论】以CNNM、GPR107作为组合是山麦冬果实花青素生物合成研究的最佳内参基因。

摘要： 【目的】制备玉米三磷酸甘油醛(GAPDH)和肌动球蛋白(ACTIN)的多克隆抗体,检测热激条件下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN的表达,为将ZmGAPDH和ZmACTIN作为非生物胁迫下的内参基因奠定基础。【方法】利用DNAMAN 7对ZmGAPDH和ZmACTIN与不同植物同源蛋白间的氨基酸序列进行比对。通过PCR克隆ZmGAPDH和ZmACTIN的CDS,将其构建到原核表达载体pET-28a中并测序;将重组质粒载体转化大肠杆菌BL21(DE3)和RG2,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;将目的蛋白透析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。利用RT-PCR和Western blot检测42°C热激不同时间(0,2,4,8 h)下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN mRNA及其蛋白的表达水平。【结果】克隆了ZmGAPDH和ZmACTIN基因的CDS序列,成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmGAPDH和pET-28a-ZmACTIN。在大肠杆菌中表达出了玉米ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白,将纯化的蛋白免疫家兔后获得了多抗血清。ZmGAPDH多克隆抗体能清晰检测到4 ng原核表达的ZmGAPDH抗原,ZmACTIN多克隆抗体同样能够清晰检测到4 ng原核表达的ZmACTIN抗原。热激不同时间下玉米B73叶片中的ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白表达水平一致,mRNA丰度稳定不变。【结论】成功制备了ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白多克隆抗体;ZmGAPDH和ZmACTIN可以作为内参基因,用于检测热激条件下目标基因的表达水平。

摘要： 选择合适的内参基因进行校正和标准化,既能提高实时定量荧光PCR的准确性,也为分析黄麻次生细胞壁合成相关基因的表达模式奠定基础。本研究通过常用的内参基因,结合课题组已有的基因组数据和转录组数据,初步筛选出8个内参基因(CcTUBα、CcACT、CcDnaJ、CcTUBβ、CcUBQ、CcEF1α、CcUBC和CcUBI)。为验证这些候选内参基因的稳定性,以优良品种‘黄麻179’为材料,对种子萌发后14 d的根、茎、叶进行qRT-PCR分析。经Ct值的变异系数、软件geNorm和NormFinder的综合分析,确定表达最稳定内参基因为CcDnaJ,最佳内参基因组合方式为CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI。通过种子萌发后10 d下胚轴、60 d和90 d茎皮的转录组数据分析次生细胞壁合成相关基因的表达模式,发现木质素合成基因Cc4CL1、CcCCoAOMT1的表达量在种子萌发后60 d茎皮最高,而种子萌发后90 d茎皮表现为下降;纤维素合成酶基因CcCesA4、CcCesA7、CcesA8和木聚糖合成基因CcIRX8、CcIRX9、CcFRA8的表达量在种子萌发后10 d下胚轴最高,而种子萌发后60 d、90 d茎皮的表达量均有下降,表明这些基因参与了黄麻纤维发育。以CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI作为内参基因组合,qRT-PCR分析5个次生细胞壁合成相关基因,即Cc4CL1、CcCCoAOMT1、CcCesA4、CcCesA7、CcesA8,在种子萌发后7 d下胚轴和14 d茎的表达模式,发现这5个基因在种子萌发期后14 d茎的表达量均高于种子萌发期后7 d下胚轴,暗示着黄麻纤维的形成开始于7~14 d之间,同时表明CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI的内参基因组合具有实用性。

摘要： 选择合适的内参基因是准确分析目标基因表达水平变化的重要条件.本研究选取SAND-1、ACT、18S rRNA、CYP2、GAPDH、TUB作为候选内参基因,通过实时荧光定量PCR,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT方法分析和评价6个候选内参基因在华细辛营养生长期、花期和花后期等不同生长阶段根、根茎、叶片、叶柄等不同组织的表达稳定性,筛选适宜于华细辛不同生长阶段不同组织基因表达水平分析的内参基因.结果表明,18SrRNA在华细辛所有样品中表达最为稳定,是进行华细辛基因表达水平分析的适宜的内参基因.本研究结果可为华细辛重要活性成分生物合成途径相关基因的功能分析,以及基因差异表达的研究提供有效的校正工具,确保基因表达分析结果的准确性与可靠性.

摘要： 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是植物基因表达和转录分析最常用的技术手段之一,选择合适的内参基因是正确运用qRT-PCR分析目标基因表达变化的前提.内参基因的选择应取决于研究者的实验条件,不同的逆境条件下合适的内参基因不尽相同.因此,筛选马铃薯干旱胁迫下稳定表达的内参基因对马铃薯抗旱基因和抗旱分子机制的研究具有重要意义.miR166是植物中高度保守且成员众多的一类miRNA,不同植物中的miR166有着同一类靶基因,即HD-ZipⅢ转录因子.miR166在调节植物生长发育和参与胁迫代谢调控已有一些报道.研究miR166在干旱胁迫时的表达模式以及克隆马铃薯stu-miR166对于深入研究miR166及其靶基因的功能具有重要意义.

摘要： 为筛选在不同生长时期鹿茸组织中稳定表达的内参基因,试验以不同生长时期(分别为托盘10d、20 d、40 d和60 d)的鹿茸组织为材料,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)方法分析了甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、β2-微球蛋白(B2M)、还原型辅酶Ⅰ(NADH)、60S核糖体蛋白L40(RPL40)、谷胱甘肽还原酶7(GPx)和β肌动蛋白(ACTB)6个内参基因的表达情况,并运用geNorm和NormFinder 2个程序综合分析6个内参基因的表达稳定性.结果显示,GAPDH、ACTB、RPL40表达稳定性较好,可用作鹿茸基因表达研究的内参基因,而NADH和GPx的稳定性最差,不适合做内参基因.又结合对5种鹿茸生长相关基因表达分析进一步验证了上述结果,为鹿茸生长相关基因的研究奠定了一定基础.

摘要： 采用实时荧光定量PCR对基因表达水平进行检测时,需要内参基因对结果数据进行校正和标准化.因此选择合适的内参基因是通过实时荧光定量PCR对目的基因进行准确定量的重要的前提条件.本文选择了10个常用的候选内参基因,分别是GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶),ACT(肌动蛋白),a-TUB(α微管蛋白),β-TUB(β微管蛋白),UBQ(多聚泛素酶),CYP(亲环蛋白),EF-1a(转录延伸因子),NAC(转录因子类),F-box(蛋白磷酸酶类)和PP2A(蛋白磷酸酶2).采用实时荧光定量PCR方法分别比较了党参4个不同器官(根、茎、叶和花)和5个不同发育期的根(拉蔓期、始花期、盛花期、果期和收获期)中各基因的表达差异,通过GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder4种软件对内参基因在不同材料中的表达稳定性和最适内参基因个数进行数据分析.结果表明,党参不同器官中候选内参基因的表达稳定性顺序为GAPDH＞PP2A＞β-TUB＞F-box＞NAC＞UBQ＞α-TUB＞CYP＞EF-1α＞ACT,不同生长时期根中表达稳定性顺序为GAPDH＞PP2A＞α-TUB＞F-box＞EF-1α＞CYP＞NAC＞UBQ＞β-TUB＞ACT.

摘要： 目的:比较6种在应用孕妇血浆游离DNA进行的无创性产前检测(Non-invasive prenatal tes-ting,NIPT)DNA定量研究中经常使用的6种内参基因(HBB、TERT、GAPDH、ALB、ACTB、TRG)分别在孕妇血浆DNA、非孕妇血浆DNA中的含量稳定性.rn 方法:孕妇及非孕妇各18例,取外周静脉血并提取血浆DNA进行荧光定量PCR扩增,分别应用geNorm,NormFinder和BestKeeper三款统计学软件对Ct值进行分析,根据结果评价内参基因在各样本中的稳定性.rn 结果:孕妇与非孕妇整体组、孕妇组、非孕妇组、母体与胎儿整体组、母源DNA组、胎源DNA组中,含量稳定性最高的基因分别为TERT、ACTB、ALB、HBB、HBB、GAPDH.rn 结论:在孕妇血浆游离DNA中,内参基因的含量稳定性具有显著的差异.在每一个利用qPCR法进行血浆游离DNA的含量分析的研究之前,应该首先评价内参基因在各样品组中的含量稳定性,从而选择一种最为稳定的内参基因.

摘要： 在本项研究中选择10个常用的内参基因：ACTB，ALASI，GAPDH，GUSB，HPRTl，PBGD，PPIA，PUM1，RPL29，和TBP，18S rRNA，利用GeNorm，BestKeeper和NormFinder软件分析卵巢癌及正常卵巢组织所有内参基因的表达稳定性，以期为卵巢癌的基因表达调控相关研究提供合适的内参基因。理想的内参基因应具备下列特性：(1)在所有组织、器官、各种细胞类型中表达，是构成细胞的基本成分，维持细胞基本的功能。(2)在所有的环境和实验条件下都稳定表达，不受任何外源和内源因素的影响。(3)具有与目的基因相似的稳定表达水平。RT-qPCR试验中，一些传统的管家基因18SRNA、GAPDH、B2M等被认为在不同的环境条件下均能稳定表达而被作为内参基因。本试验通过BestKeeper、GeNorm、NormFiner软件分析结果可以看出，在不同的卵巢组织中，这些传统的内参基因mRNA表达水平都有一定的变化，个别传统内参基因达丰度太高，不适合做内参基因，如18S rRNA高丰度表达，远远高于其他基因mRNA水平，在定量PCR数据分析时难于扣除基线。因此，依据BestKeeper、GeNorm和NormFiner软件分析结果可以看出，卵巢癌组织HPRTI及TBP稳定性最好，正常卵巢组织ALAS1及GUSB的稳定性最好，2组最佳的内参基因数量为2个。

摘要： 为菠萝蜜实时荧光定量PCR筛选表达稳定的内参基因,方法,以菠萝蜜不同成熟度果实(幼果、小果、大果、半成熟果和成熟果)的果包及菠萝蜜果实、叶、雌、雄花序为材料,结合实时荧光定量PCR技术,分析在上述材料中GAPDH、18SrRNA、UBQ、α-tubulin和β-tubulin5个候选内参基因的表达情况,并用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对候选内参基因进行表达稳定性评价.经3种评价方法得出的结果略有不同,GAPDH、18SrRNA和UBQ是所有菠萝蜜试验材料中表达较稳定的内参基因:在果实的不同成熟度和菠萝蜜的不同组织中,UBQ和GAPDH为表达稳定的内参基因;在菠萝蜜雌、雄花序的不同花期中,UBQ与GAPDH表达较稳定.UBQ和GAPDH是表达比较稳定的候选内参基因,是菠萝蜜基因表达研究中的理想内参基因.

摘要： 本研究以花生的内参基因(Arah1)为靶标,研究了花生的qPCR定量检测体系.以花生基因组DNA为模板,利用Arah1基因特异性引物进行PCR扩增,将PCR产物与栽体连接后转入大肠杆菌.序列测定结果证明成功获得了花生的Arah1基因片段.以梯度稀释的花生DNA为模板进行qPCR检测,建立了花生DNA含量与循环阈值Cq间的标准曲线.研究结果显示利用本研究建立的qPCR检测体系,可建立Arah1基因含量与Cq间具有良好线性关系的标准曲线,适用于花生样品中Arah1基因的精确定量检测.

摘要： 要获得真实可信的qPCR结果，必须选择合适的内参基因。利用基因克隆和测序，本实验从“妃子笑”荔枝果皮中获得了β-Actin、GAPDH和18SrRNA 3个qPCR分析常用的内参基因全长序列，其长度分别为1273bP、1368bP和1712bp；3个基因与其它物种高度同源，氨基酸序列同源性均超过了98％。在此基础上，结合已报道的UBQ、eEF和25S rRNA 3个常用的内参基因，对β-Actin、GAPDH、18Sr RAN、UBQ、eEF和25SrRNA6个常用内参基因在荔枝果实发育不同阶段和外源生长调节剂处理后表达稳定性进行了分析，同时比较了geNorm、NormFinder和BestKeeper三种不同算法的差异。结果表明：以上6个基因中，β-Actin在三种不同算法下均保持了较好的表达稳定性。

摘要： 本研究首次利用SYBR GreenI特异性地与双链DNA结合发出荧光的特性，以LightCycler2.0为平台，建立了中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织中GAPDH基因的SYBR GreenI实时荧光定量PCR检测方法，旨在为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。

摘要： 本发明提供了不同组织中杉木内参基因的筛选方法和内参基因的应用，属于荧光定量PCR检测领域。所述筛选方法以甘油醛三磷酸脱氢酶基因、转录延伸因子、18S rRNA、28S rRNA和泛素基因为候选内参基因，以候选内参基因为模板设计引物；提取杉木苗的根、茎、叶组织的总RNA，以总RNA为模板合成cDNA；将cDNA为模板进行qPCR扩增，得到Ct值和相对表达量Q；根据相对表达量Q值和Ct值采用多个软件对候选内参基因进行稳定性评价；将候选内参基因的稳定性由强到弱排序，选择排序前两位的候选基因作为杉木的内参基因。筛选得到的18S rRNA和/或泛素基因作为杉木不同组织中的内参基因的应用。

摘要： 本发明公开了适用于桑黄生长发育研究的内参基因，包括SIP内参基因和RSMG内参基因，所述SIP内参基因的核酸序列为No.2，所述RSMG内参基因的核酸序列为No.4，适用于桑黄生长发育研究的内参基因的内参引物的筛选方法，包括如下步骤：a)内参基因的选择；b)实时荧光定量PCR和c)内参引物的选择，利用转录组数据分析，筛选出了扩增效率高、稳定性好的桑黄生长发育阶段内参基因的内参引物，其中，内参引物在桑黄生长发育阶段均满足GeNorm，NormFinder和BestKeeper三个分析软件的稳定阈值，稳定性好，为桑黄各生长发育阶段时桑黄体内基因表达谱分析提供了稳定的内参基因参考，为研究桑黄生长发育阶段的调控机制提供借鉴，筛选方法简单、快捷。

摘要： 本发明属于基因表达分析技术领域，公开了CmEF1α基因和CmRAN基因在分析甜瓜果实的基因表达时作为内参基因的应用，所述CmEF1α基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述CmRAN基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还公开了一种采用实时荧光定量PCR分析甜瓜果实基因表达的方法，它是将CmEF1α基因和CmRAN基因组合的几何平均数作为甜瓜果实基因表达分析中的内参基因。CmEF1α基因和CmRAN基因在不同坐果方式的甜瓜果实的不同发育阶段均能稳定表达，是甜瓜果实发育过程中利用实时荧光定量PCR技术检测基因表达分析的可靠内参基因组合。

摘要： 本发明提供了不同组织中杉木内参基因的筛选方法和内参基因的应用，属于荧光定量PCR检测领域。所述筛选方法以甘油醛三磷酸脱氢酶基因、转录延伸因子、18S rRNA、28S rRNA和泛素基因为候选内参基因，以候选内参基因为模板设计引物；提取杉木苗的根、茎、叶组织的总RNA，以总RNA为模板合成cDNA；将cDNA为模板进行qPCR扩增，得到Ct值和相对表达量Q；根据相对表达量Q值和Ct值采用多个软件对候选内参基因进行稳定性评价；将候选内参基因的稳定性由强到弱排序，选择排序前两位的候选基因作为杉木的内参基因。筛选得到的18S rRNA和/或泛素基因作为杉木不同组织中的内参基因的应用。

摘要： 本发明公开了一种用于甜瓜果实基因PCR表达分析的内参基因及该内参基因的稳定性验证方法，本发明利用甜瓜转录组数据，在全基因组水平上比较了基因的表达水平和稳定性，从中选择8个表达稳定的基因，同时选用2个在甜瓜中常用的传统内参基因作为对照，比较了10个基因在两个甜瓜品种果实的不同发育时期的表达稳定性，通过使用CmAIN2和CmSPS1基因进行验证，确定MELO3C007745T1基因的表达稳定性最高，是甜瓜果实基因表达实时荧光定量PCR分析的最佳内参基因。

摘要： 本发明属于基因工程育种技术领域，特别是涉及灰霉病胁迫条件下的韭菜内参基因及内参基因的引物和应用。本发明提供了灰霉病胁迫条件下的韭菜的内参基因UBC1和UBC2，所述UBC1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，UBC2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明提供的内参基因中，UBC1和UBC2基因具有极高的表达稳定性，利用本发明提供的内参基因能够筛选现有韭菜中的高抗灰霉病优异种质资源，开发利用对灰霉病菌有诱导抗性的关键调控因子，从源头预防灰霉病菌侵入宿主细胞内部，还能够通过生物诱导防治的手段阻止灰霉菌侵入韭菜细胞，减少灰霉病相关农药的使用，增强韭菜的食用性和商品性。

摘要： 本发明涉及西南鸢尾花色形成基因表达分析的内参基因及其内参引物与应用，属于基因工程技术领域。所述的内参基因为

摘要： 本发明公开了适用于桑黄生长发育研究的内参基因，包括SIP内参基因和RSMG内参基因，所述SIP内参基因的核酸序列为No.2，所述RSMG内参基因的核酸序列为No.4，适用于桑黄生长发育研究的内参基因的内参引物的筛选方法，包括如下步骤：a)内参基因的选择；b)实时荧光定量PCR和c)内参引物的选择，利用转录组数据分析，筛选出了扩增效率高、稳定性好的桑黄生长发育阶段内参基因的内参引物，其中，内参引物在桑黄生长发育阶段均满足GeNorm，NormFinder和BestKeeper三个分析软件的稳定阈值，稳定性好，为桑黄各生长发育阶段时桑黄体内基因表达谱分析提供了稳定的内参基因参考，为研究桑黄生长发育阶段的调控机制提供借鉴，筛选方法简单、快捷。

摘要： 本发明属于基因表达分析技术领域，具体涉及ClCAC基因和ClSAND基因在西瓜果实发育过程中用作为基因表达分析的内参基因的应用。本发明为ClCAC和ClSAND基因设计了特异引物，该引物跨基因上相邻的2个外显子的接头位点，以基因组DNA为模板时无扩增产物，以cDNA为模板是可以扩增出目标片段，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1-4所示。通过实时荧光定量PCR技术检测表明，ClCAC基因和ClSAND基因在不同基因型、不同坐果方式的西瓜果实的不同发育阶段均能稳定表达，是西瓜果实发育过程中利用实时荧光定量PCR技术检测基因表达分析的可靠内参基因组合。该内参基因组合具有表达稳定性好、不受cDNA样品中是否存在基因组DNA污染影响等优点。

摘要： 本发明属于基因表达分析技术领域，公开了CmEF1α基因和CmRAN基因在分析甜瓜果实的基因表达时作为内参基因的应用，所述CmEF1α基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述CmRAN基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还公开了一种采用实时荧光定量PCR分析甜瓜果实基因表达的方法，它是将CmEF1α基因和CmRAN基因组合的几何平均数作为甜瓜果实基因表达分析中的内参基因。CmEF1α基因和CmRAN基因在不同坐果方式的甜瓜果实的不同发育阶段均能稳定表达，是甜瓜果实发育过程中利用实时荧光定量PCR技术检测基因表达分析的可靠内参基因组合。