聚酮合酶

摘要： 灰黄青霉D-756是1株灰黄霉素高产突变菌株,从转录水平揭示其灰黄霉素合成关键基因的表达情况,有助于了解其基因功能进而对菌株进行定向遗传改造。利用Primer3和Primer-BLAST设计引物,经qPCR验证,引物的扩增产物单一且扩增效率在90%~110%范围内,通过geNorm软件对TUBB、HISH3、RPS24和28S rRNA 4个候选内参基因的表达稳定性进行评价,选择评价结果中较为稳定的候选基因TUBB和RPS24作为内参基因,构建了一个适用于灰黄青霉D-756的qPCR体系。并用该体系检测灰黄青霉D-756中灰黄霉素合成关键基因gsfA在不同培养时间下的相对表达情况,为下一步研究灰黄霉素合成基因簇中各基因功能提供一个有力的工具。

摘要： 聚酮类化合物是由植物或微生物产生的一类次级代谢产物,在自然界中来源广泛,目前已有上万种聚酮类化合物被发掘。聚酮类化合物具有复杂的化学结构以及丰富的生理活性,包括抗菌活性、抗肿瘤活性、抗氧化活性等,被广泛应用于农业,食品工业和医疗保健等领域。近几十年来,人们进行了大量的研究,对聚酮类化合物生物合成机制的了解逐渐深入。然而天然的聚酮类化合物不能完全满足社会需要,因此构建非天然聚酮类化合物成为研究的热点。该文介绍了聚酮合酶的分类、构造与催化机理;部分天然聚酮类化合物及其宿主;构建非天然的聚酮类化合物的技术以及应用实例,并对聚酮类化合物的生物活性进行概述,最后指出了目前聚酮类化合物研究的不足,并对未来聚酮类化合物的开发及应用方向进行了展望。

摘要： 为了解青头菌中具体的聚酮合酶基因,从青头菌(Russula virescens)基因组挖掘并克隆到一个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因(RvPKS),通过生物信息学分析预期其功能,并检测了不同浓度碳源添加物对该基因表达的影响.结果表明:RvPKS基因(GenBank登录号:MT655136)的cDNA长度为6039 bp,编码2012个氨基酸,结构域组织顺序为SAT-KS-AT-ACP-TE,各结构域的保守活性氨基酸序列为SAT(GIIGFSSGII)、KS(DTACSSSL)、AT(NVVEAHGTGTQ)、ACP(VVGHSLGEYVA)和TE(LGGWSLGGIIA);预测的RvPKS编码蛋白与火丝菌(Pyronema omphalodes)、鸡枞菌属(Termitomyces sp.)、白环菇属(Leucoagaricus sp.)、乌氏曲霉(Aspergillus udagawae)、丝曲霉(Aspergillus lentulus)、Penicillium subrubescens等相关聚酮合酶蛋白聚为一支,该蛋白可能催化合成一种新型的分生孢子色素.此外,2%山梨醇和10%蔗糖能强烈诱导RvPKS基因的表达.

摘要： 为了解青头菌中具体的聚酮合酶基因,从青头菌(Russula virescens)基因组挖掘并克隆到一个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因(RvPKS),通过生物信息学分析预期其功能,并检测了不同浓度碳源添加物对该基因表达的影响.结果表明:RvPKS基因(GenBank登录号:MT655136)的cDNA长度为6039 bp,编码2 012个氨基酸,结构域组织顺序为SAT-KS-AT-ACP-TE,各结构域的保守活性氨基酸序列为 SAT(GIIGFSSGII)、KS(DTACSSSL)、AT(NVVEAHGTGTQ)、ACP(VVGH-SLGEYVA)和 TE(LGGWSLGGIIA);预测的 RvPKS 编码蛋白与火丝菌(Pyronema omphalodes)、鸡枞菌属(Termitomyces sp.)、白环菇属(Leucoagaricus sp.)、乌氏曲霉(Aspergilluts udagawae)、丝曲霉(Aspergillus lentulus)、Penicillium subrubescens 等相关聚酮合酶蛋白聚为一支,该蛋白可能催化合成一种新型的分生孢子色素.此外,2％山梨醇和10％蔗糖能强烈诱导RvPKS基因的表达.

摘要： 14-16元环的大环内酯类抗生素(Macrolide antibiotics,MA)是临床上重要的抗感染药物.随着细菌耐药性的不断增加,迫切需要研发出新型MA来应对耐药菌.通过MA与核糖体靶点的相互作用可以指导MA的定向优化,结合快速发展的代谢工程方法可以高效获得所需的MA衍生物.近30年来,代谢工程在改造MA的生物合成获得新衍生物以及在提高其产量方面显示出巨大优势,这些代谢工程的方法包括改造聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)结构域和PKS后修饰酶以及组合生物合成等.另外,文中还对16元环大环内酯类新药可利霉素的研制过程、抗菌活性以及利用代谢工程优化其产生菌进行了详细介绍.

摘要： 树莓酮具有重要的医药价值,如抗流感、预防糖尿病等.为了在莱茵衣藻Chlamydomonas reinhardtii中获得树莓酮,本研究将树莓酮合成的最后两个步骤中的酶,即4-香豆酰-CoA连接酶(4-coumaryl-CoA ligase,4CL)和聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS1)通过甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸(Gly-Ser-Gly,GSG)三肽接头融合在一起,构建莱茵衣藻表达载体pChla-4CL-PKSl.通过电转化的方法将由PSAD启动子驱动的融合基因4CL-PKS1插入野生型莱茵衣藻(CC125)和细胞壁缺失型莱茵衣藻(CC425)中.结果在表达4CL-PKS1融合蛋白的野生型莱茵衣藻和细胞壁缺失型莱茵衣藻中,树莓酮含量分别为6.7 μg/g(鲜重)和5.9μg/g(鲜重),高于天然植物中树莓酮的含量(2-4 μg/g).

摘要： 前期研究表明,植物类型Ⅲ聚酮合酶能够催化一系列结构多样和生理活性各异的聚酮化合物的生物合成.本文综述了植物类型Ⅲ聚酮化合物合酶类型划分、产物多样性的催化原理、PKS功能与机制等的研究进展,以期为进一步探明植物Ⅲ型聚酮合酶生物学特性,确立其系统地位,揭示聚酮类化合物相应物质的生物合成机制,以及为该类酶在基因工程中的应用提供资料借鉴.

摘要： [背景]在模块化聚酮合成酶(polyketide synthase,PKS)的催化过程中,催化结构域与同源酰基载体蛋白(acyl-carrier protein,ACP)之间的蛋白质-蛋白质相互作用起重要作用,但这种瞬时可逆的相互作用难以捕捉分析.[目的]获得ACP和酮基还原酶(ketoreductase,KR)相互作用的蛋白复合物.[方法]在KR和ACP之间的Linker上插入烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶切位点,通过双功能马来酰亚胺试剂BMH将KR和ACP共价交联,随后TEV酶切检测交联结果.调整反应条件,使交联效率最大化.根据KR-ACP交联复合物与体系内其他蛋白标签和分子量的差异,通过亲和层析和凝胶过滤等纯化手段,获得纯度较高的KR-ACP稳定交联复合物.[结果]单独表达的KR和ACP结构域交联不成功,融合表达的KR+ACP双结构域可以有效交联,结合使用亲和层析和凝胶过滤等纯化手段成功获得纯度较高的复合物.该策略可运用于多个KR和ACP的共价交联.[结论]建立了捕获并纯化KR和ACP瞬时相互作用复合物的有效方法,为后期晶体结构的解析、KR与ACP相互作用机理的揭示及参与相互作用关键氨基酸的鉴定提供了实验基础.

摘要： 植物聚酮合酶是植物中广泛存在的一大类能够催化合成植物多酚类成分的酶的总称,催化起始底物(酰基辅酶A）与丙二酰辅酶A反复地缩合形成链状聚酮中间体,再经过Claisen、Aldol等环化方式生成查耳酮、二苯乙烯、间苯三酚等结构多样的天然产物和非天然小分子.而起始底物、缩合丙二酰辅酶A分子数以及环化机制的不同,使其可以生成结构多样的"非天然的天然产物".因此筛选新颖的植物聚酮合酶并且发掘其生物学功能,对于组合合成或仿生合成结构新颖多样的复杂非天然的天然产物库具有重要意义.石杉碱甲是一种石松属类生物碱，最早从蛇足石杉Huperzia serrata中分离得到，后因发现其是一种高效、可逆、高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂而备受关注。目前石杉碱甲主要来自于野生资源，但因植物体内含量低、植株生长缓慢而难以满足需求；有机全合成步骤多、产量低。近来同位素研究推测石榴碱是石杉碱甲生物合成途径中的一个重要中间体，在一种酶的催化作用下可以和4PAACoA缩合生成石松属生物碱的重要前体phlegmarine（Fig.1a）。根据植物聚酮合酶催化机制，其有可能参与了该步偶合反应生成重要前体的步骤（Fig.1b）。因此，从蛇足石杉中筛选新颖植物聚酮合酶挖掘其催化机制，不仅有利于阐明石杉碱甲生物合成机制，也可以以此为工具酶开展组合合成，构建结构新颖多样的非天然小分子库进行活性先导化合物的筛选，为活性小分子的发现提供新的思路。目前，从蛇足石杉中成功获得三个基因。其中HsPKS3兼具多种功能，可催化合成简单喹诺酮生物碱、苄基丙酮、姜黄素类等成分。更为特别的是，HsPKS3能接受两个完全不同的底物并催化其发生“头碰头”缩合，生成C-2位取代喹诺酮生物碱和1,3-二酮类分子。目前，具备如此多样催化功能的PKS尚属首次发现。以HsPKS3作为工具酶，含有芳香环、杂环、饱和脂肪链等结构多样的辅酶A硫酯为起始底物，丙二酰辅酶A、非天然的延长单位如β-酮酸和β-酮酸的NAC硫酯等为链延长单位，开展了初步的组合合成研究，得到了系列喹诺酮及1,3-二酮类成分，并发现部分分子具有显著的抗炎活性。研究成果为酶催化构建非天然小分子化合物库并用于先导化合物的发现提供了参考。

摘要： 许多由聚酮合酶(PKS)合成的微生物次级代谢产物被应用于药物、农药和食品添加剂领域,磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(PPTase)负责催化PKS中酰基载体蛋白(ACP)的辅基化,即转移辅酶A中的磷酸泛酰巯基乙胺基到ACP上。rn 纳他霉素是一种多烯大环内醋类抗真菌抗生素，工业菌株恰塔努加链霉菌L10的基因组中除了负责合成纳他霉素的scn PKS以外，还含有簇(scm PKS, PKSⅠa. scw PKS和PKSⅡc)，以及2个PPTasePKS基因(SchPPr和SchACPS)。体外生化表征结果表明:SchPPT可以催化scn PKS、scmPKS、PKSⅠa, scw PKS和PKSⅡc，SchACPS可以催化scw PKS, PKSⅡc和脂肪酸合酶(FAS)；缺失掉SchPPT的N-端或者突变掉镁离子结合位点(D105和EI07)都导致SchPPT活性的丧失；将SchPPT的N-端融合到SchACPS上没有改变SchACPS对ACP底物的选择性。体内实验结果表明:SchPPT敲除株不能生产纳他霉素但是仍然可以生产抱子色素。综上所述:SchPPT对类型ⅠPKS和类型ⅡPKS的都有选择性，SchACPS对类型ⅡPKS和FAS具有选择性;2)SchPPT的N-端和镁离子结合位点都对SchPPT的活性至关重要;3) SchPPT的C-端可能决定了SchPPT的底物选择性。

摘要： 聚酮合酶及其合成的聚酮类化合物具有极大的学术研究和商业价值，现已成为生物技术药物领域研究热点。聚酮合酶的研究近年来发展迅速，本综述针对I型聚酮合酶基因簇筛选和功能研究的方法进行了总结归纳。

摘要： 本文分离培养鲨鱼肠道中的微生物,获得可培养菌株15株.针对聚酮合酶的酮缩合酶保守区域设计引物,对15株菌的基因组进行PCR扩增,筛选出3个株菌具有新的KS片断.菌株用16S进行了鉴定,3株菌分别为假单胞菌、动性球菌和嗜冷杆菌,其中后两者从未见报道有聚酮类代谢物.本文首次对鲨鱼肠道可培养微生物的PKS基因资源进行调查,对研究鲨鱼来源的生物活性聚酮类物质提供新方向,对研究鲨鱼的生理生化提供基础依据.

摘要： 目的：克隆并表征中药材何首乌(Fallopia multiflora)中的Ⅲ型聚酮合酶（poly ketide synthases,PKS)基因。rn 方法：根据已知PKS基因的保守序列设计简并引物，RACE技术克隆何首乌中的PKS基因;利用生物信息学工具分系其生化特征，RT-PCR分析其在各组织中的表达差异。rn 结果：首次从何首乌中克隆到一种Ⅲ型PKS基因FmPKS2(Gen Bank登录号:GQ984139)。与迄今报道的绝大部分Ⅲ型PKS含有一个内含子不同，其基因组DNA含有三个内含子。该基因在不同组织中均有表达，在块根中表达量最高。rn 结论：该基因在何首乌不同组织中的表达模式与二苯乙烯苷、蒽醌类等活性次生代谢产物的积累模式一致，推测该基因可能参与了某种次生代谢物的生物合成。通过生物信息学工具对其编码蛋白的各种理化性质进行预测，为进一步研究其功能奠定了基础。

摘要： 粘细菌纤维堆囊菌ATCC15384在发酵培养中使用P450埃博霉素环氧酶的一种抑制剂，该抑制剂特异性抑制epoK基因产物的生成。重组纤维堆囊菌的epoK基因因随机诱变而失活，由于埃博霉素聚酮合酶（PKS）基因编码的改变，生产菌株只产生埃博霉素D和C，而不产生埃博霉素A和B。快速色谱纯化得到埃博霉素D，以其为起始材料采用区域性-立体选择性钯催化大环内酯氮化反应半合成埃博霉素D内酰胺衍生物。

摘要： Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)和非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)具有相似的结构和功能特点,它们都是具有模块结构的多功能的巨型酶.目前已知许多重要的微生物次级代谢产物,其合成机制是通过PKS和NRPS这两类合成酶系统所介导的,如红霉素、环孢素、达托霉素、青霉素等.随着越来越多的重要的聚酮类和多肽类微生物代谢产物的生物合成基因簇的分离,PKS和NRPS结构和作用机制不断被揭示.近年来发现一些次级代谢产物的合成需要PKS和NRPS共同参与.本文重点以雷帕霉素、埃坡霉素和博莱霉素等不同杂合形式的PKS-NRPS为例,阐述杂合PKS-NRPS催化聚酮链和多肽链的合成以及杂合蛋白质分子上的结构特点.雷帕霉素合成酶的结构是PKS之后紧挨着NRPS,在聚酮链合成之后引入一个氨基酸并通过两个C活性域与PKS联系起来并使合成完成的主碳链从合成酶上脱离下来;埃坡霉素合成酶是在PKS之间嵌入了NRPS,与PKS起始模块一起合成了一个带噻唑环的新的聚酮链合成的起始物;博莱霉素主碳链的合成是由9个NRPS模块与嵌入其中的一个PKS模块形成的复合酶共同催化合成的.杂合酶分子在一些活性域位点具有区别于非杂合酶的特点,特别在杂合酶的模块间和亚基肽链间的连接区往往具有特殊的氨基酸组成。

摘要： 利用PCR技术对21株分离自我国南海澳大利亚厚皮海绵的放线菌及9株分离自贪婪倔海绵的芽孢杆菌进行了聚酮合酶(PKS)基因的筛选.从芽孢杆菌C89中获得了一条669bp的片段,BLAST比对结果表明该基因对应的氨基酸序列和枯草芽孢杆菌Ⅰ型聚酮合成酶基因(PKS)KS域的相似性达96％.通过系统发育分析推测芽孢杆菌C89 PKS基因属于trans-AT型.此项研究首次证明了贪婪倔海绵共附生微生物中存在PKS基因,这为海绵活性物质的微生物来源假说提供了证据;同时也为可以产生聚酮类化合物的微生物筛选以及聚酮类化合物的发酵制备奠定了基础.

摘要： 随着微生物次级代谢产物生物合成机制的不断深入研究,大量代谢产物合成基因簇被克隆分析,为从微生物中定向寻找次级代谢产物提供了一条新的筛选途径.采用特异性引物和PCR技术从大量微生物中快速确定具有潜在合成某类化学结构次级代谢产物的菌株,结合发酵营养学研究挖掘微生物强大的次级代谢产物合成能力,可望克服传统活性筛选存在的不足.本文针对催化多环芳香类代谢产物生物合成的II型PKS基因,选择KSα基因的保守区域设计兼并引物,通过PCR扩增筛选和扩增产物同源分析,从微生物资源库中筛选到一株携带KSα基因的海洋来源放线菌FIM02-765,形态学和生理生化特征研究以及16SrRNA基因序列分析表明该菌株属放线菌目链孢囊菌科野野村氏菌属(Nonomuraea),与该属同源性相近典型菌株的分类比较发现FIM02-765可能是该属的一个新种.同时,深入的发酵营养学与代谢产物差异性研究发现,该菌株在以甘露醇为碳源的发酵培养基中产生一种具有特异性紫外吸收光谱的次级代谢产物,从放大发酵培养物中分离得到化合物FW02765,理化性质和波谱学研究表明该化合物与Lee等人报道从马杜拉放线菌中发现的多环芳香类化合物Simaomicinα同质.生物学活性研究表明该化合物具有很强的抗菌和抗肿瘤活性.本文首次从海洋稀有放线菌野野村氏菌(Nonomuraea sp.)中分离得到多环氧杂蒽酮类代谢产物Simaomicinα.同时证实基因筛选策略是微生物代谢产物定向发现的有效手段之一,特别对从微生物中发现那些表达要求高、产量低的次级代谢产物具有一定的优势,克服传统活性筛选的不足.

摘要： 随着微生物次级代谢产物生物合成机制的不断深入研究,大量代谢产物合成基因簇被克隆分析,为从微生物中定向寻找次级代谢产物提供了一条新的筛选途径.采用特异性引物和PCR技术从大量微生物中快速确定具有潜在合成某类化学结构次级代谢产物的菌株,结合发酵营养学研究挖掘微生物强大的次级代谢产物合成能力,可望克服传统活性筛选存在的不足.本文针对催化多环芳香类代谢产物生物合成的II型PKS基因,选择KSα基因的保守区域设计兼并引物,通过PCR扩增筛选和扩增产物同源分析,从微生物资源库中筛选到一株携带KSα基因的海洋来源放线菌FIM02-765,形态学和生理生化特征研究以及16SrRNA基因序列分析表明该菌株属放线菌目链孢囊菌科野野村氏菌属(Nonomuraea),与该属同源性相近典型菌株的分类比较发现FIM02-765可能是该属的一个新种.同时,深入的发酵营养学与代谢产物差异性研究发现,该菌株在以甘露醇为碳源的发酵培养基中产生一种具有特异性紫外吸收光谱的次级代谢产物,从放大发酵培养物中分离得到化合物FW02765,理化性质和波谱学研究表明该化合物与Lee等人报道从马杜拉放线菌中发现的多环芳香类化合物Simaomicinα同质.生物学活性研究表明该化合物具有很强的抗菌和抗肿瘤活性.本文首次从海洋稀有放线菌野野村氏菌(Nonomuraea sp.)中分离得到多环氧杂蒽酮类代谢产物Simaomicinα.同时证实基因筛选策略是微生物代谢产物定向发现的有效手段之一,特别对从微生物中发现那些表达要求高、产量低的次级代谢产物具有一定的优势,克服传统活性筛选的不足.

摘要： 本发明提供式(I)化合物、它们作为PARP抑制剂的应用、以及包括所述式(I)化合物的药物组合物，其中n、s、R

摘要： 本发明提供式(I)的化合物，它们作为PARP抑制剂的用途以及药物组合物，其含有所述的式(I)化合物，其中n、R

摘要： 本发明提供式(I)的化合物和式(I)、(VII-a)化合物以及含有所述化合物的药物组合物，以及它们作为PARP抑制剂的用途，其中n、R

摘要： 本发明提供式(I)的化合物和式(I)、它们作为PARP抑制剂的用途以及含有所述式(I)化合物的药物组合物，其中n、R

摘要： 本发明涉及式I的化合物，和其可药用盐或互变异构体，其是聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂，由此可用于治疗癌症、炎性的疾病、再灌注损伤、局部缺血性病症、中风、肾衰竭、心血管疾病、非心血管疾病的血管疾病、糖尿病、神经变性疾病、逆转录病毒感染、视网膜损伤、皮肤衰老和UV引起的皮肤损伤，和作为癌症治疗的化学或放射致敏剂。

摘要： 本发明提供式(I)化合物、它们作为PARP抑制剂的应用、以及包括所述式(I)化合物的药物组合物，其中n、s、R

摘要： 本发明涉及式I的化合物，和其可药用盐或互变异构体，其是聚(ADP－核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂，由此可用于治疗癌症、炎性的疾病、再灌注损伤、局部缺血性病症、中风、肾衰竭、心血管疾病、非心血管疾病的血管疾病、糖尿病、神经变性疾病、逆转录病毒感染、视网膜损伤、皮肤衰老和UV引起的皮肤损伤，和作为癌症治疗的化学或放射致敏剂。

摘要： 本发明提供式(I)的化合物和式(I)、它们作为PARP抑制剂的用途以及含有所述式(I)化合物的药物组合物，其中n、R

摘要： 本发明涉及细菌(例如放线菌属细菌)的III型聚酮合酶作为间苯三酚合酶的用途。本发明还涉及编码上述III型聚酮合酶的分离的核酸分子，以及包含这种核酸分子的载体和宿主细胞。本发明还涉及生产间苯三酚的方法。

摘要： 本发明涉及III型聚酮合酶作为间苯三酚合酶的用途，特别是，涉及来自藻(优选真核褐藻)的III型聚酮合酶作为间苯三酚合酶的用途。本发明还涉及显示出间苯三酚合酶活性的多肽以及编码上述III型聚酮合酶的分离的核酸分子，以及包含这种核酸分子的载体和宿主细胞。本发明还涉及生产间苯三酚的方法。