实时定量PCR

摘要： 背景:胚胎期的神经干细胞可向神经元和神经胶质细胞分化,而实际应用中希望神经干细胞更多地分化成神经元。因此,研究神经干细胞向神经元的定向分化机制至关重要。DNA拓扑异构酶Ⅱ是一类广泛存在于生物体内的核蛋白,在DNA复制、修复、转录、重组以及染色体分离等生命活动中发挥重要作用。目的:探讨神经干细胞及其向神经元定向分化过程中DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达及意义。方法:从ICR小鼠(E12.5 d)大脑皮质中分离培养神经干细胞,将神经干细胞球消化成单细胞后,以5×10^(8)L^(-1)密度接种于用Matrigel铺底的培养皿上,加入含B27、N2、10μg/L胶质细胞源性神经营养因子的成神经诱导分化条件培养液,诱导培养1,2,3 d采用免疫细胞化学、Western blot、实时定量PCR检测DNA拓扑异构酶Ⅱα和β的表达。结果与结论:①DNA拓扑异构酶Ⅱα阳性细胞在神经球内数量较多,且均匀分布,在向神经元诱导分化后阳性细胞有所减少;DNA拓扑异构酶Ⅱβ阳性细胞在神经球内数量较少,主要分布在神经球中央,在向神经元诱导分化后强表达的阳性细胞开始增多,在诱导分化2 d达到高峰,之后呈减少趋势;②在神经球中DNA拓扑异构酶Ⅱα蛋白和mRNA表达较高,在向神经元诱导分化后逐渐降低;在神经球中DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白和mRNA表达较低,在向神经元诱导分化后显著增高;③通过实验得出DNA拓扑异构酶Ⅱβ参与神经干细胞向神经元的定向分化。

摘要： 背景:胚胎期的神经干细胞可向神经元和神经胶质细胞分化,而实际应用中希望神经干细胞更多地分化成神经元.因此,研究神经干细胞向神经元的定向分化机制至关重要.DNA拓扑异构酶Ⅱ是一类广泛存在于生物体内的核蛋白,在DNA复制、修复、转录、重组以及染色体分离等生命活动中发挥重要作用.目的:探讨神经干细胞及其向神经元定向分化过程中DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达及意义.方法:从ICR小鼠(E12.5 d)大脑皮质中分离培养神经干细胞,将神经干细胞球消化成单细胞后,以5×108 L-1密度接种于用Matrigel铺底的培养皿上,加入含B27、N2、10 μg/L胶质细胞源性神经营养因子的成神经诱导分化条件培养液,诱导培养1,2,3 d采用免疫细胞化学、Western blot、实时定量PCR检测DNA拓扑异构酶Ⅱα和β的表达.结果与结论:①DNA拓扑异构酶Ⅱα阳性细胞在神经球内数量较多,且均匀分布,在向神经元诱导分化后阳性细胞有所减少;DNA拓扑异构酶Ⅱβ阳性细胞在神经球内数量较少,主要分布在神经球中央,在向神经元诱导分化后强表达的阳性细胞开始增多,在诱导分化2 d达到高峰,之后呈减少趋势;②在神经球中DNA拓扑异构酶Ⅱα蛋白和mRNA表达较高,在向神经元诱导分化后逐渐降低;在神经球中DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白和mRNA表达较低,在向神经元诱导分化后显著增高;③通过实验得出DNA拓扑异构酶Ⅱβ参与神经干细胞向神经元的定向分化.

摘要： 生物气溶胶监测仪利用荧光光谱法检测空气中的生物性物质,对疾病防控以及生物防恐预警意义重大。研究发现目前的国产生物气溶胶监测仪在采集空气中的生物颗粒时并不能区分不同细菌状态,得到的为总细菌数。通过实时定量PCR法和菌落计数法检测BioSampler采集瓶中的微生物,发现总细菌数和可培养的细菌数差异显著。利用扫描电子显微镜和荧光显微镜观察发现,采样器的撞击和离心作用影响了所收集的空气中微生物的生存能力,因此不宜用菌落计数法校准生物气溶胶监测仪。

摘要： 大肠杆菌重组酶RecA能够结合单链DNA,介导链交联,使停滞的复制叉回退。RecB参与形成RecBCD复合体,RecBCD处理DNA产生3’-overhang结构,此结构是RecA介导的同源重组(Homologous Recombination,HR)所必需的。RuvC参与形成RuvABC复合体,RuvABC处理Holliday junction(Hj)结构,进而通过同源重组途径完成DNA损伤修复。本研究表明甲基磺酸甲酯(Methyl Methanesulfonate,MMS)对细胞生长、克隆形成能力及细胞形态有明显影响。实时定量PCR分析发现MMS引起recA上调,recB和ruvC下调。recA在MMS处理后6小时达到最高,之后回落,说明需要大量的RecA处理受损的DNA。recB和ruvC下调后随着时间推移有所恢复,说明细胞正在逐步完成DNA损伤的修复。细胞可能通过同源重组修复受损的DNA。

摘要： 【目的】为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因。【方法】基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因。以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达,采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性,最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、MT、UFGT-1、UFGT-2、MYB-1、MYB-2、MYB-3、bHLH),对所选内参基因组合进行验证。【结果】4种方法分析得出的候选内参排序存在一定差异,需综合4种方法的几何平均值作为综合排序。根据geNorm软件推荐的最适内参数目为4个,即CNNM、GPR107、EF1-α、G6PD-2最稳定,PDP最不稳定。对10个目的基因表达量标准化验证发现:以CNNM、GPR107为内参组合与选用4个基因作为内参组合无显著差异,相关系数可达0.999 9,且选用双内参组合比4个内参组合的可操作性强,而不适合的内参基因(PDP)会对RT-qPCR结果产生严重偏差。【结论】以CNNM、GPR107作为组合是山麦冬果实花青素生物合成研究的最佳内参基因。

摘要： 补体系统作为先天免疫的重要组成部分,是一种复杂的限制性蛋白水解系统,其在免疫系统中发挥着重要的防御作用。为分析马氏珠母贝补体系统的组成及作用机制,使用血细胞样品进行了全长转录组测序建库、基因比对、功能注释,共挖掘到212个潜在补体样组分相关基因。补体样组分基因经同源性比对和结构域检测分析表明,检索到的基因分别编码89个含C1q结构域蛋白、57个C型凝集素蛋白、33个纤维胶凝蛋白、11个纤维蛋白原相关蛋白、8个甘露糖结合型凝集素关联丝氨酸蛋白酶、2个含硫酯蛋白(1个C3分子,1个TEP分子)、1个补体受体、2个补体因子、9个丝氨酸蛋白酶。随机选择12个补体相关基因,使用溶藻弧菌刺激前后的血细胞样品进行实时定量PCR检测其表达水平,结果显示C1q(C1q domain containing protein)、C-lectin、MBL(mannose-binding lectin)、ficolin、MASP(mannan-binding lectin serine protease)等基因均呈现出显著差异表达,表明马氏珠母贝补体系统是一个复杂的多组分效应系统,且可能通过凝集素途径或类似于凝集素途径激活补体系统的免疫作用。研究结果为进一步验证马氏珠母贝中存在的原始补体系统提供了分子生物学证据,同时对深入了解马氏珠母贝免疫防御机制,丰富和发展海洋无脊椎动物免疫学内容也具有重要理论意义。

摘要： 土壤反硝化作用是土壤N_(2)O产生的重要过程,亚硝酸盐还原酶(NIR)催化的亚硝态氮(NO_(2))还原为一氧化氮(NO)是反硝化作用的关键环节,研究长期施肥对反硝化微生物的影响及其与N_(2)O排放的关系对于全面理解土壤反硝化过程具有重要意义。基于28年的旱作雨养长期施肥试验,通过常规监测、定量PCR和高通量测序等探讨了长期不同施肥(不施肥CK、偏施肥的单施氮肥N和氮钾配施NK、以及氮磷钾平衡施肥NPK)下土N_(2)O排放和nir S反硝化细菌群落特征及两者之间的关系。结果表明:长期化肥施用(N,NK和NPK)均显著提高了N_(2)O累积排放量,其中平衡施肥(NPK)最高。长期化肥施用对nir S基因丰度和nir S型反硝化细菌的α-多样性无显著影响,但长期平衡施用化肥提高了uncultured_bacterium_2303和Rhodanobacter_sp._D206a的相对丰度,降低了unclassified_k_norank_d_Bacteria和unclassified_p_Proteobacteria的相对丰度,从而改变了nir S型反硝化细菌的群落结构组成。雨养旱作条件下,土壤有机碳(SOC)、全氮(TN)、有效磷(AP)和pH等土壤性质是土nir S型反硝化细菌群落结构组成变化的主要影响因素。土nir S型反硝化细菌群落结构组成对土壤N_(2)O排放具有显著影响,而nir S基因丰度和nir S型反硝化细菌多样性并没有显著影响。

摘要： 旨在克隆牦牛转录激活因子4(ATF4)基因,并检测其在不同组织的表达及雌性生殖器官中定位分析,探索ATF4在母牦牛繁殖的影响.以牦牛为实验对象,利用RT-PCR克隆得到牦牛ATF4基因CDS序列,生物信息学分析牦牛CDS区,RT-qPCR检测ATF4基因在牦牛不同组织中的表达模式,免疫组化(IHC)分析ATF4蛋白在雌性生殖器官中定位.结果表明,获得到牦牛ATF4基因cDNA序列,编码区全长1 047 bp,编码348个氨基酸,ATF4蛋白属于酸性亲水不稳定蛋白.RT-qPCR显示,ATF4基因在检测的8个组织中均有表达,在子宫和卵巢的表达量显著高于其它组织(P<0.05);妊娠期子宫、卵巢和输卵管中ATF4基因的表达量显著高于空怀期(P<0.05).IHC显示ATF4蛋白主要在牦牛卵巢的颗粒细胞、卵泡液、输卵管黏膜上皮、子宫内膜和子宫基质细胞中表达.这些结果说明ATF4基因在动物进化中比较保守,组织表达广泛,并在子宫和卵巢高表达,可能在牦牛繁殖调控中发挥重要作用.

摘要： 目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓中溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1(lysophosphatidylcholine acyltransferase 1,LPCAT1)的表达和临床意义。方法:应用实时定量PCR技术检测60例不同临床分型的AML患者和27例健康对照骨髓标本LPCAT1 mRNA的表达。结果:与对照组相比,AML患者LPCAT1 mRNA的表达水平显著降低(P0.05)。LPCAT1 mRNA区分AML患者的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.896(95%CI:0.825~0.967,P<0.001),LPCAT1 mRNA表达的截断值为0.173时,敏感性和特异性分别为88.3%和81.5%。结论:LPCAT1低表达是AML中的常见分子事件,或可用于AML辅助诊断。

摘要： 目的:通过检测骨肉瘤组织中细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)基因的表达改变情况,明确骨肉瘤中CCND1基因的变化,探索CCND1基因在骨肉瘤发生和发展过程中的作用。方法:使用免疫组织化学法检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中的CCND1表达差异,再利用实时定量PCR法对同种样本进行CCND1基因mRNA表达的相对定量测定,对比两种实验结果的异同。结果:免疫组织化学实验结果表明,在骨肉瘤组织中,CCND1表达较瘤旁组织增高,差异有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR实验结果进一步表明,CCND1基因mRNA在骨肉瘤组织中的表达是瘤旁组织的2.55倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:两种实验结果表明,在骨肉瘤组织中CCND1表达量增多,意味着CCND1基因在骨肉瘤组织内处于高度活跃状态。

摘要： 甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)占比最高,约为90％.建立快速准确的检测方法,无疑对于其早期诊断和病因分析具有重要意义.本研究主要建立了基于GAS8-AS1基因的检测技术,并用于乳头状甲状腺癌的早期筛检.首先提取PTC患者甲状腺癌及正常甲状腺组织的基因组DNA,通过测序来分析GAS8-AS1基因的突变情况;第二,利用转染技术,将lncRNA GAS8-AS1基因的质粒或针对lncRNA GAS8-AS1的siRNAs分别转染培养的甲状肿瘤细胞系(GLAG66、NPA和TPC-1),检测该基因对肿瘤细胞增长的影响,以验证基因突变与肿瘤细胞的相关性;第三,设计一对特异引物(F:CAACGAGCAAACAAGAAGGAG;R:TGAGCCAAACAGACCAGTCA),建立针对基因突变的实时定量PCR检测方法.结果发现,与正常甲状腺组织比较,PTC患者甲状腺癌组织的GAS8-AS1基因突变频率明显增加,遂确认该基因为PTC的易感基因;经GAS8-AS1基因或siRNAs转染后,表现为促进或抑制甲状肿瘤细胞系的增殖;利用所设计引物,可以检测出GAS8-AS1基因的突变情况.结论:GAS8-AS1基因与乳头状甲状腺癌关系密切,前者可作为后者的易感基因,所建立的实时定量PCR检测方法,可用于乳头状甲状腺癌的快速筛选和检测.

摘要： 甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)占比最高,约为90％.建立快速准确的检测方法,无疑对于其早期诊断和病因分析具有重要意义.本研究主要建立了基于GAS8-AS1基因的检测技术,并用于乳头状甲状腺癌的早期筛检.首先提取PTC患者甲状腺癌及正常甲状腺组织的基因组DNA,通过测序来分析GAS8-AS1基因的突变情况;第二,利用转染技术,将lncRNA GAS8-AS1基因的质粒或针对lncRNA GAS8-AS1的siRNAs分别转染培养的甲状肿瘤细胞系(GLAG66、NPA和TPC-1),检测该基因对肿瘤细胞增长的影响,以验证基因突变与肿瘤细胞的相关性;第三,设计一对特异引物(F:CAACGAGCAAACAAGAAGGAG;R:TGAGCCAAACAGACCAGTCA),建立针对基因突变的实时定量PCR检测方法.结果发现,与正常甲状腺组织比较,PTC患者甲状腺癌组织的GAS8-AS1基因突变频率明显增加,遂确认该基因为PTC的易感基因;经GAS8-AS1基因或siRNAs转染后,表现为促进或抑制甲状肿瘤细胞系的增殖;利用所设计引物,可以检测出GAS8-AS1基因的突变情况.结论:GAS8-AS1基因与乳头状甲状腺癌关系密切,前者可作为后者的易感基因,所建立的实时定量PCR检测方法,可用于乳头状甲状腺癌的快速筛选和检测.

摘要： 甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)占比最高,约为90％.建立快速准确的检测方法,无疑对于其早期诊断和病因分析具有重要意义.本研究主要建立了基于GAS8-AS1基因的检测技术,并用于乳头状甲状腺癌的早期筛检.首先提取PTC患者甲状腺癌及正常甲状腺组织的基因组DNA,通过测序来分析GAS8-AS1基因的突变情况;第二,利用转染技术,将lncRNA GAS8-AS1基因的质粒或针对lncRNA GAS8-AS1的siRNAs分别转染培养的甲状肿瘤细胞系(GLAG66、NPA和TPC-1),检测该基因对肿瘤细胞增长的影响,以验证基因突变与肿瘤细胞的相关性;第三,设计一对特异引物(F:CAACGAGCAAACAAGAAGGAG;R:TGAGCCAAACAGACCAGTCA),建立针对基因突变的实时定量PCR检测方法.结果发现,与正常甲状腺组织比较,PTC患者甲状腺癌组织的GAS8-AS1基因突变频率明显增加,遂确认该基因为PTC的易感基因;经GAS8-AS1基因或siRNAs转染后,表现为促进或抑制甲状肿瘤细胞系的增殖;利用所设计引物,可以检测出GAS8-AS1基因的突变情况.结论:GAS8-AS1基因与乳头状甲状腺癌关系密切,前者可作为后者的易感基因,所建立的实时定量PCR检测方法,可用于乳头状甲状腺癌的快速筛选和检测.

摘要： 甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)占比最高,约为90％.建立快速准确的检测方法,无疑对于其早期诊断和病因分析具有重要意义.本研究主要建立了基于GAS8-AS1基因的检测技术,并用于乳头状甲状腺癌的早期筛检.首先提取PTC患者甲状腺癌及正常甲状腺组织的基因组DNA,通过测序来分析GAS8-AS1基因的突变情况;第二,利用转染技术,将lncRNA GAS8-AS1基因的质粒或针对lncRNA GAS8-AS1的siRNAs分别转染培养的甲状肿瘤细胞系(GLAG66、NPA和TPC-1),检测该基因对肿瘤细胞增长的影响,以验证基因突变与肿瘤细胞的相关性;第三,设计一对特异引物(F:CAACGAGCAAACAAGAAGGAG;R:TGAGCCAAACAGACCAGTCA),建立针对基因突变的实时定量PCR检测方法.结果发现,与正常甲状腺组织比较,PTC患者甲状腺癌组织的GAS8-AS1基因突变频率明显增加,遂确认该基因为PTC的易感基因;经GAS8-AS1基因或siRNAs转染后,表现为促进或抑制甲状肿瘤细胞系的增殖;利用所设计引物,可以检测出GAS8-AS1基因的突变情况.结论:GAS8-AS1基因与乳头状甲状腺癌关系密切,前者可作为后者的易感基因,所建立的实时定量PCR检测方法,可用于乳头状甲状腺癌的快速筛选和检测.

摘要： 本研究收集急性心肌梗死患者血清38例、心绞痛组25例及健康人20例，提取血清总RNA,采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性.结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关，其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

摘要： 本研究收集急性心肌梗死患者血清38例、心绞痛组25例及健康人20例，提取血清总RNA,采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性.结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关，其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

摘要： 本研究收集急性心肌梗死患者血清38例、心绞痛组25例及健康人20例，提取血清总RNA,采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性.结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关，其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

摘要： 本研究收集急性心肌梗死患者血清38例、心绞痛组25例及健康人20例，提取血清总RNA,采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性.结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关，其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

摘要： 本研究收集急性心肌梗死患者血清38例、心绞痛组25例及健康人20例，提取血清总RNA,采用荧光定量PCR方法,通过检测急性心肌梗死患者、心绞痛患者(除外AMI)、健康人群血清中miR-208、miR-214、miR-21表达量的差异,探讨血清miRNA作为急性心肌梗死早期诊断和预后生物学标记物的可能性.结果显示血清中miRNA的表达水平与冠状动脉病变严重程度关系相关，其表达水平可反映心肌梗死病变程度。实验结果提示心肌细胞特异性的miRNA可作为一类新的生物标志物用于临床疾病的早期诊断及治疗评估。

摘要： 目的：探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷:5-aza)对苯处理大鼠骨髓细胞(BMC)周期的影响及其作用机制。rn 方法：以指数生长期的正常大鼠BMC作为空白对照组,以10 mmol/L苯处理BMC 24 h为苯处理组,苯处理后用10μmol/L 5-aza处理72h为苯+5-aza处理组；运用流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测Cyclin D1和p27mRNA表达的变化,Western blot检测Cyelin D1和p27蛋白表达的变化。rn 结果：与对照组比较,苯处理组细胞S期比例显著增高42.5％,G1期比例下降31.5％(P＜0.01),同时伴随Cy(c)lin D1 mRNA和蛋白表达显著增加,p27 mRNA和蛋白的表达显著下降(P＜0.01)；与苯处理组相比,苯+5-aza处理组G1期比例上升52.7％,S期比例下降56.2%(P＜0.01).同时伴随Cyclin D1/p27 mRNA和蛋白的表达发生显著性的逆转(P＜0.01)。rn 结论：5-aza逆转苯所致的细胞周期改变,伴有Cyclin D1和P27表达改变。

摘要： 本发明提供了一种定量检测机体中mRNA含量的实时荧光定量PCR试剂盒及检测方法和应用，涉及mRNA检测技术领域。本发明所述试剂盒建立在RT‑PCR基础上，以mRNA作为标准品构建标准曲线，稀释的系列标准品溶液通过与待测样本同样的反转录、qPCR过程，更好的模拟样本检测过程，直观展示mRNA药物含量，减少质粒的构建工作，实现了生物样本中mRNA药物的快速、准确的定量检测，具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽，特异性强等优点，可用于mRNA类药物临床前药物生物分布研究、临床研究生物样品检测和临床治疗患者的药物分布监测。

摘要： 本发明涉及核酸分子定量的方法，具体而言，涉及适用于石蜡组织切片(FFPE)样品的基因表达定量的实时定量PCR方法，该方法包括1)反转录反应阶段；2)预扩增反应阶段；和3)巢式内扩增qPCR反应阶段。与传统的反转录qPCR相比，本发明的方法即保证了反转录、qPCR反应的特异性，又降低了反应所需底物的浓度，可以使qPCR的检测灵敏度提高500倍以上，尤其适用于低质量和/或低浓度的石蜡组织切片提取的mRNA的定量检测。本发明的方法可以极大地提高此类检测的灵敏度和可靠度。

摘要： 本发明涉及基因技术领域，特别涉及应用于肝细胞癌的一组实时定量PCR相对定量的内参基因及其筛选方法。本发明得出TFG和SFRS4可作为肝细胞癌细胞株研究中较稳定的内参基因。常用的内参基因的表达稳定性经过评估后发现ACTB可作为内参进行应用，而GAPDH、HPRT1和TUBB则不适合作为肝细胞癌研究相关的内参基因。

摘要： 本发明公开了一组定量检测柑橘半穿刺线虫的实时荧光定量PCR引物和探针及其应用。所述引物包括上游引物TsF1和下游引物TsR2，序列分别如SEQ ID NO.1～2所示；所述探针为Tspro1，探针Tspro1的序列如SEQ ID NO.3所示。利用上述引物和探针建立的实时荧光定量PCR方法不仅能够特异的从混合线虫样品或基质中检测并定量柑橘半穿刺线虫，而且检测灵敏性可达到单条线虫的灵敏度，对实际应用工作，如检验检疫工作，有着重要的推广应用价值。

摘要： 本发明提出一种利用荧光染料SYBR green的来检测造血嵌合体的PCR实时定量检测方法中的PCR反应体系，所述反应体系利用荧光染料SYBR green和TaqMan进行定量PCR检测，每个反应20微升，在Rotor gene3000荧光定量PCR仪中进行，且在定量之前，先筛选适用于供体和受体的多态性标记。本发明中介绍了12个可以用于实时荧光定量来检测造血嵌合体的特异性多态性遗传标记；另外为了弥补荧光染料SYBR green纳入双链DNA的非特异性，同时运行熔解曲线来验证PCR产物的特异性。本发明的实时定量PCR方法所需费用便宜，保质期长，且灵敏度，为一种快捷简便而可靠的造血嵌合体的检测方法。

摘要： 本发明提供了一种定量检测机体中mRNA含量的实时荧光定量PCR试剂盒及检测方法和应用，涉及mRNA检测技术领域。本发明所述试剂盒建立在RT‑PCR基础上，以mRNA作为标准品构建标准曲线，稀释的系列标准品溶液通过与待测样本同样的反转录、qPCR过程，更好的模拟样本检测过程，直观展示mRNA药物含量，减少质粒的构建工作，实现了生物样本中mRNA药物的快速、准确的定量检测，具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽，特异性强等优点，可用于mRNA类药物临床前药物生物分布研究、临床研究生物样品检测和临床治疗患者的药物分布监测。

摘要： 本发明涉及采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法，可有效解决人类血液中布鲁氏菌定量检测的问题，其解决的技术方案是，采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物和探针，引物和探针序列是：上游引物:5’‑GGAAGGTTCAGAAACAACCAC‑3’，下游引物：5’‑GTTGTAACCGGCCTGAACAC‑3’，探针：5’‑FAM‑TGCTGCTCCAGTTGACACCTTCTCG‑BHQ1‑3’，本发明稳定性良好、灵敏度高、特异性强，采用实时荧光定量PCR技术，可准确检测出人类血液中布鲁氏菌含量，对布病的准确诊断及防控策略的制定有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种HIV‑1RNA定量检测的实时荧光定量PCR引物和探针，所述引物包括上游引物HIV F1和下游引物HIV R1，所述上游引物HIV F1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物HIV R1的序列如SEQ ID NO.2所示；所述探针为HIV probe1，所述HIV probe的序列如SEQ ID NO.3所示。该引物组和探针对HIV‑1具有高特异性，可用于实时荧光定量RT‑qPCR技术检测HIV‑1。还公开了一种HIV‑1病毒载量的实时荧光定量PCR检测方法，以及上述引物和探针、试剂盒在定量检测HIV‑1病毒载量方面的应用。

摘要： 本发明涉及基因技术领域，特别涉及应用于肝细胞癌的一组实时定量PCR相对定量的内参基因及其筛选方法。本发明得出TFG和SFRS4可作为肝细胞癌细胞株研究中较稳定的内参基因。常用的内参基因的表达稳定性经过评估后发现ACTB可作为内参进行应用，而GAPDH、HPRT1和TUBB则不适合作为肝细胞癌研究相关的内参基因。

摘要： 本发明涉及核酸分子定量的方法，具体而言，涉及适用于石蜡组织切片(FFPE)样品的基因表达定量的实时定量PCR方法，该方法包括1)反转录反应阶段；2)预扩增反应阶段；和3)巢式内扩增qPCR反应阶段。与传统的反转录qPCR相比，本发明的方法即保证了反转录、qPCR反应的特异性，又降低了反应所需底物的浓度，可以使qPCR的检测灵敏度提高500倍以上，尤其适用于低质量和/或低浓度的石蜡组织切片提取的mRNA的定量检测。本发明的方法可以极大地提高此类检测的灵敏度和可靠度。