TaqMan探针

摘要： 为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法,并对其进行特异性、灵敏性、可重复性检验。特异性试验结果显示,该方法除了对PCV2和PCV3的检测结果为阳性外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测均呈阴性,无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该检测方法同时检测猪圆环病毒2型和3型质粒标准品的最低检测极限均可达到10拷贝·μL^(-1),敏感性较高;该方法组内和组间的变异系数均小于2%,重复性较好。采集浙江省181份猪肉及全血样品,分别利用本文建立的检测方法与标准普通荧光PCR检测方法进行检测,结果显示,PCV2的阳性率为50.83%(92/181),PCV3的阳性率为37.57%(68/181),PCV2和PCV3共感染率为12.15%(22/181);而普通荧光PCR的上述检测结果分别为50.28%(91/181)、36.46%(66/181),共感染率为11.60%(21/181),两种方法对PCV2和PCV3的检测符合率分别可达98.91%和97.06%,对PCV2和PCV3混合感染符合率为95.45%。综上所述,本试验建立的双重荧光定量PCR检测方法可同时对PCV2和PCV3进行快速鉴别检测,可用于病原学检测和流行病学调查等。

摘要： 为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。当质粒标准品浓度为4.22×10^(2)~4.22×10^(9)copies/μL时,荧光定量标准曲线C;值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.9998。该方法对发热伴血小板减少综合征病毒最低检测限为4.22×10^(1)copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍;该方法可特异性地检测出SFTSV,而对同科其他病毒检测结果均为阴性;批内、批间变异系数均小于2%。对采集的200只蜱进行检测,阳性检出率为3.5%,而常规RT-PCR方法的阳性检出率为2%。研究结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,为发热伴血小板减少综合征的检测提供了技术手段。

摘要： 为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)引发的鸡心包积水-肝炎综合征的病原学监测和疫情诊断提供技术支撑,本研究经对部分发表在NCBI的禽腺病毒4型序列进行比对,在其六邻体基因上找到一段相对保守序列,并设计出PCR引物和TaqMan探针。以FAdV-4 HB1510株作为标准品,通过反应条件优化,建立了FAdV-4荧光定量PCR检测方法,并对其敏感性、特异性和重复性进行了分析。结果显示,该方法的灵敏度为10 EID_(50)/mL,为常规PCR方法的10倍;组内和组间重复性良好;与鸡减蛋综合征病毒、大肠杆菌等禽类病原的核酸无交叉反应。通过对65份临床样品进行检测,FAdV-4荧光定量PCR和常规PCR的检测符合率为90.7%。因此,FAdV-4荧光定量PCR的快速、敏感、特异等优点使其在禽腺病毒4型的早期检测及预防、控制等方面有较好的应用前景。

摘要： 本研究旨在建立牛支原体Taqman探针实时荧光定量PCR方法,便于临床上快速检测、诊断牛支原体病。本研究根据牛支原体TU基因(登录号:CP002188.1)设计合成特异性引物及Taqman探针,并通过试验检验所建立的检测方法的特异性和灵敏性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的截距为46.20,斜率为-3.24,相关系数为-0.996,提示标准品的浓度与Ct值呈线性关系。方法性能评价显示,所建方法的组内及组间重复性变异系数均低于0.02,说明所建方法的重复性好;灵敏性试验中,目的基因最小检出浓度为19.1 copies/μL,敏感性是常规PCR(1.91×10^(4)copies/μL)的1 000倍。试验结果表明,本研究建立的牛支原体荧光定量PCR方法,具有精确、敏感、特异等优点,可为临床上快速检测牛支原体病提供技术支撑。

摘要： 随着人们生活水平的提高,对鹿产品的需求日益剧增。由于市场上优质鹿产品供不应求,许多不法分子借此鱼目混珠以次充好,导致掺假鹿及其衍生品泛滥,因此急需一种简单快速鉴别鹿产品真伪的方法。本研究对马鹿线粒体D-loop基因特异位点进行分析比对,并作为扩增靶序列,设计马鹿特异性的引物和探针,通过对特异性以及方法灵敏度测试,建立了马鹿的特异性实时荧光PCR方法。该方法具有很高的特异性及灵敏性,检测灵敏性为0.00174 ng/μL,适用于鉴别马鹿及其相关产品的真伪。

摘要： 由猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)引起的腹泻,直接影响仔猪存活率和后期生长速度,严重的可导致死亡,是养猪企业重点监测的疫病之一。为了满足养猪企业对猪腹泻样本快速检测和排查的需要,本研究基于Taqman荧光探针技术建立了实时荧光PCR快速检测PDCoV的方法,并将其应用于猪场实际样品的检测。结果显示:本研究建立的实时荧光RT-PCR检测PDCoV的方法具有较高的特异性,可将PDCoV与同属的其他冠状病毒进行区分;其检测灵敏度比传统的PCR提高100倍;通过对大量临床样本的检测,证实该方法具有良好的稳定性,可在众多的腹泻临床样本中准确、高效地对PDCoV进行鉴定,从而减少养殖企业的损失。

摘要： 蜱是多种病原体的储存宿主和传播媒介,近年来由蜱体内新发现了多种潜在的人兽共患病病原,因此对蜱所携带病原的早期识别和建立相应的检测与防范措施尤为重要。对辽宁省部分地区采集的长角血蜱样本进行宏转录组测序,发现其中存在一种新的黄病毒科病毒成员,是潜在的人兽共患病病原。为建立针对该病毒快速、灵敏的检测方法,选择其糖蛋白VP1基因进行引物探针设计,通过对反应条件及反应体系的优化,建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR检测方法,标准方程为y=-3.4436x+33.063,相关系数(R^(2))为0.9999;此方法可检出最低拷贝数为2.5×10copies·μL^(-1),与普通PCR相比,灵敏度提高约10^(4)倍,具有良好的灵敏度;与其他相近病毒的阳性质粒进行反应均无扩增,说明其具有良好的特异性;实验结果的变异系数均低于0.5%,重复性良好;对不同浓度质粒在不同时间进行反应,CT值无显著变化,稳定性良好。采用本方法对2020及2021年采集于辽宁省及内蒙古自治区的18个地区540头蜱进行检测,发现阳性样本数为234头,阳性率为43.3%。结果表明:所建立的实时荧光定量PCR检测方法具有特异性强,灵敏度高,线性关系、重复性及稳定性良好等特点,此检测方法的建立,填补了NALSV在实时荧光定量PCR检测方面的空白,为NALSV的病原检测提供了新的技术方法,对NALSV的分布监测、临床诊断及相关研究奠定了基础,具有一定的现实意义及应用价值。

摘要： 目的通过微流控芯片检测平台应用Taqman探针的实时定量PCR技术对血小板制剂中的细菌16S rDNA进行检测,探讨该体系在血小板细菌污染的快速检测的应用。方法向机采血小板中人为添加一定浓度的金黄色葡萄球菌或铜绿假单胞菌,模拟成10~2~10~8 CFU/mL细菌污染的血液标本,经10倍梯度稀释后进行细菌计数及微流控芯片FQ-PCR检测细菌16S rDNA,并对检测体系进行特异性、检出限和重复性评价。结果微流控芯片FQ-PCR体系特异性较强,探针和引物对阳性标本均有反应,与空白对照无反应。对污染血小板的金黄色葡萄球菌,该方法的最低检出限为865 CFU/mL,而对铜绿假单胞菌的最低检出限为885 CFU/mL。当金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌浓度分别达到最低检测限时,空白对照与各细菌组的Ct值之差分别为4.35±1.01和2.03±0.61。各浓度菌液提取的DNA进行微流控芯片FQ-PCR扩增后的Ct值计算重复性指数在0.012~0.052范围内。结论微流控芯片FQ-PCR检测平台可特异、有效地检出血小板中的细菌污染,为确保输血安全提供帮助。

摘要： 为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV),以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了试验。结果表明:该方法灵敏度高,最低检测限为3.4 copies/μL;特异性强,与狂犬病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、犬流感病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;重复性好,批内变异系数为0.99%~4.13%,批间变异系数为1.29%~4.64%。以上结果说明,本试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、敏感、重复性好,适用于FIPV的快速检测。

摘要： 目的建立一种快速检测CYP2D6*10基因多态性的方法。方法基于荧光定量PCR平台,采用Taqman探针分型技术结合扩增阻滞突变聚合酶链式反应(ARMS-PCR)技术,建立一种适应多种类型临床样本(抗凝全血、石蜡组织切片等)的快速检测CYP2D6*10基因的方法。使用多种类型的临床样本及不同浓度的基因组DNA,对检测体系的准确性、灵敏度进行验证。结果该研究建立的检测体系适用抗凝全血、石蜡包埋组织等多种类型的临床样本,基因组DNA检测范围为30~30000 copy/μL,检测结果不受同源基因干扰,且与Sanger直接测序法检测结果一致率为100%。结论该研究建立的CYP2D6*10荧光定量PCR检测体系准确性好、灵敏度高,具有广泛的应用价值。

摘要： 目的：建立一种用于检测鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法：针对鼠巴贝斯虫18sRNA基因序列,设计特异性引物和探针,建立鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR反应体系,并对该方法的灵敏度和特异性进行验证.结果：本方法对鼠巴贝斯虫的检测灵敏度较高,最低检出限为1.34×10-7ng/μl;具有较高的特异性,与钩端螺旋体、莱姆病螺旋体、巴尔通体、Q热、土拉菌等病原均无交叉反应,反应体系稳定.结论：本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法特异、灵敏,可用于鼠巴贝斯虫的实验室快速检测及现场监测使用.

摘要： 目的：建立一种用于检测鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法：针对鼠巴贝斯虫18sRNA基因序列,设计特异性引物和探针,建立鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR反应体系,并对该方法的灵敏度和特异性进行验证.结果：本方法对鼠巴贝斯虫的检测灵敏度较高,最低检出限为1.34×10-7ng/μl;具有较高的特异性,与钩端螺旋体、莱姆病螺旋体、巴尔通体、Q热、土拉菌等病原均无交叉反应,反应体系稳定.结论：本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法特异、灵敏,可用于鼠巴贝斯虫的实验室快速检测及现场监测使用.

摘要： 目的：建立一种用于检测鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法：针对鼠巴贝斯虫18sRNA基因序列,设计特异性引物和探针,建立鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR反应体系,并对该方法的灵敏度和特异性进行验证.结果：本方法对鼠巴贝斯虫的检测灵敏度较高,最低检出限为1.34×10-7ng/μl;具有较高的特异性,与钩端螺旋体、莱姆病螺旋体、巴尔通体、Q热、土拉菌等病原均无交叉反应,反应体系稳定.结论：本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法特异、灵敏,可用于鼠巴贝斯虫的实验室快速检测及现场监测使用.

摘要： 目的：建立一种用于检测鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法：针对鼠巴贝斯虫18sRNA基因序列,设计特异性引物和探针,建立鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR反应体系,并对该方法的灵敏度和特异性进行验证.结果：本方法对鼠巴贝斯虫的检测灵敏度较高,最低检出限为1.34×10-7ng/μl;具有较高的特异性,与钩端螺旋体、莱姆病螺旋体、巴尔通体、Q热、土拉菌等病原均无交叉反应,反应体系稳定.结论：本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法特异、灵敏,可用于鼠巴贝斯虫的实验室快速检测及现场监测使用.

摘要： 根据郁金香黄色疱斑病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对郁金香黄色疱斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法.除郁金香黄色疱斑病菌外,还对其他5种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测.结果表明,只有郁金香黄色疱斑病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生.实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为9pg/μ1的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.

摘要： 根据郁金香黄色疱斑病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对郁金香黄色疱斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法.除郁金香黄色疱斑病菌外,还对其他5种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测.结果表明,只有郁金香黄色疱斑病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生.实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为9pg/μ1的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.

摘要： 根据郁金香黄色疱斑病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对郁金香黄色疱斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法.除郁金香黄色疱斑病菌外,还对其他5种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测.结果表明,只有郁金香黄色疱斑病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生.实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为9pg/μ1的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.

摘要： 根据郁金香黄色疱斑病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对郁金香黄色疱斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法.除郁金香黄色疱斑病菌外,还对其他5种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测.结果表明,只有郁金香黄色疱斑病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生.实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为9pg/μ1的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.

摘要： 目的：针对BCR-ABL融合基因的不同断裂点基因序列,设计引物及TaqMan探针;构建目的基因及内参基因的标准品,建立特异灵敏的实时荧光定量PCR检测技术.方法：参照欧洲抗癌项目中25家大学联合制定的实时荧光定量PCR标准化及质控标准,依据Genbank中编码P210(b2a2,b3a3),P190的BCR-ABL及ABL(内参)基因序列,设计引物及Taqman探针.

摘要： 目的：针对BCR-ABL融合基因的不同断裂点基因序列,设计引物及TaqMan探针;构建目的基因及内参基因的标准品,建立特异灵敏的实时荧光定量PCR检测技术.方法：参照欧洲抗癌项目中25家大学联合制定的实时荧光定量PCR标准化及质控标准,依据Genbank中编码P210(b2a2,b3a3),P190的BCR-ABL及ABL(内参)基因序列,设计引物及Taqman探针.

摘要： 本发明公开了一种多探针PCR Taqman探针，其为标记有荧光基团和淬灭基团的一段寡核苷酸序列，所述寡核苷酸序列至少包括一碱基T，淬灭基团标记在所述碱基T上，荧光基团标记在淬灭基团的上游碱基上，并且与淬灭基团距离8～25nt。本发明通过改变并缩短荧光基团和淬灭基团的标记位置，并将淬灭基团标记在探针寡核苷酸序列的碱基T上，可显著增强淬灭基团对荧光基团的抑制效率，降低背景噪音；尤其是当本发明应用于多探针PCR时，可明显降低背景叠加噪音，扩大信号区间，提高信噪比和检测的灵敏度，从而提高了数据的重复性，可进一步促进多探针PCR技术的发展，提高检测效率，降低反应成本。

摘要： 本发明公开了一种鸡白痢/鸡伤寒沙门菌TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的引物和探针的组合物、试剂盒及其应用，涉及生物技术领域，其中：引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；检测速度快，特异性强、检测灵敏且检测稳定。

摘要： 本发明属于基因诊断领域，公开了一种检测HTR2A基因rs6313位点(HTR2A，102C>T)的TaqMan探针实时荧光PCR方法及其引物探针组合。其中：上游引物FpC‑T:5’‑GCTCTACAGTAATGACTTTAACTTC‑3’，上游引物FpT‑T:5’‑GCTCTACAGTAATGACTTTAACTTT‑3’，下游引物Rp：5’‑GATGAAGTAAGGAGAGACACGAC‑3’，探针Probe：5’‑FAM‑TAACACTTCTGATGCATTTAACTGGAC‑BHQ2‑3’。PCR反应完成后，可通过扩增曲线的有无分析结果。本发明具有操作简便、分辨率高、无污染、高通量等优点。

摘要： 本发明提供了一种基于TaqMan探针实时荧光PCR的特异性检测绿豆过敏原的引物、探针和方法，其上游引物的核苷酸序列LvD‑QF如序列表中SED ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列LvD‑QR如序列表中SEQ ID NO：2所示。探针的核苷酸序列LvD‑P如序列表中SEQ ID NO：3所示。本发明所述的方法在不计算DNA提取过程耗时的情况下，实时荧光定量PCR耗时80min，所以本发明的检测方法在1.5h之内即可完成食品及农产品中绿豆过敏原含量的测定工作，具有精准、快速、操作方便等优势。

摘要： 本发明提供了一种使用Taqman探针法进行APOE基因检测的方法，包括如下步骤：(1)正常人群口腔拭子基因组提取；(2)设计APOE引物及探针；(3)使用APOE的引物和探针对基因组进行PCR(聚合酶链式反应)；(4)PCR结束后进行荧光读取，并进行基因分型；(5)综合2个探针检测的结果，对个体的APOE基因进行综合评估。本发明的taqman引物及探针具有良好的分型效果，能非常准确的确定个体的基因型。

摘要： 本发明公开了一种多探针PCR Taqman探针，其为标记有荧光基团和淬灭基团的一段寡核苷酸序列，所述寡核苷酸序列至少包括一碱基T，淬灭基团标记在所述碱基T上，荧光基团标记在淬灭基团的上游碱基上，并且与淬灭基团距离8～25nt。本发明通过改变并缩短荧光基团和淬灭基团的标记位置，并将淬灭基团标记在探针寡核苷酸序列的碱基T上，可显著增强淬灭基团对荧光基团的抑制效率，降低背景噪音；尤其是当本发明应用于多探针PCR时，可明显降低背景叠加噪音，扩大信号区间，提高信噪比和检测的灵敏度，从而提高了数据的重复性，可进一步促进多探针PCR技术的发展，提高检测效率，降低反应成本。

摘要： 本发明提供了一种利用TaqMan探针检测桔小实蝇的方法，包括以下步骤：（1）设计引物和探针：上游引物序列见SEQ ID No：1，下游引物序列见SEQ ID No：2，探针序列见SEQ ID No：3；（2）采用步骤（1）设计的引物和探针进行荧光定量PCR检测。通过设计特异性引物和TaqMan探针，建立检测桔小实蝇的方法，可快速、准确地检测出桔小实蝇。

摘要： 本发明提供了一种利用TaqMan探针检测番石榴实蝇的方法，包括以下步骤：（1）设计引物和探针：上游引物序列见SEQ ID No：1，下游引物序列见SEQ ID No：2，探针序列见SEQ ID No：3；（2）采用步骤（1）设计的引物和探针进行荧光定量PCR检测。通过设计特异性引物和TaqMan探针，建立检测番石榴实蝇的方法，可快速、准确地检测出番石榴实蝇。

摘要： 本发明公开了一种白血病融合基因的TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法及其专用引物、探针与试剂盒。本发明的方法是以待检样品中的白血病融合基因(AML1-ETO、BCR-ABL190、BCR-ABL210、CBFb-MYH11(A)、CBFb-MYH11(D)、CBFb-MYH11(E)、E2A-PBX1、MLL-AF4、PML-RARa(bcr1)、PML-RARa(bcr2)、PML-RARa(bcr3)、SIL-TAL1和TEL-AML1)为检测对象，准确度及精密度均较好。利用本发明试剂盒检测白血病患者8种融合基因特异性好，可达100％；灵敏度高，达到0.01％，即10000个细胞中有1个白血病细胞就能够被检测出。本发明的试剂盒对于白血病的诊断可提供直接的理论依据，并为疗效观察、预后判断、微小残留病检测等提供有力手段，而且，操作简便、稳定性好，具有深远的临床意义和推广性。本发明的检测方法及试剂盒可用于多种临床样本(骨髓、外周血或组织等)中白血病融合基因的定性检测，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一种taqman探针法进行TP53易感基因筛查的方法，包括如下步骤：本发明所述的检测方法包括以下步骤：(1)正常人群口腔拭子基因组提取；(2)设计TP53引物及探针；(3)使用TP53的引物和探针对基因组进行PCR反应；(4)PCR结束后进行荧光读取，并进行基因分型；(5)综合4个探针检测的结果，对个体的肿瘤易感性进行综合评估。本发明的taqman引物及探针具有良好的分型效果，能非常准确的确定个体的基因型。