党参内参基因的筛选研究

摘要

采用实时荧光定量PCR对基因表达水平进行检测时,需要内参基因对结果数据进行校正和标准化.因此选择合适的内参基因是通过实时荧光定量PCR对目的基因进行准确定量的重要的前提条件.本文选择了10个常用的候选内参基因,分别是GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶),ACT(肌动蛋白),a-TUB(α微管蛋白),β-TUB(β微管蛋白),UBQ(多聚泛素酶),CYP(亲环蛋白),EF-1a(转录延伸因子),NAC(转录因子类),F-box(蛋白磷酸酶类)和PP2A(蛋白磷酸酶2).采用实时荧光定量PCR方法分别比较了党参4个不同器官(根、茎、叶和花)和5个不同发育期的根(拉蔓期、始花期、盛花期、果期和收获期)中各基因的表达差异,通过GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder4种软件对内参基因在不同材料中的表达稳定性和最适内参基因个数进行数据分析.结果表明,党参不同器官中候选内参基因的表达稳定性顺序为GAPDH＞PP2A＞β-TUB＞F-box＞NAC＞UBQ＞α-TUB＞CYP＞EF-1α＞ACT,不同生长时期根中表达稳定性顺序为GAPDH＞PP2A＞α-TUB＞F-box＞EF-1α＞CYP＞NAC＞UBQ＞β-TUB＞ACT.