E2基因

摘要： 为了解新疆北疆地区旅游骑乘马携带人乳头瘤病毒(HPV)的类型,本研究利用高通量测序技术检测北疆伊犁地区52匹纯血马、昌吉市100匹纯血马和乌鲁木齐市30匹汗血马鼻拭子样品携带HPV的类型。病毒组学分析显示,马鼻拭子携带HPV 23型(HPV-23)。根据注释到的人源HPV-23 E2基因序列,设计特异性引物,对样品进行PCR检测并测序后分析HPV E2基因的同源性及遗传进化关系。结果显示,乌鲁木齐市汗血马鼻拭子样品HPV-23阳性率为16.7%(5/30),伊犁地区和昌吉市纯血马鼻拭子样品HPV-23阳性率分别为2%(1/52)、1%(1/100),表明旅游景区骑乘纯血马和汗血马携带HPV-23,携带病毒阳性率与马匹品种有关。马源HPV-23 E2基因与国外人源HPV-23 E2基因核苷酸与氨基酸序列同源性分别为98.2%~99.4%、95.5%~99.1%,与马乳头瘤病毒(EcPV)E2基因核苷酸与氨基酸序列同源性分别为44.2%~55.1%、18.2%~29.4%。遗传进化分析显示马源HPV-23与国外人源HPV-23亲缘关系较近,而与EcPV处于不同分支,提示马源HPV-23可能来源于人。本研究首次检测到马源HPV-23,并对其E2基因进行遗传进化分析,为动物源HPV-23的流行病学研究提供了参考依据。

摘要： 泛素结合酶(UBC)E2是泛素蛋白酶体系统的组成部分,在植物生长发育、形态建成和病原互作中扮演着重要角色。为研究E2基因家族在泡桐丛枝病幼苗形态变化中的作用,利用生物信息学方法对白花泡桐E2基因进行家族成员鉴定、染色体定位及分析其在泡桐丛枝病发生过程中的作用。结果表明,白花泡桐基因组中含有56个E2基因家族成员,分别属于17个亚族。56个E2基因家族成员均含有外显子,而55个基因家族成员都含有内含子;53个基因家族成员都含有光响应元件、胁迫响应元件和激素响应元件;56个基因家族成员参与了28个基因重复事件,与拟南芥之间有41个共线性事件;PfUBC44、PfUBC45和PfUBC51可能与白花泡桐丛枝病发生相关。该结果对研究白花泡桐E2基因家族在泡桐丛枝病发生过程中的作用具有重要意义。

摘要： 本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白,rErns重组蛋白主要在上清液中存在,rE2重组蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了Erns蛋白最佳包被量为2.5μg/mL,rE2蛋白最佳包被量为0.625μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为0.25%PVA溶液,HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1∶2000,临界值分别为0.24和0.33。上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可初步应用于CSFV Erns和E2抗体的检测,鉴别E2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪瘟净化工作的实施。

摘要： 为建立基于猪瘟病毒E2基因主要抗原区表达产物的猪瘟抗体斑点杂交ELISA方法,应用RT-PCR方法扩增了猪瘟病毒E2基因的主要抗原区(dE2),经EcoR I、Xho I双酶切,与经同样双酶切的原核表达载体pET-28a (+)连接,加入适量IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,成功表达的重组蛋白分子量约32.4 KDa,能与CSFV阳性血清特异性结合,为CSFV抗体检测提供了有效工具。

摘要： 旨在构建牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列,利用生物学方法预测其B、T细胞表位;将获得的序列进行连接,重组获得新肽段(命名为AKK),通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构;PCR分别扩增上述基因序列,构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞,通过蛋白免疫印迹。经PCR扩增获得2910、1170、951和729 bp大小的目的条带,与预计相符;经蛋白免疫印迹验证,在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达;经流式细胞术验证显示,在CD3^(+)、CD4^(+)细胞占比上,共表达组极显著高于PBS组,显著高于E0组,与ELISA检测IgG抗体水平结果一致。研究表明,试验成功设计了BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体,AKK、E0、E2蛋白高效表达,共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答。

摘要： 试验旨在构建能表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV) E2抗原蛋白的重组乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),为进一步研制BVDV乳酸菌口服活载体疫苗奠定基础.将BVDV E2基因克隆后测序,根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性进行优化,再将优化的基因片段插入表达载体pNZ8148中,并电转化乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞,构建重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000,经1 ng/mL乳链菌肽诱导表达后,对菌体物进行了SDS-PAGE和Western blotting分析.将重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000口服免疫6～12月龄健康犊牛,在免疫后不同时间点采集血液样品并分离血清,用间接ELISA方法检测抗体水平.结果 显示,PCR扩增到了1149 bp的目的 片段,乳酸菌密码子偏嗜性优化后,GC含量从45.28％变为34.30％.重组质粒pNZ8148-E2经酶切鉴定插入片段与预期大小相符,在菌体裂解物中出现大小约42 ku的条带,与预期蛋白大小一致,且该蛋白可与BVDV E2抗体反应.在免疫犊牛的血清中检测到特异性抗BVDV E2蛋白的抗体.本研究结果表明,表达BVDV E2蛋白的重组乳酸菌口服免疫可诱导犊牛产生特异性的体液免疫反应,该重组菌具有较好的免疫原性.

摘要： 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)感染猪引起的一种急性、热性、接触性传染病,严重危害我国养猪业健康稳定发展.本研究采用RT-PCR方法,对从云南省宁洱县2头病死野猪体内分离到的2株CSFV毒株进行了E2及5'NTR基因扩增、克隆及序列测定;采用DNAMAN、MEGA6等分子生物学软件,对测得的序列与国内外参考毒株进行了同源性分析及系统发育分析.结果显示:2株野猪源CSFV株E2、5'NTR基因同源性分别为87.2％、100％,与国内外参考毒株同源性分别为81.0％～97.6％、93.6％～98.5％,与我国强毒株Shimen株的同源性分别为81.0％～81.2％、95.6％;2株野猪源CSFV毒株E2基因属于基因2.1亚型,5'NTR基因属于基因2.3亚型.氨基酸序列分析显示:其中一株分离毒株的E2基因有6个氨基酸具有2.1d分子变异特征,另一株兼有2.1d和2.1b亚型分支特征,可能是2.1b和2.1d亚型的过渡毒株.结果表明,云南省野猪源CSFV虽存在一定的遗传衍化,但总体比较稳定.本研究为云南省CSF防控提供了分子流行病学依据,为进一步做好分子变异等研究奠定了基础.

摘要： 猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是一种能引起仔猪先天性震颤的病原.为了解我国APPV感染状况、基因组以及遗传变异特征,采用套式RT-PCR方法,对2015—2017年我国22个省(自治区、直辖市)93个猪场的285份血清样本进行了APPV核酸检测和E2基因序列分析;并对发病猪组织样本进行了APPV全基因组扩增与序列测定和遗传变异分析.结果显示,检测样本的APPV阳性率为25.26％(72/285,95％CI=20.3％ ～30.7％),且阳性率逐年升高;猪场APPV阳性率为38.71％(36/93,95％CI=59.7％ ～94.8％).扩增出的35条A PPV E2基因的核苷酸序列相似性为83.4％ ～100.0％,推导氨基酸序列相似性为90.5％ ～100.0％.基于E2基因的遗传变异分析显示,APPV临床毒株可被分为4个亚群,大多数国内APPV临床毒株可归入亚群1,与美国的000515株遗传关系较近;少数临床毒株与Bavaria S5/9、NL1 Farm1等欧美毒株同属于亚群2;6条测定序列被划分至亚群3;亚群4的成员均来自广东;其中亚群3与亚群4均由国内APPV临床毒株构成.全基因组序列遗传变异分析表明,全球APPV毒株可归为2大分支,本研究中测序的毒株CHheb1701与所有国外毒株属于同一分支,且与GX04/2017遗传关系最近,与美国毒株000515同聚为一簇;而第二分支中的毒株均来自我国广东省.以上研究表明,我国猪群中A PPV感染已较为普遍,毒株多样且变异广泛,同时,也提示毒株可能有不同的来源,为进一步开展A PPV的防控及相关研究奠定了重要基础.

摘要： 为了解中国猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的分子流行病学及遗传变异情况,本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析.结果 显示,350份样品中21份为CSFV阳性,共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列.E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明,21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型,且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大,新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸(R31、S34、W34、K205、K303、A331)上具有相同的分子特征,E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异.韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸(N97、K159、R205)特征,并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据,流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化.本研究证实,2018年中国及周边国家CSFV较为活跃,且流行毒株依然以2.1d亚型为主,为中国科学防控CSFV提供了依据.

摘要： 猪瘟和伪狂犬病都是严重危害我国养猪业重要传染病。目前在我国猪群中主要存在Ⅰ群和Ⅱ群猪瘟病毒，同是猪伪狂犬病基因组大，可以诱导很好的干扰素等天然免疫因子，是个优良的病毒载体。本研究以伪狂犬病毒TK-/gE-/LacZ+为载体，构建了表达猪瘟Ⅰ群Shimen株和2.1亚群流行株的E2基因的重组伪狂犬病毒，为猪瘟新型标记疫苗和猪瘟及伪狂犬病净化和根除奠定基础。

摘要： 猪瘟和伪狂犬病都是严重危害我国养猪业重要传染病。目前在我国猪群中主要存在Ⅰ群和Ⅱ群猪瘟病毒，同是猪伪狂犬病基因组大，可以诱导很好的干扰素等天然免疫因子，是个优良的病毒载体。本研究以伪狂犬病毒TK-/gE-/LacZ+为载体，构建了表达猪瘟Ⅰ群Shimen株和2.1亚群流行株的E2基因的重组伪狂犬病毒，为猪瘟新型标记疫苗和猪瘟及伪狂犬病净化和根除奠定基础。

摘要： 猪瘟和伪狂犬病都是严重危害我国养猪业重要传染病。目前在我国猪群中主要存在Ⅰ群和Ⅱ群猪瘟病毒，同是猪伪狂犬病基因组大，可以诱导很好的干扰素等天然免疫因子，是个优良的病毒载体。本研究以伪狂犬病毒TK-/gE-/LacZ+为载体，构建了表达猪瘟Ⅰ群Shimen株和2.1亚群流行株的E2基因的重组伪狂犬病毒，为猪瘟新型标记疫苗和猪瘟及伪狂犬病净化和根除奠定基础。

摘要： 猪瘟和伪狂犬病都是严重危害我国养猪业重要传染病。目前在我国猪群中主要存在Ⅰ群和Ⅱ群猪瘟病毒，同是猪伪狂犬病基因组大，可以诱导很好的干扰素等天然免疫因子，是个优良的病毒载体。本研究以伪狂犬病毒TK-/gE-/LacZ+为载体，构建了表达猪瘟Ⅰ群Shimen株和2.1亚群流行株的E2基因的重组伪狂犬病毒，为猪瘟新型标记疫苗和猪瘟及伪狂犬病净化和根除奠定基础。

摘要： 猪瘟和伪狂犬病都是严重危害我国养猪业重要传染病。目前在我国猪群中主要存在Ⅰ群和Ⅱ群猪瘟病毒，同是猪伪狂犬病基因组大，可以诱导很好的干扰素等天然免疫因子，是个优良的病毒载体。本研究以伪狂犬病毒TK-/gE-/LacZ+为载体，构建了表达猪瘟Ⅰ群Shimen株和2.1亚群流行株的E2基因的重组伪狂犬病毒，为猪瘟新型标记疫苗和猪瘟及伪狂犬病净化和根除奠定基础。

摘要： 根据GeneBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成l对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上.经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切和序列测定结果表明:猪瘟E2基因原核表达载体pET-32a-E2构建成功；在此基础上将重组表达质粒转化至宿主茵BL21中,诱导表达蛋白.通过对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约58KD左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪瘟E2基因在大肠杆菌中能高效表达,并具有一定的生物学活性.

摘要： 根据GeneBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成l对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上.经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切和序列测定结果表明:猪瘟E2基因原核表达载体pET-32a-E2构建成功；在此基础上将重组表达质粒转化至宿主茵BL21中,诱导表达蛋白.通过对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约58KD左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪瘟E2基因在大肠杆菌中能高效表达,并具有一定的生物学活性.

摘要： 根据GeneBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成l对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上.经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切和序列测定结果表明:猪瘟E2基因原核表达载体pET-32a-E2构建成功；在此基础上将重组表达质粒转化至宿主茵BL21中,诱导表达蛋白.通过对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约58KD左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪瘟E2基因在大肠杆菌中能高效表达,并具有一定的生物学活性.

摘要： 根据GeneBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成l对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上.经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切和序列测定结果表明:猪瘟E2基因原核表达载体pET-32a-E2构建成功；在此基础上将重组表达质粒转化至宿主茵BL21中,诱导表达蛋白.通过对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约58KD左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪瘟E2基因在大肠杆菌中能高效表达,并具有一定的生物学活性.

摘要： 根据GeneBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成l对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上.经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切和序列测定结果表明:猪瘟E2基因原核表达载体pET-32a-E2构建成功；在此基础上将重组表达质粒转化至宿主茵BL21中,诱导表达蛋白.通过对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约58KD左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪瘟E2基因在大肠杆菌中能高效表达,并具有一定的生物学活性.

摘要： 本发明公开了甘蔗基因组内标基因异戊二烯基二磷酸δ-异构酶基因PCR引物序列及扩增方法。引物序列是由ScIDI2-F和ScIDI2-R组成，PCR扩增方法包括反应体系和扩增条件。本发明是为转基因甘蔗PCR检测和物种特异性鉴定提供基因组内标基因，同时为转基因甘蔗检测精度和结果的准确性提供了保证。

摘要： 本发明涉及一种制备非基因毒性二乙酰大黄酸(双醋瑞因)的方法，其包括：i)将粗双醋瑞因(或粗大黄酸)转化为水溶性盐；ii)将盐双醋瑞因(或大黄酸)溶液吸附至疏水性树脂；iii)使用合适的溶剂洗涤以去除杂质(特别是基因毒性杂质)；iv)洗脱以回收双醋瑞因或大黄酸；v)若所述方法应用于大黄酸，通过乙酰化将其转化为双醋瑞因；vi)纯化的双醋瑞因的酸化及其回收，以及干燥。本发明也涉及通过本发明的方法获得的非基因毒性双醋瑞因，其中基因毒性杂质的总含量为1ppm以下，所述非基因毒性双醋瑞因适于制备符合目前卫生局要求的用于人类和兽医用途的药物制剂，特别是胶囊。

摘要： 本发明公开了甘蔗基因组内标基因异戊二烯基二磷酸δ-异构酶基因PCR引物序列及扩增方法。引物序列是由

摘要： 本发明涉及一种制备非基因毒性二乙酰大黄酸(双醋瑞因)的方法，其包括：i)将粗双醋瑞因(或粗大黄酸)转化为水溶性盐；ii)将盐双醋瑞因(或大黄酸)溶液吸附至疏水性树脂；iii)使用合适的溶剂洗涤以去除杂质(特别是基因毒性杂质)；iv)洗脱以回收双醋瑞因或大黄酸；v)若所述方法应用于大黄酸，通过乙酰化将其转化为双醋瑞因；vi)纯化的双醋瑞因的酸化及其回收，以及干燥。本发明也涉及通过本发明的方法获得的非基因毒性双醋瑞因，其中基因毒性杂质的总含量为1ppm以下，所述非基因毒性双醋瑞因适于制备符合目前卫生局要求的用于人类和兽医用途的药物制剂，特别是胶囊。

摘要： 本发明公开了能够以高产率生产3‑羟基己二酸、α‑氢化己二烯二酸和/或己二酸的基因修饰微生物以及利用该基因修饰微生物制造3‑羟基己二酸、α‑氢化己二烯二酸和/或己二酸的方法。该基因修饰微生物具有制造3‑羟基己二酸、α‑氢化己二烯二酸和/或己二酸的能力，并且使丙酮酸激酶的功能受损，强化了磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的活性和对将3‑氧代己二酰‑CoA还原生成3‑羟基己二酰‑CoA的反应进行催化的酶的活性。

摘要： 本发明公开了一种以高产率生成3‑羟基己二酸、α‑氢化己二烯二酸或己二酸的基因修饰微生物。该基因微生物导入对以下(a)～(c)中任意一项所述的多肽进行编码的核酸、或者增强该多肽的表达，并且使丙酮酸激酶的功能受损。(a)由序列号1～7的任意一个氨基酸序列构成的多肽；(b)在这些的任意一个氨基酸序列中1个或多个氨基酸发生置换、缺失、插入和/或添加后的氨基酸序列构成的、并且具有对将3‑氧代己二酰‑CoA还原生成3‑羟基己二酰‑CoA的反应进行催化的酶活性的多肽；(c)相对于这些的任意一个氨基酸序列具有70％以上的序列同源性，并且具有对将3‑氧代己二酰‑CoA还原生成3‑羟基己二酰‑CoA的反应进行催化的酶活性的多肽。

摘要： 公开了导入有编码对将3‑氧代己二酰‑辅酶A还原为3‑羟基己二酰‑辅酶A的反应进行催化的酶的核酸的基因修饰微生物。基因修饰微生物导入有编码下述(a)至(c)中所述的多肽的核酸，或者该多肽的表达得以增强。(a)由序列编号1至6以及213中任一者的氨基酸序列构成的多肽；(b)由序列编号1至6以及213中任一者的氨基酸序列当中1个或几个氨基酸发生取代、缺失、插入及/或添加后的氨基酸序列构成、且具有对还原3‑氧代己二酰‑辅酶A以生成3‑羟基己二酰‑辅酶A的反应进行催化的酶活性的多肽；(c)相对于这些中的任一种氨基酸序列具有70％以上的序列同源性、且具有还原3‑氧代己二酰‑辅酶A以生成3‑羟基己二酰‑辅酶A的活性的多肽。

摘要： 公开了能够以高产率制造3‑羟基己二酸和/或α‑氢化己二烯二酸的基因修饰微生物以及使用了该基因修饰微生物的3‑羟基己二酸和/或α‑氢化己二烯二酸的制造方法。基因修饰微生物具有制造3‑羟基己二酸和/或α‑氢化己二烯二酸的能力，并且强化了对将3‑氧代己二酰‑CoA还原生成3‑羟基己二酰‑CoA的反应进行催化的酶的活性，而且使二羧酸排出载体的功能缺损或降低。

摘要： 本发明公开多个于具有生殖细胞缺失多型性的目标对象中适合治疗恶性肿瘤的方法及组合物，生殖细胞缺失多型性在肿瘤细胞内诱发细胞凋亡中或在具有AHI1基因的突变或失调的目标对象中阻断了胸腺核苷激酶抑制剂的活性。所述方法是使用一烷基化己醣醇衍生物，如卫康醇、卫康醇的衍生物或类似物、二乙酰二脱水卫矛醇、二乙酰二脱水卫矛醇的衍生物或类似物、二溴卫矛醇，以及二溴卫矛醇的衍生物或类似物。所述组合物可以包含所述烷基化己醣醇衍生物。所述方法还可包含给予一BH3类似物，且所述组合物还可包含一BH3类似物。在具有AHI1基因的失调的目标对象中，所述方法还可包含给予一调节AHI1基因或AHI1蛋白的表现或活性的药剂，且所述组合物还可包含所述药剂。

摘要： 本发明公开了一种利用基因编辑技术敲除烟草二氢黄酮醇‑4‑还原酶基因提升芸香苷含量的方法及应用。该方法包括以下步骤：(1)设计基于NtDFR1和NtDFR2基因的sgRNA序列；(2)设计并合成sgRNA PCR引物；(3)sgRNA表达载体的构建；(4)将CRISPR/Cas9‑sgRNA表达载体转化农杆菌中；(5)侵染愈伤组织及阳性筛选；(6)以液相色谱进行NtDFR1和NtDFR2基因纯合敲除素材的现蕾期叶片的烟碱含量的检测试验。本申请的方法为烟草的香味、吃味以及颜色等品质调控的品种培育研究提供遗传材料和理论依据。