BVDV

摘要： 为制备抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns蛋白单克隆抗体,本试验用Erns重组蛋白免疫Balb/c鼠,刺激小鼠脾脏产生特异性免疫细胞;通过化学剂诱导剂PEG-4000诱导免疫细胞和骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞;间接ELISA方法结合亚克隆方法筛选阳性细胞孔;鉴定为稳定分泌抗体的细胞株做扩大培养,细胞悬液计数并无菌注射KM小鼠腹腔,制备、收集腹水抗体;SDS-PAGE鉴定抗体大小、ELISA测定抗体效价、Western blot和IFA鉴定抗体特异性。本试验建立了3株稳定分泌抗体的细胞株;腹水抗体重链大小为55 kDa,轻链25 kDa,均为IgG1型,效价高于10^(4),抗体可特异性结合病毒抗原。结果证实,制备的单克隆抗体效价高、特异性好,为制备检测BVDV试剂盒奠定基础。

摘要： 为了解2021年伊犁河谷地区规模化猪场猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等5种病毒性腹泻的感染情况,试验采用RT-PCR对2021年从伊犁河谷地区规模化猪场采集患腹泻病猪的血液、粪便及肠内容物等1200份病料组织检测5种病毒性疾病的感染情况。结果表明,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、BVDV总阳性率分别为34.5%、7.4%、22.7%、2.9%、8.2%,以PEDV和PoRV阳性率较高,且以二重感染为主,其中PEDV/TGEV、PEDV/PoRV二重感染率分别为7.2%、9.4%,试验为该地区猪场中5种病毒性腹泻疾病的防控提供参考依据。

摘要： 奶牛呼吸道疾病的种类很多,主要是细菌性传染病和病毒性传染病。细菌性传染病包括巴氏杆菌病肺炎、溶血曼氏杆菌病肺炎、支原体肺炎和链球菌肺炎。病毒性传染病包括冠状病毒肺炎和BVDV急性感染。一、奶牛呼吸道疾病的共同症状呼吸异常,咳嗽,流鼻涕;体温升高;采食量下降;产奶量降低;死亡等。

摘要： 为弄清导致大理地区某规模化乳牛场犊牛严重腹泻的病因,对采集的样品进行细菌分离培养、生化试验、动物致病性试验、菌毛基因和毒力基因检测、药敏试验、PCR检测(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒)及核苷酸序列分析。结果显示,在犊牛直肠棉拭子、分离后粪样、垫料中大肠杆菌检出率均为100%,均具有很强的致病性;而成年牛直肠棉拭子大肠杆菌检出率为92.86%,无致病性;氧化塘粪样大肠杆菌检出率为0%;在犊牛直肠分离到的致病性大肠杆菌对青霉素耐药,对阿莫西林克拉维酸、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢曲松、卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、磺胺嘧啶、氟苯尼考都敏感;在粪样和垫料中分离到的致病性大肠杆菌对10种药物都敏感;在成年牛血样中PCR扩增获得大小约298 bp的DL BVDV目的条带,而犊牛血样均为阴性,通过比对分析后确定DL BVDV序列属于BVDV-1b亚型。导致大理地区某规模化乳牛场犊牛严重腹泻的主要病原为致病性大肠杆菌K99。

摘要： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)属黄病毒科、瘟病毒属成员,为单股正链RNA病毒,BVDV基因组约12.3 kb,共编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白。根据病毒感染后的致细胞病变效应(CPE),将BVDV又分为非致细胞病变型(NCP)和致细胞病变型(CP)两种生物表型。BVDV感染主要引起牛病毒性腹泻-黏膜病,随着畜牧业国际化的发展,BVDV逐渐呈全球性分布态势,广泛存在于畜牧业发达国家,危害严重,给养牛业造成了重大经济损失。

摘要： 旨在构建牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列,利用生物学方法预测其B、T细胞表位;将获得的序列进行连接,重组获得新肽段(命名为AKK),通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构;PCR分别扩增上述基因序列,构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞,通过蛋白免疫印迹。经PCR扩增获得2910、1170、951和729 bp大小的目的条带,与预计相符;经蛋白免疫印迹验证,在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达;经流式细胞术验证显示,在CD3^(+)、CD4^(+)细胞占比上,共表达组极显著高于PBS组,显著高于E0组,与ELISA检测IgG抗体水平结果一致。研究表明,试验成功设计了BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体,AKK、E0、E2蛋白高效表达,共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答。

摘要： 为摸清伊犁河谷地区牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染的病毒基因型,利用BVDV基因组5′端非翻译区(5′-UTR)通用型引物,采用一步法RT-PCR对疑似感染样品进行基因扩增、序列测定与比对分析以及遗传进化树构建.结果显示:12份疑似样品中,有1份样品PCR扩增结果呈阳性,基因型鉴定为BVDV2型.该研究表明伊犁河谷规模化牛场内存在BVDV2型感染,为该地区规模化牛场病毒性腹泻病的防控提供了理论依据.

摘要： 为了解2020年我国西北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病(BVD)的流行情况,本试验采用ELISA和RT-PCR方法分别对来自青海和甘肃的72只牦牛的血清和粪便样本进行了BVDV抗体和抗原检测.结果 表明,BVDV血清抗体阳性率平均为70.8％,抗原阳性率平均为15.3％;经过测序,成功获得一株BVDV 5'UTR序列,遗传进化分析表明该毒株属于1a型BVDV,与我国和巴西已报道毒株的亲缘关系最近,同源性均为100％.

摘要： 秋末冬初,季节更替,温差较大,BVDV进人高发期,感染BVDV后免疫力低下,继发感染加剧,导致犊牛疾病多发,如呼吸道疾病,腹泻等。今天跟大家分享牛病毒性腹泻的危害、流行形势和防控牛病毒性腹泻的意义及防制策略,旨在保卫牛群健康,提升牧场产能。

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 通过对GenBank中12条BVDV全序列和29条CSFV全序列综合比对分析,设计一对BVDV的特异扩增引物,扩增片段长900bp,通过对退火温度、镁离子浓度、引物浓度、循环数进行优化,确定反应条件最佳反应条件.通过对BVDVOregonC24V株、NADL株、牦牛株、BVDVPK株、OregonC24V株/CSFV石门株混合样品、CSFV石门株、HCLV株和CSFVJL野毒株、PK15细胞、牛睾丸细胞、新生牛血清进行PCR扩增,证明本研究建立的PCR方法对BVDV特异性强,扩增效率高,能够对猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒进行鉴别诊断,为猪源BVDV的分子流行病学调查提供了良好的技术手段.

摘要： 本发明涉及病毒检测领域，具体讲，涉及一种用于同时检测BVDV‑1,BVDV‑2和BVDV‑3的试剂盒及引物和探针。试剂盒中引物和探针的核苷酸序列如SED ID NO:1～SEQ ID NO:6所示。本发明提出一种基于TaqMan技术的三重荧光定量RT‑PCR检测方法，用于快速地鉴定BVDV基因型，具有快速、高灵敏度和高特异性的特点，可用于BVDV的研究或诊断应用中的病毒分型。

摘要： 本发明公开了病毒BVDV、BRV和BCV一管多重荧光PCR检测的专用引物及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明针对上述专用引物设计了最佳多重荧光PCR反应条件，上述引物和反应条件对BVDV、BRV和BCV的质粒标准品的最低检出限分别为1.19×102拷贝/μL、3.89×101拷贝/μL、3.74×101拷贝/μL，灵敏度最低比常规PCR高出100倍，灵敏性高；该方法仅特异扩增BVDV、BRV和BCV，与大肠杆菌、沙门氏菌、牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应，特异性强；组内变异系数小于1％，组间变异系数小于1％，具有良好的重复性。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种携带2型BVDV‑Erns基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法。本发明利用分子克隆及反向遗传方法，将BVDV2‑890#毒株的Erns基因和CSFV流行毒株QZ14的E2基因VR1区置换CSFV‑C株相应的基因片段，并引入7个特定的突变位点，得到了重组病毒rC‑Marker2。获得的重组病毒带有分子标记(BVDV2 Erns)，猪瘟病毒2型流行毒株的VR1以及特定的突变位点，为开发适应体外细胞培养体系的标记疫苗奠定了基础。应用该技术构建的重组嵌合猪瘟病毒弱毒标记疫苗株，能够通过血清学方法判断猪瘟病毒抗体阳性的猪是由于疫苗接种还是野毒感染引起；对当前流行的基因2型猪瘟病毒有较好的中和效果；在体外细胞培养系统中表现出良好的生长能力，可以降低疫苗的生产成本。

摘要： 本发明属于生物技术检测领域，公开了一种抗BVDV‑重要功能蛋白纳米抗体及其制备方法和应用，主要通过构建BVDV‑NS5A表达载体，纯化NS5A蛋白；使用BVDV灭活苗对羊驼进行免疫，分离羊驼外周血淋巴细胞，通过巢式PCR获得VHH基因，构纳米抗体噬菌体展示文库，目的基因插入率为90.8％，文库容量为1.02×107CFU/mL，经M13K07噬菌体救援建立纳米抗体噬菌体展示文库容量为1.68×1016CFU/mL；以BVDV‑重要功能蛋白作为目标抗原，对扩繁得到的噬菌体展示文库进行三轮亲和筛选，从该文库筛选出与E0/E2/NS5A/NS3蛋白特异性结合纳米抗体，通过ELISA检测其反应原性，特异性良好的纳米抗体进行测序，分析序列，进而获得该特异性纳米抗体的基因，构建原核表达载体，对其进行原核表达、纯化和鉴定，得到所需纳米抗体Nb‑Y1、Nb‑Y2、Nb‑Y3，并通过Western blot验证纳米抗体和BVDV重要功能蛋白的反应原性。

摘要： 本发明涉及病毒检测领域，具体讲，涉及一种用于同时检测BVDV‑1,BVDV‑2和BVDV‑3的试剂盒及引物和探针。试剂盒中引物和探针的核苷酸序列如SED ID NO:1～SEQ ID NO:6所示。本发明提出一种基于TaqMan技术的三重荧光定量RT‑PCR检测方法，用于快速地鉴定BVDV基因型，具有快速、高灵敏度和高特异性的特点，可用于BVDV的研究或诊断应用中的病毒分型。

摘要： 本申请提供一种能够同时检测BVDV和BEV的试剂盒，通过创造性的提出基于BVDV和BEV基因序列的特异性引物和探针，并集合特定的使用方法；试剂盒高灵敏度，可以对低丰度的目的基因进行检测，能够检测出现有技术中无法检测出的低丰度样本；能够直接定量，自动分析出结果，不依赖Ct值，不用建立标准曲线；快速高效、操作简便、重复性好。通过应本申请提供的检测试剂盒，为有效防控BVDV和BEV提供技术支持，能够促进犊牛腹泻病防治，对于养牛业具有巨大的潜在开发价值。

摘要： 本发明公开一种用于同时检测BVDV、BCOV和BRV的液相芯片检测试剂盒及其专用引物和探针，属于生物检测技术领域中的兽医动物病原检测。本发明提供的用于同时检测BVDV、BCOV和BRV的液相芯片检测试剂盒及其专用引物和探针能够基于液相芯片检测技术一步操作同时高准确度检测BVDV、BCOV和BRV，并能够保证良好的检测灵敏度和高特异性，使得检测结果更加可靠，并能够为更高通量检测需求奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种BVDV表位基因疫苗的构建方法及其应用。它是从NCBI上获得BVDV‑1四种具有免疫原性的C、E0、E2、NS3基因序列，利用生物学方法预测细胞表位；连接获得新肽段（命名为AKK），通过生物学软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构；PCR扩增基因序列，构建重组表达载体，经PCR、双酶切和测序等方法检测目的基因。并将构建成功的重组质粒转染至MDBK细胞，通过蛋白免疫印迹和RT‑PCR检测目的基因在细胞水平的表达；通过流式细胞术与ELISA检测IgG抗体水平评价重组质粒免疫效果。

摘要： 本发明提供了一种BVDV灭活疫苗及其制备方法，属于疫苗制备技术领域。本发明提供的制备BVDV灭活疫苗的方法，包括如下步骤：将BVDV毒株病毒液与过氧化氢溶液混合至过氧化氢的浓度为1％‑3％，灭活，得BVDV毒株灭活病毒液，将BVDV毒株灭活病毒液与弗氏佐剂混合，乳化得BVDV灭活疫苗。本发明用H2O2灭活BVDV毒株，不仅保留了BVDV病毒的免疫原性，而且在不影响其抗原性的情况下实现了不可逆地灭活BVDV病毒。与本领域常用的其他灭活剂相比，本发明采用H2O2灭活疫苗更安全、更有效。本发明将灭活完全后的病毒液用于灭活疫苗的制备，并且在小鼠上进行了免疫效果的验证，展示出安全、良好的免疫原性。

摘要： 本发明属于生物技术检测领域，公开了一种抗BVDV‑重要功能蛋白纳米抗体及其制备方法和应用，主要通过构建BVDV‑NS5A表达载体，纯化NS5A蛋白；使用BVDV灭活苗对羊驼进行免疫，分离羊驼外周血淋巴细胞，通过巢式PCR获得VHH基因，构纳米抗体噬菌体展示文库，目的基因插入率为90.8％，文库容量为1.02×107CFU/mL，经M13K07噬菌体救援建立纳米抗体噬菌体展示文库容量为1.68×1016CFU/mL；以BVDV‑重要功能蛋白作为目标抗原，对扩繁得到的噬菌体展示文库进行三轮亲和筛选，从该文库筛选出与E0/E2/NS5A/NS3蛋白特异性结合纳米抗体，通过ELISA检测其反应原性，特异性良好的纳米抗体进行测序，分析序列，进而获得该特异性纳米抗体的基因，构建原核表达载体，对其进行原核表达、纯化和鉴定，得到所需纳米抗体Nb‑Y1、Nb‑Y2、Nb‑Y3，并通过Western blot验证纳米抗体和BVDV重要功能蛋白的反应原性。