还原酶

摘要： 为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SDR05的重组菌不对称还原[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙酮(BTAP)制备相应手性醇的反应体系。结果表明,重组菌在以体积分数为69%异丙醇、3.9 mmol×L^(-1)氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))、1 mmol×L^(-1)MgCl2、300 g×L^(-1)重组菌、3000 mmol×L^(-1) BTAP和pH为7.4磷酸缓冲液组成的反应体系和32°C、150 r×min-1条件下催化反应18 h,产物产率和对映体过量值分别为98.3%和99.9%。研究结果丰富了还原酶库,实现BTAP底物在高质量浓度下的转化,为工业化制备(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇等手性化合物奠定基础。

摘要： 背景:目前已发现许多物质能够体外促进骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,过氧化物还原酶6对骨髓间充质干细胞的影响尚未见相关研究.目的:探索过氧化物还原酶6对大鼠骨髓间充质干细胞增殖以及体外向神经谱系诱导分化的影响.方法:体外通过全骨髓贴壁培养法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞,传到第3代分为5组:PBS溶媒组、1,10,100μg/L和1 mg/L过氧化物还原酶6组,CCK-8法检测各组细胞450 nm处的吸光度值,连续测9 d绘制细胞生长曲线;结合生长曲线,酶联免疫检测仪重复测定平台期波长为450 nm的吸光度值.然后选择相对最适质量浓度过氧化物还原酶6诱导骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,以PBS为对照组,诱导分化7 d采用免疫荧光染色和Western blot检测神经元标记蛋白NSE、胶质细胞标记蛋白GFAP的表达.结果与结论:①1,10,100μg/L过氧化物还原酶6组符合骨髓间充质干细胞一般生长规律,10μg/L为最适质量浓度;②过氧化物还原酶6诱导后可见NSE、GFAP免疫荧光染色阳性,NSE、GFAP蛋白表达高于对照组;③体外实验结果表明,适量质量浓度的过氧化物还原酶6具有促进骨髓间充质干细胞增殖以及向神经谱系诱导分化的作用.

摘要： 背景:目前已发现许多物质能够体外促进骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,过氧化物还原酶6对骨髓间充质干细胞的影响尚未见相关研究。目的:探索过氧化物还原酶6对大鼠骨髓间充质干细胞增殖以及体外向神经谱系诱导分化的影响。方法:体外通过全骨髓贴壁培养法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞,传到第3代分为5组:PBS溶媒组、1,10,100μg/L和1 mg/L过氧化物还原酶6组,CCK-8法检测各组细胞450 nm处的吸光度值,连续测9 d绘制细胞生长曲线;结合生长曲线,酶联免疫检测仪重复测定平台期波长为450 nm的吸光度值。然后选择相对最适质量浓度过氧化物还原酶6诱导骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,以PBS为对照组,诱导分化7 d采用免疫荧光染色和Western blot检测神经元标记蛋白NSE、胶质细胞标记蛋白GFAP的表达。结果与结论:①1,10,100μg/L过氧化物还原酶6组符合骨髓间充质干细胞一般生长规律,10μg/L为最适质量浓度;②过氧化物还原酶6诱导后可见NSE、GFAP免疫荧光染色阳性,NSE、GFAP蛋白表达高于对照组;③体外实验结果表明,适量质量浓度的过氧化物还原酶6具有促进骨髓间充质干细胞增殖以及向神经谱系诱导分化的作用。

摘要： 目的:研究温度和pH值对海研站菌S52菌株六价铬[Cr(Ⅵ)]还原酶活性和稳定性的影响,优化最佳还原条件,并探讨金属离子和小分子物质对其还原能力的影响.方法:将S52菌株的种子液接种于LB培养基中过夜培养,将菌液离心过滤后得到的胞外活性物质、超声波冰浴破菌得到胞内活性物质和对照组S52全菌液分别加入到含50 mg·L-1 Cr(Ⅵ)的LB培养基中,在37°C、pH值为8.0条件下培养,于0、3、6、12、24和48 h分别用二苯碳酰二肼分光光度法测定各组溶液中的Cr(Ⅵ)浓度,计算不同时刻Cr(Ⅵ)还原率、细胞内外还原酶的相对活性及相对稳定性.设定温度为25°C、30°C、35°C、40°C、45°C和50°C,pH值为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0,采用混合实验设计,计算细胞内外还原酶在0、3、6和12 h对Cr(Ⅵ)的还原率,分析不同温度和pH值处理组中细胞内外Cr(Ⅵ)还原酶对Cr(Ⅵ)还原率的变化,探讨最佳还原条件.分别将浓度为0.2 mmol·L-1的Cu2+、Mn2+和Cd2+溶液,1 mmol·L-1的十二烷基磺酸钠(SDS)和乙二胺四乙酸(EDTA),1％的Triton×100和吐温80加入到培养基中作为处理组,以未作处理的培养基为对照组,在最优还原条件下与50 mg·L-1 Cr(Ⅵ)反应3 h,测定并计算Cr(Ⅵ)还原率,比较不同金属离子和小分子物质处理组中细胞内外还原酶对Cr(Ⅵ)的还原率.结果:3 h时,胞内酶和胞外酶对Cr(Ⅵ)的还原率达到最高,且胞内酶的还原能力高于胞外酶(P0.05),而吐温80、EDTA和SDS处理组胞内酶和胞外酶对Cr(Ⅵ)的还原率明显降低(P<0.05).结论:S52菌株的Cr(Ⅵ)还原酶在细胞内和细胞外均可发挥还原作用,且胞内酶的还原作用更强.胞内酶最适温度为35°C～45°C,最适pH值为7.0;胞外酶最适温度为25°C～30°C,最适pH值为7.0.不同金属离子和小分子物质对Cr(Ⅵ)还原酶活性有不同的影响.

摘要： 细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)酶是广泛存在于微生物、动植物及人体中与膜结合的血红蛋白类酶,具有氧化、环氧化、羟化、去甲基化等多种生物催化活性.CYP酶在药物、类固醇、脂溶性维生素和许多其他类型化学物质的代谢中具有重要作用,其在异源物质的解毒、药物相互作用和内分泌功能等领域的研究是热点问题.本综述对CYP的结构、功能、临床应用与开发前景进行了概述,并对其最新的研究现状和发展前景进行探讨.

摘要： 植物中的谷胱甘肽(GSH)含量在保护植物免受因制革厂污泥(TS)中存在的重金属(HMs)产生的氧化胁迫中起着至关重要的作用.被选作研究芳香植物,因为网络最终产品的精油不含金属,即使极微量,所以生物马尼科幻食物链HMS的阳离子是可以避免的.在实验中研究的四种芳香植物在不同水平的TS下表现出不同的GSH含量和GR活性响应.万寿菊中的谷胱甘肽过氧化物酶活性先升高后下降,而罗勒叶和薄荷菜中的谷胱甘肽过氧化物酶活性在所有处理和天竺葵中均升高.GSH活性上升到一定的水平,并在75:25污泥和土壤比,并在100％TS,无显音响观察到不能改变.谷胱甘肽还原酶(GR)活性与谷胱甘肽含量高度相关.

摘要： 植物中的谷胱甘肽(GSH)含量在保护植物免受因制革厂污泥(TS)中存在的重金属(HMs)产生的氧化胁迫中起着至关重要的作用。被选作研究芳香植物,因为网络最终产品的精油不含金属,即使极微量,所以生物马尼科幻食物链HMS的阳离子是可以避免的。在实验中研究的四种芳香植物在不同水平的TS下表现出不同的GSH含量和GR活性响应。万寿菊中的谷胱甘肽过氧化物酶活性先升高后下降,而罗勒叶和薄荷菜中的谷胱甘肽过氧化物酶活性在所有处理和天竺葵中均升高。GSH活性上升到一定的水平,并在75:25污泥和土壤比,并在100%TS,无显音响观察到不能改变。谷胱甘肽还原酶(GR)活性与谷胱甘肽含量高度相关。

摘要： 随着生活水平越来越高,人们对营养健康也越来越关注了。近来,网上有传言说隔夜饭菜不能吃,会致癌;隔夜茶、隔夜水不能喝,有亚硝酸盐。有业内人士专门进行了辟谣。由于信息的不对称,这样的谣言还是造成了一些人的恐慌。隔夜饭菜从科学角度来看,亚硝酸盐伴随着蔬菜的自然生长过程而存在,亚硝酸盐在自然界中也是普遍存在的。比如,农民在种植粮食时会使用氮肥,粮食在生长中会吸收氮合成氨基酸,在这个过程中就会产生硝酸盐。而所有的植物体内都有一种还原酶,会将硝酸盐转化成亚硝酸盐。

摘要： 目的:研究从厦门近岸海域沉积物样品中分离筛选出的芽孢八叠球菌属菌株Sporosarcina saromensis M52在含不同浓度六价铬[Cr(Ⅵ)]培养基中的生长情况,定位Cr(Ⅵ)还原酶,探讨金属离子和小分子物质对耐C r(Ⅵ)菌株M 52还原能力的影响.方法:将M 52菌株的种子液接种于含不同浓度(0～600 mg·L-1)Cr(Ⅵ)LB培养基中,培养0～48 h后用紫外分光光度法测量600 nm处M52菌液的吸光度(A)值,观察M52菌株在含0、50、100、200、400和600 mg·L-1 Cr(Ⅵ)的LB培养基中的生长情况.将M52菌液超声破碎前、破碎后后离心所得胞内和胞外活性物质与对照组M 52菌液在37°C 、p H 7.5条件下培养0、12、24和48 h,用二苯碳酰二肼分光光度法分别测定溶液中C r(Ⅵ)的浓度,计算各时间点胞内和胞外活性物质中Cr(Ⅵ)的还原率.在LB培养基中分别加入0.2 mmol·L-1的Mn2+、Fe2+和Cu2+,1 mmol·L-1 SDS、1％T riton X-100和吐温80作为处理组,以未作处理的LB液体培养基为对照组,将种子液以4％ 浓度接种于处理组和对照组,计算M 52菌株在0、6、12、24、36和48 h对C r(Ⅵ)的还原率,分析金属离子和小分子物质处理组中M52菌株对Cr(Ⅵ)还原率的变化.结果:当Cr(Ⅵ)浓度低于100 mg·L-1时,随浓度增加菌株生长加快;当100 mg·L-1≤Cr(Ⅵ)浓度Fe2+,Mn2+存在情况下M52菌株对Cr(Ⅵ)的还原率降低(PTriton X-100>吐温80.结论:低浓度Cr(Ⅵ)可以促进M52菌株生长,高浓度Cr(Ⅵ)则会抑制菌株生长,M52菌株对Cr(Ⅵ)的还原主要发生在胞内,Cu2+和Fe2+可促进M52菌株还原Cr(Ⅵ),吐温80、Triton X-100和SDS可抑制M52菌株还原Cr(Ⅵ).

摘要： 目的:通过比较不同基因亚型ApoE与LDL竞争性结合的差异,分析ApoE调脂效应的作用位点.方法:制备ApoE-DMPC复合物,比较三种基因亚型ApoE-DMPC复合物与LDL竞争性结合HSF细胞上受体的差异;采用RT-PCR检测HMG-CoA还原酶mRNA表达,比较不同基因亚型ApoE对氟伐他汀HMG-CoA还原酶的影响.结果:ApoE2、ApoE3、ApoE4三种基因亚型与LDL竞争性结合的LDL最大置换量分别为3.92±0.40,6.30±0.32,6.84±0.23μg/mg protein;IC50分别为0.35±0.02,0.05±0.01,0.24±-0.01μg/ml,两两间差异具有统计学意义(P＜0.01).ApoE2、ApoE3、ApoE4存在时,1.62μg/ml(IC50浓度)氟伐他汀对HMG-CoA还原酶mRNA表达的抑制率分别为23.49±0.37％、18.59±1.09％、12.13±0.91％,ApoE2组、ApoE4组与ApoE3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:ApoE 112位和158位突变均会导致受体活性降低,其中112位表现更为明显;ApoE 112位和158位均可能是影响氟伐他汀降脂疗效的关键位点.112位与158位的突变均可能会导致降脂疗效的改变.氟伐他汀在临床用药时应关注患者ApoE不同位点的突变情况.

摘要： 通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析,根据其保守性利用PCR技术得到目的基因rcr.该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸.通过构建重组质粒pETRCR,使目的基因在Escherichia coli BL21(DE3)中表达.研究发现,在重组菌培养过程中不添加IPTG诱导培养更有利于该基因的表达.利用HisTrap亲和层析纯化得到了目的重组酶,该酶在pH 6.0以及45°C的条件下分别表现出较高的酶活.在底物选择性方面,该重组酶催化还原乙醛的活性很高,而对于酮类化合物,其对中链长度的底物专一性较强.通过考察金属离子对酶活的影响,发现该重组酶是一种含锌的金属酶,锌离子对该酶的活性有激活作用。

摘要： 本文研究了HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀对法夫酵母生长及其虾青素合成的影响,实验结果表明,当辛伐他汀浓度在4.78×10-6mol/L时对酵母细胞的生长的抑制表现不明显,但对虾青素合成具有显著的抑制作用.以此浓度作为筛选浓度,经亚硝基胍(NTG)诱变后,通过辛伐他汀平板初筛与摇瓶复筛,获得较高虾青素产率的突变株.实验结果表明,菌体生物量、类胡萝卜总量和虾青素产量都有明显的提高,其中NPX-3-05突变株类胡萝卜总量与虾青素产量分别达到3.823mg/L、2.755mg/L,比出发菌株依次提高了163％、143％(1.453mg/L、1.134mg/L).菌株NPX-3-05经连续发酵5次的稳定性实验表明其性状稳定.目标产物经HPLC定性分析,确定为反式虾青素.因此,以辛伐他汀等HMG-CoA还原酶抑制剂作为选择压力,对虾青素高产突变株的筛选具有较好的"筛分"能力.

摘要： 本文建立了硝酸盐还原酶试验检测结核分支杆菌耐药性的方法.实验表明,该方法是一种快速、经济、简便的结核分支杆菌药敏方法.

摘要： 本文主要从高铁肌红蛋白(MetMb)及其还原酶等二方面,阐述其对宰后畜肉肉色的影响,以及在肉品品质和食品安全上的意义.肉色是畜肉最主要的肉品品质之一,并决定着消费者对肉类产品的选择.肉色的新鲜和光泽取决于肌肉内肌红蛋白(Mb)三种形态的动态平衡,宰后(离体后)生鲜肉随着货架期延长,肌细胞内还原酶的消耗,MetMb不再被还原为Mb,而导致肉色变暗,品质下降,从而丧失畜肉的商品价值.因此,MetMb可被开发成一种生鲜肉品质鉴定的快速诊断试剂盒,在超市中服务消费者和商家,保证畜肉新鲜和品质可靠。

摘要： 本发明涉及新的根瘤菌GIN611KCTC11708BP或其细胞提取物，显示糖酵解活性的新氧化还原酶，编码所述氧化还原酶的基因，包括重组载体蛋白的重组菌株，或编码重组蛋白的表达载体，以及使用上述物质作为生物催化剂将天然产物糖酵解的方法。本发明还涉及一种使用上述物质从各种天然产物产生糖苷配基的方法。从本发明新的微生物分离的新氧化还原酶不属于葡糖苷酶类，但属于氧化还原酶类，并具有针对天然产物的糖酵解活性。新的氧化还原酶氧化天然产物糖苷配基中的糖，从而产生各种糖苷配基。

摘要： 本发明公开了一种氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示的氧化还原酶或其重组酶作为羰基还原酶催化剂在不对称还原前手性羰基化合物以制备光学活性手性醇中的应用。本发明还公开了由下述方法制得的重组氧化还原酶：培养包含碱基序列如序列表中SEQ ID No.1所示的氧化还原酶基因的重组表达转化体，即可。本发明涉及的氧化还原酶制备简便，作为羰基还原酶催化剂可适用的前手性羰基化合物范围广，具有优异的催化活性，可获得高转化率、高光学纯度的光学活性手性醇，并且可实现自身辅酶NADH的再生，无需另外加入其它辅酶再生系统，整个反应过程不需控制pH，反应条件温和，具有很好的工业应用开发前景。

摘要： 本发明公开了一种改造羰基还原酶立体选择性的方法、羰基还原酶突变体及应用，通过酶结合口袋的大小和形状鉴定羰基还原酶立体选择性，反Prelog酶的口袋外部形状接近于立方体，Prelog酶的口袋外部形状更类似于长方体，通过调控关键位点氨基酸可实现酶立体选择性的反转或提升。本发明制备的羰基还原酶突变体KmCR‑E87D/A129C/V239N的立体选择性(99.5％deP,R)较野生型KmCR(99.5％deP,S)得到反转，在10h能不对称合成35.4mM的6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯。

摘要： 本发明涉及新的根瘤菌GIN611KCTC11708BP或其细胞提取物，显示糖酵解活性的新氧化还原酶，编码所述氧化还原酶的基因，包括重组载体蛋白的重组菌株，或编码重组蛋白的表达载体，以及使用上述物质作为生物催化剂将天然产物糖酵解的方法。本发明还涉及一种使用上述物质从各种天然产物产生糖苷配基的方法。从本发明新的微生物分离的新氧化还原酶不属于葡糖苷酶类，但属于氧化还原酶类，并具有针对天然产物的糖酵解活性。新的氧化还原酶氧化天然产物糖苷配基中的糖，从而产生各种糖苷配基。

摘要： 本发明公开了一种亚胺还原酶突变体，以及这种亚胺还原酶突变体用于制备(S)‑尼古丁的制备方法。发明第一个目的是提供了一种亚胺还原酶突变体，解决现有技术使用酶得不到S构型的尼古丁，以及现有技术中酶活性低的问题，这种突变体可以将底物麦思明或4‑(甲胺基)‑1‑(吡啶‑3‑基)丁酮催化还原为(S)‑尼古丁。本发明第二个目的是提供这种亚胺还原酶与葡萄糖脱氢酶的共表达酶，具体是亚胺还原酶突变酶与葡萄糖脱氢酶的共表达酶，这种共表达酶应用与制备(S)‑尼古丁，降低了酶催化制备(S)‑尼古丁的成本。

摘要： 本发明公开了一种氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示的氧化还原酶或其重组酶作为羰基还原酶催化剂在不对称还原前手性羰基化合物以制备光学活性手性醇中的应用。本发明还公开了由下述方法制得的重组氧化还原酶：培养包含碱基序列如序列表中SEQ ID No.1所示的氧化还原酶基因的重组表达转化体，即可。本发明涉及的氧化还原酶制备简便，作为羰基还原酶催化剂可适用的前手性羰基化合物范围广，具有优异的催化活性，可获得高转化率、高光学纯度的光学活性手性醇，并且可实现自身辅酶NADH的再生，无需另外加入其它辅酶再生系统，整个反应过程不需控制pH，反应条件温和，具有很好的工业应用开发前景。

摘要： 本发明涉及电化学领域，特别涉及提高电化学活性的氧化还原酶及含有该氧化还原酶的生物传感器。申请人发现经过化学交联的葡萄糖氧化酶仍然保持着它们的直接电化学活性，例如戊二醛化学交联的含有经过修饰的葡萄糖氧化酶的葡萄糖生物传感器在电极上呈现出良好的电化学性能，而且是一个典型的表面电化学现象。以上实验结果证明化学交联没有对电化学活化后的葡萄糖氧化酶产生显著的影响，这就为电化学活化后的葡萄糖氧化酶在植入式持续葡萄糖监测系统中的应用铺平了道路。

摘要： 本发明公开了一种羰基还原酶基因、固定化羰基还原酶的制备方法和应用。羰基还原酶基因序列如SEQ：ID：NO:1所示，其氨基酸序列如SEQ：ID：NO:2所示。本发明应用聚羟基脂肪酸酯（PHA）磁性纳米微球合成了固定化羰基还原酶，本发明公开了羰基还原酶在生物合成R型托伐普坦中的应用。和游离酶相比，固定化酶在pH为8.0缓冲体系中稳定性最好，提高了耐碱性。本发明制备的固定化羰基还原酶有效改善了游离酶稳定性差，耐受性差，不可重复使用等缺点。

摘要： 本发明公开了一种硝基还原酶基因dnrA及其硝基还原酶和应用，该基因dnrA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，该基因dnrA编码的硝基还原酶DnrA的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明克隆到一种硝基还原酶基因dnrA，该基因为一种二苯醚类除草剂硝基还原酶基因，全长为780bp，编码259个氨基酸；本发明硝基还原酶基因dnrA编码的硝基还原酶DnrA能够将二苯醚类除草剂中的硝基还原成氨基降解和转化二苯醚类除草剂，该硝基还原酶DnrA以及含有硝基还原酶基因dnrA的基因工程菌可用于污染农田和环境水体中二苯醚类除草剂残留的去除及药物合成的生物转化，具有非常重要的理论和应用价值。

摘要： 本公开涉及表达活性D‑脯氨酸还原酶的微生物。