突变株

摘要： 目的:探讨昆明市10岁以下儿童大环内酯类耐药肺炎支原体感染情况分析。方法:收集昆明市儿童医院社区获得性呼吸道感染患儿500例,其中男237例,女263例,年龄3~10岁。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增并测序肺炎支原体耐药株的23S rRNA基因靶区V区域。聚类分析用于预测耐药支原体的变异与传播。结果:在500例呼吸道感染患儿的痰标本中,成功培养出213株,其中药敏菌株70株,中敏菌株96株,耐药菌株47株,耐药菌株检出率为22.06%。用23S rRNA V区引物进行PCR扩增出47株耐药菌株,8株耐药菌株未能扩增,39个耐药菌株的目标条带成功扩增。测序结果显示:16株菌株与标准菌株M129高度同源,16株耐药菌株中,有4株与标准菌株M129相比无基因位点突变。4株含有A2063G转化,3株含有A2064G转化,5株含有A2064C转化。2064点突变的频率(大肠杆菌中为2059)比2063点突变的频率高得多。人耐药肺炎支原体对5种抗生素的表型耐药模式因突变位置不同而不同。突变株A2063G表现出对红霉素和罗红霉素的抗性,突变株A2064G表现出对红霉素和交叉霉素的抗性,突变株A2064C表现出对红霉素的抗性。结论:该研究有助于更好地筛选抗支原体药物,并在临床上更好地治疗对支原体有耐药性的感染患儿。

摘要： 自从新冠肺炎大流行以来,新冠病毒(SARSCoV-2)不断发生突变,目前已在200多个国家流行,全球累计确诊病例已超4.6亿,死亡人数突破600万。SARS-CoV-2的快速突变凸显防治药物的重要性,然而,对新冠肺炎有效的治疗药物仍然十分稀缺。研发一种安全有效,能抑制多种SARS-CoV-2突变株感染的新冠肺炎治疗药物仍然是各国科学家们的共同目标。

摘要： 从国家药监局网站获悉,2021年国家药监局共批准14个新冠病毒检测试剂,截至2021年年底,共批准新冠病毒检测试剂68个(包括34个核酸检测试剂、31个抗体检测试剂.3个抗原检测试剂)。产能达到5130.6万人份/天。为常态化疫情防控工作提供了有力保障。启动新冠病毒突变株监铡和试剂检出能力评估工作,确保已批准试剂对新冠病毒突变株的检测质量。

摘要： 近期,在英国和南非发现的新冠病毒突变株上出现了一些关键的基因突变,这让科学家开始怀疑正在使用的治疗方法是否能应对这些突变株。在英国出现的B.1.1.7突变株有7个突变位于刺突蛋白上,其中N501Y突变就存在于受体结合域,且在与人的细胞结合的序列中。它能增加新冠病毒与人细胞ACE2受体的亲和力,加快病毒在人群中的传播。

摘要： [背景]细菌在环境中以复杂的微生物群落形式存在,细菌间的竞争是细菌生存的一种重要方式.鼠伤寒沙门氏菌是一种可引起胃肠道疾病的重要人畜共患病病原体,其在水源、食物或是宿主肠道等环境中均需与其他细菌进行相互作用以获得生存优势.[目的]通过转座子技术构建鼠伤寒沙门氏菌转座子插入突变体库,从中筛选鼠伤寒沙门氏菌与细菌竞争能力相关的基因,探讨该菌参与细菌竞争的相关机制.[方法]利用EZ-Tn5TM＜R6Kγori/KAN-2＞Tnp TransposomeTM试剂盒获得了含有1 323个突变株的鼠伤寒沙门氏菌突变库,并针对其与大肠杆菌JM109以及MG1655的竞争作用进行筛选,利用反向PCR对筛选出的在细菌竞争能力上具有显著差异的突变株进行侧翼序列的鉴定,确定了转座子插入位点,并根据插入位点所表达基因的功能分析了其造成细菌竞争能力差异的可能原因.[结果]筛选出细菌竞争能力差异显著的13株突变株,其中2株突变株竞争能力显著增强,插入突变的基因为polB与flhd;11株竞争能力显著下降的细菌突变的基因分别为fstJ、rfbG、recC、rfaI、rfaG、rfbC、udha、plsc、mdh、res及ackA.[结论]毒力因子、细菌膜蛋白的完整、细菌代谢能力的正常及其天然免疫能力和DNA的合适修饰等都与细菌参与竞争的能力密切相关,此研究为进一步探讨影响细菌竞争能力的具体机制奠定了基础.

摘要： 本试验研究了枯草芽孢杆菌突变株对多种作物病原菌的抑制效果,通过田间试验研究该菌对番茄枯萎病的生防效果.抑制试验结果表明,突变株YJY19-01具有广谱抑菌性,对8种作物枯萎病病原菌的抑制率高达75.06％～80.12％,对其他26种真菌性病原菌和2种细菌性病原菌具有明显抑制效果.田间试验结果表明,YJY19-01突变株对番茄枯萎病的防效达到75.43％.综上,枯草芽孢杆菌突变株YJY19-01抑菌谱广、防治效果好,有作为生防菌剂的潜力.

摘要： 新型冠状病毒肺炎的大流行严重威胁人类健康和发展,为应对这一全球性公共卫生事件,多种技术路线的新型冠状病毒疫苗(新冠疫苗)被投入紧急使用.本文介绍了新冠疫苗技术路线,并就新冠疫苗应对多种突变毒株的效力和在高危人群中的使用进行了梳理,发现现有疫苗对突变毒株效力出现了不同程度的下降,提示应关注突变毒株的影响.现有疫苗对高龄,孕妇等高风险人群缺乏足够的临床数据,应尽快开展针对高风险人群接种疫苗的相关研究.

摘要： 通过分析突变株1-2和原始基因所表达的木聚糖酶的酶学性质可知,突变株1-2最适合的温度及最适合的pH分别是40°C、5.50,与原始木聚糖酶的酶学性质基本一致.同时本研究也证实了加入0.2％的吐温80使突变株1-2和原始基因重组酵母分泌的木聚糖酶活力提高30％左右(P<0.05).通过更深入地对小麦木聚糖酶酶解分析发现,黑曲霉所分泌的原始木聚糖酶可显著提高葡萄糖与阿拉伯糖的产量,但其产木糖的能力要低于突变株(P<0.05);与原始基因对比,突变基因所产的木聚糖酶可显著地降低葡萄糖的含量(P<0.05),但能提高木糖的含量(P<0.05),表明突变株分泌的木聚糖酶具有很好地提高木糖产量的能力(P<0.05).

摘要： 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XL05是从土壤中筛选的一株拮抗细菌,该菌株抗菌谱广,对根腐病原菌、绿僵菌和烟草赤星病菌等多种植物病原真菌具有强烈抗性.为获得高产抗真菌活性物质的突变菌株,对筛选到的原始菌株进行紫外诱变,并确定其遗传稳定性;选择遗传稳定性最好的突变株进行发酵配方优化.试验结果表明:该菌株的紫外诱变的最佳照射时间为20 s,通过筛选,获得5株较稳定的高产突变株,其效价较出发菌株均提高1倍以上,且遗传性状稳定;ZW75突变株最优配方为葡萄糖4.0％、蛋白胨0.2％ 和CaCO30.1％,为该突变株的工业发酵提供一定的理论基础.

摘要： 本研究利用KanR表达盒的正向筛选突变体技术构建了dhfq突变株，突变株对小鼠的致病性降低;转录组测序表明:Hfq在多杀性巴氏杆菌中起调控作用。本研究为下一步验证Hfq蛋白对其他蛋白的调控作用机制奠定基础。

摘要： 本实验室在前期工作中利用粗毛革孔菌野生株诱变了一株高产漆酶的突变株,其漆酶活力可达303U/mL,是野生菌的3倍多,是目前国内外所报道的漆酶活性较高者,且能稳定遗传.本研究希望能够通过RAPD扩增获得野生株和突变株的差异基因,为进一步提高菌体漆酶活力、了解漆酶代谢特征以及通过定向突变的方式构建高产漆酶工程菌奠定理论基础.对野生株和突变株进行RAPD比较分析,从140条随机引物中筛选出了13条能够稳定扩增并且在原始株CK和突变株T9之间有明显特异条带的引物.从这13条引物中选取扩增产物经琼脂糖凝胶电泳差异谱带比较亮的三个引物,对扩增出3条特异性片段进行回收、克隆及测序,将结果用BLASTX与NCBI的数据库进行比对分析.结果表明S193扩增出的1027bp大小的特异条带可能为云芝中的一个假想蛋白.S225扩增出的654bp大小的特异条带可能是30S核糖体蛋白S4.S381扩增的809bp大小的特异条带可能是糖苷水解酶.

摘要： 虾青素是一种橘红色的酮式类胡萝卜素,其超强的抗氧化活性是番茄红素等抗氧化剂的1000倍以上。通过法夫酵母(Phaffia rhodozyma)发酵生产的天然虾青素在水产养殖、食品、医药、化妆品等领域具有广阔的应用前景。本室前期通过诱变获得了中温型高产突变株MK19,是工业生产中节能高效的备选菌株。rn 为探究MK19中虾青素的增产机制，比较了MK19和野生菌株中虾青素及其旁支代谢途径在代谢终产物及基因表达水平的差异，发现MK19脂肪酸和麦角甾醇含量较野生型减少，虾青素含量增加。Q-PCR结果表明，类胡萝卜素合成基因crtI, crtE, pbs和ast在MK19中高表达，推测，该菌株细胞内脂肪酸和麦角固醇减少，积累的大量乙酞-CoA等前体和NADPH、 ATP等辅因子，被活跃的虾青素合成途径所利用。采用液质联用方法检测细胞不同色素含量水平，发现了一未知色素在细胞中积累，经过量表达虾青素合成酶基因ast，有效地促进β-胡萝卜素及该产物转化为虾青素，使突变株的虾青素产量又提高了33.5%。

摘要： GlnD蛋白是一种具有尿苷酞化及去尿苷酞化的双功能酶(UTase/UR)，该蛋白可对PII蛋白行使可逆的尿苷酞化与去尿苷酞化作用，对与氮的吸收和利用相关过程有着非常重要的调控作用。施氏假单胞菌A1501为本实验室自南方水稻根际土壤分离到的一株联合固氮菌，属于变形细菌Y亚族。该菌在无按和微好氧条件下，能将空气中的氮气固定为植物可利用的铵。本实验利用自杀质粒pK18mobsacB构建体外重组载体，并通过与A1501野生型发生同源重组结合转移的方法构建了带有氯霉素(Cm)抗性的glnD缺失突变株。并对glnD缺失突变株进行了表型分析，结果显示，与野生型A1501相比，glnD的缺失突变株中fleQ等鞭毛合成相关调控基因的表达量下调。以上实验结果表明，glnD基因在A1501的固氮基因表达调控及相关代谢过程中起着非常重要的作用，其具体的作用机制待于进一步的研究。

摘要： 目的：构建多种HBV突变株可调控性表达细胞系,并检测它们对常用的核苷类似物的敏感性。方法：在表达野生型HBV的pTRE-HBVT质粒上,应用PCR方法实现定点突变,分别构建多个HBV突变体质粒,包括:2个HBsAg阴性细胞株(疫苗逃逸);6个常见的核苷类似物耐药突变株;质粒转染我们前期构建的HepG2TA2-7细胞系(整合有PtTA 2质粒)，潮霉素筛选获得抗性细胞克隆。结果：所有的细胞株对阿德福韦酷敏感，已报道的阿德福韦耐药突变株N236T. A181T和N236T+A181T对阿德福韦的敏感性下降不明显，通过提取细胞培养上清液中HBV DNA, PCR扩增含突变点的片段，测序证实与实验设计完全相符合。结论：本研究成功地构建了8个HBV突变株可调控性表达细胞系，有望作为细胞模型用于HBV分子生物学研究及抗HBV药物筛选。

摘要： 本文以酶催化水解2-苯基丙酸对硝基苯酚酯为模型反应，对BSLA催化三联体附近的重要位点进行定向进化，通过多轮的突变，最终得到的产物ee值可以提高到90%，优先选择R构型。同时，具有反转的S-构型选择性的突变株则可以催化获得ee值达到70%的S-构型产物。这两类突变株也具有较好的底物谱。最后，利用分子动力学模拟也对两类突变株的选择性差异进行了解释。

摘要： 为进一步阐明MTQ3拮抗的分子机制,本研究对MTQ3和MTQ3-ΔT进行了转录组测序,得到了6294个Unigene,通过在数据库中比对分析,得到了1428个差异显著的Unigene.将2个样品MTQ3和MTQ3-ΔT的序列信息同与其相似度较高的同属菌株Delftia acidovorans SPH-1和Delftia sp.Cs1-4的全基因组序列信息进行比对,进行1428个差异基因的定位,发现共有665个Unigenes在Delftia acidovorans SPH-1和Delftia sp.Cs 1-4比对中相似度均为100％,说明665个Unigenes在基因组中是比较保守的区域.根据在数据库中比对到的相关基因的功能注释,将差异显著的1428个Unigene进行了功能分类.在差显基因中发现了一些和NRPS合成相关的基因簇，并且，在Pathway的富集结果中发现MTQ3-△T的一些与CoA合成、氨基酸合成和脂肪酸合成相关基因普遍下调。所以，推测调控基因tetR直接或间接产生的拮抗物质可能为脂肤类抗生素，脂肤的肤骨架可能是经NRPS途径合成，相关基因的功能鉴定正在进一步研究中。

摘要： 本研究以非编码小RNA STnc640为对象，探索其在调控沙门氏菌菌毛相关基因表达和毒力中的功能。并通过荧光定量PCR技术分析野生株和突变株中bcfAfimA以及其它菌毛主要亚单位基因表达量的变化。结果显示，与野生株相比，STnc640突变株bcfA和fimA的表达量均有所下降，分别为野生株的71%和50%。sefA的表达量明显升高，是野生株的三倍。其它菌毛亚单位基因的表达量与野生株差异不显著。表明STnc640可直接或间接调控bcfA,fimA和sefA三个基因的表达。同时，通过感染测试，STnc640突变株对雏鸡的毒力增强，推测STnc640的缺失导致菌毛基因的表达发生变化。

摘要： 目的：探讨临床分离的肠炎沙门菌对喹诺酮类药物耐药性及耐药机制研究.rn 方法：琼脂稀释法测定萘啶酸、左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC);煮沸法粗提取模版DNA、PCR扩增、PCR扩增产物琼脂糖电泳以及最后的核苷酸序列测定.rn 结果：55株肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率极高(96.36％),80％对环丙沙星敏感性下降,9.09％对环丙沙星低水平耐药,9.09％对环丙沙星高水平耐药,仅1株对环丙沙星敏感(1.82％),90.91％对左氧氟沙星敏感,92.73％对加替沙星敏感,其中4株(7.27％)对四种药物均耐药.对萘啶酸耐药的肠炎沙门菌均发生gyrA基因Ser83位密码子或Asp87位密码子突变;对萘啶酸及环丙沙星低水平耐药的肠炎沙门菌中除发生gyrA基因突变外,还同时出现parC基因突变;对四种喹诺酮类药物均耐药的4株肠炎沙门菌中同时出现gyrA、parC、parE基因突变;未发现gyrB基因突变.rn 结论：肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率极高,对环丙沙星敏感性下降,而对左氧氟沙星及加替沙星较敏感;gyrA基因单突变即可导致沙门菌对萘啶酸高度耐药及环丙沙星敏感性下降,其中Ser83是耐药性产生的重要位点,突变频率最高;parC突变不频繁,且常伴gyrA突变,在环丙沙星低水平耐药性中发挥作用;parE突变能提高gyrA突变和parC突变分离株的耐药性。

摘要： 目的：探讨临床分离的肠炎沙门菌对喹诺酮类药物耐药性及耐药机制研究.rn 方法：琼脂稀释法测定萘啶酸、左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC);煮沸法粗提取模版DNA、PCR扩增、PCR扩增产物琼脂糖电泳以及最后的核苷酸序列测定.rn 结果：55株肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率极高(96.36％),80％对环丙沙星敏感性下降,9.09％对环丙沙星低水平耐药,9.09％对环丙沙星高水平耐药,仅1株对环丙沙星敏感(1.82％),90.91％对左氧氟沙星敏感,92.73％对加替沙星敏感,其中4株(7.27％)对四种药物均耐药.对萘啶酸耐药的肠炎沙门菌均发生gyrA基因Ser83位密码子或Asp87位密码子突变;对萘啶酸及环丙沙星低水平耐药的肠炎沙门菌中除发生gyrA基因突变外,还同时出现parC基因突变;对四种喹诺酮类药物均耐药的4株肠炎沙门菌中同时出现gyrA、parC、parE基因突变;未发现gyrB基因突变.rn 结论：肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率极高,对环丙沙星敏感性下降,而对左氧氟沙星及加替沙星较敏感;gyrA基因单突变即可导致沙门菌对萘啶酸高度耐药及环丙沙星敏感性下降,其中Ser83是耐药性产生的重要位点,突变频率最高;parC突变不频繁,且常伴gyrA突变,在环丙沙星低水平耐药性中发挥作用;parE突变能提高gyrA突变和parC突变分离株的耐药性。

摘要： 本发明涉及一种同义突变结合删除突变的流感病毒的致弱方法及致弱流感病毒株和应用，属于致弱病毒疫苗技术领域。本发明所述致弱方法包括以下步骤：对A型流感病毒M基因中M2基因和M1基因重叠的部分进行同义突变，保证M1氨基酸序列的完整和不变，同时，在M2基因跨膜区进行终止密码子突变和删除部分核苷酸序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。本发明所述致弱方法获得的病毒增殖过程稳定，没有回复野生型的可能性；高剂量接毒时可以在MDCK细胞中生长繁殖，具有限制性复制能力；安全性佳，免疫效果好，可以作为减毒活疫苗候选株。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为涉及一种提高合成气发酵产乙醇含量的突变株、突变株的构建以及应用和提高利用基因工程手段获得突变株合成气发酵产乙醇的方法。突变株为食气梭菌中2,3‑丁二醇脱氢酶的缺失或失活的突变。本发明构建的缺失突变体在几乎不影响菌株正常生长的情况下，显著降低了副产物2,3‑丁二醇的产量，以及在总发酵有机溶剂中的比例。以永达尔梭菌为例，2,3‑丁二醇产量由16.6g/L下调到了2.4g/L，乙醇生成基本不受影响。本发明通过基因缺失的方式减少了副产物2,3‑丁二醇在总发酵溶剂中的含量，同时提高了乙醇在总发酵溶剂中的占比，从而使发酵液的分离成本降低，对合成气发酵产燃料乙醇的工业化实施具有重要意义。

摘要： 本发明涉及一种具有增强的蛋白酶活性的酱油曲霉突变株及一种使用该突变株的天然味道增强剂的制备方法。更具体地讲，本发明涉及一种具有增强的蛋白酶活性的酱油曲霉的突变株，其通过选择具有高蛋白酶活性的菌株并用N-甲基-N'-亚硝基-N-亚硝基胍(NTG)处理该菌株，以及通过辐射诱导突变而获得。并且，本发明涉及使用通过水解具有蛋白源培养物的蛋白源而获得的蛋白水解物的天然味道增强剂的制备方法。

摘要： 本发明公开了一株高产表面素的枯草芽孢杆菌突变株及利用该突变株进行半固态发酵生产表面素的方法，所述的突变株命名为B.S.surfactin 1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC No.10270。表面素(surfactin)是由含有sfp基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisssp.)通过发酵的方式，所生产的一种脂肽类生物表面活性剂，目前表面素的生产大多是以液态发酵来进行，但是由于生产过程中，除泡剂的添加造成后续纯化上的困难，以至于生产成本过高，因此，本发明以泰国海水虾池所分离出的枯草芽孢杆菌进行物理或化学突变，利用sfp基因筛选出高产表面素的枯草芽孢杆菌突变株，再将突变株以半固态发酵方式生产表面素。

摘要： 本发明一种SARS‑CoV‑2α突变株和β突变株骆驼源高亲和力纳米抗体，具体涉及与冠状病毒(例如SARS‑CoV‑2)S蛋白特异性结合的抗体及其抗原结合片段，更具体涉及能以高亲和力结合冠状病毒例如SARS‑CoV‑2野生型原始株及其突变株(尤其是B.1.1.7突变株和B.1.351突变株)表面S蛋白的骆驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其能够用于预防、检测、诊断或治疗由冠状病毒尤其是SARS‑CoV‑2病毒引起的感染。

摘要： 本发明是包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低了的里氏木霉(Trichoderma reesei)的突变株，以及通过用包含乳糖的培养基培养该突变株来高产蛋白质的方法。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为涉及一种提高合成气发酵产乙醇含量的突变株、突变株的构建以及应用和提高利用基因工程手段获得突变株合成气发酵产乙醇的方法。突变株为食气梭菌中2,3‑丁二醇脱氢酶的缺失或失活的突变。本发明构建的缺失突变体在几乎不影响菌株正常生长的情况下，显著降低了副产物2,3‑丁二醇的产量，以及在总发酵有机溶剂中的比例。以永达尔梭菌为例，2,3‑丁二醇产量由16.6g/L下调到了2.4g/L，乙醇生成基本不受影响。本发明通过基因缺失的方式减少了副产物2,3‑丁二醇在总发酵溶剂中的含量，同时提高了乙醇在总发酵溶剂中的占比，从而使发酵液的分离成本降低，对合成气发酵产燃料乙醇的工业化实施具有重要意义。

摘要： 本发明的目的在于提供一种拟南芥UDP‑葡萄糖4‑异构酶基因At‑UGE2及其过表达突变株35S:UGE2和缺失突变株uge2在调节植物产量相关性状及抗逆性状等方面的应用。本发明揭示了UDP‑葡萄糖4‑异构酶催化的UDP‑葡萄糖与UDP‑半乳糖的生物合成与转换在调控植物生长发育和抗逆境胁迫响应的功能，为植物品种改良提供了一个优质基因，阐述了一种新的提高植物产量性状和抵御逆境能力的方法和机制，具有重要的经济意义和运用价值。

摘要： 本发明属于食品生物技术领域，公开了一种节杆菌突变株Arthrobacter sp.jnsb-2，对其发酵培养生产乳糖酶的方法及用该乳糖酶作为催化剂催化乳糖和果糖合成乳果糖的方法。本发明以节杆菌突变株jnsb-2作为菌种，保藏号为CCTCC NO：M 209210，采用碳源、氮源和无机盐组成的发酵培养基进行发酵培养制得乳糖酶，该乳糖酶可以作为催化剂，以乳糖和果糖为底物，酶法转化制备乳果糖。利用本发明的菌株发酵生产乳糖酶，培养条件粗放、产酶周期短、操作方便；同时利用上述乳糖酶采用酶法转化生产乳果糖，克服化学法乳果糖制备中产物易降解以及有色副产物难以去除的缺陷，产物纯度高。

摘要： 本发明公开了一种新型转座子突变文库的构建系统，可通过化学转化和电转化法把质粒转进目的菌株中，然后诱导转座酶的表达，只需一个含有转座子的突变株，就能得到几乎覆盖全基因组范围内的转座子突变文库。这种新型转座子文库的构建系统不仅可以增大转座突变的多样性，更有助于菌株插入位置的确定，有助于研究铜绿假单胞菌的基因组注释、功能分析及其耐药机制的研究。