法夫酵母

摘要： 为筛选法夫酵母耐热菌株以实现虾青素的中温化(25~40°C)生产,构建了法夫酵母整合型表达载体pUC18-kan-18S-groes,并将嗜热菌HB8的热激蛋白基因整合到法夫酵母基因组中,构建了基因工程菌法夫酵母XD-G,成功将发酵温度提高至25°C。发酵动力学研究结果表明,25°C下法夫酵母XD-G的虾青素产量达到177.7μg/g,比野生菌株提高了26.7%。

摘要： 为建立与虾青素高产菌株相适应的发酵工艺,研究运用正交试验设计优化了发酵培养基配方成份,并在补料摇瓶上确定了碳源补加工艺,且进一步地在70 L发酵罐上对获得的新工艺进行验证。结果表明,影响法夫酵母(Phaffia rhodozyma)虾青素生产的因素,按照主次顺序及影响由大到小排列为碳源>酵母抽提物>乳酸>(NH_(4))_(2)SO_(4)>蛋白胨>KH_(2)PO_(4)>微量元素。该研究建立了法夫酵母高产虾青素的生产工艺,为虾青素的商业化生产提供了坚实的基础。

摘要： 以灵芝、平菇、秀珍菇、茶树菇制备真菌诱导子和金属离子、硝酸铈、氯化镉、茉莉酸甲酯制备化学诱导子,研究了其对法夫酵母生长和新科斯糖合成的影响。结果表明,真菌诱导子对法夫酵母菌体生长、新科斯糖合成有显著促进作用,化学诱导子对生长作用不一致但能促进新科斯糖的合成。灵芝、平菇、秀珍菇、茶树菇诱导子在添加量分别为10,20,5,10 mg/L时生物量最高,分别比对照组提高了12.50%、12.11%、7.81%和7.99%,灵芝、平菇、秀珍菇和茶树菇制备的诱导子在添加量分别为10,30,10,20 mg/L时新科斯糖含量最高,分别比对照提高了11.85%、15.08%、19.03%和9.87%;Mn^(2+)和Zn^(2+)能明显促进细胞生长,增强果糖基转移酶的活性,最佳浓度下,新科斯糖积累量增加了9.56%和5.18%,硝酸铈、氯化镉和茉莉酸甲酯诱导子在添加量分别为0.16,0.12,0.08 mg/L时新科斯糖含量最高,分别比对照组提高了9.97%、14.08%和5.91%。

摘要： 法夫酵母(Xanthophyllomyces dendrorhous)发酵生产虾青素中存在发酵温度低的主要问题。为了获得耐中温的突变菌株,应用化学诱变,筛选能在25°C下生产虾青素且稳定遗传的耐热突变菌株,进一步通过基因组重测序,对突变菌株进行变异检测。筛选出一株法夫酵母突变株YB25,其生长温度为25°C,经五代培养后虾青素产量无显著差异。在培养120 h后,YB25的虾青素产量达到237.19μg/g,比野生型提高29%。通过比较基因组分析,获得了YB25的遗传图谱和遗传变异结果,检测到单核苷酸多态性位点数626个,小片段的插入和缺失序列数184个,结构变异数703个,基因组片段的拷贝数变异293个。通过对变异基因分析发现,脂代谢相关基因及虾青素合成酶基因的变异可能是突变菌株中温高产虾青素的原因。

摘要： 从产虾青素的法夫酵母突变菌株出发,经诱变、筛选得到了一株性状稳定、高产虾青素的突变菌株为法夫酵母X-NTG-25,该菌株虾青素的最大产量达到213.94μg/g,比出发菌株提高了52％,培养温度从20°C提高到25°C.通过响应面法对摇瓶发酵的转速、温度、接种量、Fe2+浓度、K+浓度和碳源6种因素进行优化,结果表明,摇床转速、温度和F e2+浓度是合成虾青素的重要因素,确定了发酵的最优条件为摇床转速195 r/min、温度22°C、Fe2+浓度1.51μmol/L,在此条件下,虾青素产量最大预测值为272.58μg/g,经摇瓶发酵验证实际值为279.89μg/g,虾青素产量比初始条件下的产量提高了30％,比出发菌株提高了98.9％.

摘要： 为进一步提升法夫酵母虾青素产量和虾青素占类胡萝卜素比例,考察了大宗碳源及其组合对法夫酵母细胞生长和虾青素生产的影响,并在70 L发酵罐上进行配比确定,在10 m3发酵罐上进行中试放大.结果 表明:有利于细胞增殖的碳源为糖蜜、葡萄糖、麦芽糊精和麦芽糖浆,有利于类胡萝卜素合成的为麦芽糊精、麦芽糖浆、淀粉水解液和蔗糖,有利于虾青素合成的为麦芽糊精、淀粉水解液和麦芽糖浆;不同碳源组合中,糖蜜或葡萄糖与麦芽糊精组合时虾青素产量最高,分别达到(58.7±1.2)、(55.1±0.8)μg/mL;在70 L发酵罐中,葡萄糖和麦芽糊精质量比为1∶1时较佳,虾青素产量和干菌体虾青素含量分别为(341.0 ±7.2) μg/mL和4.08 mg/g(细胞干重);在10 m3发酵罐中进行工艺放大,虾青素产量和虾青素占类胡萝卜素比例分别为(360.3±0.8)μg/mL和42.2％,干菌体虾青素含量为3.88 mg/(g细胞干重),稍低于小试.该研究确定了法夫酵母虾青素生产的碳源种类和混合补加比例,为虾青素商业化生产提供了重要参考.

摘要： 采用代谢通量分析的方法,分析乙醇促进法夫酵母生物合成虾青素的代谢调控机理。研究发现,乙醇促进法夫酵母细胞代谢中丙酮酸、乙酰辅酶A代谢节点处的通量,使流向虾青素合成途径的通量增加,是对照组通量的2.3倍,进而促进了虾青素的合成。根据代谢调控机理,对法夫酵母菌株JMU-MVP14合成虾青素代谢途径的α-酮戊二酸和5-磷酸核酮糖代谢节点进行调控,结果表明:在培养环境中添加0.5 g/Lα-酮戊二酸,能促进法夫酵母细胞生长,生长量提高0.4 g/L。添加3 g/L的谷氨酸时,法夫酵母总类胡萝卜素产量达67.9 mg/L,是对照试验总类胡萝卜素产量的1.7倍。

摘要： 利用摇瓶培养法夫酵母JMU-MVP14菌株,通过乙醇传感器检测乙醇含量,研究乙醇对法夫酵母细胞生长及虾青素合成的影响.结果表明,在10 g/L和20 g/L葡萄糖初始培养基中分别添加1～2 g/L乙醇时,均可提高虾青素的产量;而添加高浓度乙醇,则会抑制细胞生长和虾青素的合成.以10 g/L葡萄糖为初始培养基,控制发酵中恒定乙醇浓度为2 g/L,虾青素质量浓度可达到50.1 mg/L,比只添加2 g/L乙醇提高了20.3％,且虾青素细胞产率达到13.1 mg/g,葡萄糖的利用率能达到77.2％以上,说明恒定乙醇控制策略更有利于法夫酵母虾青素的合成.在10 g/L初始葡萄糖浓度,恒定乙醇浓度2 g/L,并每24 h补加5 g/L葡萄糖的优化条件下,虾青素产量最大值达到55.3 mg/L,虾青素细胞产率为19.7 mg/g,比对照组(14.1 mg/g)提高了39.7％.%With the detection of ethanol by ethanol sensor,the effects of ethanol on cell growth and astaxanthin production by Phaffia rhodozyma JMU-MVP14 were investigated in shake flask.The results indicated that 1 ～2 g/L ethanol was conducive to astaxanthin accumulation in initial medium with 10 g/L or 20 g/L glucose,while high concentration of alcohol inhibited the cell growth and astaxanthin production of P.rhodozyma.When ethanol concentration was maintained at 2 g/L in initial medium with 10 g/L glucose,astaxanthin production was 50.1 mg/L,which increased by 20.3％ compared with the control group.The yield of astaxanthin in a cell was 13.1 mg/g and the utilization rate of glucose was over 77.2％.The results demonstrated that the constant ethanol control strategy was conductive to astaxanthin accumulation in yeast cells.The maximum yield of astaxanthin was 55.3 mg/L under the optimized condition of 10 g/L initial glucose concentration,2 g/L constant ethanol concentration and 5 g/L glucose supplemented per 24 h during the fermentation.And the yield of astaxanthin in a cell was 19.7 mg/g,which increased by 39.7％ compared with the control group (14.1 mg/g).

摘要： 为了明确法夫酵母(Phaffia rhodozyma)类胡萝卜素提取物对化学性肝损伤大鼠丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)肝细胞坏死程度的影响,建立CCl4诱导大鼠化学性肝损伤模型,将60只大鼠随机分成6组,分别是正常组,模型组,联苯双酯组,低、中、高剂量组(受试样剂量分别为0.187 5、0.375、0.75 g/kg),检测大鼠血清中ALT、AST活性,并观察肝脏细胞的病理损伤情况.结果显示,法夫酵母类胡萝卜素高剂量组大鼠血清ALT与模型组比较显著降低(P＜0.05),受试样品不同剂量组大鼠的肝细胞病变均有不同程度的减轻.表明,法夫酵母类胡萝卜素提取物对大鼠化学性肝损伤有辅助保护作用.

摘要： 虾青素是一种橘红色的酮式类胡萝卜素,其超强的抗氧化活性是番茄红素等抗氧化剂的1000倍以上。通过法夫酵母(Phaffia rhodozyma)发酵生产的天然虾青素在水产养殖、食品、医药、化妆品等领域具有广阔的应用前景。本室前期通过诱变获得了中温型高产突变株MK19,是工业生产中节能高效的备选菌株。rn 为探究MK19中虾青素的增产机制，比较了MK19和野生菌株中虾青素及其旁支代谢途径在代谢终产物及基因表达水平的差异，发现MK19脂肪酸和麦角甾醇含量较野生型减少，虾青素含量增加。Q-PCR结果表明，类胡萝卜素合成基因crtI, crtE, pbs和ast在MK19中高表达，推测，该菌株细胞内脂肪酸和麦角固醇减少，积累的大量乙酞-CoA等前体和NADPH、 ATP等辅因子，被活跃的虾青素合成途径所利用。采用液质联用方法检测细胞不同色素含量水平，发现了一未知色素在细胞中积累，经过量表达虾青素合成酶基因ast，有效地促进β-胡萝卜素及该产物转化为虾青素，使突变株的虾青素产量又提高了33.5%。

摘要： 本实验采用构建虾青素合成酶基因过表达菌株的策略，经摇瓶及发酵罐培养证实，达到了提高供试菌株虾青素产量的目的。结果，1、成功构建了无抗性标记的ast基因过表达菌株，使供试菌株虾青素产量比出发菌株提高了50%，且具有良好的稳定性，菌株具有安全性和工业生产潜力；2、从细胞学水平和分子水平验证了ast基因过表达对于虾青素合成的调节作用；3、本实验采用分子生物学策略，成功尝试了对供试菌株法夫酵母的遗传操作，对于进一步探讨该菌株代谢调控机制打下理论基础及技术保障。

摘要： 本文研究了HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀对法夫酵母生长及其虾青素合成的影响,实验结果表明,当辛伐他汀浓度在4.78×10-6mol/L时对酵母细胞的生长的抑制表现不明显,但对虾青素合成具有显著的抑制作用.以此浓度作为筛选浓度,经亚硝基胍(NTG)诱变后,通过辛伐他汀平板初筛与摇瓶复筛,获得较高虾青素产率的突变株.实验结果表明,菌体生物量、类胡萝卜总量和虾青素产量都有明显的提高,其中NPX-3-05突变株类胡萝卜总量与虾青素产量分别达到3.823mg/L、2.755mg/L,比出发菌株依次提高了163％、143％(1.453mg/L、1.134mg/L).菌株NPX-3-05经连续发酵5次的稳定性实验表明其性状稳定.目标产物经HPLC定性分析,确定为反式虾青素.因此,以辛伐他汀等HMG-CoA还原酶抑制剂作为选择压力,对虾青素高产突变株的筛选具有较好的"筛分"能力.

摘要： 本发明涉及一种提高法夫酵母虾青素含量的法夫酵母培养方法。该方法包括法夫酵母野生菌株JCM9042菌种固体种子制备、一级种子培养、二级种子培养与发酵培养以及发酵液的虾青素含量测定。本发明的培养方法使用麦角甾醇合成抑制剂，可明显地促进法夫酵母中虾青素的积累，与不使用麦角甾醇合成抑制剂相比，本发明的培养方法能够提高虾青素的含量高达3-8倍以上。本发明的方法简单易行，麦角甾醇合成抑制剂及培养基成本低廉，有效地降低虾青素的生产成本，有利于工业化培养。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种利用β‑葡聚糖酶与几丁质酶提取红法夫酵母胞内虾青素的方法。本发明的提取方法包括如下步骤：(1)将红法夫酵母的菌体用碱液处理后，离心弃上清，得到中间菌体；(2)在中间菌体中加入β‑葡聚糖酶与几丁质酶的混合液进行酶解处理后，萃取得到虾青素。采用本发明的提取方法能最大限度的提取红法夫酵母胞内的虾青素，并且对环境无污染。

摘要： 本发明涉及一种提高法夫酵母虾青素含量的法夫酵母培养方法。该方法包括法夫酵母野生菌株JCM9042菌种固体种子制备、一级种子培养、二级种子培养与发酵培养以及发酵液的虾青素含量测定。本发明的培养方法使用麦角甾醇合成抑制剂，可明显地促进法夫酵母中虾青素的积累，与不使用麦角甾醇合成抑制剂相比，本发明的培养方法能够提高虾青素的含量高达3-8倍以上。本发明的方法简单易行，麦角甾醇合成抑制剂及培养基成本低廉，有效地降低虾青素的生产成本，有利于工业化培养。

摘要： 本发明公开了一种基于高产虾青素红法夫酵母的复壮方法，其整体步骤为：步骤一、YM斜面培养基活化；步骤二、添加筛选剂的YM培养基平皿筛选；步骤三、YM培养基摇瓶产量验证；步骤四、高产菌株传代稳定性验证。本发明通过活化、复壮获得的高产量菌株，其产量较之前提高83.2％，菌株传代稳定，适合进一步研究或者作为生产用菌种。

摘要： 本发明公开了一种改善水产动物体色的红法夫酵母GOY1及其培养物的制备方法和应用。所述红法夫酵母GOY1的分类命名为红法夫酵母Phaffia rhodozyma，保藏编号为CGMCC No.22504。红法夫酵母GOY1培养物的制备方法包括步骤：红法夫酵母GOY1种子液培养、固体培养基预酶解、固体培养、细胞破壁、烘干。红法夫酵母GOY1及其培养物都能用于制备水产养殖动物饲料添加剂，能够提高南美白对虾的增重率和存活率，并降低饵料系数，改善其体色，进而提高其非特异性免疫力，改善肠道菌群结构。

摘要： 本发明公开了一种红法夫酵母液体复合制剂及其制备方法和应用。所述红法夫酵母液体复合制剂由97.97%红法夫酵母发酵液、1%杜仲提取物、1%葡萄糖氧化酶、0.3‰海藻酸钠组成，其中红法夫酵母发酵液由保藏编号为CGMCC NO.22504的红法夫酵母GOY1经培养发酵获得。本发明通过复合的技术手段优化了红法夫酵母液体复合制剂的生产工艺，获得了常温存放高稳定、不分层、不变质的产品，不仅解决了酵母细胞下沉、蛋白含量较高引起变质等问题，还应用于制备水产动物的开口饵料，并能有效促进水产动物生长，提高水产动物的抗应激能力，减少动物体内弧菌数量，且成本低，制备方法简单，因此具有广阔的使用前景。

摘要： 本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及到一种提升红法夫酵母菌株产虾青素的发酵工艺。本申请的一种红法夫酵母菌株，命名为红法夫酵母菌株(Xanthophyllomyces dendrorhous/Phaffia rhodozyma)，于2020年8月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏编号为CCTCC M 2020413。本发明的红法夫酵母发酵生物量干重达到110g/L，虾青素发酵产量达到600mg/L以上，虾青素含量达到5.00mg/g以上，实现红法夫酵母产业化生产虾青素，大幅超过了目前同类菌株的虾青素产量，也逐渐拉近了与基因工程菌的产量差距。本发明的红法夫酵母菌株可广泛应用于动物饲料添加剂、食品添加剂、保健品等领域。

摘要： 本发明公开了一种无机‑微生物杂化体系提高野生红法夫酵母菌株虾青素产量的方法，包括以下步骤：摇瓶种子培养：从红法夫酵母原始斜面菌株斜面上取一接种环菌种接种于种子培养基中，摇瓶在22±5°C、转速180‑240rpm下培养24‑72h，得到种子培养液；摇瓶发酵培养：按10％的体积比，将所述种子培养液接种于含有浓度为0.2‑6g/L氮化碳纳米片发酵培养基的摇瓶中，摇瓶在22±5°C、转速180‑240rpm下培养48‑108h，其中，发酵培养过程置于全程有光或完全黑暗的条件下。该方法通过光驱动氮化碳纳米片与红法夫酵母组装成的杂化体系的方法，可显著提高红法夫酵母虾青素的产量。

摘要： 本发明公开了一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其包括以下步骤：从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；对样品进行液相色谱‑电喷雾电离‑三重四级杆飞行时间质谱联用检测，获得质谱数据；在MS‑Dial选择液质代谢组学数据库进行下载；通过MS‑Dial对上述步骤的质谱数据进行分析，获得总离子峰图；将上述步骤的总离子峰图与上述步骤的数据库进行鉴定法夫酵母的代谢产物。该方法提高了检测靶向性的准确度，提高了检测灵敏度，无需同位素示踪，操作简单，适用性广泛。

摘要： 本发明涉及虾青素技术领域，具体涉及到基于红法夫酵母制备虾青素精油的方法。本申请的基于红法夫酵母制备虾青素精油的方法，利用食品级试剂(食品乙醇，食品乳酸)通过物料前处理、酸法破壁、收集红法夫酵母菌体、提取红法夫酵母中虾青素、浓缩虾青素提取液、粗制虾青素精油、精制虾青素精油、获取虾青素精油成品并进行保存，使红发夫酵母中部分磷脂溶于油脂并增加虾青素在油脂中的溶解度，在不添加额外辅料的情况下使精油中虾青素的含量从300mg/L提升至1200mg/L，从而获得高品质的虾青素精油。本发明的工艺简单、成本低廉，使用较低比例的乙醇和乳酸，即可获得高收率的虾青素精油。