转基因动物

摘要： 转基因三文鱼是全球第1例批准上市的转基因动物,美国食品药品管理局于2015年批准其进入市场,巴西国家生物安全技术委员会于2021年批准其进入市场。除此之外,美国食品药品管理局还批准了转基因鸡、转基因猪等作为医用或饲用,日本批准基因编辑真鲷和河豚于2021年上市,这说明全球范围内转基因动物的研发和上市正在稳步推进,并逐渐被普通大众认可。我国作为最早研究转基因动物的国家,虽然研究正在稳步开展,但还未有1例转基因动物获批生产应用安全证书。通过概述美国转基因动物的安全管理制度和转基因动物在美国的商业化情况,结合转基因三文鱼的批准过程,为我国转基因动物安全管理提供参考。

摘要： 目的 探究lncRNA-ZFAS1对心肌纤维化的调控作用.方法 采用结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支的方式建立心肌缺血诱发的心肌纤维化模型;利用CRISPR/Cas9技术构建心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠;利用Masson染色检测小鼠心脏组织心肌纤维化情况;利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导原代培养的小鼠心肌成纤维细胞,建立离体心肌纤维化模型,并转染siRNA(siZFAS1)用于敲减lncRNA-ZFAS1;利用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖情况;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测lncRNA-ZFAS1、转化生长因子β1(TGFβ1)、Ⅰ型胶原(Col1a1)和Ⅲ型胶原(Col3a1)的表达情况.利用Western blot实验检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMΑ)的表达情况.结果 在心肌纤维化模型小鼠的心脏组织中,ln-cRNA-ZFAS1的表达显著升高,AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中敲减lncRNA-ZFAS1后,Col3a1和TGFβ1的表达显著降低;心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠心脏组织中出现胶原沉积,并且α-SMA、Col1a1和Col3a1的表达显著升高.结论 lncRNA-ZFAS1在心脏组织中的高表达会诱导心肌纤维化,敲减lncRNA-ZFAS1可以缓解心肌纤维化.

摘要： 随着各类新兴技术和学科的发展,单克隆抗体制备技术也得到不断更新和完善,但如何利用并有效制备抗体,用于检测、预防、治疗等迫在眉睫.本文综述了单克隆抗体制备技术的最新研究进展,包括抗体库技术、转基因和新型动物模型技术、单个B细胞抗体技术、多学科和计算机辅助抗体制备技术,并简要讨论其应用前景和存在的问题.

摘要： 糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)以视网膜微血管异常、新生血管形成及神经元退行性变为主要病理特征.通过药物诱导、饮食诱导、基因敲除、转基因等方法制造的多种动物模型已用于研究.其中,啮齿类动物是最常用的动物模型,已广泛用于DR的发病机制特别是遗传学研究、药物干预(特别是基因治疗、干细胞移植治疗)等领域.非人类灵长类DR动物模型的病理生理特征与人类极为相似,具有啮齿类动物没有的黄斑结构,因此在临床前研究中占有重要地位.此外,犬、猪、猫、斑马鱼等动物也用于DR的动物模型建立.但无论是诱发型或自发性DR动物模型,其大多数只能表现为DR早期阶段的临床特征如视网膜微血管瘤形成、硬性渗出、点状和斑状视网膜出血、视网膜静脉扩张、视网膜内微血管异常等,只有极少数可通过诱导局部缺血的方法或将血管内皮生长因子直接注射入眼内诱发DR晚期阶段的类临床特征.

摘要： 美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)于2020年12月14日批准了名为GalSafe转基因猪上市.它是首个既可以有效减轻异种器官移植中的急性免疫排斥,又可以生产肉类过敏者可安全食用的转基因家畜.随着基因编辑技术不断发展,转基因动物走入市场已势不可挡,尤其近年来,规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统成为基因编辑技术的一种重要的方法.CRISPR/Cas 9基因编辑系统由于结构简单、效率高、应用范围广和成本低等优点被广泛应用于作物育种、家畜遗传改良、人类疾病治疗等方面.论文主要对CRISPR/Cas9基因编辑系统在家畜应用上取得的研究进展进行综述,并对未来发展前景进行展望.

摘要： 肿瘤免疫疗法是应用免疫学原理和方法,提高肿瘤细胞自身的免疫原性及其对效应细胞杀伤作用的敏感性,激发和增强机体抗肿瘤免疫应答,并应用免疫细胞和效应分子,协同机体免疫系统杀伤肿瘤,抑制肿瘤生长的方法;因其具有抑瘤作用特异性强,毒副作用小,疗效好等特点,日益受到研究者青睐,如何科学控制与反映该疗法的药效作用已成为研究热点.本文针对目前肿瘤免疫疗法的两大类热点产品[抗细胞程序性死亡受体1/细胞程序性死亡配体1(PD-1/PD-L1)抗体药物和嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞]药效研究面临的问题,如抗PD-1/PD-L1抗体药物的整体临床药效反应率偏低,CAR-T细胞治疗实体瘤的临床疗效不尽理想,对抗PD-1/PD-L1抗体药物临床药效标志物和CAR-T细胞临床前药效评价的特点与分析方法、发展面临的挑战及转基因动物在此类产品药效学研究中的应用进行分析,以期为准确预测此类产品的临床药效,提高其疗效提供参考.

摘要： 目的 观察C57BL/6N-Tg (1.28HBV) /Vst乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠复合四氯化碳(CCL4)腹腔注射诱导乙型肝炎背景下肝纤维化模型小鼠肝内淋巴细胞亚群变化特点,并分析其与血清HBV DNA及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量的相关性. 方法 HBV-Tg小鼠予10％ CCl4腹腔注射诱导加速肝纤维化形成,以血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平和肝组织HBsAg表达情况评价模型小鼠病毒学特征,肝组织HE、天狼猩红染色及肝组织Hyp含量检测小鼠肝脏炎症及纤维化程度,流式细胞术观察肝内T淋巴细胞、B淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T淋巴(NKT)细胞分布情况.组间数据比较采用单因素方差分析,LSD进行两两比较;Pearson相关性分析上述各淋巴细胞亚群与血清HBV DNA、肝组织Hyp含量的相关性. 结果 HBV-Tg复合CCl4模型组小鼠血清HBsAg、HBeAg及肝组织HBsAg均呈阳性表达,血清HBV DNA载量＞1×106IU/ml.与野生型对照组相比,复合模型组小鼠肝组织Hyp含量显著升高[(196.39±38.14) μg/g与(347.67±59.53)μ g/g,P＜0.01],肝组织炎症及纤维化程度加重,肝内CD4+T、NK、NKT细胞占淋巴细胞比例均显著减少(P＜0.01),而CD8+T淋巴细胞(30.58％±2.89％与46.50％±2.24％,P＜0.01)和B淋巴细胞(28.82％±2.24％与37.10％±8.59％,P＜0.05)比例明显增多.血清HBV DNA水平与肝内T淋巴细胞比例呈正相关(r=0.413,P＜0.05),与NK细胞比例呈负相关(r=-0.419,P＜0.05);肝组织Hyp含量与CD4+T淋巴细胞(r=-0.871)、NK细胞(r=-0.716)、NKT细胞(r=-0.876)比例均呈负相关(P值均＜ 0.01),与CD8+T淋巴细胞(r=0.852)、B淋巴细胞(r=0.593)比例均呈正相关(P值均＜0.01).结论 HBV-Tg小鼠复合CCl4造模可诱导HBV病毒学指标阳性、肝脏炎症和纤维化并存的乙型肝炎肝纤维化小鼠模型,该模型具有与人类疾病相似的肝脏淋巴细胞免疫紊乱的特点,且肝内淋巴细胞免疫紊乱与HBV病毒载量和肝纤维化程度存在相关性.

摘要： 为探索可靠、灵敏的转基因动物及其产品检测技术,从核酸检测和蛋白检测两个方面,综述了转基因动物及其产品不同检测技术的原理、特点及应用,提出了每种检测技术的不足及今后转基因检测技术的发展趋势和研究方向.目前,已经研发的核酸检测技术主要包括多种PCR方法、环介导等温扩增技术、Southern blot技术和染色体原位杂交技术等,蛋白检测方法主要包括酶联免疫吸附检测技术、免疫层析试纸条、Western blot技术、免疫组织化学和免疫荧光技术等.三代测序技术是近年来提出的一种新型基因检测技术,适用于对未知序列转基因动物的分析.随着转基因技术的发展,转基因动物及其产品越来越多,高通量、高灵敏度和低成本的检测技术将成为未来转基因动物及其产品检测的研究重点.

摘要： 随着科学技术不断的创新发展,动物转基因技术的发展日渐成熟,逐渐进入一个新的发展阶段.本文综述了动物转基因技术的发展历程,以及原核显微注射法、锌指核酸酶-基因打靶技术、转座子介导的基因转移法、胚胎干细胞介导法、体细胞克隆技术、慢病毒载体法、RNAi介导的基因敲除法等方法,对动物转基因技术进行综述和探讨.转基因动物的生物安全性一直是人们普遍关注的问题。相关研究表明，利用转基因动物、克隆动物制备的食物、药物并不一定会对人体带来危害。随着动物转基因技术日趋完善，转基因动物将被更多的人们认可和接受。而这些动物转基因新技术也将推动生物制药、动物疾病模型、动物遗传育种、环境保护、器官移植和基因治疗、以及生物材料等诸多领域的研究。

摘要： 应用转基因动物乳腺生物反应器生产转基因药物是一种全新的药物生产模式，具有成本低、效益高和产量高等优点。但是乳腺生物反应器制药还有三个问题需要研究解决。一是转基因动物的成功率，二是外源基因在乳腺的高效表达，三是乳汁中表达的外源药物蛋白能否完成蛋白质的翻译修饰。针对上述问题，应用同体克隆、同型克隆技术和改进的克隆方法，从转基因动物(家畜)奶汁中分离纯化得外源药物蛋白，对其分析结果表明，无论其理化性质(分子量、等电点、化学结构等)或者蛋白质修饰(轻基化、糖基化、磷酸化、剪接修饰等)以及生物活性都和天然的蛋白质无异，证明在乳腺细胞中表达的外源蛋白质己经完成了蛋白质的翻译后修饰加工，表明通过转基因乳腺生物反应器生产药物蛋白是一种理想的制药途径。

摘要： 本实验采用环介导等温扩增方法，通过在线软件设计了2对引物，并优化了反应温度、时间、酶的用量等条件，建立了检测人乳铁蛋白基因和人溶菌酶基因的扩增体系，检出限为每微升10拷贝，是普通PCR的10倍。并对41个转人乳铁蛋白基因山羊样品和31个转人溶菌酶山羊进行了盲检检测，检测结果与预期一致。同时本实验室正在研发用于检测转人乳铁蛋白基因、人乳清蛋白基因、人溶菌酶基因转基因牛的纳米金基因芯片。根据这三个基因序列设计多重PCR引物及基因芯片的捕获探针和检测探针，己优化条件建立了三种外源基因的多重PCR体系。后续将对基因芯片、纳米金探针的制备及样品的盲检筛查进行研究。

摘要： 随着转基因动物的产业化发展,建立快速、简便的转基因成分检测方法是转基因动物及其产品安全评价的重要研究部分.本实验采用环介导等温扩增方法,分别建立了检测人乳铁蛋白基因和人溶菌酶基因扩增体系,对41个转人乳铁蛋白基因山羊样品和31个转人溶菌酶山羊样品进行了盲检检测,检测结果与预期一致.同时正在研发用于转人乳铁蛋白基因、人乳清蛋白基因、人溶菌酶基因转基因牛的纳米金基因芯片.

摘要： 传统2年致癌试验需在两种啮齿类动物中进行.国际药品注册三方协调指南(ICH)1997年开始允许使用短期6个月转基因小鼠实验来代替一个长期致癌实验(S1B),并且推荐使用的转基因小鼠模型为rasH2,p53+/-,及Tg.AC三种.rasH2鼠可用于检测遗传性致癌物质和非遗传性致癌物质.统计数据显示用rasH2小鼠模型完成的试验其结果比另两种有更好的预测性,故现为首选的转基因小鼠模型.中国食品药品监督管理局在2010年颁布了《药物致癌试验必要性的技术指导原则》,要求预期临床用药期至少连续6个月的药物一般应进行致癌试验.因传统的两年致癌试验和六个月短期转基因致癌试验费用均很高,技术操作难度大,且数据分析方法独特,科文斯美国从1998年以来完成了30余个六个月短期转基因致癌试验，科文斯上海也在过去两年内完成了4个剂量摸索试验，在试验结果上报美国CAC并得到允许后，顺利实施并完成了2个26周致癌试验。试验采用美国或日本进口rasH2小鼠；随机将动物分为五组，溶剂对照组，阳性对照组，低、中、及高剂量给药组。阳性对照组动物在第一天经腹腔注射给予甲基亚硝基脲，其他动物按试验设计每天经口灌胃给予溶剂或供试品。在设计和实施这些试验的过程中积累了一些经验，其中的要点和难点包括：熟练地小鼠灌胃技术，良好的动物饲养条件，及时准确判断和处置濒死动物，致癌试验独特的数据分析（肿瘤出现时间及生长状况，动物的存活率和癌症发生率的统计分析）；以及如何根据阳性对照动物出瘤情况和死亡率对整体试验的有效性进行判断。

摘要： 传统2年致癌试验需在两种啮齿类动物中进行.国际药品注册三方协调指南(ICH)1997年开始允许使用短期6个月转基因小鼠实验来代替一个长期致癌实验(S1B),并且推荐使用的转基因小鼠模型为rasH2,p53+/-,及Tg.AC三种.rasH2鼠可用于检测遗传性致癌物质和非遗传性致癌物质.统计数据显示用rasH2小鼠模型完成的试验其结果比另两种有更好的预测性,故现为首选的转基因小鼠模型.中国食品药品监督管理局在2010年颁布了《药物致癌试验必要性的技术指导原则》,要求预期临床用药期至少连续6个月的药物一般应进行致癌试验.因传统的两年致癌试验和六个月短期转基因致癌试验费用均很高,技术操作难度大,且数据分析方法独特,科文斯美国从1998年以来完成了30余个六个月短期转基因致癌试验，科文斯上海也在过去两年内完成了4个剂量摸索试验，在试验结果上报美国CAC并得到允许后，顺利实施并完成了2个26周致癌试验。试验采用美国或日本进口rasH2小鼠；随机将动物分为五组，溶剂对照组，阳性对照组，低、中、及高剂量给药组。阳性对照组动物在第一天经腹腔注射给予甲基亚硝基脲，其他动物按试验设计每天经口灌胃给予溶剂或供试品。在设计和实施这些试验的过程中积累了一些经验，其中的要点和难点包括：熟练地小鼠灌胃技术，良好的动物饲养条件，及时准确判断和处置濒死动物，致癌试验独特的数据分析（肿瘤出现时间及生长状况，动物的存活率和癌症发生率的统计分析）；以及如何根据阳性对照动物出瘤情况和死亡率对整体试验的有效性进行判断。

摘要： 传统2年致癌试验需在两种啮齿类动物中进行.国际药品注册三方协调指南(ICH)1997年开始允许使用短期6个月转基因小鼠实验来代替一个长期致癌实验(S1B),并且推荐使用的转基因小鼠模型为rasH2,p53+/-,及Tg.AC三种.rasH2鼠可用于检测遗传性致癌物质和非遗传性致癌物质.统计数据显示用rasH2小鼠模型完成的试验其结果比另两种有更好的预测性,故现为首选的转基因小鼠模型.中国食品药品监督管理局在2010年颁布了《药物致癌试验必要性的技术指导原则》,要求预期临床用药期至少连续6个月的药物一般应进行致癌试验.因传统的两年致癌试验和六个月短期转基因致癌试验费用均很高,技术操作难度大,且数据分析方法独特,科文斯美国从1998年以来完成了30余个六个月短期转基因致癌试验，科文斯上海也在过去两年内完成了4个剂量摸索试验，在试验结果上报美国CAC并得到允许后，顺利实施并完成了2个26周致癌试验。试验采用美国或日本进口rasH2小鼠；随机将动物分为五组，溶剂对照组，阳性对照组，低、中、及高剂量给药组。阳性对照组动物在第一天经腹腔注射给予甲基亚硝基脲，其他动物按试验设计每天经口灌胃给予溶剂或供试品。在设计和实施这些试验的过程中积累了一些经验，其中的要点和难点包括：熟练地小鼠灌胃技术，良好的动物饲养条件，及时准确判断和处置濒死动物，致癌试验独特的数据分析（肿瘤出现时间及生长状况，动物的存活率和癌症发生率的统计分析）；以及如何根据阳性对照动物出瘤情况和死亡率对整体试验的有效性进行判断。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： 本发明提供了一种肝细胞癌小鼠模型，以及构建该小鼠模型的方法，它包括以下步骤：1.将外源目的基因插入携带靶位点同源序列的适宜载体中，构建出重组的打靶载体；2.将步骤1的打靶载体转化所研究动物的ES细胞，从中获得外源基因定位整合的中靶ES细胞；3.将步骤2获得的中靶ES细胞注入所述动物的囊胚，并进行体外培养，获得含有中靶ES细胞的胚胎；4.将步骤3获得的胚胎植入所述动物的子宫中，由此产生稳定表达外源目的基因的动物子代。本发明还涉及该小鼠模型在肝细胞癌的致病机理研究、早期诊断和治疗以及在抗肝癌药物筛选中的应用。

摘要： 本发明公开了一种利用基因敲入和核移植技术在转基因非人哺乳动物生产重组人丁酰胆碱酯酶的方法，具体地，本发明提供了一种用于乳腺特异表达的供体构建物，所述构建物将人丁酰胆碱酯酶DNA编码序列定点整合于乳腺特异表达蛋白基因位点并成功转染非人哺乳动物胚胎成纤维细胞，幼年和成年体细胞，利用体细胞核移植技术进行克隆从而获得新的个体，其所携带的人丁酰胆碱酯酶基因能使非人哺乳动物乳腺稳定表达并分泌人丁酰胆碱酯酶全酶或单体。本发明方法所生产的重组蛋白可用于预防和治疗神经毒剂和有机磷化合物中毒，可卡因中毒和琥珀胆碱引起的呼吸暂停，及用于检测和祛除蔬菜瓜果和其他农作物、各种物件层面及土壤的有机磷化合物残留。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种培养转基因动物胚胎或制备转基因动物的方法及培养基。该方法包括将经基因修饰后的动物受精卵培育到四细胞阶段，去掉透明带，再去掉细胞间连丝，将4细胞胚胎分离为4个单卵裂球，进一步再将单个卵裂球细胞放回到去除胞质的透明带中，进行体外培养，高效获得纯合基因修饰的胚胎。发明同时提供了优化的培养基。本发明通过胚胎卵裂球分离再独立培养技术，能够在优化的胚胎培养体系中成功获得囊胚，效率为30.33％；其次，所获得的再分化胚胎纯合打靶效率较未分割前的发育胚胎相对明显增高，高达55.80％的纯合突变效率。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种培养转基因动物胚胎或制备转基因动物的方法及培养基。该方法包括将经基因修饰后的动物受精卵培育到四细胞阶段，去掉透明带，再去掉细胞间连丝，将4细胞胚胎分离为4个单卵裂球，进一步再将单个卵裂球细胞放回到去除胞质的透明带中，进行体外培养，高效获得纯合基因修饰的胚胎。发明同时提供了优化的培养基。本发明通过胚胎卵裂球分离再独立培养技术，能够在优化的胚胎培养体系中成功获得囊胚，效率为30.33％；其次，所获得的再分化胚胎纯合打靶效率较未分割前的发育胚胎相对明显增高，高达55.80％的纯合突变效率。

摘要： 本发明涉及转基因动物技术领域，具体涉及一种精子载体制备转基因动物的方法以及一种制备转基因鸡的sgRNA和制备方法。该方法根据用于制备sgRNA的crRNA编码序列构建sgRNA与Cas9蛋白构建出共表达质粒，以精子为载体制备转基因动物。该方法通过精子载体与第三代基因编辑技术CRISPR/Cas9的结合，使转基因动物的制备过程操作简单，成本低，效率高，既能够用于转基因禽类动物的制备，也可以用于其他有性繁殖的转基因动物的制备。

摘要： 本发明公开了一种转基因动物生产方法及狂犬病动物模型构建方法。将外源G蛋白编码基因插入到实验动物胚胎干细胞中，即可获得外源全身性表达G蛋白的转基因动物。用G蛋白缺陷型街毒对转基因动物进行感染，由转基因动物为缺陷型街毒补充G蛋白，即可获得狂犬病动物模型。转基因动物为缺陷型RV补充G蛋白恢复街毒活性，可极大降低RV街毒获取、扩增和保管的难度；在体内感染的缺陷型RV离开动物体后，没有其他来源的G蛋白补充时没有单独感染与传播的能力，可视作无感染性材料，极大降低了生物安全风险与门槛。转基因动物提供的G蛋白量少于RV街毒表达的G蛋白量，因而动物模型的狂犬病进程相对于自然状态下能够更好控制与观察病程进度。

摘要： 本发明提供乳腺特异性表达人Amylin基因载体，还提供乳腺特异性表达人Amylin基因转基因动物及其应用。本发明利用β‑酪蛋白启动子启动人Amylin基因，构建了乳腺特异性表达人Amylin基因载体，并将该载体转入动物基因组中获得乳腺特异性表达人Amylin蛋白的转基因动物，其乳汁特异性表达人Amylin蛋白，且人Amylin基因在动物乳腺中的表达并未对动物的正常生理活动造成不良影响。因此，应用本发明可望通过转人Amylin小鼠、奶山羊或奶水牛的制备，获得大量廉价的人Amylin蛋白，并分离提纯生产药用人源Amylin，产生巨大的经济效益和社会效益。

摘要： 本发明涉及一种转基因动物毛色报告基因表达载体构建及其应用。该表达盒是由依次串联的两个人TYR增强子，人TYR启动子，小鼠TYR基因和bGH polyA组成；其序列如SEQ ID NO.13所示。本发明还公开了含有该表达盒的表达载体，将表达载体转入毛色为白色的宿主动物基因组，转基因表达后，产生黑色素沉积，能够在宿主动物的皮肤、毛发等部位肉眼直接观察到毛色变化，直接反应目的基因表达情况。应用本发明中构建的载体，以小白鼠为宿主动物制备转基因鼠，成功获得转基因后代，并观察到毛色变化，获得黑鼠，表明该载体可以作为报告基因应用。

摘要： 本发明提供了一种表达多基因抗流感转基因动物的构建方法。该方法在RNA聚合酶Ⅲ型启动子h7SK、hH1、hU6和mU6的控制下，靶向流感病毒基因构建了串联表达的shRNA表达盒，将Mx-RNAis与shRNA表达盒联合构建到表达载体并包装重组慢病毒，制备转基因动物获得表达抗流感基因的转基因动物。实验结果表明转基因动物具有显著抑制猪流感病毒复制的活性。

摘要： 本发明提供了一种表达双基因抗流感转基因动物的培育方法,利用体细胞克隆技术与常规育种技术，将具有抗各亚型流感病毒作用的多靶点RNAi、Mx基因转入猪体内，通过改造猪的遗传性状达到了广谱抗猪流感的目的。表达抗流感Mx-RNAis基因转基因猪已繁育至F3代，外源基因可稳定遗传；完成的感染评价实验表明，F1、F2代转基因猪与非转基因猪相比具有显著的抗病毒、抑制病毒传播的特性，培育的转基因猪群体感染率减少30％以上。