抗体库

摘要： 噬菌体抗体展示技术是第一个也是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术,可用于发现治疗各种疾病的全人源抗体。虽然存在不同的抗体发现方法,但噬菌体抗体展示技术已成为发现和优化靶标特异性单克隆抗体不可或缺的工具。研究人员可通过在丝状噬菌体上创建组合抗体库,从而在几周内获得抗原特异性抗体。在当前冠状病毒病(COVID-19)大流行的情况下,对中和抗体的研究激励着研究人员寻找出抗SARS-CoV-2的候选治疗药物。通过对噬菌体抗体库的筛选,目前已有许多不同的SARS-CoV-2中和抗体被发现。因此,本文综述了噬菌体抗体展示技术的原理,抗体库的构建、分类及淘选流程,并对其优点及局限性进行了讨论。此外,还总结了利用该技术发现抗SARS-CoV-2中和抗体的最新进展。旨为今后该技术在抗体发现中的应用提供理论支持。

摘要： 随着各类新兴技术和学科的发展,单克隆抗体制备技术也得到不断更新和完善,但如何利用并有效制备抗体,用于检测、预防、治疗等迫在眉睫.本文综述了单克隆抗体制备技术的最新研究进展,包括抗体库技术、转基因和新型动物模型技术、单个B细胞抗体技术、多学科和计算机辅助抗体制备技术,并简要讨论其应用前景和存在的问题.

摘要： 宿主适应性免疫系统通过产生种类多样的抗体保护其免受病原侵害,而传统的低通量测序方法无法完成对宿主抗体库的测序.本研究通过多重聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中扩增获得猪B细胞受体(B cell receptor,BCR)重链文库,经二代测序建立并分析健康猪抗体库的组成特征.结果表明:3周龄仔猪在正常情况下对抗体库IGHV、IGHD、IGHJ基因使用具有偏好性,其中IGHV1-4和IGHV1S2是使用最频繁的2种V(variable)基因,有8种IGHV基因的使用频率之和超过80％,另外发现重链互补决定区3(heavy chain complementarity determining region 3,HCDR3)的长度呈正态分布,平均长度约为15.8个氨基酸.本研究成功建立了适用于猪抗体库的高通量测序方法,可为未来进一步深入理解不同状态(生理、病理)猪抗体库的特异性组成提供有效的研究方法.

摘要： 噬菌体抗体库因具有构建过程简单及筛选方法高效、快速等优势,近年来受到广泛的关注.按照抗体库的来源可将噬菌体抗体库分为免疫噬菌体抗体库和非免疫噬菌体抗体库两大类.免疫噬菌体抗体库主要来源于能够产生免疫应答的动物体.非免疫噬菌体抗体库主要是通过半合成或全合成的方式获得.按照筛选抗原的纯度可将噬菌体抗体库的筛选方法分为纯化抗原筛选法和非纯化抗原筛选法两大类.纯化抗原筛选法主要是通过使用纯化过的抗原对抗体库进行筛选,具有效率高、特异性强等特点.非纯化抗原筛选法是对无法获得纯化抗原或抗原背景较复杂的抗体库进行筛选的方法,具有随意性强的特点.本研究主要是探讨噬菌体抗体库的分类与筛选方法,以便为噬菌体抗体库的构建提供参考.

摘要： 自杂交瘤技术成功体外制备单克隆抗体以来,抗体的生物合成一直是热点问题,其中全人源抗体因其免疫原性小等特点受到更多关注.目前最常用的抗体库技术主要有噬菌体展示技术、酵母细胞表面展示技术、核糖体展示技术和细胞内组合抗体展示技术等.噬菌体展示技术利用噬菌体的生理特征,将人源蛋白表达在噬菌体表面,从而实现筛选.在药用单克隆抗体上,噬菌体展示技术是最成熟且高效的.与噬菌体展示技术相比,酵母细胞展示技术最突出的优点是可以对蛋白进行翻译后修饰,大大拓宽了可表达的蛋白的范围.核糖体展示技术的主要特点是,mRNA的转录和翻译均在细胞外进行,减小了筛选的难度.细胞内组合抗体展示技术是在噬菌体展示技术的基础上,通过慢病毒转染,富集细胞的表型与生物活性信号,从而获得特定生物功能的抗体.以上数据库技术尽管已经十分成熟,但在扩大应用规模上仍有弊端,包括运输和储存.建立数字化抗体库,即将已知的抗体及抗原相关数据建成电子库,不仅能方便信息保存,还能促进定向改造抗体的发展.%Since hybridoma was applied to prepare monoclonal antibodies in vitro,the biosynthesis of antibodies has always been the hot spot among biologists around the world.The preparation of fully humanized antibodies,due to its low immunogenicity,is the most popular and important part.Phage display,yeast display,ribosome display,and combinatorial antibody libraries are most commonly-used antibody library techniques.Phage display method utilizes the characteristics of phage life-cycle and displays humanized protein on the surface of phages,thus realizing screening.It's the most mature and efficient method to find therapeutic monoclonal antibody.Yeast display can not only express the protein,but do posttransla-tional modifications,greatly widening the range of the expression of protein.Conducting transcription and translation in cell-free system is the key feature of ribosome display.Combinatorial antibody libraries are based on the phage display tech-nique,while using lentivirus to transfect cells,in order to get antibodies with certain biological functions.These techniques, while being practical and mature,still have disadvantages in scaled application,such as transportation and storage.Construc-ting a digital antibody/antigen library can not only bring convenience to data storage,but also encourage the development of directional modification of antibody.

摘要： 噬菌体抗体库技术是一种以噬菌体为载体,将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中,并组装出具有扩增能力且在噬菌体表面无缺损表达抗体的融合噬菌体的技术.噬菌体抗体库技术已广泛运用于单克隆抗体的研发,它相对于传统的筛选技术,在时间周期,抗体类型,筛选范围,经济成本等有较为突出的优势.本文主要介绍噬菌体抗体库技术的原理、类型、运用以及最新研究进展.

摘要： 噬菌体抗体库技术是一种以噬菌体为载体,将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中,并组装出具有扩增能力且在噬菌体表面无缺损表达抗体的融合噬菌体的技术。噬菌体抗体库技术已广泛运用于单克隆抗体的研发,它相对于传统的筛选技术,在时间周期,抗体类型,筛选范围,经济成本等有较为突出的优势。本文主要介绍噬菌体抗体库技术的原理、类型、运用以及最新研究进展。

摘要： 目的:在人源单链抗体库中筛选抗人转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv).方法:人源展示型抗体库质粒转染293T细胞,通过第一轮流式细胞分选得到比例为0.2％的阳性细胞,提取质粒并扩增,得到的质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需抗体库;第二轮分选时降低抗原浓度,最后得到2个候选的scFv序列.经序列分析,选择1号单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得单链抗体蛋白,经ForteBio Octet进一步测定单链抗体蛋白的亲和力.结果:经过2轮筛选获得了全新的抗TfR单链抗体序列,构建并表达了该单链抗体蛋白,该单链抗体与TfR的亲和力常数为5.57×10-7.结论:从展示型人源scFv抗体库中获得了全新的抗TfR单链抗体,该单链抗体与TfR具有较好的亲和力.

摘要： 噬菌体抗体库技术（phagedisplayantibody librarytechniques）近十几年发展起来的特殊的基因工程重组技术，一般是指用聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）扩增抗体的全套可变区基因，通过噬菌体表面展示技术，把 Fab段或单链抗体（ScFv）表达在噬菌体的表面，经过“吸附 2 洗脱 2 扩增”过程筛选并富集特异性抗体。由于该技术具有生产抗体的潜力，因此，吸引了许多学者投入这一研究中，使得噬菌体抗体库技术得以迅速发展，在这项技术中，编码蛋白质的插入噬菌体外壳蛋白基因基因，使噬菌体外壳“显示”编码蛋白，表现出我们想要的蛋白质的基因，导致这些噬菌体可以屏蔽其他蛋白质、多肽或 DNA 序列，以检测显示蛋白和其他分子之间的相互作用。噬菌体抗体库技术方便、快速、高 效、培养方便，这些特点决定了其在肿瘤标志物的发现和肿瘤抗体药物研发中的广泛应用。但是噬菌体抗体库技术还存在一定缺陷，技术需要不断发展 和革新，此论文中对使用 M3 噬菌体的骆驼抗体库吸附过程做出些改进。

摘要： 目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage EIJSA、BstOI酶切片断分析进行检测,获得阳性克隆,作可溶性表达和鉴定。结果:Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,并从中筛选到一株与c-Met结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26,DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实表达出了人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得一株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。

摘要： 将编号为01,02,03,04,05的五个伊氏锥虫克隆群体(实验室保存)以10条/只经耳静脉接种至新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,开始耳静脉采血并提取抗血清,之后每隔两天提取一次抗血清,共提取10次,50份血清等量(各占1/50)混合,称为抗活体锥虫血清"抗体库B";此外取BeTat1.1,BeTat1.2……BeTat1.19,BeTat1.20共计20个抗原变异体(实验室保存)以10条/只经耳静脉接种至新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,心脏采血,分离血清,20份血清等量(各占1/20)的比例混合,称为抗活体锥虫血清"抗体库A";取将编号为01的伊氏锥虫克隆群体以100条/只分别腹腔注射接种小鼠和大鼠,见虫后分别使用抗活体锥虫血清"抗体库B"和抗活体锥虫血清"抗体库A"进行治疗;结果显示"抗体库B"治疗组的小鼠治愈率为93.75﹪,大鼠的治愈率达到了100﹪,"抗体库A"的治疗效果则不明显.

摘要： 杆状病毒作为节肢动物专一性的昆虫病毒，不仅能够作为生物杀虫剂，而且还在真核表达系统、基因转移载体、蛋白表面展示、表达病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)和表达异源病毒等研究方面发挥重要作用。因此，杆状病毒在表达具有生物活性的外源蛋白、多肽库和抗体库的构建、基因治疗、疫苗研制等方面具有巨大潜力。本文对杆状病毒的应用进行了简要综述。

摘要： 随着免疫学技术的迅猛发展，医院病理科、检验科、生物研究所等使用的抗体品种越来越多，目前许多科室采用手工频繁清点、登记的办法，既费时费力，又不能精确掌握抗体库存量，已不能适应简便、高效管理抗体的需要。本研究尝试运用MicrosoftExcel2003管理抗体一年，收到良好效果。

摘要： 阿兹海默病(AD)被广泛地认为是—种神经退行性疾病，研究发现由Aβ(1-42)聚合而成的Aβ寡聚体,即胞外淀粉样斑块前体可能是导致AD的重要因素之一。免疫治疗虽然是一种很有希望解决AD的途径，本研究计划制备一种人源抗Aβ寡聚体抗体，通过中和Aβ寡聚体对神经元毒性，加强小胶质细胞对其吞噬降解作用达到被动免疫治疗的目的。

摘要： 目前国内的狂犬病灭活苗尚未批准，但有4种狂犬病灭活苗已获批进行临床试验，并上报注册。最近，启荣良博士通过研究报道，以犬2型腺病毒为载体的重组狂犬病疫苗能够刺激动物产生有效的免疫应答，产生有效的中和抗体水平，足以抵抗致死剂量狂犬病病毒的攻击。也许再过几年的临床试验，狂犬病基因重组疫苗将是动物狂犬病免疫的最好选择。

摘要： 目前国内的狂犬病灭活苗尚未批准，但有4种狂犬病灭活苗已获批进行临床试验，并上报注册。最近，启荣良博士通过研究报道，以犬2型腺病毒为载体的重组狂犬病疫苗能够刺激动物产生有效的免疫应答，产生有效的中和抗体水平，足以抵抗致死剂量狂犬病病毒的攻击。也许再过几年的临床试验，狂犬病基因重组疫苗将是动物狂犬病免疫的最好选择。

摘要： 目前国内的狂犬病灭活苗尚未批准，但有4种狂犬病灭活苗已获批进行临床试验，并上报注册。最近，启荣良博士通过研究报道，以犬2型腺病毒为载体的重组狂犬病疫苗能够刺激动物产生有效的免疫应答，产生有效的中和抗体水平，足以抵抗致死剂量狂犬病病毒的攻击。也许再过几年的临床试验，狂犬病基因重组疫苗将是动物狂犬病免疫的最好选择。

摘要： 目前国内的狂犬病灭活苗尚未批准，但有4种狂犬病灭活苗已获批进行临床试验，并上报注册。最近，启荣良博士通过研究报道，以犬2型腺病毒为载体的重组狂犬病疫苗能够刺激动物产生有效的免疫应答，产生有效的中和抗体水平，足以抵抗致死剂量狂犬病病毒的攻击。也许再过几年的临床试验，狂犬病基因重组疫苗将是动物狂犬病免疫的最好选择。

摘要： 本发明提供的一种将单链抗体库重排为全长抗体库的方法，将单链抗体模板、引物序列组、连接片段在乳液PCR条件下进行两阶段PCR扩增反应。本发明的方法能够简化操作过程，有效维持轻重链的原始配对以及原始库的多样性特征。

摘要： 本发明涉及新型抗体筛选方法，该方法包括抗体库构建步骤：构建可感染病毒颗粒型抗体重链库和可感染病毒颗粒型抗体轻链库；第一筛选步骤：利用可感染病毒颗粒型抗体重链库和可感染病毒颗粒型抗体轻链库感染动物细胞，采用特异性抗原筛选被感染的、具有特异性抗体表达能力的动物细胞，获得阳性细胞株；第二筛选步骤：从阳性细胞株获取特异性抗体的重链可变区cDNA序列和轻链可变区cDNA序列，拼接引入特异性抗体的轻链信号肽序列，连接插入表达载体，构建特异性抗体的表达细胞株，以表达制备特异性抗体。本发明的筛选方法工艺简单高效、切实可行；筛选获得的基因工程抗体具有高特异性和高亲和性。

摘要： 本发明公开了一种构建高度多样性的大容量天然人源Fab噬菌体抗体库的方法，采用DNA重组技术从15位健康志愿者外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链和重链可变区基因，分别插入噬菌体载体PFK-1，PFL-6相应的位置，建立高容量、高多样性的天然人源Fab噬菌体抗体库，该方法建立的kappa链Fab抗体库容量为2.85×108，lambda链Fab抗体库容量为2.9×108，符合大容量体抗体库的标准，且包含几乎覆盖人抗体的全部轻链和重链可变区基因，具有高度的多样性。该抗体库主要用来高通量筛选临床治疗用的低抗原性和高亲和性人源抗体。使用该抗体库，筛选出一株抗CD6的单克隆抗体。

摘要： 本发明公开了一种从ScFv噬菌体抗体库中以THY‑1/CD90为靶点筛选出的全人源拮抗抗体，该全人源拮抗抗体为单链抗体，全人源拮抗抗体重链DNA序列如SEQ ID NO:1所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO:2所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。上述技术方案，从人ScFv噬菌体抗体库中筛选以THY‑1/CD90为靶点的全人源拮抗抗体，并分别测定其DNA序列和氨基酸序列，通过该方法获得的全人源拮抗抗体具有靶向THY‑1/CD90的特异性。这样产生的抗体能够克服杂交瘤技术生产抗体的缺点，还能实现高通量、快速筛选抗体的目的，且价格低廉。

摘要： 本申请涉及抗体库构建技术领域，尤其涉及一种半合成纳米抗体库构建方法和纳米抗体库，所述方法包括：以CDR1、CDR2和CDR3的cDNA为模板，进行第一扩增，分别得到CDR1、CDR2和CDR3的碱基序列；将FR1、FR2、FR3和FR4的核苷酸序列与所述CDR1、所述CDR2和所述CDR3的碱基序列连接，并进行第二扩增，得到目的基因片段；将目的基因片段与第一载体连接，得到第二载体；将所述第二载体进行培养后筛选，得到含有纳米抗体库的目标载体，其中，所述目的基因片段的碱基序列连接关系包括：FR1‑CDR1‑FR2‑CDR2‑FR3‑CDR3‑FR4。通过FR1、FR2、FR3和FR4的抗体骨架与合成部分CDR区域，构建半合成的纳米抗体库，避免了现有纳米抗体需要通过抗原免疫接种获得，可用抗原直接筛选，快速获得人源纳米抗体，节省了成本和时间。

摘要： 本发明提供的一种将单链抗体库重排为全长抗体库的方法，将单链抗体模板、引物序列组、连接片段在乳液PCR条件下进行两阶段PCR扩增反应。本发明的方法能够简化操作过程，有效维持轻重链的原始配对以及原始库的多样性特征。

摘要： 本发明涉及新型抗体筛选方法，该方法包括抗体库构建步骤：构建可感染病毒颗粒型抗体重链库和可感染病毒颗粒型抗体轻链库；第一筛选步骤：利用可感染病毒颗粒型抗体重链库和可感染病毒颗粒型抗体轻链库感染动物细胞，采用特异性抗原筛选被感染的、具有特异性抗体表达能力的动物细胞，获得阳性细胞株；第二筛选步骤：从阳性细胞株获取特异性抗体的重链可变区cDNA序列和轻链可变区cDNA序列，拼接引入特异性抗体的轻链信号肽序列，连接插入表达载体，构建特异性抗体的表达细胞株，以表达制备特异性抗体。本发明的筛选方法工艺简单高效、切实可行；筛选获得的基因工程抗体具有高特异性和高亲和性。

摘要： 本发明公开了一种构建高度多样性的大容量天然人源Fab噬菌体抗体库的方法，采用DNA重组技术从15位健康志愿者外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链和重链可变区基因，分别插入噬菌体载体PFK-1，PFL-6相应的位置，建立高容量、高多样性的天然人源Fab噬菌体抗体库，该方法建立的kappa链Fab抗体库容量为2.85×108，lambda链Fab抗体库容量为2.9×108，符合大容量体抗体库的标准，且包含几乎覆盖人抗体的全部轻链和重链可变区基因，具有高度的多样性。该抗体库主要用来高通量筛选临床治疗用的低抗原性和高亲和性人源抗体。使用该抗体库，筛选出一株抗CD6的单克隆抗体。

摘要： 本发明提供了一种针对感兴趣的蛋白质制备其抗体的方法，其能够针对所有蛋白质高效、快速、低成本地制备具有高度特异性的抗体，并且能够明确抗体所针对的表位，进而建立起覆盖感兴趣的蛋白质表面的表位库以及针对所有表位的抗体库。这些抗体证明能够用于检测，蛋白功能研究和抗体制药。

摘要： 本发明提供一种Benzonase免疫噬菌体展示抗体库的构建方法，其步骤包括：(1)用Benzonase蛋白免疫兔，提取淋巴细胞的总RNA，逆转录成cDNA；(2)利用PCR技术扩增重链可变区和轻链可变区片段并拼接成scFv基因；(3)构建pCANTAB5E‑scFv重组质粒，电转化至TG1感受态细胞，构建噬菌体单链抗体库；(4)特异性富集噬菌体单链抗体库，从中筛选出阳性克隆。并公开了筛选得到的单克隆抗体及其编码基因。本发明通过噬菌体展示抗体库技术筛选得到高亲和力的兔源单链抗体。本发明的单链抗体可以通过大肠杆菌BL21表达得到，为免疫检测试剂盒的开发提供可选的原料。