MSTN基因

摘要： 【目的】试验旨在分析阳原驴肌生长抑制素(myostatin,MSTN)基因CDS序列特征及其在不同生长发育时期和不同组织中的表达水平。【方法】采集6、12、18、24月龄阳原驴的血样及不同组织样,提取其基因组DNA及不同组织样总RNA。利用PCR技术扩增阳原驴MSTN基因CDS序列,并对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测MSTN基因在阳原驴不同生长发育时期背最长肌、腿肌和18月龄不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏)中的表达水平。【结果】阳原驴MSTN基因CDS序列长1128 bp,编码375个氨基酸,与马的核苷酸序列相似性最高(99.9%),编码蛋白属于不稳定的亲水性蛋白,含有转化生长因子-β(TGF-β)超家族结构域,不含跨膜区,存在1个信号肽区域,包含6个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和34个磷酸化位点,主要分布于细胞核中(39.1%),二级结构中无规则卷曲占比最高(50.93%)。MSTN基因在18月龄阳原驴背最长肌和腿肌中的表达水平显著高于6、12、24月龄(P<0.05);MSTN基因在18月龄阳原驴不同组织中均有表达,其中背最长肌中的表达水平显著高于其他组织(P<0.05),其次是腿肌、肺脏、脾脏、肾脏和肝脏,心脏中的表达水平最低。【结论】试验成功扩增出阳原驴MSTN基因CDS序列,MSTN基因在阳原驴不同生长发育时期背最长肌和腿肌中的表达水平均以18月龄最高,且在18月龄不同组织中以背最长肌和腿肌中表达水平较高。研究结果为进一步探讨MSTN基因在阳原驴骨骼肌生长发育中的作用机制提供参考。

摘要： 【目的】利用单碱基编辑器在宁乡花猪肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因第2外显子处引入终止密码子,以获得MSTN基因表达沉默的肾成纤维细胞系,为后期培育MSTN碱基编辑猪奠定基础。【方法】首先在MSTN基因的第2外显子处设计1条单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其连接至pMLM3636-puro质粒,形成重组表达载体pMLM3636-puro-MSTN,与含有红色荧光碱基编辑器YE1-BE3-FNLS共转入宁乡花猪肾成纤维细胞中,在红色荧光和嘌呤霉素双筛选条件下,挑取单克隆细胞,测序验证后,分析阳性单克隆细胞的蛋白表达情况。【结果】在MSTN基因第2外显子处发生了碱基定点突变,目标位点的氨基酸序列由色氨酸(TGG)转变成终止密码子(TAA),且G→A突变率为5.5%。Western blotting检测结果表明,试验组10号单克隆细胞的MSTN蛋白表达量与野生型相比降低了60%。【结论】本研究运用单碱基编辑技术在宁乡花猪MSTN基因编码区引入终止密码子,使翻译提前终止,导致蛋白表达量显著降低,为后期MSTN基因碱基编辑猪的生产奠定基础。

摘要： 为了探索伊拉肉兔和美系獭兔MSTN基因多态性,以期为家兔分子选育提供理论依据。试验分别选取了伊拉肉兔与美系獭兔70只,其中公母各35只,采用PCR扩增MSTN基因部分片段并测序,结果:①共发现了4个SNP位点,分别位于MSTN基因序列外显子Ⅰ的111bp处,内含子Ⅰ的234bp处,外显子Ⅱ的338bp处和内含子Ⅱ的34bp处;外显子Ⅲ中则未发现多态位点;内含子多态位点首次发现。② MSTN基因外显子Ⅰ的SNP位点发生C—T的转换,有CC、CT和TT 3种基因型,CC为优势基因型,且基因型频率分布在伊拉肉兔群体中不符合hardy-weinberg平衡外(P0.05)。④ 4个SNP位点在伊拉肉兔和美系獭兔群体中均表现为中度多态(0.25

摘要： 【目的】对藏羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆和生物信息学分析,检测其在藏羊不同组织中的表达,为探究MSTN基因在藏羊中的生物学功能提供参考。【方法】以藏羊背最长肌组织cDNA为模板,克隆藏羊MSTN基因完整CDS区序列并测序,用SeqMan程序对测序结果进行拼接,并用BLAST在线程序对组装后的序列进行分析鉴定。用生物信息学软件进行相似性比对、系统进化树构建及生物信息学分析,用实时荧光定量PCR检测MSTN基因在藏羊不同组织中的表达量。【结果】藏羊MSTN基因CDS全长为1128 bp,编码375个氨基酸。藏羊MSTN基因氨基酸序列与绵羊、牦牛、牛、猪、恒河猴、人、黑猩猩、犬、鸡及斑马的相似性依次为100.0%、93.4%、93.4%、95.2%、94.4%、94.2%、94.4%、93.1%、87.8%和87.5%;系统进化树分析结果表明,藏羊与绵羊的亲缘关系最近,与斑马和鸡的亲缘关系最远。藏羊MSTN蛋白属于亲水性分泌蛋白,且具有不稳定性,不含跨膜结构,含1个信号肽,存在31个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化修饰位点,主要分布在线粒体和细胞质中;MSTN蛋白二级结构以无规卷曲为主,其次是α-螺旋、延伸链和β-转角;三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,MSTN基因在藏羊不同组织中均有表达,其中在臂三头肌和半腱肌的表达量显著高于肺脏、下丘脑、心脏、肝脏、十二指肠、瘤胃和肾脏(P<0.05)。【结论】成功克隆了藏羊MSTN基因;该基因在藏羊肌肉中的表达量高于内脏组织。该结果为进一步研究MSTN基因对藏羊肌肉生长发育的调控机制奠定了基础。

摘要： 构建肉牛MSTN基因的miRNA特异性干扰载体,并在肉牛骨骼肌卫星细胞中验证其有效性。设计4对肉牛MSTN基因特异性miRNA寡聚单链DNA序列,分别克隆在pcDNA TM 6.2-GW/EmGFPmiR上,构建MSTN基因miRNA的干扰载体,转染肉牛骨骼肌卫星细胞,实时荧光定量PCR及Western blot分别用于检测MSTN基因mRNA及蛋白表达量,结果显示,成功构建了4个miRNA干扰载体miR-MSTN-1、miR-MSTN-2、miR-MSTN-3及miR-MSTN-4。4个载体均能有效下调MSTN mRNA及蛋白的表达,其中miR-MSTN-4的干扰效果最好。说明成功构建针对肉牛MSTN基因的miRNA特异性有效干扰载体,为通过MSTN基因的miRNA干扰生产高产肉性能肉牛的研究奠定了基础。

摘要： 为探究MSTN基因g+6723G>A对绵羊胴体相关性状的影响。本文以Texel×Altay杂交进行MSTN基因的导入,经繁殖后的横交F2代羊为实验群体,对208只F2代羔羊体重、体尺及胴体性状指标进行测量和关联分析。横交F2代羊MSTN基因3’UTR检测出3种基因型,两个等位基因。其基因型频率以AG型最高,G为优势等位基因;分析发现,不同基因型中AA基因型的体重、胴体重、左带臀腿重量显著高于GA与GG基因型(P0.05),在不同基因型间AA与GG基因型出生重、眼肌长、臀宽差异显著(P0.05)。本研究结果表明,MSTN基因g+6723G>A位点对绵羊的生长性状有影响,该位点可作为绵羊生长发育的候选遗传标记,为绵羊选种选育提供重要参考。

摘要： 为解析肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因在黄条鰤(Seriolaaureovittata)生长发育过程中作用机制.本研究采用cDNA末端快速扩增法,克隆了黄条鰤MSTN基因的全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对MSTN mRNA在黄条鰤不同组织、胚胎发育过程以及仔稚幼鱼发育过程中的差异表达特征进行了研究.序列分析结果显示,MSTN基因全长cDNA为1828 bp,开放阅读框为1131 bp,编码了376个氨基酸.RT-qPCR分析表明,在检测的脑、垂体、肝脏、肌肉、脾脏、肾脏、鳃、心脏、胃、肠、头肾组织中MSTN mRNA均有表达,其在肌肉中表达量最高(P<0.05).MSTN mRNA在胚体下包2/3时期至孵化期表达量显著升高,且在孵化期达到峰值(P<0.05).MSTN mRNA在孵化后3天前表达量显著升高(P<0.05),在第20天降低至较低水平,25天后表达量再次显著升高,在第30天达到峰值(P<0.05).研究结果首次揭示了MSTN基因在黄条鰤的胚胎及早期生长发育过程中发挥着重要作用,本研究为开展黄条鰤繁养殖、育种提供了理论参考.

摘要： 为筛选刀鲚(Coilia ectenes)生长性状遗传改良的分子遗传标记,基于现有刀鲚转录组数据,利用基因克隆技术获得养殖刀鲚肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的全长序列,采用PCR产物直接测序和SNaPshot技术分别进行基因多态性的筛选和分型,并将不同基因型与刀鲚的生长性状(体长、体高和体质量)进行关联分析.结果显示,养殖刀鲚MSTN基因的DNA序列主要由2个内含子和3个外显子组成,经SNP位点筛选,仅在第1内含子上筛选到2个颠换突变位点(g.564G>T和g.755G>T)和1个转换突变位点(g.786C>T);将3个SNP位点与生长性状进行关联分析发现,SNP位点g.786C>T与刀鲚的体长、体高和体质量呈显著性负相关,具有TT基因型个体的体长、体高和体质量显著低于CC型和CT型(PT和g.755G>T的不同基因型仅与刀鲚的体高具有一定程度的相关性;3个SNP位点对养殖刀鲚的群体遗传分析显示,刀鲚养殖群体的观测杂合度(HO)、期望杂合度(HE)和多态信息含量(PIC)分别为0.280～0.480、0.332～0.455和0.277～0.351,3个SNP位点均属于中度多态(0.25T有望作为剔除劣质刀鲚繁育亲本的候选分子标记.

摘要： 试验旨在研究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性及其对东佛里生羊生长性状的影响.从324只东佛里生羊全血中提取DNA,对MSTN基因外显子序列和非翻译区(untranslated region,UTR)序列进行PCR扩增,采用一代测序技术鉴定单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,分析不同位点的遗传多态性,并将不同基因型与东佛里生羊的生长性状进行关联分析.结果 显示,在东佛里生羊MSTN基因外显子中未检测到突变;在3'-UTR区的272 bp处存在G→A单碱基突变,该位点只检测到AG和AA基因型,且AA基因型频率高于AG基因型;在5'-UTR区的176 bp处存在C→A突变,该位点只检测到CC和AC基因型,且CC基因型频率高于AC基因型.遗传多样性参数分析结果表明,东佛里生羊群体MSTN基因3'-UTR-272和5'-UTR-176位点的纯合度分别为0.827和0.887,杂合度分别为0.173和0.113,2个位点的多态性均较低(PIC＜0.25),其群体基因型分布均符合哈代-温伯格平衡(P＞0.05).关联分析发现,3'-UTR-272位点AG基因型体斜长显著高于AA基因型(P＜0.05),5'-UTR-176位点CC基因型胸围显著高于AC基因型(P＜0.05),其余指标均无显著差异(P＞0.05).综上,东佛里生羊MSTN基因3'-UTR和5'-UTR突变位点可作为其目标性状选育的分子标记.

摘要： 肌肉生长抑制素(MSTN)是骨骼肌发育的主要调控因子,为获得新西兰白兔MSTN基因序列及其表达规律,试验通过RT-PCR技术从新西兰白兔腿肌组织中扩增并克隆得到MSTN基因序列,利用在线网站对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR技术检测MSTN基因在新西兰白兔同一时期不同组织及不同时期腿肌组织中的表达量.结果显示,新西兰白兔MSTN基因CDS区序列长1 128 bp,编码375个氨基酸,其核苷酸序列与GenBank上公布的人、猪、马、小鼠、犬、牛和鸡的核苷酸序列相似性分别为95.9％、94.9％、94.9％、91.7％、91.5％、91.3％及84.2％.新西兰白兔MSTN蛋白属于酸性、亲水性分泌蛋白,且具有不稳定性,不含跨膜结构,含有1个信号肽,主要分布在内质网和线粒体中.MSTN蛋白二级结构和三级结构预测结果一致,以无规则卷曲为主,其次是α-螺旋、延伸链,为混合型蛋白.蛋白质互作关系预测发现,MSTN蛋白与PAX7、MYOG、IGF1、FST、Smad3及Smad2等与肌肉生长发育有关的蛋白之间存在相互作用.不同组织表达分析结果表明,新西兰白兔MSTN基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腿肌、子宫和胃中均有表达,在腿肌中表达量最高,极显著高于其他组织(P＜0.01),其次是肾脏,在肝脏中的表达量最低.不同时期腿肌组织中的表达量分析结果显示,新西兰白兔MSTN基因在180日龄腿肌组织中的表达量显著高于90和240日龄(P＜0.05).研究结果为深入探讨MSTN基因对家兔肌肉生长发育的调控机制奠定了基础.

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： MSTN是肌肉生长发育的一个重要的负调控因子,已有研究发现MSTN基因持续低表达或者敲除后在提高肌肉量的同时也和难产率、流产率及胎儿死亡率高有很高的关联性.本研究中,设计了一对小鼠MSTN shRNA,验证其效率后,构建了整合型四环素诱导表达载体pSingle-tTS-MSTNshRNA,细胞水平验证其诱导活性剂表达活性后,利用显微注射法制备一批转基因小鼠.分子生物学检测结果表明，和正常小鼠组及未经诱导组相比，转基因小鼠MSTNshRNA诱导表达后，P21表达显著上调(1±0.06&0.85±0.09&0.57±0.25)，CDK2表达显著降低(1±0.24&0.73±0.19&1.3 7±0.37)，同时下调成肌分化因子MyoD的表达(1±0.14&0.73±0.23&1.37±0.24)，说明转基因小鼠骨骼肌细胞的增殖和分化受到明显的调控。本研究说明了成功制备了MSTN shRNA可控表达转基因小鼠，证明了MSTN表达在出生后调控可以实现肌肉量增加的同时不会对转基因小鼠自身有不良影响。为将可控表达的MSTN基因应用到基因工程育种、药物治疗肌肉萎缩病等方面奠定技术基础。

摘要： 本发明公开了检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法，属于基因工程以及遗传育种技术领域。与传统的基于4P‑ARMS‑PCR、PCR‑RFLP、PCR‑SSCP以及Sanger测序检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法相比，本发明的方法基于特异性引物对以及高分辨率熔解曲线分析，这使得本发明的方法仅需通过一次PCR，无需酶切或者测序等手段，即可将绵羊MSTN基因g.+6723位点的三种基因型AA、AG和GG进行分型，检测效率极高且操作简便。

摘要： 本发明涉及CRISPR‑Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，其是根据羊的MSTN基因序列，构建基于CRISPR‑Cas9系统的gRNA表达载体，并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的供体质粒，然后将优化的CRISPR‑Cas9载体、上述构建的gRNA表达载体和线性化的供体质粒共同转入羊的成纤维细胞中，获得羊MSTN基因敲除且定点整合外源基因的细胞。本发明构建的CRISPR‑Cas9介导的打靶载体为羊MSTN基因的敲除和外源基因的定点整合提供了一种简便快速安全的途径，大大提高了转基因细胞系的筛选效率。该方法实现了不添加任何筛选标记即可筛选定点整合外源基因细胞系，大大提高了转基因动物的安全性，对羊的遗传育种具有重要价值。

摘要： 本发明公开了一种“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪的制备方法。本发明提供的方法，为对目的猪基因组的MSTN基因外显子3中的靶点区域进行基因组编辑，使外显子3提前形成终止密码子而终止表达，得到“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪。本发明的方法制备的“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪相对于其它突变类型(不形成移码突变或不形成提前终止密码子)的基因编辑而言，可以提前形成终止密码子，对于MSTN基因的修饰更为有效。

摘要： 本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法。所述制备方法包括：设计sgRNA寡聚核苷酸链；将sgRNA寡聚核苷酸链通过程序性退火得到含黏性末端的退火后的sgRNA双链；将退火后的sgRNA双链与酶切处理后的PX459‑puro载体连接得到PX459‑puro‑sgRNA质粒。本发明提供的质粒的制备方法简单有效，敲除MSTN基因的方法则可以有效敲除MSTN基因，提高桃源黑猪仔猪的生长速率。

摘要： 本发明公开的两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制，其中1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列；2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子，且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成；3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后，分别连接到pLL3.7慢病毒干扰载体上，构建了2个慢病毒RNA干扰质粒(MSTN-shRNA)；4)通过荧光定量PCR及Western b1ot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达，在mRNA水平上抑制效率可达58％以上，而对MSTN蛋白的抑制可达80％以上；5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。

摘要： 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。

摘要： 利用Crispr/Cas9技术制备MyoG基因敲入和MSTN基因敲除的细胞克隆，属于基因工程技术领域，其特征在于：细胞克隆被分离纯化且经过2％马血清诱导分化后可以形成肌纤维；该骨骼肌卫星细胞具有融合为肌管的能力；MSTN基因敲除载体靶位点已成功连接，未发生碱基突变；实验组细胞经分化能够形成一定数目的肌管，表明干扰MyoG基因后，细胞依然能够分化成为肌管，但总体肌管融合率降低，形态和数目较对照组有极显著差异。

摘要： 本发明公开了检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法，属于基因工程以及遗传育种技术领域。与传统的基于4P‑ARMS‑PCR、PCR‑RFLP、PCR‑SSCP以及Sanger测序检测绵羊MSTN基因g.+6723位点基因型的方法相比，本发明的方法基于特异性引物对以及高分辨率熔解曲线分析，这使得本发明的方法仅需通过一次PCR，无需酶切或者测序等手段，即可将绵羊MSTN基因g.+6723位点的三种基因型AA、AG和GG进行分型，检测效率极高且操作简便。

摘要： 本发明涉及CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，其是根据羊的MSTN基因序列，构建基于CRISPER-Cas9系统的gRNA表达载体，并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的供体质粒，然后将优化的CRISPER-Cas9载体、上述构建的gRNA表达载体和线性化的供体质粒共同转入羊的成纤维细胞中，获得羊MSTN基因敲除且定点整合外源基因的细胞。本发明构建的CRISPER-Cas9介导的打靶载体为羊MSTN基因的敲除和外源基因的定点整合提供了一种简便快速安全的途径，大大提高了转基因细胞系的筛选效率。该方法实现了不添加任何筛选标记即可筛选定点整合外源基因细胞系，大大提高了转基因动物的安全性，对羊的遗传育种具有重要价值。

摘要： 本发明公开了一种“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪的制备方法。本发明提供的方法，为对目的猪基因组的MSTN基因外显子3中的靶点区域进行基因组编辑，使外显子3提前形成终止密码子而终止表达，得到“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪。本发明的方法制备的“仿比利时蓝牛”MSTN基因型的基因编辑猪相对于其它突变类型(不形成移码突变或不形成提前终止密码子)的基因编辑而言，可以提前形成终止密码子，对于MSTN基因的修饰更为有效。