摘要:
目的:建立pDCs的体外培养方法.rn 方法:采集健康产妇脐带血40mL,分离脐带血单个核细胞,用含rhFlt3-L 100ng/ml、IL-3 10ng/mL的RPMI1640完全培养基连续培养7d,每隔1天半量换液.第8天加入2μg/mL的CpG ODN,24h后收集细胞行流式检测,同时检测pDC培养上清IFN-α水平检测.在培养细胞的第1、3、5、7、8天,用倒置相差显微镜观察培养孔中的pDCs形态特征变化.rn 结果:脐带血单个核细胞培养2h后可见圆形扁平贴壁细胞布满视野,24 h后细胞体积所有增大,圆形,透亮,并可见散在的小集落形成.培养第3-4天,细胞体积较前继续增大,多数为圆形,部分细胞表面可见小的突起,并可见少量梭形、蝌蚪状、星形或其他不规则形的细胞,培养液中集落较前明显增多、增大.培养第5-8天,集落数量及集落内细胞数逐渐减少,而培养液中圆形或具有小突起的悬浮细胞逐渐增多.细胞流氏检测显示:在培养过程中,pDCs比例不断变化,其中pDCs在培养开始时仅占脐带血单个核细胞总数的1.08%,第4天升至5.32%,第8天时达到高峰,为19.8%.培养第8天,pDC培养上清进行IFN-α水平达11302±1745.31 pg/mL.rn 结论:以人CBMC为培养初始细胞,利用rh Flt3-L+IL-3联合体外诱导,可成功体外诱导出pDCs.