体外扩增

摘要： 造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)位于造血系统的顶端,是造血系统中唯一具有多能性和自我更新能力的细胞,可以分化为各种功能的血细胞,维持血液系统的建立和动态平衡,是目前研究最为透彻、临床应用最为成熟的成体干细胞。造血干细胞的这些重要特性,使得基于造血干细胞在治病机制研究和临床应用中的研究取得了很大进展。以造血干细胞为基础的再生医学治疗是目前治疗恶性血液病和遗传病的首选方法,如造血干细胞治疗犬白细胞黏附缺陷综合征、犬遗传性贫血、犬淋巴瘤、犬白细胞减少症、犬X连锁严重联合免疫缺陷病等,但由于白细胞抗原匹配的供体稀缺、可获得的造血干细胞数量有限等原因,无法满足临床需求,因此,如何通过体外培养获得满足临床需要的造血干细胞成为近年来学者们研究的热点问题。作者参照现有研究成果对造血干细胞的来源和体外分离培养、治病机制进行系统的描述,并对造血干细胞移植治疗遗传性溶血性贫血、白细胞黏附缺陷综合征、淋巴瘤、白细胞减少症、X连锁严重联合免疫缺陷病的临床研究进行综述,以期为今后将造血干细胞广泛应用于临床治疗提供参考依据。

摘要： 目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖曲线,观察NK效应细胞按效靶比1:1、5:1与10:1对肿瘤细胞的杀伤作用。结果培养14 d的脐血单个核细胞,细胞总数扩增294倍,其中NK细胞扩增5580倍。NK细胞CD3^(-)CD56^(+)阳性率为97.93%,与杀伤功能相关的重要分子CD16、NKG2D、NKp30、NKp44的表达阳性率均在95%以上。对A549肺癌细胞株作用6 h的杀伤活性,在1:1~10:1效靶比范围内,随着效靶比增加,杀伤活性从(78.16±2.41)%逐渐增强到(95.71±3.21)%;并且在效靶比1:1的情况下,随着作用时间从6 h延长到24 h,杀伤活性也从(78.16±2.41)%逐渐增强到(96.33±2.15)%。结论建立了无需分选细胞、无需滋养层细胞、操作简单、通用性强的脐血NK细胞培养方法,获得的NK细胞纯度高,对肿瘤细胞的杀伤作用强。

摘要： 造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)体外扩增过程中,HSPCs的命运取决于HSPCs的对称或不对称分裂,而HSPCs分裂模式的选择与细胞因子有关。为此,以脐带血CD34^(+)细胞为研究对象,采用SCF+TPO+FL(STF)、SCF+IL-3+IL-6(S36)和SCF+TPO+FL+IL-6(STF6)三种细胞因子组合进行体外扩增,分析了CD34^(+)细胞扩增倍数、扩增后CD34^(+)细胞的集落形成能力等HSPCs扩增特性;并以CD34^(+)CD48-细胞的含量、Numb在子细胞中的分布以及numb和musashi-2的基因表达水平为评价指标,多角度评价细胞因子组合对HSPCs的分裂模式的影响。结果发现,与S36相比,STF和STF6均能够通过显著增加HSPCs自我更新的对称分裂比例提高HSPCs的体外扩增效果和集落形成能力。该研究结果可为HSPCs体外扩增过程的优化提供技术支持。

摘要： 疫情防控过程中,诊断试剂起到了至关重要的作用。诊断试剂领域资深专家、博仁安康医疗CEO兼研发总监赖演媚,带领团队研发的产品,使用了一种“巢式共扩增结合荧光定量PCR的创新技术”,对病毒RNA进行体外扩增检测,以实现对COIVD-19病毒核酸的定量检测。

摘要： 脐血移植(cord blood transplantation,CBT)已广泛地应用于儿童及成人恶性及非恶性血液病的治疗.与其他来源的造血干/祖细胞移植相比,行CBT后造血系统及免疫系统重建较缓慢且存在一定的植入失败率,从而增加了患者感染等导致的移植相关死亡率.因此,如何促进脐血造血干/祖细胞的植入是CBT多年来研究的热点.该文就近年来在促进脐血造血干/祖细胞植入策略的研究进展方面作一综述.

摘要： 近年来,干细胞在临床应用方面愈加广泛,但人体内的造血干细胞比例和数量极低,无法满足临床需求.本实验以建立体外扩增人CD34+造血干/前体细胞的培养体系为研究目的,通过收集临床G-CSF动员得到的外周血,利用Ficoll获得单个核细胞(PBMC),再通过磁珠分选得到CD34+造血干/前体细胞(HSPC);培养过程中调整培养基中细胞因子浓度,得到在FLT3L 100ng/ml,SCF 30 ng/ml,IL-320 ng/ml,IL-615ng/ml条件下,基质细胞存在时,造血干细胞扩增速度增加,可作为体外扩增培养CD34+造血干细胞的培养基成分.

摘要： 本综述的目的是为了充分认识和理解γδ T细胞在肿瘤微环境中的作用机制以及在肿瘤免疫治疗中的临床研究意义。γδ T细胞是构成MHC非限制性的先天性T细胞群体,在先天免疫和适应性免疫之间架起桥梁,在抗肿瘤免疫反应中发挥作用。γδ T细胞可以分泌大量的细胞因子,对多种癌细胞发挥细胞毒性。γδ T细胞在肿瘤的免疫监视作用中表现突出,已经成为癌症免疫治疗非常有吸引力的效应细胞。γδ T细胞主要通过分泌促凋亡分子和炎性细胞因子或通过TCR依赖性途径介导抗肿瘤治疗。近些年,γδ T细胞的临床研究数据表明,γδ T细胞免疫治疗具有良好的耐受性和有效性。但是,γδ T细胞在免疫治疗研究中仍存在着一些不足,甚至还发现其有促肿瘤的免疫抑制作用。γδ T细胞的未来研究应集中在体外扩增方法的稳定性改善方面,同时,需要更多的研究来探索γδ T细胞在促进或阻止肿瘤生长之间的平衡,以及在肿瘤微环境中所发挥的作用。

摘要： 近年来,干细胞在临床应用方面愈加广泛,但人体内的造血干细胞比例和数量极低,无法满足临床需求。本实验以建立体外扩增人CD34^(+)造血干/前体细胞的培养体系为研究目的,通过收集临床G-CSF动员得到的外周血,利用Ficoll获得单个核细胞(PBMC),再通过磁珠分选得到CD34^(+)造血干/前体细胞(HSPC);培养过程中调整培养基中细胞因子浓度,得到在FLT3L 100ng/ml,SCF 30 ng/ml,IL-320 ng/ml,IL-615ng/ml条件下,基质细胞存在时,造血干细胞扩增速度增加,可作为体外扩增培养CD34^(+)造血干细胞的培养基成分。

摘要： 自然杀伤细胞(Natural killer cells,NK)是治疗恶性肿瘤的一种有效的免疫治疗方法.NK细胞疗法是通过分离自体或异体免疫效应细胞,经过体外激活和扩增后回输到患者体内,达到杀伤肿瘤和激发机体抗肿瘤免疫反应的目的.NK细胞临床免疫治疗的前提是对其生物学特征有充分的认识,并且在体外扩增中得到足够数量NK细胞.为此,本文将对NK细胞生物学特征及体外扩增技术研究进展进行总结阐述.

摘要： 悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响.为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养.结果显示,当海藻酸钠质量浓度达到25 mg·mL-1时,磁性搅拌珠的力学性能最佳;用于NK-92细胞扩增时,在保证细胞活性的同时,总细胞扩增倍数以及扩增后的细胞杀伤活性分别可达到(72.63±7.80)倍和(85.57±3.69)％,显著高于T 25培养瓶静态培养时的(22.41±1.46)倍(p<0.05)和(70.53±1.72)％(p<0.05).研究结果为悬浮细胞动态培养设备的设计提供了新的思路,为免疫细胞的体外扩增提供了技术支持.

摘要： 本研究所建立的NK细胞体外扩增方法具有细胞生长速度快、数量多、纯度高、对肿瘤细胞的杀伤力强等特点。供者来源的50ml外周血分离得到的单个核细胞，经体外培养16-21天后，CD3-CD56+NK细胞数量、纯度及活率等均可满足临床治疗的需要，NK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性，同时不存在细菌、真菌、支原体及病毒等的污染，具有很好的临床应用前景。

摘要： 目的:探索非牙源性上皮干细胞体外长期扩增的上皮细胞的培养方法,为将来进行细胞重组牙再生提供种子细胞来源.rn 方法:获取临床手术得到的正常牙龈组织，剪成1cm×1cm大小的组织块，4mg/mlDiseaseⅡ 37°C消化约20min，体视镜下用分离上皮和间充质，将上皮置于0.25%胰蛋白酶中，37°C消化约15min,终止消化，吹打成单细胞，离心弃上清后，改良上皮培养基重悬细胞，接种于含有3T3伺养层细胞(已经5μg/m(丝裂霉素C处理3小时)的培养皿共同培养，上皮和饲养层细胞的接种比为1:5-10，在37°C含有5% C02的培养箱培养。改良培养基的成分:F培养基(DMfD/F12培养基、5%FBS. 5mg/ml胰岛素、5mg/m(转铁蛋白、2×10-10M三碘甲状腺氨酸、1×10-10M霍乱毒素、0.5mg/ml氢化可的松和0.1mg/mt表皮生长因子)+ROCK抑制剂Y27632(10μM)+添加青霉素(1000unitjml)+链霉素(1mg/ml),当细胞长满后，胰蛋白酶差数消化上皮细胞进行传代继续培养.利用倒置显微镜观察细胞生长情况，绘制细胞生长曲线，CCK-8法观察细胞增殖特征，免疫荧光染色法鉴定细胞。rn 结果:培养3天后原代上皮细胞呈立方形或多角形形成多个克隆。细胞生长迅速，5天后多个克隆融合，并呈铺路石样排列。上皮细胞可连续传代。传代的细胞经3-5天可达到80%-90%融合，上皮细胞仍保持铺路石样排列，上皮细胞周围的饲养层细胞被挤成条索状并逐渐减少。细胞生长曲线和CCK-8法显示细胞生长呈指数扩增。免疫荧光染色显示上皮细胞CK14和LGRS表达阳性.连续IO代传代培养表明细胞依旧保持良好的生长状态，表面杨己无明显改变。rn 结论:采用改良培养基培养非牙源性上皮细胞，可以有效改善上皮细胞的贴壁速度，ROCK抑制剂Y27632可以促进上皮的生长，连续传代培养表明上皮细胞形态和干性没有发生改变。该改良上皮培养法可潜在用于细胞重组牙再生的种子细胞的大量体外扩增.

摘要： 生长刺激因子体外扩增造血干细胞(HSC)可以一定程度上获得HSC数量上的增加，但是传统的HSC体外扩增培养体系却使得HSC-部分重要生理功能丢失，如长期植入能力以及各系列血细胞重建能力。而HSC的衰老和HSC的生理功能密切相关。mTORC1是近期研究中发现的控制细胞生长与衰老平衡的重要通路之一。在本研究中我们试图探讨mTORC1在小鼠造血干细胞体外扩增过程中对造血干细胞衰老和对造血干细胞干性的影响及其机制。

摘要： 造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)作为成体干细胞的一种,具有高度的自我更新能力和多向分化能力.目前,造血干细胞移植已广泛应用于恶性血液病、遗传性疾病、免疫缺陷病和某些实体瘤治疗,并取得较好疗效.与骨髓和动员外周血相比,脐血作为HSCs的来源具有如下优势:(1)采集方便,受病毒污染几率小;(2) HSCs 含量丰富,原始干/祖细胞比例高,增殖力强,易植活;(3)免疫排斥活性低,移植物抗宿主病(GVHD)发生率较低;(4)端粒较长,端粒酶活性较高,移植后寿命更长,可以更持久地维持造血机能;(5)对供体无伤害.但由于一份脐血中可用的干细胞数量有限,无法满足治疗的需要.因此,需要通过体外扩增HSCs 来提高可输注的细胞数量.细胞因子对于调控造血干细胞的增殖、分化等起着极为重要的作用.但传统体外培养过程中,细胞因子的添加策略都是依靠经验,并无明确的理论依据,因此需要了解细胞因子在细胞培养过程中对细胞的扩增、分化等产生的影响,从而为优化体外培养过程中细胞因子添加策略等提供理论支持.干细胞因子(stem cell factor,SCF)是一种作用于最早期造血干/祖细胞的造血细胞因子,在维持造血细胞存活,促进造血细胞增殖和分化,调控各系造血细胞的生长发育中起着重要作用.本实验旨在研究SCF 对造血干细胞体外扩增的影响,以CD34+细胞为起始细胞,采用无血清培养基,添加不同剂量的SCF,分别考察(1)使用SCF+TPO+FL 细胞因子组合,并改变其中SCF的添加浓度,对CD34+细胞体外扩增的影响;(2)CD34+细胞表面SCF的受体SCFR的表达情况及与细胞扩增的关系;(3)SCF 与CD34+细胞体外扩增的动力学研究。实验结果表明:(1)使用SCF+TPO+FL 细胞因子组合,且SCF 浓度为50 ng*mL-1时,能有效扩增CD34+细胞,培养至14d时,总细胞扩增35.18±15.46 倍,CD34+细胞扩增7.81±1.10 倍,CD34+CD38-细胞扩增3.41±0.46倍,集落形成细胞扩增1.56±1.03 倍;(2)随培养时间增长,SCFR 表达呈下降趋势;(3)细胞对SCF的比消耗速率在4d时达到最大值,之后逐渐下降,在7d～14d 间保持平稳.

摘要： 造血干细胞体外扩增是解决其数量稀少问题的有效策略,然而,由于体外培养环境与体内造血微环境存在很大差异,造血干细胞经过体外扩增后其生理功能可能发生变化,因此有必要研究体外培养环境对造血干细胞生理功能的影响,优化体外培养条件,以确保造血干细胞在扩增的同时保持其正常的生理功能.氧分压(pO2)是造血干细胞体外培养过程的关键参数,在常规培养体系中可达21%,而在骨髓造血微环境中一般只维持在5%左右,氧分压对造血干细胞的体外扩增和扩增后的生理功能具有重要影响.本文以脐血CD34+细胞为对象,采用SCF+IL-3+IL-6 细胞因子组合,在有血清培养体系中培养14天,比较了常氧(21%pO2)和低氧(5% pO2)两种条件下总细胞、CD34+造血干/祖细胞、CD34+CD38-造血干细胞、集落形成细胞(CFC)的体外扩增特性,获得以下结果:(1)体外培养7d 、10d和14d,常氧组总细胞的扩增倍数均显著高于低氧组,说明常氧条件更有利于总细胞的扩增;(2)体外培养7d、10d和14d,低氧组CD34+细胞和CD34+CD38-细胞的比例均显著高于常氧组,说明低氧条件更有利于维持培养物中造血干/祖细胞的含量;(3)在培养14d的过程中,两种培养条件下CD34+细胞和CD34+CD38-细胞均得到一定程度的扩增,常氧组CD34+细胞的扩增倍数始终略高于低氧组,两组CD34+CD38-细胞的扩增倍数相近,没有显著差异;(4)新鲜分离的脐血CD34+细胞集落密度最高,随培养时间的延长,集落密度显著下降.在培养14d的过程中,两种氧分压条件下的集落密度均没有显著差异,常氧组CFC有一定程度的扩增,而低氧组CFC 几乎没有扩增.可见,两种培养条件均能实现造血造血干/祖细胞的体外扩增,但低氧条件更有利于保持扩增后细胞的干/祖细胞特性.

摘要： 目的:研究根吸收不同时期乳牙牙髓干细胞(DDPSCs)的体外扩增与成骨分化能力的不同.rn 方法:根据根吸收长度将乳牙分为3组:S(早期)、M(中期)和F(晚期),从12颗乳切牙中分别分离培养DDPSCs.通过流式细胞仪和免疫荧光鉴定细胞表型,MTT细胞活性实验检测细胞增殖能力,并采用体外成骨诱导检测细胞成骨分化能力.rn 结果:DDPSCs表达间充质细胞表面分子CD146, CD105, CD29和CD90等。M组细胞增殖最快(Dunnett-T3,p＜0.05)。成骨诱导3周以后，各组DDPSCs均有矿化结节形成，茜素红染色并进行半定量分析后发现F组形成钙结节最多(LSD-t,p＜0.05)。rn 结论:本研究发现生理性根吸收过程中DDPSC、分化与增殖能力发生改变，吸收中期增殖较快，吸收晚期成骨分化能力较强。

摘要： 脐带血作为一种重要的干细胞来源，其优点主要包括采集方便，对产妇和供者无害;病原微生物，尤其是CMV的感染率低;实物冻存，可立即使用;免疫反应弱，GVHD发生少且轻等现已逐渐扩展至各种恶性和非恶性疾病的治疗，无血缘和成年病人的应用日益增加。本文就双份脐带血移植、减低预处理强度、脐血干细胞体外扩增4、骨髓腔内输注、辅助细胞的使用等方面对脐带血移植现状进行了阐述。

摘要： 目的：比较两种不同方法诱导的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性。rn 方法：健康人外周血10例，经密度梯度离心获得单个核细胞，运用两种不同的方法诱导CIK细胞，对照组以CD3MAb、干扰素-γ和IL-2为诱导剂制备CIK细胞，实验组另外加入RetroNectin诱导，直接活细胞计数法比较两者的扩增速度，流式细胞仪检测比较两者细胞表型，MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。rn 结果：实验组CIK细胞的扩增速度显著高于对照组，(P0.05)。rn 结论：运用实验组方法诱导CIK细胞扩增速度快，CD3+CD56+百分比以及对肿瘤细胞的杀伤活性得以保持，是一种值得推广运用的培养方法。

摘要： 目的：对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法：以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoR I酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果：Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由C转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸(P)变成谷氨酰胺(Q)。结论：Ddx4基因发现单碱基突变，该突变与B6-Co小鼠EOB表型可能相关，有待于进一步研究。

摘要： 目的：对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法：以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoR I酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果：Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由C转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸(P)变成谷氨酰胺(Q)。结论：Ddx4基因发现单碱基突变，该突变与B6-Co小鼠EOB表型可能相关，有待于进一步研究。

摘要： 本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种人间充质干细胞体外快速扩增用添加剂及扩增方法。本发明添加剂中没食子酸、烟酰胺、丙戊酸、P57抑制剂等相互协同作用，增加人间充质干细胞在细胞发生时发生细胞周期的合成周期（S期）的百分比，以促进细胞快速分裂和增殖，同时保持干细胞多功能分化的潜力；增加人间充质干细胞的端粒酶逆转录酶，以延长端粒还原至的时间，延缓细胞衰老，延长细胞寿命，获得至少2至3倍含量的生长因子。

摘要： 本发明提供了一种Treg扩增激活磁珠制备方法，具体包括以下内容：将CD3抗体和CD28抗体和IL2用磷酸盐缓冲液稀释，配置成缓冲液；计数1μm的羧基葡聚糖磁珠，并将装有磁珠悬液的离心管放置在磁铁上，使用移液器吸去磁珠上清；每108磁珠用1mL配置好的缓冲液重悬；将重悬后的磁珠放置于冰箱中，涡旋混匀，过夜；使用磷酸盐缓冲液和HSA配置终浓度为10％的HSA；第二天从冰箱中取出磁珠，在磁铁上弃取磁珠上清；使用与磁珠上清等量的10％HSA在37°C封闭羧基葡聚糖磁珠其余位点2小时。本方法避免了直接加入CD3/CD28抗体和细胞因子因为混合不均匀导致激活效率差，避免了提前一天预包被培养板的复杂操作。

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基体系及NK细胞体外扩增的方法。本发明利用固化的anti‑CD137和RetroNectin直接培养Ficoll分离的PBMC，采用OK‑432作为生物效应剂，在GM‑CSF、IL‑4、IL‑2、IL‑15、IL‑21共同作用下体外活化和扩增自然杀伤细胞，创建了一种高效的NK细胞体外扩增方法；该方法制备的NK细胞CD3‑CD16+/CD56+细胞表达率高达92.5％以上，经过14天培养，NK细胞可扩增1000～2000倍，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明公开了一种脂肪间充质干细胞体外高效扩增剂、扩增方法。本发明发现，甘氨熊去氧胆酸对ADSCs具有显著的增殖促进作用，呈现一定的剂量依赖效应，而且甘氨熊去氧胆酸不会降低ADSCs的多向分化潜能。因此，甘氨熊去氧胆酸可以用作脂肪间充质干细胞体外高效扩增剂，用于制备脂肪间充质干细胞体外扩增培养基，用于脂肪间充质干细胞体外扩增。

摘要： 本发明公开了一种人骨髓间充质干细胞体外扩增用添加剂，所述添加剂加入至人骨髓间充质干细胞体外扩增基础培养基中使用，由以下成分组成：儿茶素、莽草酸、石杉碱甲、铌酸钾钠、丝素蛋白、bFGF、L‑谷氨酰胺、胰岛素。本发明提供添加剂中的莽草酸、石杉碱甲及铌酸钾钠和丝素蛋白等协同作用，显著提高人骨髓间充质干细胞的体外扩增速度，提高增殖效率，减少细胞老化，通过扩增培养得到的细胞还保持较好的分化潜能。本发明还提供了一种人骨髓间充质干细胞体外扩增方法，在基础培养基中加入本发明的添加剂作为扩增培养基，在短时间内可收获大量人骨髓间充质干细胞，为骨髓间充质干细胞的临床应用提供保障。

摘要： 本发明涉及细胞免疫治疗领域，具体涉及一种体外扩增淋巴细胞的培养体系及扩增方法和应用。所述培养体系包括：白细胞介素21、白细胞介素12和CD80的混合物。采用本发明培养体系扩增的NK细胞，NK细胞纯度高，对肿瘤细胞杀伤力强，在第14天可以将NK细胞扩增约9100倍，达到各种临床适合治疗病症预期疗效应用要求；解决了临床应用培养体系的安全性问题，有效降低NK细胞的应用成本，为NK细胞过继免疫治疗的广谱应用奠定了基础。

摘要： 本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系和脐带造血干细胞体外扩增方法。本发明提供了一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系，包括：G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4。结果表明，在脐带造血干细胞体外扩增培养体系添加G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4可明显提升脐带造血干细胞的体外扩增效率并维持其干性。

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基体系及NK细胞体外扩增的方法。本发明利用固化的anti‑CD137和RetroNectin直接培养Ficoll分离的PBMC，采用OK‑432作为生物效应剂，在GM‑CSF、IL‑4、IL‑2、IL‑15、IL‑21共同作用下体外活化和扩增自然杀伤细胞，创建了一种高效的NK细胞体外扩增方法；该方法制备的NK细胞CD3‑CD16+/CD56+细胞表达率高达92.5％以上，经过14天培养，NK细胞可扩增1000～2000倍，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基及NK细胞体外扩增的方法，所述培养基按体积百分含量包括淋巴细胞无血清培养基100％或RPMI1640培养基1～90％和淋巴细胞无血清培养基10～99％的混合物，以及血清替代物和白介素2；其中，所述血清替代物的浓度为0.5～4g/L，所述白介素2的浓度为50～500μg/mL。本发明的培养基及制备方法能实现NK细胞在短时间内的爆发性增殖，成本低廉且扩增的细胞杀伤性极高，满足三类医疗技术应用的要求和体细胞治疗药物质量控制的要求。

摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，公开了一种NK细胞扩增组合物及体外扩增培养方法本发明通过分离获取外周血单个核细胞，在体外经过含高浓度IL‑2的A组培养液预处理和经过含有CD3、CD52单抗的B组培养液激活后，再使用C组培养液进行自然杀伤细胞体外扩增，最终制备获得足量且高纯度的自然杀伤细胞。使用本发明的方法扩增的NK细胞，在体外可以有效杀伤K562细胞，杀伤效率超过80％，NK细胞扩增倍数高达550倍。