神经元样细胞

摘要： 目的观察丁苯酞在成人脂肪基质细胞(ADSC)分化为神经元样细胞过程中的分化促进及自噬激动作用。方法取成人ADSC,应用1 mmol/L的β-巯基乙醇进行预诱导24 h后,分为β-巯基乙醇组、β-巯基乙醇+丁苯酞组、β-巯基乙醇+雷帕霉素组。其中β-巯基乙醇组加入含5 mmol/L的β-巯基乙醇,β-巯基乙醇+丁苯酞组加入5 mmol/L的β-巯基乙醇和10μmol/L的丁苯酞,β-巯基乙醇+雷帕霉素组加入5 mmol/L的β-巯基乙醇和200μg/L的雷帕霉素。在预诱导、诱导1 h、诱导3 h、诱导5 h、诱导8 h时,采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化,计算细胞分化率。在诱导1 h、诱导5 h时,在透射电镜下观察细胞的超微结构,计数自噬小体和自噬溶酶体数量。在诱导1 h、诱导3 h、诱导5 h、诱导8 h时,采用MTT法检测细胞存活率。在诱导5 h时,采用免疫细胞化学法检测各组细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋-200(NF-200)。在诱导1 h、诱导3 h、诱导5 h、诱导8 h时,采用免疫细胞化学法检测各组细胞中LC3蛋白。结果诱导后的三组细胞形态学变化相似,分化的细胞呈典型的神经元样细胞形态;细胞核体积大而圆,染色浅,其中常染色质多、异染色质较少,部分神经元样细胞的细胞浆可见大量内质网扩张,线粒体出现肿胀、嵴断裂,细胞内出现具有双层膜结构的自噬小体。随着诱导时间的延长,各组细胞分化率、LC3阳性细胞率显著升高(P均<0.05),在诱导5 h时达到峰值;与β-巯基乙醇组相比,β-巯基乙醇+雷帕霉素组、β-巯基乙醇+丁苯酞组细胞分化率、LC3阳性细胞率均显著升高(P均<0.05);与β-巯基乙醇+雷帕霉素组相比,β-巯基乙醇+丁苯酞组在诱导1 h、3 h时细胞分化率、LC3阳性细胞率均显著升高(P均<0.05),在诱导8 h时显著降低(P<0.05)。诱导5 h时各组细胞自噬小体及自噬溶酶体数量均高于诱导1 h时(P均<0.05),β-巯基乙醇+丁苯酞组、β-巯基乙醇+雷帕霉素组细胞自噬小体及自噬溶酶体数量均高于β-巯基乙醇组(P均<0.05)。随着诱导时间的延长,各组细胞存活率均显著下降(P均<0.05);与β-巯基乙醇组相比,β-巯基乙醇+雷帕霉素组、β-巯基乙醇+丁苯酞组细胞存活率均显著升高(P均<0.05);与β-巯基乙醇+雷帕霉素组相比,β-巯基乙醇+丁苯酞组在诱导1 h、5 h、8 h时细胞分化率均显著降低(P均<0.05)。与β-巯基乙醇组相比,β-巯基乙醇+雷帕霉素组、β-巯基乙醇+丁苯酞组NSE、NF-200阳性细胞率均显著升高(P均<0.05);与β-巯基乙醇+雷帕霉素组相比,β-巯基乙醇+丁苯酞组NSE阳性细胞率显著升高(P<0.05)。结论在ADSC诱导分化为神经元样细胞过程中,丁苯酞可促进细胞分化,并通过升高自噬小体和自噬溶酶体数量等自噬激动作用提高了细胞存活率。

摘要： 目的 研究定向诱导为神经元样细胞的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用.方法 取12只SD大鼠,分离纯化BM-MSCs后,将其分成对照组、β-巯基乙醇组、全反式视黄酸组、Transwell小室共培养组,分别诱导7 d,选择诱导分化率最高的细胞用于动物实验.另取90只大鼠,按随机数字表法分为假手术组、模型组、普通细胞组和定向诱导组,采用钳夹法建立大鼠坐骨神经挤压伤模型,最终每组各20只大鼠.普通细胞组和定向诱导组大鼠在坐骨神经损伤处分别注射BM-MSCs或神经元样定向诱导分化的BM-MSCs.假手术组和模型组注射等量生理盐水.比较四组坐骨神经功能指数(SFI)、Bsso Beattie Bresnahan(BBB)评分和肌湿重恢复率,Western blot法检测神经组织脑源性神经营养因子(BDNF)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)和生长关联蛋白43(GAP-43)的表达水平.结果 β-巯基乙醇用于后续动物实验.模型组术后2、4、8、12周SFI低于假手术组,差异均有统计学意义(均P<0.05).定向诱导组术后2、4、8、12周SFI高于模型组、普通细胞组;普通细胞组术后2、4、8、12周SFI高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05).模型组术后2、4、8、12周BBB评分低于假手术组,差异均有统计学意义(均P<0.05).定向诱导组术后8、12周BBB评分高于模型组和普通细胞组;普通细胞组术后8、12周BBB评分高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05).模型组大鼠肌湿重恢复率低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05).定向诱导组肌湿重恢复率高于普通细胞组及模型组;普通细胞组肌湿重恢复率高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05).模型组BDNF、MBP与和GAP-43蛋白表达量低于假手术组,差异均有统计学意义(均P<0.05).定向诱导组BDNF、MBP和GAP-43蛋白表达量高于模型组和普通细胞组;普通细胞组BDNF、MBP与和GAP-43蛋白表达量高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 β-巯基乙醇可定向诱导BM-MSCs向神经元样细胞分化,并且能够获得稳定的神经元细胞.而且定向诱导为神经元样细胞的BM-MSCs对坐骨神经损伤具有明显的神经修复作用.

摘要： 目的 研究定向诱导为神经元样细胞的间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用以及生物力学评价.方法 体外获取纯化的大鼠BM-MSCs,并利用β-巯基乙醇诱导剂将BM-MSCs向神经元样定向分化.将80只SD大鼠分为假手术组、模型组、普通细胞组和定向诱导组.除假手术组外,其余三组用钳夹法建立大鼠坐骨神经挤压伤模型.普通细胞组和定向诱导组大鼠在坐骨神经损伤处分别注射BM-MSCs或神经元样定向诱导分化的BM-MSCs.假手术组和模型组注射等量生理盐水.测定坐骨神经功能指数(SFI),Bsso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分方法评价大鼠运动功能,利用坐骨神经电生理检测和坐骨神经单向拉伸实验对其生物力学进行评价.Western blot法检测神经组织脑源性神经营养因子(BDNF)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)与和生长关联蛋白43(GAP-43)的表达水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠的坐骨神经SFI指数和BBB评分均降低,BDNF、MBP和GAP-43蛋白的表达水平下调,波幅值、运动传导速度值、最大应力、最大应变、弹性限度应力、弹性限度应变亦显著下降(均P<0.05).然而,与模型组相比,普通细胞组和定向诱导组大鼠上述指标均升高,尤其是定向诱导组大鼠上述各项指标改善更明显(均P<0.05).结论 定向诱导为神经元样细胞的BM-MSCs对大鼠坐骨神经损伤具有明显的修复效果.

摘要： 中枢神经元内在再生能力不足是其再生失败的主要因素。以病毒为载体调控关键靶基因表达,提升受损神经元内在再生能力为近年研究中枢神经损伤修复的焦点之一。莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点(Pim-1)为丝/苏氨酸蛋白激酶,是许多细胞因子和生长因子在细胞增殖、存活及凋亡等过程中发挥作用的共同下游分子。小鼠Pim-1与Lnc-Pim1的基因同位于17号染色体,基因序列相似且有重叠,转录方向相反。由小鼠Neuro-2a细胞诱导而来的、具有中枢神经元属性的神经元样细胞(N-2a-N细胞),被广泛应用于研究神经元的分化、突起再生以及信号转导。

摘要： 背景:受损大脑和脊髓的自我修复能力有限, 寻找促进神经干细胞增殖与分化的潜在治疗剂, 对神经系统疾病的干细胞治疗具有重要意义.目的:探讨法舒地尔对原代神经干细胞增殖及分化的影响及其可能机制.方法:体外分离、培养15 d龄胎鼠脑组织获得神经干细胞, 免疫荧光检测细胞中Nestin的表达;以不同浓度 (50, 100, 200μmol/L) 法舒地尔干预神经干细胞24, 48, 72 h, MTT检测细胞增殖率, 流式细胞术检测细胞凋亡率;进一步应用凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂、自噬抑制剂、坏死抑制剂、凋亡诱导剂、铁死亡诱导剂干预神经干细胞, MTT检测细胞增殖率, 生化法检测细胞丙二醛水平;最后, 应用200μmol/L法舒地尔干预神经干细胞10 d, Western blot和免疫荧光检测神经干细胞中Nestin、DCX、MAP-2、GFAP蛋白的表达.结果与结论: (1) 分离培养的原代神经干细胞表达Nestin; (2) 随着法舒地尔浓度升高及作用时间延长, 神经干细胞的增殖率逐渐增高 (P <0.05); (3) 凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂可提高神经干细胞的增殖率 (P <0.05); (4) 法舒地尔可提高凋亡诱导剂和铁死亡诱导剂干预的神经干细胞的增殖率 (P <0.05); (5) 法舒地尔和铁死亡抑制剂均能降低神经干细胞中丙二醛水平, 铁死亡诱导剂则使神经干细胞中丙二醛水平升高 (P <0.05); (6) 经法舒地尔处理后, 神经干细胞中DCX和GFAP蛋白的表达升高, Nestin的表达降低 (P <0.05); (7) 结果表明, 法舒地尔可通过抑制凋亡与铁死亡提高神经干细胞的存活, 并能促进神经干细胞增殖及向神经元样细胞与神经胶质细胞分化.%BACKGROUND: The self-repairing ability of damaged brain and spinal cord is limited. It is important to search for potential therapeutics to promote the proliferation and differentiation of neural stem cells. OBJECTIVE: To investigate the effect of fasudil on the proliferation and differentiation of primary cultured neural stem cells and its potential mechanism. METHODS: Neural stem cells were obtained from the brain tissue of 15-day-old fetal rats in vitro. The expression of Nestin in the cells was detected by immunofluorescence. After treatment with fasudil at different concentrations (50, 100, 200 μmol/L) for 24, 48 and 72 hours, the proliferation rate of neural stem cells was detected by MTT, and the apoptosis rate was detected by flow cytometry. After further treatment with autophagy inhibitor, necrosis inhibitor, apoptosis inducer and ferroptosis inducer, the proliferation rates of neural stem cells were detected by MTT and the levels of malondialdehyde were detected by biochemical method. The expression of Nestin, doublecortin, microtubuleassociated protein and glial fibrillary acidic protein in neural stem cells were detected by western blot and immunofluorescence after treatment with 200 μmol/L fasudil for 10 days. RESULTS AND CONCLUSION: The positive expression of Nestin protein in primary cultured neural stem cells was observed. The proliferation rate of neural stem cells increased gradually with the increase of fasudil concentration as well as with the prolongation of action time (P < 0.05). Both apoptosis inhibitor and ferroptosis inhibitor can increase the proliferation rate of neural stem cells (P < 0.05). Fasudil increased the proliferation rate of neural stem cells treated by apoptosis inducer and ferroptosis inducer (P < 0.05). Fasudil and ferroptosis inhibitors both decreased the level of malondialdehyde in neural stem cells, while ferroptosis inducers increased the level of malondialdehyde in neural stem cells (P < 0.05). After treatment with fasudil, the expression of doublecortin and glial fibrillary acidic protein protein in neural stem cells increased, and the expression of Nestin decreased (P < 0.05). To conclude, fasudil can improve the survival of neural stem cells by inhibiting apoptosis and ferroptosis, and moreover, it can promote the proliferation and differentiation of neural stem cells into neuron-like cells and glial cells.

摘要： 背景:受损大脑和脊髓的自我修复能力有限,寻找促进神经干细胞增殖与分化的潜在治疗剂,对神经系统疾病的干细胞治疗具有重要意义。目的:探讨法舒地尔对原代神经干细胞增殖及分化的影响及其可能机制。方法:体外分离、培养15 d龄胎鼠脑组织获得神经干细胞,免疫荧光检测细胞中Nestin的表达;以不同浓度(50,100,200μmol/L)法舒地尔干预神经干细胞24,48,72 h,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率;进一步应用凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂、自噬抑制剂、坏死抑制剂、凋亡诱导剂、铁死亡诱导剂干预神经干细胞,MTT检测细胞增殖率,生化法检测细胞丙二醛水平;最后,应用200μmol/L法舒地尔干预神经干细胞10 d,Western blot和免疫荧光检测神经干细胞中Nestin、DCX、MAP-2、GFAP蛋白的表达。结果与结论:①分离培养的原代神经干细胞表达Nestin;②随着法舒地尔浓度升高及作用时间延长,神经干细胞的增殖率逐渐增高(P<0.05);③凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂可提高神经干细胞的增殖率(P<0.05);④法舒地尔可提高凋亡诱导剂和铁死亡诱导剂干预的神经干细胞的增殖率(P<0.05);⑤法舒地尔和铁死亡抑制剂均能降低神经干细胞中丙二醛水平,铁死亡诱导剂则使神经干细胞中丙二醛水平升高(P<0.05);⑥经法舒地尔处理后,神经干细胞中DCX和GFAP蛋白的表达升高,Nestin的表达降低(P<0.05);⑦结果表明,法舒地尔可通过抑制凋亡与铁死亡提高神经干细胞的存活,并能促进神经干细胞增殖及向神经元样细胞与神经胶质细胞分化。

摘要： BACKGROUND: The self-repairing ability of damaged brain and spinal cord is limited. It is important to search for potential therapeutics to promote the proliferation and differentiation of neural stem cells. OBJECTIVE: To investigate the effect of fasudil on the proliferation and differentiation of primary cultured neural stem cells and its potential mechanism. METHODS: Neural stem cells were obtained from the brain tissue of 15-day-old fetal rats in vitro. The expression of Nestin in the cells was detected by immunofluorescence. After treatment with fasudil at different concentrations (50, 100, 200 μmol/L) for 24, 48 and 72 hours, the proliferation rate of neural stem cells was detected by MTT, and the apoptosis rate was detected by flow cytometry. After further treatment with autophagy inhibitor, necrosis inhibitor, apoptosis inducer and ferroptosis inducer, the proliferation rates of neural stem cells were detected by MTT and the levels of malondialdehyde were detected by biochemical method. The expression of Nestin, doublecortin, microtubuleassociated protein and glial fibrillary acidic protein in neural stem cells were detected by western blot and immunofluorescence after treatment with 200 μmol/L fasudil for 10 days. RESULTS AND CONCLUSION: The positive expression of Nestin protein in primary cultured neural stem cells was observed. The proliferation rate of neural stem cells increased gradually with the increase of fasudil concentration as well as with the prolongation of action time (P < 0.05). Both apoptosis inhibitor and ferroptosis inhibitor can increase the proliferation rate of neural stem cells (P < 0.05). Fasudil increased the proliferation rate of neural stem cells treated by apoptosis inducer and ferroptosis inducer (P < 0.05). Fasudil and ferroptosis inhibitors both decreased the level of malondialdehyde in neural stem cells, while ferroptosis inducers increased the level of malondialdehyde in neural stem cells (P < 0.05). After treatment with fasudil, the expression of doublecortin and glial fibrillary acidic protein protein in neural stem cells increased, and the expression of Nestin decreased (P < 0.05). To conclude, fasudil can improve the survival of neural stem cells by inhibiting apoptosis and ferroptosis, and moreover, it can promote the proliferation and differentiation of neural stem cells into neuron-like cells and glial cells.%背景:受损大脑和脊髓的自我修复能力有限, 寻找促进神经干细胞增殖与分化的潜在治疗剂, 对神经系统疾病的干细胞治疗具有重要意义.目的:探讨法舒地尔对原代神经干细胞增殖及分化的影响及其可能机制.方法:体外分离、培养15 d龄胎鼠脑组织获得神经干细胞, 免疫荧光检测细胞中Nestin的表达;以不同浓度 (50, 100, 200μmol/L) 法舒地尔干预神经干细胞24, 48, 72 h, MTT检测细胞增殖率, 流式细胞术检测细胞凋亡率;进一步应用凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂、自噬抑制剂、坏死抑制剂、凋亡诱导剂、铁死亡诱导剂干预神经干细胞, MTT检测细胞增殖率, 生化法检测细胞丙二醛水平;最后, 应用200μmol/L法舒地尔干预神经干细胞10 d, Western blot和免疫荧光检测神经干细胞中Nestin、DCX、MAP-2、GFAP蛋白的表达.结果与结论: (1) 分离培养的原代神经干细胞表达Nestin; (2) 随着法舒地尔浓度升高及作用时间延长, 神经干细胞的增殖率逐渐增高 (P <0.05) ; (3) 凋亡抑制剂、铁死亡抑制剂可提高神经干细胞的增殖率 (P <0.05) ; (4) 法舒地尔可提高凋亡诱导剂和铁死亡诱导剂干预的神经干细胞的增殖率 (P <0.05) ; (5) 法舒地尔和铁死亡抑制剂均能降低神经干细胞中丙二醛水平, 铁死亡诱导剂则使神经干细胞中丙二醛水平升高 (P <0.05) ; (6) 经法舒地尔处理后, 神经干细胞中DCX和GFAP蛋白的表达升高, Nestin的表达降低 (P <0.05) ; (7) 结果表明, 法舒地尔可通过抑制凋亡与铁死亡提高神经干细胞的存活, 并能促进神经干细胞增殖及向神经元样细胞与神经胶质细胞分化.

摘要： 目的 在前期成功利用甲钴胺体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞分化的基础上,进一步探讨大鼠脊髓损伤模型中甲钴胺局部注射诱导移植后的大鼠BMSCs向神经元样细胞分化的可行性;并观察对脊髓损伤的修复作用.方法 将40只SD大鼠制备T10节段脊髓横断模型后随机抽样分为A组(模型对照组)、B组(甲钴胺治疗组)、C组(BMSCs移植组)和D组(甲钴胺联合BMSCs移植组),每组10只.于术后1、7、14、21 d采用肢体功能评判标准(BBB评分)、免疫荧光显微镜观测绿色荧光蛋白标记的BM SCs的存活及分布情况,苏木精-伊红染色观察脊髓白质、灰质及细胞间质损伤情况,尼氏(Nissl)染色观察残存神经元状态、分布及再生情况.结果 造模后4组大鼠均出现了严重的双下肢瘫痪,随着时间的推移,双下肢功能无明显恢复,4组大鼠BBB评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05).脊髓组织病理切片显示,A组大鼠脊髓受损严重,细胞结构紊乱,大量炎症细胞浸润,修复程度低且缓慢;B、C组大鼠脊髓受损程度均优于A组;D组大鼠可见组织受损较轻,且修复较快;免疫荧光显微镜下C、D组大鼠均可见带示踪标记的神经元样细胞表达,呈双染色表现,且D组大鼠荧光强度及密度较C组明显;在Nissl染色切片中,D组大鼠尼氏小体再生数量最多.结论 BMSCs移植和甲钴胺治疗对改善脊髓损伤大鼠双下肢运动功能不明显.BMSCs在脊髓组织微环境中能分化为神经元样细胞,甲钴胺能协同BMSCs向神经元样细胞分化.甲钴胺联合BMSCs移植可减轻大鼠脊髓损伤后的病理改变.

摘要： 目的：探讨骨髓源神经祖细胞(BM-NPCs)向神经元诱导分化的能力. 方法：将BM-MSCs获得的第3代BM-NPCs置于神经元细胞培养基中贴壁诱导观察15d.通过细胞免疫荧光技术分析诱导细胞神经元标志物Tuj-1/NF200和神经胶质细胞标志物GFAP/S100的表达情况,用半定量RT-PCR与定量qPCR检测mRNA水平,诱导前后神经干细胞标志物Nestin/NCAM1/CD133基因,神经细胞基因β-Ⅲ-tubulin/NeuN/5-HT/ACHE/GABA和CNPase,以及神经营养因子NGF/BDNF/GDNF基因表达情况.另外,将CM-Dil细胞示踪剂标记后的第3代BM-NPCs与原代皮层神经元细胞共培养15d,利用倒置显微镜和细胞免疫荧光法观察检测神经元标志物Tuj-1表达情况. 结果：BM-NPCs直接贴壁诱导的骨髓源神经细胞,可见较典型的神经样细胞形态,表达部分神经细胞表型Tuj-1(+)/NF200(-)和GFAP(+)/S100(+),以及表达β-Ⅲ-tubulin(+)/NeuN/5-HT(+)/ACHE(+)/GABA(-)和CNPase(++)/NGF(+++)/BDNF(+)/GDNF(+)基因特点.定量基因表达检测发现,BM-NPCs较BM-MSCs高表达NCAM1和CD133神经祖细胞基因,贴壁分化后干细胞基因Nestin、NCAM1、CD133表达明显下降,随着细胞分化成不同的神经样细胞,β-Ⅲ-tubulin/NeuN/5-HT/ACHE基因表达下调,培养后期CNPase表达明显升高,NGF基因水平的显著提高.将CM-Dil标记BM-NPCs与原代皮层神经元细胞共培养,可见BM-NPCs可分化成较多典型神经元样形态特征、Tuj1荧光蛋白呈阳性表达,与正常神经细胞相互连接成网络状生长. 结论：骨髓源性神经元样细胞与完全成熟神经元相比细胞形态相似,但基因表达上仍存在一定差距,BM-NPCs较BM-MSCs更具有向神经细胞分化的能力,BM-NPCs在合适的环境中有能力向功能性神经元分化.

摘要： 探讨在MSCs向神经元样细胞分化过程中,A(HSYA)能否提高BME引起的细胞毒理作用的能力及HSYA的最佳保护剂量.MSCs贴壁后分7组处理,再进行活力检测,凋亡检测,各组细胞的SOD和GSH比活力或相对含量检测,NSE、MAP-2及其基因的表达检测.实验结果表明HSYA能显著提高细胞的相对活力、降低细胞凋亡率、并能维持细胞内较高的SOD/GSH水平,该组各测试数据均可达到Control-1的80％以上;与Control-2相比,经120 mg/L HSYA保护后,分化后的神经元样细胞存活时间明显延长,NSE和MAP-2呈阳性表达,RT-PCR结果表明在3-7h内NSE和MAP-2的mRNA相对含量一直呈上升趋势.

摘要： 目的:探讨氯化镉对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖以及其向神经元样细胞分化的影响,为镉的神经发育毒性研究提供理论依据.rn 方法:运用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞.流式细胞仪检测第3代细胞表面标志抗体(CD44、CD90).MTT法检测不同浓度镉对骨髓间充质干细胞增殖的影响.根据48h半数致死浓度LC5o(以LC50的1/3作为起始浓度,进行2/3倍比稀释),以0.00μmol/L镉浓度为对照组,设4组不同浓度的镉(0.87μmol/L,0.58μmol/L,0.39μmol/L,0.26μmol/L)预处理骨髓间充质干细胞48h,用不含血清的DMEM-F12培养48h后,通过表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合维甲酸诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化,免疫组织化学方法检测微管相关蛋白MAP-2的表达.rn 结果:流式细胞仪检测结果显示,第3代细胞强表达CD44和CD90.MTT检测结果表明0.78μmol/L至200.00μmol/L镉暴露后,随着镉作用时间的增加,骨髓间充质干细胞的存活率逐渐减低;镉作用24h、48h和72h后半数致死浓度分别为6.12μmol/L,2.61 μmol/L,2.19μmol/L,.镉作用48h后,诱导BMSCs向神经细胞分化后,0.39μmol/L至0.87μmol/L镉浓度组细胞MAP-2阳性表达率显著低于对照组.rn 结论:在一定范围内,氯化镉对骨髓间充质干细胞的增殖具有显著的抑制作用,并影响其向神经元样细胞分化;表明镉不仅对干细胞增殖有毒性作用并具有影响干细胞分化的作用,骨髓间充质干细胞可作为检测镉神经发育毒性的理想细胞.

摘要： 目的：研究皮肤源性前体细胞和皮肤源性前体细胞体外诱导分化的神经元样细胞体内移植,移植时机、移植周围微环境对移植细胞存活率的影响,以及移植细胞在损伤的周围神经中神经营养因子的表达情况. 方法:根据可能导致细胞生存微环境改变的因素，将受体模型Lewis大鼠随机分为胫神经未损伤组和胫神经损伤组。将建立周围神经损伤模型的Lewis大鼠胫神经在其进入腓肠肌以上1厘米处横断，并造成0.5厘米的神经缺损，然后将横断神经的远、近端分别加橡皮帽封闭。胫神经损伤组中，又随机分为四个实验组：胫神经切断即刻，皮肤源性前体细胞直接注射组；肌肉萎缩产生后，培养液注射组；肌肉萎缩产生后，皮肤源性前体细胞注射组：肌肉萎缩产生后，皮肤源性前体细胞体外诱导分化的神经元样细胞注射组。分别在细胞移植术后第4、8、12周，取标本，采用免疫荧光染色定性分析皮肤源性前体细胞以及皮肤源性前体细胞体外诱导分化的神经元样细胞在体内表达神经营养因子BDNF、NGF、GDNF和CNTF的情况。 结果：与皮肤源性前体细胞移植入损伤的周围神经中相比，将皮肤源性前体细胞移植入完整的未损伤的周围神经中，其存活率明显降低。在损伤的周围神经环境中，急性损伤后较慢性损伤后移植细胞存活率高。将皮肤源性前体细胞和皮肤源性前体细胞诱导分化的神经元样细胞分别移植入离断胫神经的远端，术后不同时间点观察，两种细胞均能在体内存活，且在各时间点后者细胞存活率较前者高。在术后第4、8、12周取材，两种细胞在损伤的周围神经中的存活率随时间推进均明显下降。在细胞移植术后第12周时，皮肤源性前体细胞和其诱导分化的神经元样细胞在损伤的周围神经中均仍然存活，且在体内亦均表达神经营养因子BDNF、NGF、GDNF和CNTF。 结论：皮肤源性前体细胞在不同的周围神经环境中表现出不一样的细胞存活率。皮肤源性前体细胞和其诱导分化的神经元样细胞在损伤的周围神经中至少可以存活12周。体外将皮肤源性前体细胞诱导分化成神经元样细胞可以提高移植术后细胞在损伤周围神经中的存活率。皮肤源性前体细胞和其诱导分化的神经元样细胞在体内均可表达神经营养因子。今后可在此基础上研究皮肤源性前体细胞和其诱导分化的神经元样细胞对促进神经再生、延缓失神经骨骼肌萎缩的作用。

摘要： 目的：内耳毛细胞作为将声波振动转换成电脉冲信号的神经终末细胞,其功能的丧失是听觉无法恢复的主要原因,也是儿童感音神经性聋防治难题的关键.联合应用毛细胞正性调控因子及干细胞移植是可能治疗该疾病的理想途径,但体内局部组织特异性的微环境决定了干细胞的可塑性,不同的诱导因素可诱导干细胞向不同类型的体细胞分化.如何使多潜能干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题.本研究拟通过观察联合应用多种细胞生长因子逐步定向诱导,探讨对真皮源性干细胞分化为神经祖细胞样细胞的影响.方法：采用建立的改良二步酶消化法分离SD大鼠背部真皮毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)，取稳定转染的第四代DPCs，滴加DMEM/F121:1+2%B27+20Ng/L EGF进行单细胞克隆培养，传代的真皮细胞分为诱导组(分别滴加100ng/ml NGF,20ng/ml EGF,50ng/ml IGF-I，10ng/ml bFGF,30ng/ml NT3,10ng/ml BDNF进行逐步诱导)和空白对照组(DMEM/F121:1+2%B27+20Ng/L EGF)。分别于培养6h,48h,10d在倒置显微镜下观察细胞的形态学改变，稳定诱导分化2周后免疫组化法鉴定神经细胞标记Nesin,NSE,GFAP的表达，并计算其阳性细胞率，检测真皮源性干细胞向神经元定向分化的情况。结果：诱导组经诱导6h后部分细胞胞质向核回缩，胞体开始变小，诱导48h后大部分细胞胞体明显变化，具有粗细不一的，典型的双极、多极或锥形突起，诱导分化10d后细胞胞体呈圆形或椭圆形，细胞突起细长，相互交织成网状，多为神经元样细胞。空白对照组培养10天后细胞形态无明显改变。经诱导分化2周后细胞免疫组化检测结果显示大部分诱导细胞表达Nesin和NSE，极少量GFAP阳性细胞表达，计数Nesin,NSE,GFAP阳性表达率分别为(61.9518.01)%,(29.04±10.23)%,(8.04±7.72)%;而空白对照组表达均阴性。结论:多细胞因子联合诱导方案能诱导DPCs细胞在体外向神经细胞分化，并且主要分化为神经元样细胞，其神经元的表达时间比以往研究报道的更长、更稳定，实验结果不仅提示DPCs能够成为在体外诱导增殖，并最终形成内耳毛细胞样细胞的又一新的种细胞来源，同时说明采用的逐步诱导方案能有效能模拟内耳的微环境，定向诱导多潜能干细胞向神经元分化是可能的。

摘要： 目的：以枸杞多糖作为诱导剂，探讨其体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性。rn 方法：取SD大鼠8只，于无菌条件下取其股骨，利用贴壁筛选法体外分离培养骨髓间充质干细胞。取生长状态良好的第2代细胞进行诱导实验，将1×107L-1细胞悬液1 mL接种于预先放置盖玻片的24孔板内，每孔加入1 mL预诱导液，置37°C、体积分数为5％的CO2孵箱内继续培养，24 h后更换诱导液，于上述CO2孵箱内诱导。并设立添加全反式维甲酸的阳性对照组，以及空白对照组。诱导过程中镜下动态观察细胞形态学变化。诱导第8，24h采用免疫组织化学技术检测细胞内nestin，NF，GFAP的表达。rn 结论：在体外枸杞多糖能够成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化。

摘要： 目的:建立永生化的人骨髓基质细胞系供神经外科临床和基础研究使用。rn 方法:原代培养人骨髓基质干细胞,以逆转录病毒为载体,导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)全长cDNA,经筛选得到阳性克隆,体外连续传代,检测hTERT基因的整合情况及其表达,并对转化的骨髓基质细胞进行诱导,使其分化成神经元样细胞。rn 结果:成功地将hTERT基因转入人骨髓基质细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至82代。神经元特异性标志物NeuN和 Tubulin—β III表达呈阳性。rn 结论:转导外源性的hTERT基因可以导致人骨髓基质细胞永生化且可诱导其分化成神经元样细胞。

摘要： 朊蛋白病是由朊蛋白引起的海绵状脑病,是一组包括遗传性、散发性和传染性的神经系统变性疾病.朊蛋白106-126肽段在体外与异常朊蛋白(PrP)具有许多相似的生物学作用.本研究利用NGF诱导PC12细胞形成神经元样细胞,加入106-126肽段,观察到了一系列的形态学变化及其致凋亡作用,探索在细胞水平上建立了传染性朊蛋白病模型的可能性.

摘要： 本发明涉及细胞生物学领域，公开了一种神经元细胞和神经胶质细胞有序共培养装置及其制备方法和应用。该装置包括基底和聚二甲基硅氧烷印章，所述聚二甲基硅氧烷印章可移除地复合在所述基底上；所述聚二甲基硅氧烷印章包含至少一个微孔单元，所述微孔单元包含依次排列的、至少一个垂直于所述基底的第一通孔和至少一个垂直于所述基底的第二通孔，所述第一通孔和第二通孔分别与基底表面形成一端开口的凹槽；所述第一通孔和第二通孔的距离为500μm～2000μm。本发明通过垂直于基底的第一通孔和第二通孔接种神经元细胞和神经胶质细胞，两种细胞在各自区域接种时均匀性易于控制，可使用的细胞量增大，群体效应明显，利于观察研究。

摘要： 本发明通过重编程过表达ADSCs中的Sox2基因或沉默抑制其PSEN1基因的表达，亦或者通过重编程同时在ADSCs中过表达Sox2基因和沉默PSEN1基因表达，实现ADSCs向神经元的转化。通过上述重编程方法可提高ADSCs向神经元的转化率，获得大量的神经元。另外，本发明还提供了一种具有提高细胞活性的水凝胶，该水凝胶能够提高由ADSCs向神经干细胞转化的效率。

摘要： 本发明提供了将非神经元细胞转分化为神经元细胞的方法，包括用细胞骨架蛋白小分子抑制剂处理，用小干扰RNA(siRNA)对胞外基质‑骨架系统的特定基因表达敲低处理，对胞外基质低粘附处理并定向分化培养。小分子抑制剂选自肌球蛋白抑制剂和/或肌动蛋白组装抑制剂。对胞外基质低粘附处理选自悬浮培养。siRNA敲低选自对以下至少一种胞外基质‑骨架系统中基因表达敲低：rock1、rock2、mrlc1、mrlc2、mrlc3、myh9、myh10、mrckα、mrckβ、lamina/c、lmnb1、lbr、sun1、sun2、cbx1、cbx3、cbx5、banf1、syne1、syne2、β‑actin。

摘要： 本发明提出一种原代星形胶质细胞/原代中脑腹侧神经元共培养体系在星形胶质细胞与神经元间铁代谢研究中的应用，属于细胞生物学领域，该技术方案通过设计试验方法检测该共培养体系，可在细胞层面明确神经元铁的来源、其与星形胶质细胞间的相互影响，以及铁转运的方向性问题。本发明建立的原代星形胶质细胞与原代中脑腹侧神经元共培养体系是一种新的研究帕金森病的细胞模型，可用于研究帕金森病等神经退行性疾病脑内高铁的相关研究中。

摘要： 本发明涉及细胞生物学领域，公开了一种神经元细胞和神经胶质细胞有序共培养装置及其制备方法和应用。该装置包括基底和聚二甲基硅氧烷印章，所述聚二甲基硅氧烷印章可移除地复合在所述基底上；所述聚二甲基硅氧烷印章包含至少一个微孔单元，所述微孔单元包含依次排列的、至少一个垂直于所述基底的第一通孔和至少一个垂直于所述基底的第二通孔，所述第一通孔和第二通孔分别与基底表面形成一端开口的凹槽；所述第一通孔和第二通孔的距离为500μm～2000μm。本发明通过垂直于基底的第一通孔和第二通孔接种神经元细胞和神经胶质细胞，两种细胞在各自区域接种时均匀性易于控制，可使用的细胞量增大，群体效应明显，利于观察研究。

摘要： 本发明通过重编程过表达ADSCs中的Sox2基因或沉默抑制其PSEN1基因的表达，亦或者通过重编程同时在ADSCs中过表达Sox2基因和沉默PSEN1基因表达，实现ADSCs向神经元的转化。通过上述重编程方法可提高ADSCs向神经元的转化率，获得大量的神经元。另外，本发明还提供了一种具有提高细胞活性的水凝胶，该水凝胶能够提高由ADSCs向神经干细胞转化的效率。

摘要： 本发明公开了将非神经元细胞重编程为神经元样细胞的方法和组合物。该组合物包括神经元样特性化学诱导剂，所述神经元样特性化学诱导剂包括下述1)‑6)中的任意组合：1)环腺苷单磷酸激动剂；2)促神经发生小分子；3)糖原合成激酶抑制剂；4)TGFβ受体抑制剂；5)BET家族溴结构域抑制剂；6)选择性Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶抑制剂和/或p38丝裂原活化激酶抑制剂；所述6)是选择性组分。本申请的使非神经元真核细胞获得神经元样特性的组合物在16天的诱导时间内能够产生超过90％的TUJ1阳性细胞。通过进一步的促成熟阶段，这些化学方法诱导的神经元样细胞有着神经元特异性的表达谱，能够产生动作电位并且形成功能性突触。

摘要： 本发明公开了将非神经元细胞重编程为神经元样细胞的方法和组合物。该组合物包括神经元样特性化学诱导剂，所述神经元样特性化学诱导剂包括下述1)-6)中的任意组合：1)环腺苷单磷酸激动剂；2)促神经发生小分子；3)糖原合成激酶抑制剂；4)TGFβ受体抑制剂；5)BET家族溴结构域抑制剂；6)选择性Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶抑制剂和/或p38丝裂原活化激酶抑制剂；所述6)是选择性组分。本申请的使非神经元真核细胞获得神经元样特性的组合物在16天的诱导时间内能够产生超过90％的TUJ1阳性细胞。通过进一步的促成熟阶段，这些化学方法诱导的神经元样细胞有着神经元特异性的表达谱，能够产生动作电位并且形成功能性突触。

摘要： 本发明提供了一种柴胡皂苷α处理人神经干细胞得到神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述选择培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有1-500ug/mL的柴胡皂苷α、1-20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子和5-200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；还提供了使用前述分化培养基的制备该柴胡皂苷α分化试剂盒的方法；还提供了包括前述的方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。使用本发明的选择培养基的本发明的方法能够高效分化神经干细胞，得到神经元样细胞。本发明用于治疗神经系统疾病的药物组合物能在体内修复损伤的神经细胞，并消除神经病变。

摘要： 本发明提供了一种神经生长因子在促进脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化中的应用，属于生物技术领域。本发明实验发现，经慢病毒介导的神经生长因子过表达脐带间充质干细胞在神经因子Nestin、GFAP、MAP2和Tubulin的mRNA转录上均显著增加，证明神经生长因子具有促进脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化的功能。