Cre重组酶

摘要： 目的构建Tnfrsf11a^(Cre)Rosa26^(yfp)报告基因小鼠,检测Tnfrsf11a^(Cre)介导黄色荧光素蛋白YFP标记组织巨噬细胞的效率。方法将Tnfrsf11a^(Cre)小鼠与Rosa26^(yfp)小鼠交配,通过PCR筛选出Tnfrsf11a^(Cre)Rosa26^(yfp)报告基因小鼠。分离成年Tnfrsf11a^(Cre)Rosa26^(yfp)小鼠脑小胶质细胞、肝脏巨噬细胞、肾脏巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾脏巨噬细胞,标记流式抗体,通过流式细胞术分析Tnfrsf11a^(Cre)介导荧光素蛋白YFP标记组织巨噬细胞的效率。结果Tnfrsf11a^(Cre)介导黄色荧光素蛋白YFP对脑小胶质细胞具有约91.27%的标记效率,但对肝脏、脾脏、肺泡巨噬细胞细胞的标记效率分别只有约63.60%、69.66%、32.76%。结论Tnfrsf11a^(Cre)可以介导YFP对脑小胶质细胞进行示踪。同时,Tnfrsf11a^(Cre)可用做脑小胶质细胞基因条件性敲除的工具鼠。

摘要： 目的:检测NKp46-Cre介导的黄色荧光蛋白(YFP)报告基因系统在小鼠体内自然杀伤细胞的效率以及特异性.方法:通过ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交产生后代并且利用基因型鉴定的方法筛选出双阳性的基因型小鼠,流式细胞术检测小鼠体内免疫器官淋巴结、脾脏以及骨髓中的YFP的表达效率,然后用细胞表面抗体标记脾脏的淋巴细胞,分析淋巴细胞群体中YFP阳性细胞的百分比.结果:选取ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交后代中基因型为ROSA26R-YFP(+/+)Cre(+/-)的小鼠为实验组,ROSA26R-YFP(-/-)Cre(-/-)的小鼠为对照组;流式细胞术分析免疫器官(淋巴结、骨髓、脾脏)YFP的阳性细胞的比例分别为0.589％±1.02％、1.89％±1.28％、4.53％±1.54％,对照组YFP的阳性细胞的比例分别为0.008％±0.003％、0.126％±0.08％、0.12％±0.004％;两种小鼠的非免疫器官(心脏)YFP阳性的细胞为0.009％±0.0002％、0.03％±0.012％;脾脏淋巴细胞系中各免疫细胞(NK细胞、T细胞、B细胞)YFP阳性百分比为89.4％±1.08％、0.89％±0.56％、0.82％±0.82％.结论:NKp46-Cre介导的YFP报告基因系统标记NK细胞具有明显的特异性.%Objective:To detect the efficiency and specificity of YFP labeled NK cells by the NKp46-Cre mediated YFP reporting system in mice.Methods:Two-positive genotype mice were screened by ROSA26R-YFP and NKp46-Cre mice using genotype identification.Flow cytometry was used to detect the expression efficiency of YFP in the immune organs,spleen and bone marrow of mice,and then the lymphocytes of spleen were labeled by cell surface antibody,and the percentage of YFP positive cells in lymphocyte population was analyzed.Results:The mice with genotype ROSA26R-YFP (+/+)Cre (+/-) from ROSA26R-YFP and NKp46-Cre mice were selected as experimental group,the mice selected ROSA26R-YFP (-/-) Cre (-/-) were the control group and the proportions of the positive cells of the immune organs (lymph node,bone marrow,spleen) were 0.589％±1.02％,1.89％± 1.28％,4.53％±1.54％,the proportion of YFP positive cells in control group were 0.008％±0.003％,0.126％±0.08％,and 0.12％±0.004％;there were no distinct YFP positive cells 0.009％±0.0002％,0.03％±0.012％ in the non-immune organs (heart) of the two mice,and the YFP positive percentages of each immune cell(NK cell,T cell,B cell) in splenic lymphocyte system were 89.4％±1.08％,0.89％±0.56％,and 0.82％±0.82％.Conclusion:YFP marked NK cells through NKp46-Cre induced YFP reporter system in mice may have high specificity and efficiency.

摘要： Objective To explore the specificity and efficiency of YFP labeled natural killer (NK) cells through Vav-Cre induced YFP reporter system in mice. Methods ROSA26R-YFP and Vav-Cre mice were crossed, and their YFP and Cre gene double positive progeny were screened by genotyping. The specificity of YFP in hematopoietic cells from im-mune organs including lymph nodes, spleen, thymus and bone marrow were analyzed by flow cytometry. The percentages of YFP positive cells in NK cells from lymph nodes, spleen and bone marrow were also analyzed by flow cytometry. Results A total of 11 double positive mice (ROSA26R-YFP-(+/-)VavCre) were obtained in 17 mouse offspring by crossing ROSA26R-YFP mice with Vav-Cre mice. The percentages of YFP positive cells in immune organs including lymph nodes, spleen, thy-mus and bone marrow were 73.87%± 1.51%, 56.07%± 1.47%, 86.17%± 1.74%and 53.60%± 3.56%, and there were signifi-cant differences compared with the corresponding negative control cells(0.27%±0.01%, 1.33%±0.91%, 0.11%±0.01%and 0.29%± 0.03%, P0.05). The positive rates of YFP were significantly higher in NK cells in lymph nodes, spleen and bone marrow (76.94%±0.84%、81.66%±1.18%and 88.92%±0.77%) compared with those of control (P0.05）；淋巴结、脾和骨髓中NK细胞YFP阳性百分比（%）76.94±0.84、81.66±1.18、88.92±0.77，与阴性对照组比较均明显增高（均P<0.01）。结论 Vav-Cre介导的YFP报告基因系统标记小鼠体内NK细胞具有特异性及高效性。

摘要： 目的:构建基于Tat细胞穿透肽和核定位信号NLS的重组酶Cre蛋白表达载体,引导Cre内化并入核实现细胞水平的基因敲除.方法:在带His标记的细胞穿透肽Tat和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pET14b-SBP-Tat-EGFP基础上,利用酶切连接的方法将NLS-Cre片段插入带上述表达载体中,构建新的融合蛋白表达载体pET14b-SBP-Tat-NLS-Cre-EGFP;经酶切、测序鉴定载体构建正确后,将重组质粒转化BL21 (DE3)宿主菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用Ni2+亲和层析纯化得到融合蛋白;将融合蛋白透析、过滤除菌后加入到培养的cdc42基因两端带Loxp位点的C57小鼠腹腔巨噬细胞中,在Zeiss荧光显微镜下观察蛋白转导效率,并用Western blot方法在蛋白水平检测并验证细胞水平目的基因敲除效果.结果:经酶切、基因测序证实重组载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中可有效表达;Zeiss荧光显微镜下观察融合蛋白穿透细胞膜并进入细胞,细胞在经融合蛋白内化处理后目的基因蛋白的表达量与对照组没加Tat融合蛋白比较有明显降低.结论:利用Tat细胞穿透肽成功构建了基于细胞穿透肽的带有NLS-Cre的Tat蛋白表达运输载体,建立了可携带Cre进入细胞核进行基因敲除的系统,说明利用该系统可以实现细胞水平的基因敲除.%Objective:To construct the fusion expression plasmid based cell penetrating peptides with Cre and nuclear localization signal (NLS) label,and to study gene knockout at cell level.Methods:The fusion protein expression vector pET14b-SBP-Tat-NLS-Cre-EGFP incorporating Cre recombinant enzyme and NLS was constructed based on His-tagged pET14b-SBP-Tat-EGFP by insertion method,then it was identified by enzyme digestion and DNA sequence,and the recombinant plasmid was transformed into BL21(DE3) strain.The His-SBP-Tat-NLS-Cre -EGFP fusion protein was expressed following IPTG induction and purified with Ni2+-NTA affinity chromatography.After dialysis and filtration the fusion protein was added into cultured eukaryotic cells,and transduced protein was observed under fluorescence microscope and analyzed by Western blot.Results:Enzyme digestion and DNA sequencing confirmed successful construction of the vector pET14b-SBP-Tat-NLS-Cre-EGFP,and the fusion protein was successfully expressed in E.coli.The fusion protein could rapidly penetrate cell membrane and reach cell nucleus,and it was revealed that in the protein transduction experiments in eukaryotic cells at Loxp site,the targeted gene protein was found to be obviously decreased in the level of protein,indicating that cell penetrating peptides can achieve gene knockout on cell level.Conclusion:The fusion peptide expression vector based Tat protein and Cre recombinant enzyme for targeted protein delivery to the cell nucleus became an effective system,and the system can carry Cre into cells to knock out targeted gene.

摘要： Objective: To investigate the expression of the Cre recombinase mediated by human glial fibril-lary acidic protein (hGfap) gene promoter in mouse cerebellum. Methods: hGfapcre/Rosa26R transgenic mice were obtained by crossing hGfapcre transgenic mice with Rosa26R Cre reporter mouse strain. X-gal staining was applied to observe the distribution of Cre recombinase in their cerebellum at embryonic days 12.5, 13.5, 14.5, 16.5 and week 3 after birth. In addition, immunohistochemical staining with cell specific antibodies, Blbp (as-troglial marker), NeuN (neuronal marker) and Calbindin (Purkinje cell marker) was used to identify the cells expressing Cre recombinase indicated by X-gal staining. Results: At embryonic day 13.5, X-gal-positive cells appeared in the rhombic lip (rl) and further expanded to the entire cerebellum until embryonic day 16.5. Three weeks after birth, X-gal-positive cells coexpressed Blbp and NeuN, but did not express Calbindin. Conclusion: The expression of the Cre recombinase mediated by hGfap gene promoter appears in the rhombic lip as early as embryonic day 13.5, and the Cre recombinase mainly expresses in astrocytes (including Bergmann glial cells) and granular cells, not presents in the Purkinje cells. These results indicate that the GFAP-positive cells eventually differentiate into astrocytes (including Bergmann glia) and granular cells in the development of cerebellum, but do not generate into Purkinje cells.%目的:探讨以人胶质纤维酸性蛋白(hGfap)基因启动子介导的Cre 重组酶在小鼠小脑中的表达.方法:将hGfapcre 转基因小鼠与Rosa26R 转基因鼠杂交得到hGfapcre/Rosa26R 基因型小鼠,分别在胚胎12.5 、13.5 、14.5 、16.5d 和出生后3 周,取小脑组织切片行X-gal 染色观察Cre 重组酶分布;另外,出生后3 周的小脑组织切片同时使用细胞种类特异性抗体Blbp(星形胶质细胞标记物)、NeuN(颗粒细胞标记物)、Calbindin(浦肯野细胞标记物)进行免疫组织化学染色鉴定X-gal 染色阳性细胞类型.结果:胚胎13.5d,小脑菱唇开始出现X-gal 染色阳性细胞;此后Cre 重组酶表达范围进一步扩大,至胚胎16.5d,X-gal 染色阳性细胞可覆盖整个小脑;在出生后3 周,X-gal 染色阳性细胞可以和Blbp 及NeuN 共标记,和Cal-bindin 不能共标记.结论:以hGfap 基因启动子介导的Cre 重组酶最早在胚胎13.5d 的菱唇开始表达,并且Cre 重组酶主要表达于星形胶质细胞(包括Bergmann 胶质细胞)和颗粒细胞,不表达于浦肯野细胞,表明在小脑发育过程中以GFAP 为标记物的胶质细胞主要向星形胶质细胞(包括Bergmann 胶质细胞)和颗粒细胞分化,不向浦肯野细胞分化.

摘要： Objective: To investigate the differentiation of early postnatal GFAP-positive cells in mouse brain. Methods: Tamoxifen injection induced Cre recombination expression in mice carrying hGfapCreERT2/Rosa26R transgence at P6. Cells expressing Cre recombination were indicated by X-gal staining and then immunohistochemical staining (Blbp, GFAP, NeuN and NG2 or CC1) was used to identify the cell style at P60. Results: X-gal staining positive cells coex-pressed astroglial markers Blbp and GFAP, oligodendrocyte precursor cell marker NG2 or oli- ? Godendrocyte cell marker CC1, and the neuronal marker NeuN, in different regions of the adult # mouse brain. Conclusion: The early postnatal GFAP-positive cells exhibit properties of multiple differentiation potentiality, to eventually differentiate into neurons, astrocytes, and oligodendrocyte precursor cell in adult mice brain.%目的:探讨幼鼠大脑胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的分化类型.方法:hGfapCreERT2/Rosa26R转基因小鼠在出生后第6天用他莫西芬诱导Cre重组酶表达；在出生后第60天,对大脑组织切片行X gal染色,然后用细胞种类特异性抗体Blbp、GFAP(星形胶质细胞标记物),NeuN(神经元标记物),NG2(少突胶质细胞前体细胞标记物)或CC1(成熟少突胶质细胞标记物)进行免疫组织化学染色.结果:大脑不同脑区X-gal染色阳性细胞可以和Blbp和GFAP、NeuN及NG2或CC1共标记.结论:出生后早期小鼠大脑GFAP阳性的细胞具有多向分化潜能,可分化产生星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞前体细胞.

摘要： 目的：获得肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步利用Cre-Loxp系统建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供工具。方法：通过改造实验室已有的诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,构建肾脏特异性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用Fngene HDTransfection Reagent介导转染小型猪成纤维细胞,并利用(G418筛选细胞克隆。利用PCR鉴定成功整合pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的阳性细胞克隆。通过核移植、胚胎移植方法建立转基因小型猪。利用PCR鉴定转基因小型猪Cre表达载体的整合情况。结果：共出生12头小型猪,PCR鉴定表明全部整合了Cre表达载体。结论：建立了肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供了工具。

摘要： 目的：获得肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步利用Cre-Loxp系统建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供工具。方法：通过改造实验室已有的诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,构建肾脏特异性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用Fngene HDTransfection Reagent介导转染小型猪成纤维细胞,并利用(G418筛选细胞克隆。利用PCR鉴定成功整合pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的阳性细胞克隆。通过核移植、胚胎移植方法建立转基因小型猪。利用PCR鉴定转基因小型猪Cre表达载体的整合情况。结果：共出生12头小型猪,PCR鉴定表明全部整合了Cre表达载体。结论：建立了肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供了工具。

摘要： 目的：获得肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步利用Cre-Loxp系统建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供工具。方法：通过改造实验室已有的诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,构建肾脏特异性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用Fngene HDTransfection Reagent介导转染小型猪成纤维细胞,并利用(G418筛选细胞克隆。利用PCR鉴定成功整合pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的阳性细胞克隆。通过核移植、胚胎移植方法建立转基因小型猪。利用PCR鉴定转基因小型猪Cre表达载体的整合情况。结果：共出生12头小型猪,PCR鉴定表明全部整合了Cre表达载体。结论：建立了肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供了工具。

摘要： 目的：获得肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步利用Cre-Loxp系统建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供工具。方法：通过改造实验室已有的诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,构建肾脏特异性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用Fngene HDTransfection Reagent介导转染小型猪成纤维细胞,并利用(G418筛选细胞克隆。利用PCR鉴定成功整合pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的阳性细胞克隆。通过核移植、胚胎移植方法建立转基因小型猪。利用PCR鉴定转基因小型猪Cre表达载体的整合情况。结果：共出生12头小型猪,PCR鉴定表明全部整合了Cre表达载体。结论：建立了肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供了工具。

摘要： 目的：建立检测 Cre 重组酶活性的转基因报告猪,为制备人类疾病动物模型研究基因功能,提供手段和方法。rn 方法：以条件性表达绿色荧光蛋白的猪成纤维细胞系作为供体细胞,采用体细胞核移植技术,制备转基因克隆猪,并对所获得的转基因克隆猪进行初步的鉴定。rn 结果：获得了11头健康的克隆猪。对所获得的克隆猪通过PCR、分离尾部成纤维细胞并进行Cre重组酶的验证实验,从而对所获得的克隆猪进行了鉴定,鉴定结果表明,所获得的克隆猪均为转基因克隆猪。

摘要： 目的：建立检测 Cre 重组酶活性的转基因报告猪,为制备人类疾病动物模型研究基因功能,提供手段和方法。rn 方法：以条件性表达绿色荧光蛋白的猪成纤维细胞系作为供体细胞,采用体细胞核移植技术,制备转基因克隆猪,并对所获得的转基因克隆猪进行初步的鉴定。rn 结果：获得了11头健康的克隆猪。对所获得的克隆猪通过PCR、分离尾部成纤维细胞并进行Cre重组酶的验证实验,从而对所获得的克隆猪进行了鉴定,鉴定结果表明,所获得的克隆猪均为转基因克隆猪。

摘要： 目的：建立检测 Cre 重组酶活性的转基因报告猪,为制备人类疾病动物模型研究基因功能,提供手段和方法。rn 方法：以条件性表达绿色荧光蛋白的猪成纤维细胞系作为供体细胞,采用体细胞核移植技术,制备转基因克隆猪,并对所获得的转基因克隆猪进行初步的鉴定。rn 结果：获得了11头健康的克隆猪。对所获得的克隆猪通过PCR、分离尾部成纤维细胞并进行Cre重组酶的验证实验,从而对所获得的克隆猪进行了鉴定,鉴定结果表明,所获得的克隆猪均为转基因克隆猪。

摘要： 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管生物反应器的最佳技术路线.为构建了对鸡卵清蛋白位点的基因打靶载体,本研究克隆了鸡的卵清蛋白基因7.8kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体SSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8,经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确.这为下一步基因打靶鸡ES细胞制备鸡输卵管生物反应器奠定了基础.

摘要： 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管生物反应器的最佳技术路线.为构建了对鸡卵清蛋白位点的基因打靶载体,本研究克隆了鸡的卵清蛋白基因7.8kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体SSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8,经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确.这为下一步基因打靶鸡ES细胞制备鸡输卵管生物反应器奠定了基础.

摘要： 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管生物反应器的最佳技术路线.为构建了对鸡卵清蛋白位点的基因打靶载体,本研究克隆了鸡的卵清蛋白基因7.8kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体SSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8,经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确.这为下一步基因打靶鸡ES细胞制备鸡输卵管生物反应器奠定了基础.

摘要： Cre重组酶重组基因及Cre/loxP介导的转基因安全性植物表达载体，它涉及一种Cre重组酶重组基因及植物表达载体。它解决了现有Cre/loxP位点特异性重组系统去除转基因植物中标记基因的方法中因Cre/loxP位点特异性重组系统具有可逆性，导致其删除效率降低的问题。crein基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明载体包含标记基因bar、crein基因、热激启动子hsp和组成型启动子CaMV35S。本发明可提高转基因植物的安全性。

摘要： 本发明公开了一种Cre重组酶调控的非免疫耐受型OVA-HBsAg转基因小鼠的构建方法。本发明首先将酶切线性化后的携带目的基因OVA-HBsAg的表达载体，采用原核显微注射法，靶向性地导入小鼠体内，制备得到Cre重组酶调控的非免疫耐受型OVA-HBsAg转基因小鼠。该方法在国内外率先建立了一种新型可诱导型非免疫耐受的乙肝疾病模型，即Cre重组酶调控表达的OVA-HBsAg转基因小鼠，可针对性的应用于乙肝相关研究领域中，能够真实、全面地反映临床乙肝发生、发展过程，填补了国内外此类动物模型的空白。

摘要： 一种改造重组酶Cre的方法及其在植物中的应用，它涉及将重组蛋白Cre拆分为无活性的N端（NCre）和C端（CCre）两部分，并且对拆分蛋白进行体外原核表达和活性检测，同时分别构建新的Cre/loxp系统，将其应用于植物当中，实现了当N端和C端在同一个植物细胞时恢复重组活性而发生删除，反之则不能。本发明还包括核定位信号NLS对该系统的影响以及所有的植物表达载体和体外原核表达载体。

摘要： Cre重组酶重组基因及Cre/loxP介导的转基因安全性植物表达载体，它涉及一种Cre重组酶重组基因及植物表达载体。它解决了现有Cre/loxP位点特异性重组系统去除转基因植物中标记基因的方法中因Cre/loxP位点特异性重组系统具有可逆性，导致其删除效率降低的问题。crein基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明载体包含标记基因bar、crein基因、热激启动子hsp和组成型启动子CaMV35S。本发明可提高转基因植物的安全性。

摘要： 本发明涉及一种表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建，其特征在于：首先采用基因工程的方法构建pCEP4-Cre质粒，并用载体pCEP4-Cre与载体pEF-stop-eGFP共转染进入细胞，在表达Cre重组酶的情况下，将转入到细胞中的载体pEF-stop-eGFP中的Loxp卯定的终止子删除，使后接的报告基因eGFP得以表达，从而用于剪切条件性表达绿色荧光蛋白载体中的LoxP元件；其应用基因工程技术构建了一个表达Cre重组酶的质粒，并且重组质粒pCEP4-Cre可以在药物压力下独立于细胞染色体外存在，并在撤去药物压力后以每代10％的速率丢失；可有效的防止细胞基因组因插入外源基因而导致的基因突变；其使用的简便性和安全性可被广泛的应用，为人类Cre重组酶系统的检测发展起到积极的推动作用。

摘要： 本发明涉及DNA重组酶Cre氨基酸序列的改造和应用，其是通过点突变技术将Cre基因第173位的精氨酸改变为组氨酸，上述Cre突变体由一个大鼠胰岛素启动子（RIP）控制其在胰岛beta细胞中的表达。另外，本发明对Cre突变体在胰岛beta标记中的应用进行了初步研究，利用Cre突变体及其作用位点loxP、CMV启动子、绿色荧光报告基因（EGFP）、及红色荧光报告基因（DsRed），组装成一个双质粒的胰岛素阳性细胞的标记系统。

摘要： 本发明涉及一种基于Cre重组酶诱导的大规模慢病毒基因药物制备系统，其包括：悬浮293稳转细胞株和表达Cre基因的病毒；所述悬浮293稳转细胞株的基因组上整合了慢病毒包装蛋白表达序列和目的基因序列；且所述慢病毒包装蛋白表达序列与驱动其表达的启动子之间插入loxP‑Stop‑loxP序列；loxP‑Stop‑loxP序列包含两个方向相同的loxP位点以及连接在两个loxP位点之间的Stop序列；所述表达Cre基因的病毒为可感染悬浮293细胞且能够表达Cre蛋白的病毒；所述表达Cre基因的病毒用于感染所述悬浮293稳转细胞株，激活慢病毒包装蛋白表达序列进行表达，以包装产生慢病毒。本发明其解决了质粒瞬时转染成本高，放大困难的问题；同时利用表达Cre基因的病毒感染进行诱导，避免四环素等抗生素诱导后难以去除的工艺难题。

摘要： 本发明公开了一种CRE和FLP双重组酶级联控制的逆行跨单突触的辅助载体及其应用，将改造后的基因片段H2B‑EGFP‑2a‑TVA和改造后的基因RVG酶切后，分别与酶切后的病毒载体连接，该辅助载体只有在CRE和FLP重组酶同时存在的细胞中才能正常表达，并辅助ENVA外膜包裹的缺陷型重组狂犬病毒特异性识别感染和逆向跨突触标记特定脑区的上游神经网络，可以实现特定类型神经元的逆行跨突触标记。该方法在解析特定脑区交集神经元类群或投射到特定区域的特定类型神经元的上游输入、环路功能研究、神经元稀疏标记或稀疏跨单突触等方面具有广泛的应用价值和前景。

摘要： 一种利用生殖特异性启动子表达cre的重组酶载体，属于生物技术领域。本发明的目的是利用VASA基因的生殖特异性表达，来建立转基因猪模型的利用生殖特异性启动子表达cre的重组酶载体。本发明载体的构建方法是：①VASA转录起始位点上游序列扩增与纯化；②VASA转录起始位点上游序列测序；③VASA-Cre表达载体构建。本发明利用基因工程技术构建了一个生殖系统特异表达cre重组酶的质粒，并且重组质粒可以在药物压力下独立于细胞染色体外存在。该质粒可以保证在生殖系统中特异表达cre重组酶，可以与loxp相结合，进行相关生殖系统表达基因的敲除，为cre重组酶系统的发展和相关基因的研究起到积极的推动作用。

摘要： 本发明公开了一种含有可调控表达的cre重组酶基因和报告基因LacZ的表达载体及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明的表达载体为pBI-3-LacZ-cre，且该表达载体中含有LacZ报告基因、Cre重组酶基因及双向启动子tetO元件。本发明将表达载体pBI-3-LacZ-cre导入小鼠输卵管内进行妊娠，获得转基因小鼠。将该转基因小鼠与正在应用的两种模型动物可诱导肝脏特异性表达rtTA分子的rTA