肾脏特异性表达Cre重组酶转基因小型猪的建立

摘要

目的：获得肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步利用Cre-Loxp系统建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供工具。方法：通过改造实验室已有的诱导性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-Mxl-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,构建肾脏特异性表达Cre重组酶表达载体pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用Fngene HDTransfection Reagent介导转染小型猪成纤维细胞,并利用(G418筛选细胞克隆。利用PCR鉴定成功整合pET28a(+)-AQP2-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的阳性细胞克隆。通过核移植、胚胎移植方法建立转基因小型猪。利用PCR鉴定转基因小型猪Cre表达载体的整合情况。结果：共出生12头小型猪,PCR鉴定表明全部整合了Cre表达载体。结论：建立了肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因小型猪,为进一步建立条件性基因敲除小型猪动物模型提供了工具。