绿色荧光蛋白基因

摘要： 旨在揭示稻田施用转基因微生物制造农药(dsRNA)的环境稳定性,以便为dsRNA的高效应用和安全评估提供理论依据,南农大研究人员以绿色荧光蛋白基因EGFP为模板合成dsRNA,利用点滴法处理稻苗叶片,利用定量添加处理稻田水,定时取样测定观察。

摘要： [目的]研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病基因的功能,构建一个便于筛选敲除转化子的高效基因敲除载体.[方法]通过普通PCR技术扩增得到绿色荧光蛋白基因(GFP),连接到pMD18-T载体上,测序验证,利用限制性内切酶HindⅢ将目的片段切下,连接到敲除载体pRF-HU2的多克隆位点上.通过电击转化法将载体转化到农杆菌EHA105中,利用农杆菌介导法(ATMT)转化到大丽轮枝菌.[结果]成功得到一种新的携带GFP筛选标记的大丽轮枝菌敲除载体,通过GFP基因的筛选,T-DNA随机插入转化子在荧光显微镜下呈现绿色,相反敲除转化子在荧光显微镜下不呈现绿色.[结论]构建了一种大丽轮枝菌基因新的高效敲除载体,利用该载体大大节省了筛选转化子所用的时间,为大丽轮枝菌功能基因的验证提供了技术平台.

摘要： Aim:To construct a novel lentiviral expression vector based on the Cre-LoxP system.The novel lentiviral expression vector consists of tow reporter genes (EGFP and puromycin resistance gene (Puro)driven by EF1αpromoter,and the multiple clone site (MCS)driven by CMV promoter).Meth-ods:pLOX-TERT-iresTK lentiviral vector was used as the template and digested by SpeI and KpnI re-striction enzymes to remove the TERT-iresTK fragment.The lined vector was then ligated with a novel MSC fragment including SpeI and KpnI cohesive end sites which was got by annealing two oligonucleoti-des,thereby constructing pLOX-MCS vector.At the same time,EF1α-EGFP-Puro fragment with BamHI and KpnI cohesive end sites was amplified from the pB513 plasmid and ligated with pLOX-MCS vector di-gested by BamHI and KpnI restriction enzymes,thereby constructing pLOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro (pLOX-CMV-E /P)vector.pLOX-CMV-E /P vector was co-transfected into 293T cells with packaging plasmids including pCMVR8.74 and pMD2.G to examine the virus titers and function of reporter genes. Results:Through sequencing analysis,it was found that the sequence of pLOX-CMV-E /P vector is cor-rect.Furthermore,the function of reporter genes (EGFP and Puromycin)was verified by fluorescence microscope and puromycin treatment,respectively.Conclusion:Taken together,this study has success-fully constructed a novel lentiviral vector pLOX-CMV-E /P including two reporter genes driven by EF1αpromoter and a MCS driven by CMV promoter,which provides a more effective lentiviral expression sys-tem for gene therapy and function studies.%目的：基于 Cre-LoxP 系统构建携带 EGFP 及 Puromycin 抗性基因，并带有巨细胞病毒（CMV）及翻译延伸因子1α（EF1α）双启动子的新型慢病毒表达载体，为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统．方法：以已经插入 LoxP 序列的 pLOX-TERT-iresTK 慢病毒载体为模板，用 SpeI 与 KpnI 进行双酶切，去除 TERT-iresTK片段，然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接，构建 pLOX-MCS 表达载体．同时，以 pB513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro 表达框（带有 BamHI 及 KpnI 酶切位点），然后与经过 BamHI 及 KpnI 双酶切的 pLOX-MCS 载体连接，进而构建 pLOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro（简称 pLOX-CMV-E ／P）载体．将 pLOX-CMV-E ／P 载体与慢病毒包装载体pCMVR8．74及 pMD2．G 共转染293T 细胞，包装病毒进行报告基因的功能分析．结果：菌落聚合酶链式反应（PCR）、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致，绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能．结论：成功构建了pLOX-MCS 及 pLOX-CMV-E ／P 慢病毒表达载体，为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统．

摘要： [目的]为有效利用草木樨中华根瘤菌CHW10B菌株,对绿色荧光蛋白(GFP)标记的菌株在南方红豆杉根际及其根部的定殖进行研究.[方法]采用修改的反复冻融转化方法,将穿梭载体pGFP4412质粒转化进入草木樨中华根瘤菌CHW10B细胞,对该菌株进行GFP标记,筛选荧光表达强烈且稳定遗传的转化子,对转化子的细胞及菌落形态特征进行观察,并采用钼锑抗比色法对其溶磷能力进行测定.在此基础上,以GFP基因标记和抗性标记作为示踪手段,将GFP标记的CHW10B菌株接种到南方红豆杉1年生盆栽实生苗根表面,借助荧光显微镜及稀释涂布技术,对根际土壤中GFP标记菌株进行定期回收检测.[结果]成功获得CHW10B菌株荧光表达强烈且稳定遗传的GFP转化子,该转化子及野生菌株均为革兰氏阴性(G-),短杆菌,但二者在LB固体平板上的菌落形态有一定差别.野生菌株菌落呈圆形、边缘整齐,表面湿润黏稠,为乳白色;而标记菌株CHW10B-GFP2菌落表面为浅棕色,其他一致;标记菌株溶磷能力与野生菌株接近,发酵液上清液中可溶性磷含量分别为639.12和656.57 mg·L-1.GFP标记菌株在南方红豆杉根际的数量变化幅度较大,接种1天根际土壤中CHW10B转化子菌数为6.08×107cfu· g-1,随后细菌数量迅速减少,15天后标记细菌数量开始增多,25～ 40天菌体数量升高并呈平稳趋势.用荧光显微镜对接种40天后南方红豆杉的根部进行观察,发现在根系表面及其内部有大量发绿色荧光的GFP标记细胞存在.[结论]GFP基因标记的CHW10B菌株在南方红豆杉幼苗根际土壤中具有持久性定殖的能力;另外,该标记菌株能在根表面和内部定殖,具有内生性.

摘要： 从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)野生型菌株YBT-9602基因组中通过PCR扩增到编码一种具有细胞壁锚定活性的芽胞皮层水解酶的编码基因mbA。序列测定和编码产物结构域预测分析显示,mbA编码产物在结构上由1个具有肽聚糖结合性能的N-末端结构域和1个具细胞壁水解酶活性的C-末端结构域组成,具有作为细胞表面展示系统的运载蛋白的潜力。通过体外构建mbA与绿色荧光蛋白基因gfp的融合基因(mbA-gfp)并导入苏云金芽胞杆菌受体菌中进行表达,经对重组菌全细胞免疫荧光显微镜观测、蛋白酶pronase消化试验和SDS处理,证实GFP被成功展示于受体菌细胞表面;经流式细胞仪测定,以细菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶为靶蛋白的表面展示系统有42.97%的重组菌细胞可展示融合酶,重组菌具有13.5U/mL的全细胞酶活性。结果表明,MbA作为一种细胞壁锚定蛋白可用于构建新的苏云金芽胞杆菌细胞表面展示系统。

摘要： 目的 构建并鉴定携带人γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭分泌型表达载体,探索抗肿瘤基因治疗的新型载体.方法 用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,通过PCR方法克隆双歧杆菌的内源性阿拉伯糖苷酶的启动子和分泌性信号肽DNA序列(ara).然后以大肠杆菌质粒pBAD-A和pBS-T为基础,以ara启动子取代原有的启动子,以绿色荧光蛋白基因(GFP)作为报告基因,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP.通过PCR方法扩增真核表达载体pBLAST49-hIP-10质粒中的IP-10基因,将其克隆到穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP中,采用电转化法将正确克隆的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒导入双歧杆菌中,并以L-arabinose诱导表达.在激光共聚焦显微镜下观察转基因双歧杆菌中GFP蛋白的表达;运用免疫蛋白质印迹(Western blot)检测转基因双歧杆菌中IP-10的蛋白表达水平.结果 含GFP基因的转基因双歧杆菌在激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光.含IP-10基因的转基因双歧杆菌经Western blot检测到分子量为8.47 kD的目的 蛋白条带.结论 成功构建能表达IP-10蛋白的穿梭质粒载体pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,为IP-10转基因双歧杆菌的抗肿瘤机制及其抑瘤效应的研究奠定基础.

摘要： 在生物强化中采用报告基因技术对降解质粒进行标记,可实现对基因工程菌和降解基因的原位监测.通过基因克隆技术,将绿色荧光蛋白基因(gfp)和阿特拉津脱氯水解酶基因(atzA)重组,构建降解-示踪功能质粒,实现对阿特拉津降解质粒的示踪标记,并对转化获得的基因工程菌绿色荧光蛋白表达及阿特拉津降解能力进行评价.结果表明将gfp和atzA基因克隆至质粒载体pUC18所获得的重组质粒,经检测含有atzA基因,具有氨苄青霉素抗性,并可表达绿色荧光蛋白.携带重组质粒的基因工程菌具有阿特拉津降解活性；且在活性污泥中产生绿色荧光现象,可通过原位观察进行监测.

摘要： 通过农杆菌介导法将携带mgf p4基因的植物表达载体pCAGFPHyg导入水稻明恢86中,获得101个独立克隆的转基因植株.PCR检测和Southern blot分析证明外源基因已整合进水稻基因组中,T0代种子的分离分析结果表明大部分转基因植株为单T-DNA插入.荧光检测及RT-PCR分析结果显示mgf p4基因能在水稻中表达,但其发出的绿色荧光检测效果不甚理想.%Plant expression vector, pCAGFPHyg, carrying mg f p4 gene was introduced into rice Minghui 86 (Indica Saliva L. ) mediated by Agrobacterium tumefaciens. The transgenic rice containing 101 independent clones was obtained. PCR and the southern blot analysis ensured that the exogenous genes were indeed integrated into the rice genome. The result of T1 segregation analysis from TO rice seeds indicated that most of the transgenic plants were inserted by a single T-DNA. It was confirmed by the fluorescence microscopic and RT-PCR detections that the mg f p4 gene was expressed in the transgenic rice, although no acceptable result of green fluorescence was secured.

摘要： [Objective] The objective of the study was to understand the sulxellular localization of OsWRKY78 protein in plants. [Method] In doing that, primers of OsWRKY78 gene were designed according to the OsWRKY78 full length sequence in Genbank. The gene was cloned by RT-PCR method. The gene was then recombined into a plasmid expression vector carrying green fluorescent protein (GFP) gene, pBinGFP-The recombinant was confirmed by PCR enzyme digestion. The recombinant plasmid pBinGFP-OaWRKY was transformed into Arabidopsis through Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 and transgenic plant was obtained. [Result] Measured by fluorescence microscopy, the expression of OsWRKY78 and GFP fusion protein in root tip cells was localized in the nucleus. [Conclusion] This study laid the foundation for further investigating the function of OsWRKY78 gene and its role in related signal transduction and provided theoretical basis for exploring the relation between OsWRKY78 gene and brown planthoppers.%[目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位.[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定位进行研究.[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中.[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据.

摘要： 随着转基因技术的发展，GFP报告基因已成为转基因动物上常用的的报告基因之一。目前对于转基因动物传代前后基因表达的变化，仅见个别基因的研究，常规育种所用的模型(数学方程式来表达，数学期望、方差以及协方差无法描述，无法假设及约束条件)均不适用，选择时首要选择的是质量性状即表达了外源基因，淘汰没有表达外源基因的个体。本文构建成功的G0代转绿色荧光蛋白基因小鼠与野生型昆明白鼠采用类系祖建系的方法，对绿色荧光蛋白基因转基因小鼠进行传代。通过在紫外灯下观察绿色荧光的方法，剔除未表达绿色荧光蛋白基因的小鼠。

摘要： 应用聚合酶链反应(PCR)方法，扩增HCN4及Tbx3基因，构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(HCN4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度.结果成功构建同时携带HCN4,Tbx3基因及EGFP基因的慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒，为通过HCN4联合Tbx3基因长期稳定的表达来构建窦房结细胞的实验研究提供高效稳定的转基因技术平台。

摘要： 目的：探讨利用体细胞核移植技术生产转基因兔胚胎的可行性,为今后的研究奠定基础.方法：利用携带绿色荧光蛋白基因(GFP)的选择载体,分别通过脂质体法、磷酸钙法和电穿孔的方法转染兔胎儿成纤维细胞,经过G418筛选后,均获得了阳性细胞株.以非转基因和转基因兔胎儿成纤维细胞做核供体,进行了兔的体细胞核移植.结果：(1)血清饥饿处理3～5d的非转基因兔胎儿成纤维细胞核移植后其重构胚的囊胚率显著高于不处理组和处理6～9d组(33.33％ VS 22.47％和23.61％,P＜0.05);(2)转基因与非转基因兔胎儿成纤维细胞核移植后重构胚的融合率(76.27％ VS 73.12％)和分裂率(82.22％ VS 72.06％)没有显著差异(P＞0.05),但囊胚发育率差异显著(20.59％VS33.33％,P＜0.05);(3)比较3种不同方法转染的胎儿成纤维细胞核移植后重构胚的发育情况,发现用电穿孔法转染的兔胎儿成纤维细胞其重构胚的囊胚发育率显著高于脂质体法和磷酸钙法(44.44％VS 20.59％和20.00％,P＜0.05),且只有该方法转染的供体细胞构建的克隆胚在荧光显微镜下观测到了绿色荧光蛋白的表达,而脂质体和磷酸钙法转染的供体细胞核移植后的融合率以及重构胚分裂率与电穿孔法相比,虽然差异不显著(P＞0.05),但均没有观察到GEP的表达.结论：供体细胞经血清饥饿处理适当的时间有利于兔核移植胚胎的发育;用电穿孔法转染兔胎儿成纤维细胞可以有效的生产兔转基因克隆囊胚,且GFP作为一种标记基因,可用于转基因克隆兔的制备.

摘要： 为了便于转基因植株的分子检测，用PCR方法克隆来自于水母的绿色荧光蛋白基因(GFP)和来自于拟南芥的目的基因-DREB转录因子，并对其进行改造，共同构建到表达载体pCAMBIAl301上，获得了具有DERB和GFP的融合蛋白基因的重组表达载体pDRI-GFP，经酶切和测序检测，证明已完整克隆重组。

摘要： 探索用NucleofectorⅡ核转染仪将外源基因导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的可行性.使用Lonza公司的NucleofectorⅡ核转染仪,参考已报道的转染其他猪种的PEFs效率最高的U020程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比,观察转染效率.结果显示，转染5小时后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80％,远远高于脂质体转染的方法.结论表明，用NucleofectorⅡ核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,按照本文所述的转染条件,转染效率可达80％.

摘要： 探索用NucleofectorⅡ核转染仪将外源基因导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的可行性.使用Lonza公司的NucleofectorⅡ核转染仪,参考已报道的转染其他猪种的PEFs效率最高的U020程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比,观察转染效率.结果显示，转染5小时后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80％,远远高于脂质体转染的方法.结论表明，用NucleofectorⅡ核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,按照本文所述的转染条件,转染效率可达80％.

摘要： 探索用NucleofectorⅡ核转染仪将外源基因导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的可行性.使用Lonza公司的NucleofectorⅡ核转染仪,参考已报道的转染其他猪种的PEFs效率最高的U020程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比,观察转染效率.结果显示，转染5小时后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80％,远远高于脂质体转染的方法.结论表明，用NucleofectorⅡ核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,按照本文所述的转染条件,转染效率可达80％.

摘要： 探索用NucleofectorⅡ核转染仪将外源基因导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的可行性.使用Lonza公司的NucleofectorⅡ核转染仪,参考已报道的转染其他猪种的PEFs效率最高的U020程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比,观察转染效率.结果显示，转染5小时后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80％,远远高于脂质体转染的方法.结论表明，用NucleofectorⅡ核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,按照本文所述的转染条件,转染效率可达80％.

摘要： 探索用NucleofectorⅡ核转染仪将外源基因导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的可行性.使用Lonza公司的NucleofectorⅡ核转染仪,参考已报道的转染其他猪种的PEFs效率最高的U020程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比,观察转染效率.结果显示，转染5小时后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80％,远远高于脂质体转染的方法.结论表明，用NucleofectorⅡ核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,按照本文所述的转染条件,转染效率可达80％.

摘要： 为了构建表达基孔肯雅病毒E基因的重组痘苗病毒，本研究通过基因重组的方法将基孔肯雅病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上，酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-CHIKE-EGFP.通过脂质体转染的方法，将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞，通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-CHIKE-EGFP，收集感染重组痘苗病毒的BHK一21细胞，SDS—PAGE电泳检测基孔肯雅病毒E基因在细胞中的表达情况，Westem blot分析表达产物的免疫原性。结果证明基孔肯雅病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-CHIKE-EGFP中获得表达，且表达产物具有良好的免疫原性。表达基孔肯雅病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建，为研制基孔肯雅病毒活载体疫苗奠定了基础。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体为公开了高亲和力增强绿色荧光蛋白纳米抗体及其编码基因的筛选方法。所述抗体是含有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，其核酸序列如SEQ ID NO.2所示。还公开了一种宿主细胞，可以表达抗EGFP纳米抗体，具有高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及高表达性。本发明提供的抗EGFP纳米抗体可特异性的结合绿色荧光蛋白，且其有较高亲和力，可应用与EGFP的基础研究中。

摘要： 本发明公开了一种利用绿色荧光蛋白报告基因检测犬IFN‑α生物学活性的方法，属于蛋白活性检测技术领域。本发明将犬ISRE启动子片段插入带有绿色荧光蛋白的质粒中，构建表达绿色荧光蛋白的重组质粒，通过检测绿色荧光蛋白的表达情况来判断ISRE启动子的激活情况，从而检测犬α‑IFN生物学活性。本发明利用绿色荧光蛋白报告基因检测犬α‑IFN生物学活性的方法与传统检测方法MDCK‑VSV相比，避免了VSV病毒感染人的风险，提高了生物安全性。本发明操作简单，可重复性高，成本低，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及四个绿色荧光蛋白(GFP)纳米抗体编码基因，及其制备方法和应用。本发明构建了GFP纳米抗体文库。利用噬菌体展示技术，从该抗体文库中筛选到了四个特异结合GFP的纳米抗体，分别命名为A12、E6、D5和B9。测序获得了这四个纳米抗体基因的核苷酸序列，如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，其对应的氨基酸序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。将A12基因克隆到改造的表达载体pADL‑10b‑His中，并导入SS320菌株中；将E6、D5和B9基因分别克隆到改造的表达载体pBAD24‑Flag‑His中，并分别导入TOP10菌株中，从而获得了四个纳米抗体的原核表达载体和菌株。本发明表达纯化了四个纳米抗体并证明了四个GFP纳米抗体能够特异结合GFP，可应用于基础研究中对GFP的检测。

摘要： 本发明涉及一种携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的南瓜花叶病毒重组载体及其构建方法，以南瓜花叶病毒基因组RNA2所对应的侵染性克隆pSqMV‑RNA2为模板，将增强型绿色荧光蛋白报告基因插入到MP和LCP之间，获得pSqMV‑RNA2‑EGFP重组载体，该载体可与南瓜花叶病毒基因组RNA1所对应的侵染性克隆pSqMV‑RNA1一起通过农杆菌共浸润的方法接种甜瓜，获得能够表达增强型绿色荧光蛋白报告基因的南瓜花叶病毒。本发明为研究该病毒的侵染过程、揭示该病毒的种传机制提供了新的方法和手段，也为其他外源基因的表达或应用多肽的大量获得特供了新的工具。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 本发明公开了一种利用绿色荧光蛋白报告基因检测犬IFN‑α生物学活性的方法，属于蛋白活性检测技术领域。本发明将犬ISRE启动子片段插入带有绿色荧光蛋白的质粒中，构建表达绿色荧光蛋白的重组质粒，通过检测绿色荧光蛋白的表达情况来判断ISRE启动子的激活情况，从而检测犬α‑IFN生物学活性。本发明利用绿色荧光蛋白报告基因检测犬α‑IFN生物学活性的方法与传统检测方法MDCK‑VSV相比，避免了VSV病毒感染人的风险，提高了生物安全性。本发明操作简单，可重复性高，成本低，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及生物技术中的基因工程领域，公开了一种含绿色荧光蛋白基因的植物转基因表达载体，以及其构建方法和应用。即利用pBIN19、pGFP和pCHS质粒，通过酶切和重组等方法，构建CaMV 35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达载体pBIN-35S-GFP。该载体能实现gfp基因的高效表达，并且在CaMV35S启动子的两端各有一个多克隆位点，可以方便地进行启动子替换，用于研究组织特异性启动子的功能；此外，该载体在gfp基因的5′端含有多克隆位点，在3′端含有EcoR I和Bsm I两个单一酶切位点，可以方便地在5′端连接上目标基因，表达含GFP的融合蛋白，用于研究目标基因编码蛋白的亚细胞定位；也可以方便地切除gfp基因，连上需要的目的基因用于遗传转化研究。

摘要： 本发明涉及生物技术中的基因工程领域，公开了一种含绿色荧光蛋白基因的植物转基因表达载体，以及其构建方法和应用。即利用pBIN19、pGFP和pCHS质粒，通过酶切和重组等方法，构建CaMV 35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达载体pBIN－35S－GFP。该载体能实现gfp基因的高效表达，并且在CaMV 35S启动子的两端各有一个多克隆位点，可以方便地进行启动子替换，用于研究组织特异性启动子的功能；此外，该载体在gfp基因的5′端含有多克隆位点，在3′端含有EcoR I和Bsm I两个单一酶切位点，可以方便地在5′端连接上目标基因，表达含GFP的融合蛋白，用于研究目标基因编码蛋白的亚细胞定位；也可以方便地切除gfp基因，连上需要的目的基因用于遗传转化研究。

摘要： 本发明提出了一种绿色荧光蛋白基因标记鲍曼不动杆菌的方法，构建了pET‑RA‑Y大肠杆菌‑鲍曼不动杆菌穿梭质粒(包含启动子序列、GFP序列、鲍曼不动杆菌基因复制起始点序列、利福平抗性筛选标记)，并导入到鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC17978中。在荧光显微镜下观察，菌体呈现绿色荧光。本发明还建立了荧光标记鲍曼不动杆菌感染细胞模型，用于本方法构建的荧光标记鲍曼不动杆菌的稳定性与可靠性，为研究细菌致病因子的生物学作用及细菌与宿主相互作用情况提供技术支撑，绿色荧光蛋白基因的导入为研究鲍曼不动杆菌与宿主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。