Ⅱ型胶原

摘要： 背景:支架材料与生物因子在不同条件下复合培养对软骨细胞功能的影响,是组织工程材料研究的热点。目的:探讨动态环境下透明质酸与国产多孔钽复合对大鼠软骨细胞功能的影响。方法:分离培养SD大鼠膝关节软骨细胞,分5组培养:A组单纯细胞静态培养;B组接种于国产钽片上静态培养;C组接种于国产钽片上,加入含透明质酸的培养基,静态培养;D组接种于国产钽片上,置于动态转瓶中(双向交替正反转,旋转角度为40°,40 r/h)培养;E组接种于国产钽片上,加入含透明质酸的培养基,置于动态转瓶中(双向交替正反转,旋转角度为40°,40 r/h)培养,5组均连续培养7 d。扫描电镜下观察材料上的细胞形态,采用ELISA法检测细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、SOX9的分泌情况,Western Blot实验检测细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、SOX9蛋白的表达。结果与结论:①扫描电镜下可见,随着静态培养时间的延长,C组软骨细胞数量逐渐增多,并逐渐覆盖钽材料表面;②培养第5天,C组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原分泌量均高于A、B组(P<0.05),D组SOX9分泌量低于E组(P<0.05),B组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原分泌量低于D组(P<0.05),C组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原分泌量低于E组(P<0.05);③培养第5天,C组Ⅱ型胶原蛋白表达量高于B组(P<0.05),D组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量高于B组(P<0.05),E组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量高于C组(P<0.05);④结果表明,国产多孔钽与透明质酸复合后可促进软骨细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的分泌和蛋白表达,动态环境培养下蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的分泌及蛋白表达优于静态环境培养,SOX9的分泌及蛋白表达不受动、静态培养环境影响。

摘要： 背景:在骨关节炎的发生、发展过程中,软骨病变是其中的关键环节,探究软骨细胞功能、开发具有软骨细胞保护作用及促软骨细胞分泌Ⅱ型胶原等的药物,是当前探索骨关节炎临床治愈的重要手段。目的:研究黄芪甲苷对白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎性损伤的保护作用,探讨Hippo-YAP通路是否参与到该作用中及其潜在的作用机制。方法:分离培养SD大鼠乳鼠胫骨与股骨软骨细胞。取对数生长期软骨细胞,分5组:空白组常规培养,模型组加入白细胞介素1β诱导软骨细胞炎性损伤,黄芪甲苷组加入白细胞介素1β+黄芪甲苷,NC-si RNA组转染NC-si RNA+白细胞介素1β+黄芪甲苷,YAP1-si RNA转染组转染YAP1-si RNA+白细胞介素1β+黄芪甲苷。各组细胞培养48 h后,进行相关检测。结果与结论:(1)模型组细胞活力低于空白组(P <0.05),黄芪甲苷组、NC-si RNA组、YAP1-si RNA转染组细胞活力高于模型组(P <0.05),YAP1-si RNA转染组细胞活力高于NC-si RNA组(P<0.05);(2)模型组细胞相凋亡率高于空白组(P<0.05),黄芪甲苷组、NC-si RNA组、YAP1-si RNA转染组细胞相凋亡率低于模型组(P <0.05),YAP1-si RNA转染组细胞相凋亡率低于NC-si RNA组(P <0.05);(3)RT-q PCR检测显示,模型组金属基质蛋白酶1、组织金属蛋白酶抑制物1 m RNA表达高于空白组(P <0.05),YAP1、TEAD1 m RNA表达低于空白组(P <0.05);黄芪甲苷组YAP1 m RNA表达高于模型组(P <0.05);YAP1-si RNA组金属基质蛋白酶1、组织金属蛋白酶抑制物1 m RNA表达高于NC-si RNA组(P <0.05),YAP1、TEAD1m RNA表达低于NC-si RNA组(P<0.05);(4)Western Blot检测显示,模型组金属基质蛋白酶1、组织金属蛋白酶抑制物1、YAP1蛋白表达高于空白组(P <0.05),Ⅱ型胶原、TEAD1、p-YAP1蛋白表达低于空白组(P <0.05);YAP1-si RNA组金属基质蛋白酶1、织金属蛋白酶抑制物1蛋白表达高于NC-si RNA组(P <0.05),Ⅱ型胶原、TEAD1、p-YAP1蛋白表达低于NC-si RNA组(P <0.05);(5)结果表明,黄芪甲苷对白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎性损伤存在保护作用,该作用可能与Hippo-YAP通路有关。

摘要： 背景:随着软骨组织工程技术的发展,国内外已有应用外周血源性间充质干细胞修复软骨缺损的体外培养及动物实验,并取得了不错的进展,转化生长因子β3常被用于细胞体外培养以诱导间充质干细胞成软骨分化。但在实验应用中,很少涉及转化生长因子β3量效探讨,涉及量效的细胞培养实验又经常误用单因素方差分析或t检验来分析这类资料。目的:采用重复测量方法分析转化生长因子β3诱导外周血源性间充质干细胞成软骨分化的量效关系,以期获得较佳的转化生长因子β3用量,获得较好的成软骨分化效果。方法:动员、提取、培养滇南小耳猪外周血源性间充质干细胞,分别加入含不同质量浓度转化生长因子β3(25-500μg/L)的成软骨诱导液进行成软骨诱导分化,对照组不作诱导处理,培养第2,4,6,8,10,12,14天,CCK-8法检测各组细胞增殖情况;培养第3,7,14,21天,收集各组细胞培养上清,ELISA法检测Ⅱ型胶原水平;培养第21天,进行甲苯胺蓝染色观察聚集蛋白聚糖表达;培养第21天,进行免疫细胞化学染色观察Ⅱ型胶原表达。结果与结论:在25-500μg/L范围内,转化生长因子β3质量浓度在40μg/L时外周血源性间充质干细胞生长增殖能力最强,转化生长因子β3质量浓度在40,80μg/L时更容易促进外周血源性间充质干细胞成软骨分化。

摘要： 背景:目前,腰椎间盘摘除术后纤维环破口仍继续存在,容易形成复发型腰椎间盘突出,如何修复纤维环破口是组织工程学的热点问题.目的:比较以明胶海绵为载体的山羊骨髓间充质干细胞移植与纤维蛋白粘合剂修复椎间盘纤维环缺损的能力.方法:从山羊髂骨中提取和分离出骨髓间充质干细胞,并将其进行传代培养.将15只山羊随机分为对照组、粘合组、移植组,每组5只(30个椎间盘).采用手术器械制备0.75 cm×0.75 cm椎间盘纤维环缺损,粘合组利用纤维蛋白粘合剂对破损的纤维环进行粘合,移植组将负载骨髓间充质干细胞悬液(细胞浓度为5×109 L-1,体积为10μL)的明胶海绵(0.75 cm×0.75 cm)放入纤维环缺损中,然后逐层进行缝合.术后6,12周,取出纤维环组织进行苏木精-伊红染色、Masson三色明胶染色、AB-PAS染色和Ⅱ型胶原染色.结果 与结论:苏木精-伊红染色观察到移植组中软骨细胞、胶原细胞与骨细胞的数量相比其他两组增多,细胞成熟,修复能力更强;Masson三色明胶染色观察到移植组有更多的成纤维细胞和纤维组织;AB-PAS染色观察到移植组有更多的软骨细胞参与修复;Ⅱ型胶原免疫组化染色发现移植组Ⅱ胶原含量最高;上述结果证实了山羊骨髓间充质干细胞对纤维环缺损有更好的修复能力.

摘要： 背景:聚氨酯材料作为一种非降解高分子化合物具有良好的稳定性和力学特性,但作为组织工程材料的软骨细胞生物相容性研究未见报道.目的:观察聚氨酯材料与兔膝关节软骨细胞复合培养的生物相容性.方法:采用酶消化法提取兔膝关节软骨细胞,体外扩增至第3代时与聚氨酯材料复合培养,采用MTT法检测复合培养与单纯培养的细胞增殖活性;复合培养2,4周后,倒置显微镜、苏木精-伊红染色与扫描电镜观察软骨细胞生长情况,免疫组化染色观察Ⅱ型胶原表达.结果 与结论:①MTT检测显示,复合培养6,8,10 d的细胞增殖活性高于单纯培养的细胞(P<0.05).②倒置显微镜显示,2周后细胞基本长满材料表面,部分细胞融入材料内部;4周后材料表面长满细胞,成团细胞填塞材料孔隙.③苏木精-伊红染色显示,软骨细胞在聚氨酯材料内部稳定贴壁生长;扫描电镜显示,软骨细胞成团贴附于聚氨酯材料表面.④免疫组化染色显示,支架中的软骨细胞表达Ⅱ型胶原.⑤结果表明,聚氨酯材料与软骨细胞的生物相容性良好,有望成为理想的组织工程软骨材料.

摘要： 背景:Ⅱ型胶原、丝素蛋白和透明质酸3种天然生物可降解材料能够为细胞提供理想的微环境,已成为理想的软骨修复支架材料。目的:将Ⅱ型胶原、丝素蛋白和透明质酸3种材料制备成软骨组织工程支架,评价其理化性质及生物力学性能。方法:采用低温3D打印技术制备Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸复合支架,检测其微观结构、孔隙率与吸水膨胀率。采用不同的应变率对该复合支架进行压缩实验,考察支架的率相关性能;在该复合支架表面施加恒定的应力水平或恒定的应变,保持3600 s,观察其蠕变应变变化及应力松弛行为。结果与结论:①Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸复合支架呈三维多孔结构,孔径大小一致,相通性好,孔隙率为(85.1±1.6)%,吸水膨胀率为(1071.7±131.6)%;②在不同的应变率作用下,软骨支架的压缩应力-应变曲线不重合,说明软骨支架的压缩力学性能具有率相关性;随着应变率的增加,复合支架的杨氏模量增加;③当应力水平恒定时,复合支架的蠕变应变呈现先快速增加后缓慢增加的趋势,当应力水平增加时蠕变应变也增加;④当压缩应变恒定时,支架的应力随着松弛时间先快速降低后缓慢降低,随着压缩应变的增大,不同时刻的应力都增大;⑤力学性能实验表明,制备的Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸软骨支架力学性能特征与宿主软骨组织相似,都是非线性黏弹性材料。

摘要： 背景:目前,腰椎间盘摘除术后纤维环破口仍继续存在,容易形成复发型腰椎间盘突出,如何修复纤维环破口是组织工程学的热点问题。目的:比较以明胶海绵为载体的山羊骨髓间充质干细胞移植与纤维蛋白粘合剂修复椎间盘纤维环缺损的能力。方法:从山羊髂骨中提取和分离出骨髓间充质干细胞,并将其进行传代培养。将15只山羊随机分为对照组、粘合组、移植组,每组5只(30个椎间盘)。采用手术器械制备0.75 cm×0.75 cm椎间盘纤维环缺损,粘合组利用纤维蛋白粘合剂对破损的纤维环进行粘合,移植组将负载骨髓间充质干细胞悬液(细胞浓度为5×10^(9)L^(-1),体积为10μL)的明胶海绵(0.75 cm×0.75 cm)放入纤维环缺损中,然后逐层进行缝合。术后6,12周,取出纤维环组织进行苏木精-伊红染色、Masson三色明胶染色、AB-PAS染色和Ⅱ型胶原染色。结果与结论:苏木精-伊红染色观察到移植组中软骨细胞、胶原细胞与骨细胞的数量相比其他两组增多,细胞成熟,修复能力更强;Masson三色明胶染色观察到移植组有更多的成纤维细胞和纤维组织;AB-PAS染色观察到移植组有更多的软骨细胞参与修复;Ⅱ型胶原免疫组化染色发现移植组Ⅱ胶原含量最高;上述结果证实了山羊骨髓间充质干细胞对纤维环缺损有更好的修复能力。

摘要： 背景:聚氨酯材料作为一种非降解高分子化合物具有良好的稳定性和力学特性,但作为组织工程材料的软骨细胞生物相容性研究未见报道。目的:观察聚氨酯材料与兔膝关节软骨细胞复合培养的生物相容性。方法:采用酶消化法提取兔膝关节软骨细胞,体外扩增至第3代时与聚氨酯材料复合培养,采用MTT法检测复合培养与单纯培养的细胞增殖活性;复合培养2,4周后,倒置显微镜、苏木精-伊红染色与扫描电镜观察软骨细胞生长情况,免疫组化染色观察Ⅱ型胶原表达。结果与结论:①MTT检测显示,复合培养6,8,10 d的细胞增殖活性高于单纯培养的细胞(P<0.05)。②倒置显微镜显示,2周后细胞基本长满材料表面,部分细胞融入材料内部;4周后材料表面长满细胞,成团细胞填塞材料孔隙。③苏木精-伊红染色显示,软骨细胞在聚氨酯材料内部稳定贴壁生长;扫描电镜显示,软骨细胞成团贴附于聚氨酯材料表面。④免疫组化染色显示,支架中的软骨细胞表达Ⅱ型胶原。⑤结果表明,聚氨酯材料与软骨细胞的生物相容性良好,有望成为理想的组织工程软骨材料。

摘要： 背景:Ⅱ型胶原、丝素蛋白和透明质酸3种天然生物可降解材料能够为细胞提供理想的微环境,已成为理想的软骨修复支架材料.目的:将Ⅱ型胶原、丝素蛋白和透明质酸3种材料制备成软骨组织工程支架,评价其理化性质及生物力学性能.方法:采用低温3D打印技术制备Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸复合支架,检测其微观结构、孔隙率与吸水膨胀率.采用不同的应变率对该复合支架进行压缩实验,考察支架的率相关性能;在该复合支架表面施加恒定的应力水平或恒定的应变,保持3600 s,观察其蠕变应变变化及应力松弛行为.结果 与结论:①Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸复合支架呈三维多孔结构,孔径大小一致,相通性好,孔隙率为(85.1±1.6)％,吸水膨胀率为(1071.7±131.6)％;②在不同的应变率作用下,软骨支架的压缩应力-应变曲线不重合,说明软骨支架的压缩力学性能具有率相关性;随着应变率的增加,复合支架的杨氏模量增加;③当应力水平恒定时,复合支架的蠕变应变呈现先快速增加后缓慢增加的趋势,当应力水平增加时蠕变应变也增加;④当压缩应变恒定时,支架的应力随着松弛时间先快速降低后缓慢降低,随着压缩应变的增大,不同时刻的应力都增大;⑤力学性能实验表明,制备的Ⅱ型胶原-丝素蛋白-透明质酸软骨支架力学性能特征与宿主软骨组织相似,都是非线性黏弹性材料.

摘要： 背景:随着软骨组织工程技术的发展,国内外已有应用外周血源性间充质干细胞修复软骨缺损的体外培养及动物实验,并取得了不错的进展,转化生长因子β3常被用于细胞体外培养以诱导间充质干细胞成软骨分化.但在实验应用中,很少涉及转化生长因子β3量效探讨,涉及量效的细胞培养实验又经常误用单因素方差分析或t 检验来分析这类资料.目的:采用重复测量方法分析转化生长因子β3诱导外周血源性间充质干细胞成软骨分化的量效关系,以期获得较佳的转化生长因子β3用量,获得较好的成软骨分化效果.方法:动员、提取、培养滇南小耳猪外周血源性间充质干细胞,分别加入含不同质量浓度转化生长因子β3(25-500 μg/L)的成软骨诱导液进行成软骨诱导分化,对照组不作诱导处理,培养第2,4,6,8,10,12,14天,CCK-8法检测各组细胞增殖情况;培养第3,7,14,21天,收集各组细胞培养上清,ELISA法检测 Ⅱ型胶原水平;培养第21天,进行甲苯胺蓝染色观察聚集蛋白聚糖表达;培养第21天,进行免疫细胞化学染色观察 Ⅱ型胶原表达.结果与结论:在25-500 μg/L范围内,转化生长因子β3质量浓度在40 μg/L时外周血源性间充质干细胞生长增殖能力最强,转化生长因子β3质量浓度在40,80 μg/L时更容易促进外周血源性间充质干细胞成软骨分化.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的：探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysacdharides,ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响.rn 方法：取4周龄SD大鼠,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ性胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞.建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化方法鉴定软骨细胞.体外培养到第二代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg/ml的ABPS对软骨细胞进行干预.干预后,Western blot检测各组的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达变化,免疫荧光观察空白对照组与加药组的Ⅱ型胶原的表达变化.rn 结果：与阴性对照组相比,第二代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征：软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原.与空白对照组相比,Western blot检测结果显示ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原,并且在100μg/ml时软骨细胞中的Ⅱ型胶原表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05).同时100μg/ml的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强.rn 结论：ABPS促进了软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达.

摘要： 目的:通过检测关节软骨Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平,探讨膝骨性关节炎中Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律.rn 方法:2012年10月20日～2014年12月27日,对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查,同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料.在显微镜下观察不同体质KOA患者软骨的病理改变,采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞mRNA及蛋白水平的表达.rn 结果:在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中,阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱,细胞聚集成团或者局部退化消失,Sox9在软骨细胞核中表达,Col2al在细胞外基质中表达,在阳虚质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态,在平和质KOA相对阳虚体质表达比较低,两者的表达均有显著差异(P＜0.05).rn 结论:膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质.在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现高表达,其与中医体质存在一定的内在相关性,说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素,因人的体质是相对恒定的,某一疾病的诱发是具有时间性的,故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al高表达的主要因素之一.

摘要： 目的:通过检测关节软骨Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平,探讨膝骨性关节炎中Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律.rn 方法:2012年10月20日～2014年12月27日,对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查,同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料.在显微镜下观察不同体质KOA患者软骨的病理改变,采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞mRNA及蛋白水平的表达.rn 结果:在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中,阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱,细胞聚集成团或者局部退化消失,Sox9在软骨细胞核中表达,Col2al在细胞外基质中表达,在阳虚质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态,在平和质KOA相对阳虚体质表达比较低,两者的表达均有显著差异(P＜0.05).rn 结论:膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质.在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现高表达,其与中医体质存在一定的内在相关性,说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素,因人的体质是相对恒定的,某一疾病的诱发是具有时间性的,故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al高表达的主要因素之一.

摘要： 目的:通过检测关节软骨Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平,探讨膝骨性关节炎中Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律.rn 方法:2012年10月20日～2014年12月27日,对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查,同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料.在显微镜下观察不同体质KOA患者软骨的病理改变,采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞mRNA及蛋白水平的表达.rn 结果:在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中,阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱,细胞聚集成团或者局部退化消失,Sox9在软骨细胞核中表达,Col2al在细胞外基质中表达,在阳虚质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态,在平和质KOA相对阳虚体质表达比较低,两者的表达均有显著差异(P＜0.05).rn 结论:膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质.在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现高表达,其与中医体质存在一定的内在相关性,说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素,因人的体质是相对恒定的,某一疾病的诱发是具有时间性的,故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al高表达的主要因素之一.

摘要： 目的:通过检测关节软骨Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平,探讨膝骨性关节炎中Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律.rn 方法:2012年10月20日～2014年12月27日,对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查,同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料.在显微镜下观察不同体质KOA患者软骨的病理改变,采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞mRNA及蛋白水平的表达.rn 结果:在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中,阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱,细胞聚集成团或者局部退化消失,Sox9在软骨细胞核中表达,Col2al在细胞外基质中表达,在阳虚质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态,在平和质KOA相对阳虚体质表达比较低,两者的表达均有显著差异(P＜0.05).rn 结论:膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质.在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现高表达,其与中医体质存在一定的内在相关性,说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素,因人的体质是相对恒定的,某一疾病的诱发是具有时间性的,故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al高表达的主要因素之一.

摘要： 本发明创造提供了一种融合蛋白酶及其制备方法、其在提取I型胶原蛋白中的应用以及该I型胶原蛋白的用途，所述融合蛋白酶包括蛋白酶7片段mmp7C和/或蛋白酶9片段mmp9C；所述蛋白酶7片段mmp7C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述蛋白酶9片段mmp9C的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的融合蛋白酶在提取动物皮和肌腱组织的I型胶原蛋白的过程中，I型胶原蛋白空间结构不会被破坏，且能够去除终产品中的杂蛋白，提高了I型胶原蛋白的提取率。

摘要： 本发明公开了一种液化动物软骨的设备，包括：外腔体，其上端可拆卸密封设有上盖、下端可开启/关闭密封设有下封盖，所述上盖开有投料口和第一进汽口；第一液化腔，其同轴且可上下滑动地设置在所述外腔体内；第二液化腔，其顶面固接在所述外腔体的外侧壁上，以使所述外腔体下端伸入第二液化腔内。本发明还公开了一种液化动物软骨的设备联产硫酸软骨素、Ⅱ型胶原寡肽、Ⅱ型胶原多肽的方法。本发明的液化动物软骨的设备，能对动物软骨进行第一次液化和第二次液得到液化物，从而简化动物软骨的加工流程、提高生产效率。

摘要： 本发明属于医学生物材料领域，具体公开了一种改性I型胶原蛋白及改性方法和利用该改性I型胶原蛋白制备的胶原凝胶，该改性方法包括：在2～10°C的温度下(1)将弱酸与I型胶原蛋白混合均匀，制得酸性胶原溶液；(2)利用磷酸盐缓冲液对酸性胶原溶液进行透析，直到获得中性胶原溶液；(3)去除中性胶原溶液中的气泡；(4)在液封条件下，利用旋转流变仪对脱除了气泡的中性胶原溶液进行剪切，剪切完成后静置，即可制得改性I型胶原蛋白。本发明通过利用机械剪切的方式对胶原蛋白进行改性，该方法简便高效，可以在不需要引入其他物质的基础上，减少胶原分子的三螺旋结构，增多无规卷曲结构，使得组装得到的胶原纤维直径、孔隙和粘弹性可控。

摘要： 本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，包含如下步骤：动物胎盘组织预处理、脱细胞、脱脂、除杂、酶切、盐析纯化、脱盐浓缩；所述的盐析方法为：在碱性条件下对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物源胶原蛋白混合物进行盐析，一步盐析即可得到高纯度的Ⅲ型胶原蛋白，纯度达到95％以上；制备得到的动物胎盘Ⅲ型胶原蛋白具有良好的三螺旋结构以及特征性的纤维网状结构；内毒素含量低于0.5Eu/mL，达到医用标准；可应用于活性护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品等领域。

摘要： 提供以新的作用机制为指标的成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选方法。通过以神经激活作为指标，能够进行成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选。

摘要： 本发明创造提供了一种融合蛋白酶及其制备方法、其在提取I型胶原蛋白中的应用以及该I型胶原蛋白的用途，所述融合蛋白酶包括蛋白酶7片段mmp7C和/或蛋白酶9片段mmp9C；所述蛋白酶7片段mmp7C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述蛋白酶9片段mmp9C的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的融合蛋白酶在提取动物皮和肌腱组织的I型胶原蛋白的过程中，I型胶原蛋白空间结构不会被破坏，且能够去除终产品中的杂蛋白，提高了I型胶原蛋白的提取率。

摘要： 本发明涉及一种将选自I型胶原酶、II型胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶构成的组的至少一种酶从物质的混合物中纯化出来的方法，作为方法步骤，所述方法包括至少一个疏水作用色谱过程，其特征在于，疏水作用色谱过程中的固定相包括从聚丙二醇和丁基琼脂糖构成的组中选出的材料。本发明还涉及以这种方法纯化的酶用于制药、化妆品和/或生化目的的用途。

摘要： 本发明公开了IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1：样品垫的制备；S2：结合垫的制备；S3：NC膜的制备；S4：装配。本发明利用荧光免疫层析技术，采用双抗体夹心法原理进行检测，在层析过程中，样本中的CIV/LN/PIIINP抗原与结合垫上的荧光微球标记的CIV/LN/PIIINP单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下沿着硝酸纤维素膜向前移行至检测区域，被硝酸纤维素膜上包被的另一株CIV/LN/PIIINP单克隆单克隆抗体捕获并形成复合物沉积在T区，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的定标曲线自动转化为定量数值。

摘要： 本发明公开了一种液化动物软骨的设备，包括：外腔体，其上端可拆卸密封设有上盖、下端可开启/关闭密封设有下封盖，所述上盖开有投料口和第一进汽口；第一液化腔，其同轴且可上下滑动地设置在所述外腔体内；第二液化腔，其顶面固接在所述外腔体的外侧壁上，以使所述外腔体下端伸入第二液化腔内。本发明还公开了一种液化动物软骨的设备联产硫酸软骨素、Ⅱ型胶原寡肽、Ⅱ型胶原多肽的方法。本发明的液化动物软骨的设备，能对动物软骨进行第一次液化和第二次液得到液化物，从而简化动物软骨的加工流程、提高生产效率。

摘要： 本申请涉及重组III型胶原蛋白技术领域，尤其涉及重组人源III型胶原蛋白注射剂及其在在皮肤胶原再生中的应用。通过构建Col IIIɑ‑1和P4HA融合表达的毕赤酵母X33，制备了能够胞外表达III胶原蛋白ɑ链，对该基因工程菌进行发酵培养，能够大量收获胞外表达的III胶原蛋白ɑ链，极大地利于该蛋白的下游纯化和提取。本申请公开的重组人源III型胶原蛋白注射剂，以独立包装的Col III‑ɑ1‑DOPA和葡萄糖亚铁摩尔比例为5:1的条件下形成具有三螺旋和铁离子配位交联结构的水凝胶，能够增强胶原的粘合性，还能够在体内具有优良的生物相容性，非常适合应用在于中创伤部位的胶原再生和组织填充。