Wnt1

摘要： 目的选择miR-21介导Wnt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制研究。方法选择人胰腺腺癌细胞株ASPC-1,分为As组(正常ASPC-1细胞)、Ay组(ASPC-1细胞转染+miR-21-inhibitions)、Nc组(ASPC-1细胞转染+miR-21-阴性对照)。RT-PCR法检测Wnt1、β-catenin水平变化,Westernblot法检测Wnt1、β-catenin蛋白,Transwell法、MTT法检测ASPC-1细胞的迁移、活力变化,流式细胞仪检测ASPC-1细胞凋亡率。结果三组miR-21、Wnt1、β-catenin水平、Wnt1蛋白、β-catenin蛋白、ASPC-1细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(F分别=55.47、14.30、123.60、3.54、5.85、30.27,P均<0.05)。与As组、Nc组比较,Ay组miR-21、Wnt1、β-catenin水平、Wnt1蛋白、ASPC-1细胞凋亡率有明显下降,β-catenin蛋白明显上升(P均<0.05),ASPC-1细胞迁移能力明显下降。培养24 h、48 h、72 h时,三组间ASPC-1细胞活力比较,差异均有统计学意义(F分别=9.62、24.47、126.10,P均<0.05)。两两比较,培养24 h、48 h、72 h时,Ay组细胞活力均低于As组、Nc组(P均<0.05)。结论miR-21低表达能明显抑制胰腺癌细胞增殖,其作用机制可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性来实现。

摘要： 目的 研究桃核承气汤对Wnt1/β-catenin信号通路介导Axin表达产生的影响,从理论层面上为慢性肾衰竭的临床治疗提供支撑.方法 选择125只雄性Wistar大鼠,以随机的方式分为5组,其中,针对桃核承气汤组、尿毒清组和模型组以切除5/6肾的方式进行手术造模,对假手术组进行双肾被膜剥除操作,同时设置空白组.每天在固定时间进行灌胃操作,经过56 d后,采取麻醉的方式处死,对血尿素氮、血红蛋白、红细胞等进行测量,并观察病理组织形态学及分子生物学指标.结果 比较桃核承气汤组、模型组,发现前者的Hb、RBC出现明显的增长趋势,2组之间差异显著;除血肌酐降低外,血尿素氮也逐渐变少,差异显著.通过实时荧光定量PCR及蛋白切迹,比较桃核承气汤组、模型组,发现前者的表达出现下调现象,差异明显;表达不断增加,差异显著.肾组织HE染色显示:在模型组中,肾小球固缩,炎性细胞出现浸润现象;和模型组相比,桃核承气汤组有了明显的改善.结论 桃核承气汤能够有效抑制上述通路,延缓慢性肾衰竭进展.

摘要： 目的 探讨无翅型小鼠乳癌病毒整合位点家族成员1(Wnt1)、β-连环蛋白(β-catenin)、转录因子4(TCF4)在结直肠癌(CRC)_患者组织中的变化,及其在预后判断中的价值.方法 采用实时荧光定量PCR方法 检测2011年5月至2014年5月期间106例II、III期结直肠癌患者癌组织和癌旁正常组织中Wnt1、β-catenin、TCF4的表达.结果 CRC患者癌组织中Wnt1、β-catenin、TCF4 mRNAs表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.001).其中Wnt1的表达与肿瘤大小、浸润程度和局部淋巴结转移密切相关(P<0.05);β-catenin的表达与分化程度、浸润程度和局部淋巴结转移密切相关(P<0.05);TCF4的表达与浸润程度和局部淋巴结转移密切相关(P<0.05).COX多因素模型进行分析,局部淋巴结转移、Wnt1、β-catenin和TCF4是CRC患者预后的独立因素.结论 Wnt1、β-catenin和TCF4可以有效预测II、III期结直肠癌患者的预后,便于临床制定更有效的治疗方案.

摘要： 目的 探讨成骨不全(OI)XV型患者中,WNT1 c.110T>C/p.I37T和c.505G>T/p.G169C错义突变对WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖分化的机制.方法 构建野生型WNT1、WNT1 c.110T>C突变体、WNT1 c.505G>T突变体、WNT1 c.884C>A突变体(阳性对照)和空质粒(载体,阴性对照)转染成骨前细胞(MC3T3-E1).MTS法检测WNT1基因突变对细胞活性的影响,实时定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(WB)分别检测BMP2和RANKL(成骨细胞和破骨细胞分化标志物)的表达.采用qPCR、WB和免疫荧光(IF)检测成骨细胞中WNT1的mRNA、蛋白表达水平与WNT1/β-catenin信号通路相关的蛋白表达水平.结果 转染24 h后,WNT1野生型细胞活性显著高于空载组、c.505G>T及c.884C>A突变组,转染48 h后,c.110T>C和c.505G>T突变细胞活性较WNT1野生型细胞显著降低,差异有统计学意义(PC和c.505G>T突变株中BMP2基因的表达显著水平降低,RANKL基因的表达显著升高,差异有统计学意义(PC和c.505G>T突变可能通过抑制WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖和成骨表型,这可能与OI有关.

摘要： 近来研究显示,早期冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)患者具有Wnt信号通路缺陷特征,而Wnt通路由包括DKK在内的多种拮抗剂家族所调控,反映在生化指标上表现为血清Wnt-1水平降低,DKK水平升高.红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)是反映红细胞大小是否均一的指标,既往常被用于诊断血液病,近来研究发现红细胞也参与炎症反应及动脉粥样硬化的过程,证明血清RDW水平与CHD也有一定的相关性,本文对CHD患者外周血中Wnt-1、DKK-1及RDW水平的关系作一综述.

摘要： 目的:探究miR-140-5p通过Wnt1通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭的影响,为临床对NSCLC的治疗提供理论依据.方法:临床收集人NSCLC组织及癌旁组织20组,RT-PCR检测miR-140-5p与Wnt1基因的表达水平,Spearman相关分析法比较miR-140-5p与Wnt1基因表达水平的相关性.将miR-140-5p mimic转染至A549细胞,通过RT-PCR确认过表达.将A549细胞分为对照组、miR-140-5p组、Wnt1组和mimic+Wnt1组,将miR-140-5p mimic和Lv-Wnt1载体分别或共转染至A549细胞,分别通过RT-PCR、Western blot检测Wnt1基因表达水平,并通过细胞划痕实验和Transwell检测各组A549细胞的迁移、侵袭能力.Western blot检测各组细胞中MMP2,MMP9和β-catenin蛋白表达水平.荧光素酶报告基因法验证miR-140-5p与Wnt1基因的靶向关系.结果:与癌旁组织相比,NSCLC组织中miR-140-5p表达量显著降低(P<0.01),且miR-140-5p与Wnt1基因表达水平呈负相关(r=-0.901,P<0.001).过表达miR-140-5p后,与对照组相比,miR-140-5p组中Wnt1基因在RNA和蛋白质水平的表达量、细胞迁移能力、细胞侵袭数量、MMP2,MMP9、β-catenin蛋白表达量均显著下降(P<0.01),而在Wnt1组中均显著升高(P<0.01).与Wnt1组相比,mimic+Wnt1组中Wnt1基因在RNA和蛋白质水平表达量、细胞迁移能力、细胞侵袭数量、MMP2、MMP9、β-catenin蛋白表达量均显著下降(P<0.01).在荧光素酶报告实验中,与WT-Wnt1+miR-140-5p NC组相比,WT-Wnt1+miR-140-5p mimic组中荧光素酶活性显著降低(P<0.01).结论:miR-140-5p可靶向作用于Wnt1基因,抑制Wnt1通路活性并下调MMP2,MMP9、β-catenin表达,抑制NSCLC细胞迁移与侵袭.

摘要： [目的]明确基于电穿孔的基因功能分析方法在家蚕Bombyx mori活体内的应用实效.[方法]针对调控家蚕幼虫体表斑纹黑色素合成的靶基因Wnt1(Wingless),人工合成特异性siRNA,向4龄第3天家蚕幼虫注射Wnt1 siRNA并进行电穿孔作为处理组(ERFA-RNAi),以注射Wnt1 siRNA但未进行电穿孔的幼虫作为阴性对照组(negative control,NC),解剖5龄幼虫斑纹区的表皮,用实时定量RT-PCR测定表皮中Wnt1的相对表达量,验证电穿孔介导的RNAi效果.带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP和红色荧光蛋白报告基因DsRed2表达元件的转座子载体pPIG-A3GR,通过电穿孔导入家蚕2龄幼虫;正常饲养72 h后,用荧光体视显微镜观察幼虫中EGFP和DsRed2的表达,验证当世代家蚕的嵌合体转基因.[结果]家蚕4龄第3天幼虫中导入Wnt1的特异性siRNA后,5龄幼虫体表特定部位斑纹的形成明显受到抑制,实时定量RT-PCR分析表明5龄幼虫表皮中Wnt1的表达水平显著降低.嵌合体转基因家蚕的阳性率达56.60％,并且两个荧光报告基因EGFP和DsRed2在幼虫、蛹及成虫期持续表达.[结论]电穿孔技术可快捷、高效地向家蚕活体内导入外源RNA或DNA,是家蚕乃至其他昆虫基因功能解析的有效方法.

摘要： 目的 通过在家兔腓肠肌急性钝挫伤模型中,研究Wnt1、Wnt4的含量变化,探讨Wnt1、Wnt4在急性钝挫伤修复中产生的作用.方法 将40只日本大耳白兔随机选5只为空白对照组,其余35只通过软组织钝挫伤重力砸伤器建立家兔右后肢急性钝挫伤模型,造模成功后(4h后)选取7个时间观察点进行取材,分别在第1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天取材.通过透射电镜观察超微结构下各组急性钝挫伤后恢复情况.采用RT-PCR检测各组Wnt1 mRNA、Wnt4 mRNA表达动态变化情况.结果 透射电镜下空白组、急性钝挫伤后各组可见不同程度的超微结构变化.RT-PCR检测结果显示,Wnt1 mRNA在损伤后7d、14d表达升高(P＜ 0.05);Wnt4 mRNA在损伤后5d、7d、14d表达升高(P＜0.05).结论 Wnt1、Wnt4可能参与了兔急性钝挫伤后的早期恢复过程,且Wnt1、Wnt4的表达量变化与骨骼肌急性钝挫伤的早期恢复进程密切相关.说明Wnt1、Wnt4在骨骼肌损伤后的修复过程中发挥了重要作用.

摘要： 目的 探讨黄芪多糖(APS)对脾虚湿困大鼠胃肠功能的调节作用及通过Wnt/β-catenin信号通路修复肠道黏膜损伤的机制.方法 4周龄雄性Wistar大鼠50只,按随机数字表法分为五组,每组10只:对照组(正常饲养),模型组(高脂低蛋白饲料加力竭游泳法建立脾虚湿困大鼠模型)、APS高剂量组[造模后,按照900 mg/(kg·d)灌胃APS,每次1 ml/100 g]、APS中剂量组[造模后,按照600 mg/(kg·d)灌胃APS,每次1 ml/100 g]、APS低剂量组[造模后,按照300 mg/(kg·d)灌胃APS,每次1 ml/100 g],APS灌胃每日一次,对照组与模型组给予同体积生理盐水灌胃,持续2周.酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清淀粉酶、D-木糖、胃动素、胃泌素;HE染色法观察各组大鼠小肠病理学变化;免疫组织化学法观察各组大鼠小肠组织Wnt1、β-catenin蛋白的变化.结果 与对照组比较,模型组血清淀粉酶、D-木糖、胃动素、胃泌素水平显著降低,差异有高度统计学意义(P＜ 0.01);与模型组比较,APS高剂量组血清淀粉酶、D-木糖和胃泌素水平升高,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜ 0.01);且APS中剂量组和APS低剂量组血清淀粉酶、胃动素水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).HE染色结果显示模型组肠黏膜损伤,APS各剂量组均有不同程度改善.与对照组比较,模型组大鼠小肠Wnt1、β-catenin蛋白表达显著上调,差异有高度统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,APS各剂量组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著下调,差异有高度统计学意义(P＜0.01).结论 APS能改善脾虚湿困大鼠胃肠消化吸收功能,其作用机制与调节Wnt/β-catenin通路有关.

摘要： 目的 探讨大豆异黄酮(ISO)调控Wnt-1基因表达影响骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的机制.方法 原代分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入不同浓度(40、60、80μg/μL)的ISO处理(ISO-L组、ISO-M组、ISO-H组),用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-?Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞(pcDNA组、pcDNA-Wnt-1组),将si-NC、si-Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞后用ISO处理(ISO+si-NC组、ISO+si-Wnt-1组);甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测ISO对Wnt-1表达的影响;RT-qPCR与Western blot分别检测碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达量.两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 与对照组比较,ISO-L组、ISO-M组、ISO-H组细胞活力[24 h:(0.17±0.02)比(0.21±0.02)、(0.25±0.02)、(0.29±0.03);48 h:(0.26±0.03)比(0.39±0.03)、(0.48±0.04)、(0.53±0.05);72 h:(0.37±0.03)比(0.54±0.04)、(0.65±0.06)、(0.78±0.07)],骨髓间充质干细胞中ALP?mRNA?(1.00±0.06比1.74±0.16、2.53±0.21、3.06±0.29)及蛋白(0.41±0.04比0.62±0.06、0.74±0.05、0.83±0.07)、OPN?mRNA?(1.01±0.08比1.52±0.15、2.11±0.19、2.74±0.25)及蛋白(0.34±0.03比0.51±0.05、0.63±0.06、0.76±0.07)、Runx2?mRNA?(1.01±0.08比1.52±0.15、2.11±0.19、2.74±0.25)及蛋白(0.34±0.03比0.51±0.05、0.63±0.06、0.76±0.07)、Wnt-1?mRNA?(1.01±0.06比1.48±0.14、1.83±0.17、2.53±0.24)及蛋白(0.21±0.02比0.36±0.03、0.49±0.04、0.62±0.06)均呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).与pcDNA组比较,pcDNA-Wnt-1组细胞活力[24 h:(0.18±0.02)比(0.24±0.02);48 h:(0.25±0.03)比(0.51±0.05);72 h:(0.36±0.03)比(0.72±0.06)]、ALP?mRNA[(1.01±0.08)比(2.89±0.27)]及蛋白[(0.40±0.04)比(0.79±0.07)]、OPN?mRNA[(0.99±0.07)比(2.53±0.25)]及蛋白[(0.33±0.03)比(0.71±0.06)]、Runx2?mRNA[(1.00±0.06)比(2.14±0.21)]及蛋白[(0.21±0.02)比(0.62±0.06)]的表达量均呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).与ISO+si-NC组比较,ISO+si-Wnt-1组细胞活力[24 h:(0.25±0.03)比(0.19±0.02);48 h:(0.56±0.05)比(0.31±0.03);72 h:(0.82±0.08)比(0.49±0.04)]、ALP?mRNA[(3.14±0.31)比(1.67±0.16)]及蛋白[(0.87±0.08)比(0.51±0.05)]、OPN?mRNA[(2.79±0.26)比(1.43±0.13)]及蛋白[(0.79±0.08)比(0.43±0.04)]、Runx2?mRNA[(2.36±0.24)比(1.35±0.13)]及蛋白[(0.68±0.07)比(0.34±0.03)]的表达量均呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 ISO通过调控Wnt-1基因表达而增强骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化功能.

摘要： 本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原和Wnt2单克隆抗体以及Wnt2单克隆抗体的应用，EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原主要是EGFP与人源Wnt2除信号肽的全长氨基酸序列的融合蛋白，所述EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原包括EGFP氨基酸序列、TEV酶切位点和FLAG标签序列、Wnt2除信号肽全长氨基酸序列、6×His标签序列，抗Wnt2单克隆抗体能够用于抑制肿瘤细胞的免疫逃逸和生长。本发明的Wnt2单克隆抗体结合细胞分泌的人Wnt2抗原时，拮抗细胞对肿瘤内抑制性免疫微环境形成的促进，抑制肿瘤细胞的免疫逃逸及生长。本发明提供的Wnt2单克隆抗体能够用于食管鳞癌、胃癌、胰腺癌、直肠结肠癌、肺癌、乳腺癌、胶质细胞瘤、肝癌等实体肿瘤的免疫治疗中。

摘要： 本发明首次发现牙周膜/牙骨质与牙本质/牙髓具有独特的Wnt信号通路，并提供了通过Wnt3a调控牙髓干细胞Wnt信号通路从而有效促进牙周膜牙骨质再生潜能的方法。同时，本发明还构建了Wnt3a生物牙根支架，从而实现单一一种牙髓干细胞再生生物牙根。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，具体是Wnt抑制剂Wnt‑C59在制备治疗SCN5A突变致扩张型心肌病的药物中的应用。本发明首次提出以SCN5A基因型检测为切入点，利用Wnt通路特异性抑制剂Wnt‑C59抑制SCN5A基因突变所致的Wnt/β‑Catenin通路异常活化，从而实现改善SCN5A基因突变的扩张型心肌病患者心脏功能预后。实验通过构建衰老联合阿霉素致扩心病模型，对心功能改变、相关信号分子的激活等指标检测Wnt‑C59对扩心病的治疗作用，为Wnt‑C59应用于临床治疗扩张型心肌病提供理论依据。本发明为SCN5A突变致扩张型心肌病提供了新的治疗方法，为该类患者带来了曙光，有很好的应用前景。

摘要： 本公开内容描述了包括Wnt和sFRP的分离的蛋白质复合物；包括Wnt的组合物；过表达Wnt和sFRP的细胞；包括过表达Wnt的细胞和过表达sFRP的细胞的组合物；制备蛋白质复合物、组合物和细胞的方法；以及使用分离的蛋白质复合物、组合物和细胞的方法。本公开内容进一步描述了形成包括Wnt和sFRP的复合物的方法，以及用于分离Wnt的方法。本文还描述的是可以用于纯化Wnt而无需使用去污剂的方法。

摘要： 本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原和Wnt2单克隆抗体以及Wnt2单克隆抗体的应用，EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原主要是EGFP与人源Wnt2除信号肽的全长氨基酸序列的融合蛋白，所述EGFP‑Wnt2融合蛋白抗原包括EGFP氨基酸序列、TEV酶切位点和FLAG标签序列、Wnt2除信号肽全长氨基酸序列、6×His标签序列，抗Wnt2单克隆抗体能够用于抑制肿瘤细胞的免疫逃逸和生长。本发明的Wnt2单克隆抗体结合细胞分泌的人Wnt2抗原时，拮抗细胞对肿瘤内抑制性免疫微环境形成的促进，抑制肿瘤细胞的免疫逃逸及生长。本发明提供的Wnt2单克隆抗体能够用于食管鳞癌、胃癌、胰腺癌、直肠结肠癌、肺癌、乳腺癌、胶质细胞瘤、肝癌等实体肿瘤的免疫治疗中。

摘要： 本发明首次发现牙周膜/牙骨质与牙本质/牙髓具有独特的Wnt信号通路，并提供了通过Wnt3a调控牙髓干细胞Wnt信号通路从而有效促进牙周膜牙骨质再生潜能的方法。同时，本发明还构建了Wnt3a生物牙根支架，从而实现单一一种牙髓干细胞再生生物牙根。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，具体是Wnt抑制剂Wnt‑C59在制备治疗SCN5A突变致扩张型心肌病的药物中的应用。本发明首次提出以SCN5A基因型检测为切入点，利用Wnt通路特异性抑制剂Wnt‑C59抑制SCN5A基因突变所致的Wnt/β‑Catenin通路异常活化，从而实现改善SCN5A基因突变的扩张型心肌病患者心脏功能预后。实验通过构建衰老联合阿霉素致扩心病模型，对心功能改变、相关信号分子的激活等指标检测Wnt‑C59对扩心病的治疗作用，为Wnt‑C59应用于临床治疗扩张型心肌病提供理论依据。本发明为SCN5A突变致扩张型心肌病提供了新的治疗方法，为该类患者带来了曙光，有很好的应用前景。

摘要： 本发明涉及医疗诊断技术领域，具体是Wnt‑7a在制备诊断和预测卵巢癌试剂中的应用及Wnt‑7a化学发光检测试剂盒。本发明优点在于：本发明首次发现Wnt‑7a蛋白作为新的卵巢癌诊断标志物，对于卵巢癌的诊断和预测具有关键意义；本发明采用磁微粒化学发光法进行试剂盒开发，相较于酶联免疫技术，有助于提高检测灵敏度和操作便捷性，同时，也有助于后期配套自动化检测仪器的检测产品的开发。

摘要： 本发明描述了通过给予Axin稳定物来调控或调节(例如促进或抑制)Wnt信号的方法。本发明也描述了使用在此所述的Axin稳定物来治疗、诊断、预防和/或改善Wnt信号相关病症的方法。

摘要： 本发明提供了包含自卷曲蛋白、分泌型卷曲相关蛋白或Ror蛋白衍生的Frz结构域构件和Fc免疫球蛋白构件的嵌合Wnt拮抗剂，及其在细胞Wnt信号传导和Wnt介导的病症(包括癌症)的治疗和诊断性检测中的用途。