多聚酶链反应

摘要： 目的 建立多重PCR法检测产志贺毒素性大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)主要血清型O26、O145、O45和O121的分析方法.方法 根据GenBank登录序列,设计扩增O抗原翻转酶(wzx)基因的引物,建立PCR方法,并以STECO26、O145、O45和O121基因组为模板,检验多重PCR的灵敏度和特异性.使用建立的PCR,检测牛胴体表面拭子,阳性扩增条带送测序,以验证PCR扩增的可靠性.同时将阳性扩增样品,涂布显色平板,分离靶标血清型细菌.结果 本研究成功建立STEC O26、O145、O45和O121的多重PCR方法,PCR循环参数中退火温度为60°C,扩增片段分别为249、353、890和587 bp.多重PCR直接检测O26、O145、O45和O121时,最低检测限介于103～104 CFU/mL,而增菌后再检测,最低检测限均为1 CFU/mL.多重PCR用于其他血清型STEC,和非大肠杆菌扩增时,均未扩增出目的条带,只有O26、O145、O45和O121能够扩增出相应条带.当使用多重PCR直接检测胴体擦拭子时,阳性率为5.45％(3/55),主要为O26、O145血清型;增菌后检测阳性率为7.27％(4/55),主要为O26、O145和O121血清型.阳性PCR扩增样品,成功分离到O26两株、O145和O121各一株.分离菌株具有典型大肠杆菌的生化特性,携带STEC代表性毒力因子志贺毒素和紧密素,且具有多重耐药性.结论 以STECO26、O145、O45和O121的wzx基因为检测靶标,成功建立多重PCR方法,灵敏度和特异性良好,与细菌分离联合使用,可减少工作量,精准分离目的病原菌.

摘要： 目的 探讨一项新型封闭穿刺活检技术在骨肿瘤诊断中的应用价值.方法 建立兔 VX2 骨肿瘤动物模型,随机分为实验组与对照组,每组18只.实验组采用新型穿刺装置进行肿瘤部位的穿刺检查,穿刺后及时封闭穿刺留下的骨孔;对照组采用传统穿刺活检装置,穿刺后不封闭骨孔,仅按压止血.用彩超检测穿刺后穿刺孔血肿形成情况;应用定量PCR技术检测穿刺通道组织中癌基因血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达,进而评估两组穿刺技术引起的肿瘤细胞通道扩散情况.结果 穿刺2h后彩超显示,实验组新型封闭栓均未脱落,其中2只穿刺孔少量出血形成微小血肿,16只穿刺孔周围无明显液体渗出;对照组15只穿刺孔有明显出血形成血肿,仅3只无明显出血;两组穿刺孔出血率比较差异有统计学意义(P＜0.05).实验组穿刺针道软组织中VEGF mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 该新型封闭穿刺装置和封闭穿刺骨孔器械可有效降低肿瘤穿刺后肿瘤细胞针道扩散,可应用于临床骨肿瘤的诊断.%Objective To investigate the application value of a new closed needle biopsy technique in the diagnosis of bone tumors. Methods The VX2 rabbit bone tumor model was establishd, which was randomly divided into the new puncture technique group (VX2 experimental group) and the control group,each group had 18 rabbits. In the experi-mental group, the new puncture device was used to check the tumor location, and the bone hole was plugged after the puncture. In the control group, the traditional biopsy device was used, and the bone hole was not plugged after the puncture, just only applied the pressure to stop the bleeding. B-ultrasonography was used to detect the formation of hematoma of the puncture hole after the puncture. The quantitative detection PCR was used to detect the expression of oncogene vascular endothelial growth factor gene(VEGF)in needle-path tissue. Then the tumor cell path proliferation of two groups were evaluated and compared. Results The color ultrasonography showed no shedding in the new closed plug of the experimental group after 2 h of puncture, in which 2 cases of mild bleeding of puncture holes oc-curred and micro hematoma was formed, and other 16 cases showed no obvious liquid exudation around the puncture holes. In the control group, it also showed 15 cases of obvious bleeding of puncture holes that formed hematoma, while the remaining 3 cases showed no obvious bleeding. There were significantly statistical differences between the puncture hole bleeding rate of two groups (P＜0.05) . The expression of VEGF mRNA in the needle-path soft tissue of the experimental group was significantly lower than that of the control group. The gene expression in needle-path showed there was significantly statistical difference between the two groups (P＜0.05) . Conclusions The new type of closed puncture device and closed puncture bone hole device can effectively reduce the tumor cell puncture after tumor cell proliferation, and can be used in the diagnosis of clinical bone tumors.

摘要： 目的 探讨一种新的封闭穿刺活检技术在诊断骨肿瘤中的应用价值.方法 建立兔VX2骨肿瘤动物模型,随机分为新型穿刺技术组(VX2实验组,18只实验兔)与传统穿刺技术组(VX2对照组,18只实验兔),实验组18只采用新型穿刺装置进行肿瘤部位的穿刺检查,穿刺后及时封堵穿刺留下的骨孔;对照组采用传统穿刺活检装置,穿刺后不封堵骨孔,仅行按压止血.采用B超检测穿刺后穿刺孔血肿形成情况,实时荧光定量PCR技术检测穿刺通道及周围组织中癌基因血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达,并对穿刺通道及周围组织行病理学检查,进而评估与比较两组穿刺技术引起的肿瘤细胞通道扩散情况.结果 穿刺2h后,B超显示实验组新型封闭栓均未脱落,其中2只(11.1％)穿刺孔少量出血,形成微小血肿,其余16只穿刺孔周围无明显液体渗出;对照组15只(83.3％)穿刺孔有明显出血形成血肿,与实验组穿刺孔出血率比较差异有统计学意义(P＜0.05).VX2实验组穿刺通道及周围组织中见VEGF基因表达量明显低于对照组,两组穿刺通道及周围组织VEGF基因表达比较差异有统计学意义(P＜0.05),病理学检查VX2实验组穿刺针道软组织中2只发现肿瘤细胞,VX2对照组穿刺针道及周围组织中13只发现肿瘤细胞,两组穿刺通道肿瘤细胞扩散率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 该新型封闭穿刺技术安全,容易操作,可有效降低肿瘤穿刺后肿瘤细胞针道扩散,可应用于临床骨肿瘤的诊断.

摘要： 目的 系统评价脑脊液多聚酶链反应(PCR)对中枢神经系统侵袭性曲霉菌感染的诊断价值.方法 计算机检索PubMed、The Cochrane Library、EMbase、CNKI、WanFang Data、CBM和VIP,查找评估PCR对中枢神经系统侵袭性曲霉菌感染诊断价值的相关研究,检索时限均为从建库至2015年1月10日.由两位评价者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的方法学质量后,采用Stata 12.0软件统计并Meta分析,评估异质性及发表偏倚.结果 最终纳入8个研究,共130例病人,确诊/可信病人数为27例(20.8%).针对3篇病例对照及1篇队列研究的Meta分析结果显示:敏感度(Sen)、特异度(Spe)、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(-LR)、诊断比值比(DOR)、ROC曲线下面积(AUC)分别为0.984[95%CI(0.796,0.992 )]、0.930[95% CI(0.837,0.971)]、14.09[95% CI(5.87,33.82)]、0.016[95% CI(0.001,0.843)]、847 [95% CI(16,4536)]、0.99[95% CI(0.97,0.99)].但有一定的异质性(I2=37%)和发表偏倚(P=0.095)存在.脑脊液PCR阳性率显著高于脑脊液GM检测(P=0.018)和血PCR检测(P=0.02).结论 脑脊液PCR对中枢神经系统侵袭性曲霉菌感染有较高的诊断价值.但PCR检测方法学上存在异质性,发表偏倚可能高估PCR方法的诊断价值,上述结论仍需谨慎看待.%Objective Systematic review about diagnostic value of cerebrospinal fluid PCR detection for invasive aspergillosis in the central nervous system (CNS).Methods Computer retrieval of PubMed,The Cochrane Library,EMbase,CNKI,Wan Fang Data,CBM and VIP was conducted.Studies published from initiation of the databases until January 10,2015,assessing diagnostic performance of CSF PCR detection for invasive aspergillosis in the central nervous system were searched.Two reviewers independently searched literature on the grounds of inclusion and exclusion standards,extracted information and evaluated methodological quality of included studies.statistical calculation and meta-analysis were conducted via Stata 12.0 software and heterogeneity and publication bias were assessed.Results Totally eight studies were enrolled,with proven/probable 27 cases (20.8%) in 130 patients.Meta-analysis based on 3 case-control studies and 1 cohort study showed:sensitivity (Sen),specific (Spe),positive likelihood ratio (+ LR),negative likelihood ratio (-LR) and diagnostic odds ratio (DOR),the area under the ROC curve (AUC) were 0.984 [95% CI(0.796,0.992)],0.930 [95% CI(0.837,0.971)],14.09 [95% CI(5.87,33.82)],0.016 [95% CI(0.001,0.843)] and 847 [95% CI(16,453 6)],0.99 [95% CI(0.97,0.99)],respectively.But there were moderate heterogeneity (I2 = 37%)and publication bias (P=0.095).PCR positive rate in CSF was significantly higher than that of GM test in CSF(P=0.018) and blood PCR detection (P=0.02).Conclusion PCR test in CSF for invasive aspergillosis of the central nervous system has high diagnostic value.However,due to methodological heterogeneity of PCR detection and possibly overestimated diagnostic performance of PCR by publication bias,aforementioned conclusion must be drawn conscientiously.

摘要： 目的：了解四川省德阳地区宫颈组织中23种人乳头瘤病毒（ Human papilloma virus ，HPV）感染情况（亚型分布、单一和混合感染构成以及感染女性年龄分布）。方法对2014年1月至2015年1月在德阳市人民医院体检和就诊的3008例女性的宫颈标本应用多聚酶链反应（ polymerase chain reaction ，PCR）－反向点杂交法进行HPV分型检测，并对所得数据进行统计分析。结果3008例标本中，阳性1010例，感染率为33.58％；其中单一感染726例（70.88％），单一高危型感染560例（18.62％），单一低危型感染166例（5.52％），单一感染例数是多重感染的2.56倍；多重感染284例（28.11％），以双重感染为主（69.37％）；双重感染中以高危型和高危型混合感染为主（61.42％），而三重及以上感染以高危型和低危型混合感染为主（73.56％）；41～50岁年龄段的患者感染最多，但≤20岁和＞50岁年龄段的患者组检出阳性率最高。结论德阳地区有较高的HPV感染率，且本地区HPV感染亚型和年龄段分布具有独特的区域特点。本研究结果可为本地区宫颈病变的诊断、治疗，宫颈癌的早期预防和HPV疫苗使用等提供重要的参考依据。%Objective To study 23 kinds of Human Papilloma Virus ( HPV ) infections of cervical tissues in Deyang region ( subtype distributions , single and mixed infections and age distribution of infected women ) .Methods Applying PCR-reverse dot blot to detect the HPV genotyping of 3 008 female cases'cervical specimens , who did physical examinations and treated in the people's hospital of Deyang City from Jan.2014 to Jan.2015, and the resulting data were statistically analyzed .Results In 3 008 cases of specimens, there were 1 010 cases of positive results, and the infection rate was 33.58 %.In which 726 cases belonged to the single infection (70.88 %).The single high -risk accounted for 560 cases, and the infection rate was 18.62 %.The single low -risk accounted for 166 cases, and the infection rate was 5.52 %.The number of the single infection was 2.56 times of the multiple infections.There were 284 cases (28.11 %) of multiple infections in 1 010 cases, and the most of which was the dual infections (69.37 %).In the dual infections,the mixed infections with high -risk and high-risk were dominant (61.42 %), while in the triple infections and more ,the mixed infections with high -risk and low-risk were dominant (73.56%) .The most of patients infected were in the 40~50 age group.However, the highest positive rates were among ≤20 and>50 years old group.Conclusion There was high prevalence of HPV in Deyang region.And the age and subtypes distribution of HPV infection were unique in this region .This study can provide important reference basis for the diagnosis and treatment of the cervical lesions , the prevention of the early cervical cancer and the use of HPV vaccine .

摘要： 目的：探讨多聚酶链反应（PCR）检测免疫球蛋白重链基因重排在原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病中的良恶性鉴别中的应用价值。方法选取存档蜡块45例，采用HE常规染色及SP免疫组化方法进行组织学分类，运用PCR半巢式扩增免疫球蛋白重链基因重排，2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果IgH FR3A和IgH FR3A+FR2A在MALT淋巴瘤的阳性检测率分别为60.7%（17/28）和75.0%（21/28），在DLBCL中的阳性检测率分别为60.0%（9/15）和73.3%（11/15），在MCL中的阳性检测率分别为100.0%（1/1）和100.0%（1/1）。IgH FR3A在胃肠道淋巴瘤中的阳性检测率为60.0%。IgH FR3A联合IgH FR2Ad在胃肠道淋巴瘤中的阳性检出率为73.3%（33/45）。结论采用PCR方法检测免疫球蛋白重链基因重排能够作为淋巴瘤诊断的有效辅助手段，有助于对原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病的良恶性做出正确的诊断。%Objective To explore value of polymerase chain reaction (PCR) detecting immunoglobulin heavy chain gene rearrangement in differentiation of benign and malignant of primary gastrointestinal lymphoproliferative disease. Methods 45 paraffin-embedded specimens were selected and they were received histological categories according to HE staining and SP immunohistochemistry. Immunoglobulin heavy chain gene rearrangement was amplified by semi nested PCR. 2%PCR products were detected by agarose gel electrophoresis. Results Positive detective rates of IgH FR3Aand IgH FR3A+FR2A in MALT lymphoma were 60.7%(17/28) and 75.0%(21/28) respectively. Positive detective rates in DLBCL were 60.0%(9/15) and73.3%(11/15) respectively. Positive detective rates in MCL were 100.0%(1/1) and 100.0%(1/1) respectively. Positive detective rate of IgH FR3A in gastrointestinal lymphoma was 60.0%. Positive detective rate of gH FR3Acombined with IgH FR2Ad in gastrointestinal lymphoma was 73.3%(33/45). Conclusion Use of PCR to detect immunoglobulin heavy chain gene rearrangement can be effective assistant method to diagnose lymphoma. It can help to make right diagnosis for differentiation of benign and malignant of primary gastrointestinal lymphoproliferative disease.

摘要： 目的:探讨孕酮对自然流产小鼠母胎界面白介素(IL)-8的调节作用.方法:建立经典的自然流产小鼠模型(CBA/J×DBA/2交配组合),分为两组,孕酮组注射黄体酮,模型组同步注射等量的生理盐水.另设正常妊娠组小鼠(正常组)对照,每组10只小鼠.用免疫组织化学染色法和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各组小鼠蜕膜及绒毛组织中IL-8蛋白和mRNA的相对表达情况.结果:孕酮组血清孕酮(84.91±10.05ng/ml)水平明显高于模型组(41.83±9.77ng/ml),而IL-8(615.23±213.62pg/ml)水平明显低于模型组(1653.14±321.25pg/ml),差异均有统计学意义(P＜0.01);孕酮组血清孕酮、IL-8水平分别与正常组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学染色和RT-PCR在绒毛组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA(0.067±0.028,61.28±4.13)相对含量均明显低于模型组(0.135±0.012,85.72±2.63),差异均有统计学意义(P＜0.01),与正常组(0.059±0.021,58.33±2.87)比较均无统计学意义(P＞0.05);在蜕膜组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA的相对含量低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05),与正常组比较均无统计学意义(P＞0.05).结论:孕酮可下调自然流产小鼠母胎界面IL-8的表达.

摘要： 艾滋病（爱滋病）瘢痕（疤痕）白细胞（白血球）巴宾斯基征（巴彬斯基征）低钾血症（低血钾症）铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）啰音（罗音）末梢循环（末稍循环）脑梗死（脑梗塞）低氧血症（低血氧症）聚合酶链反应（多聚酶链反应）体层摄片（分层摄片）X线（X光）代偿性月经（倒经）低热（低烧）三酰甘油（甘油三酯）适应证（适应症）异位妊娠（宫外孕）吸光度（光密度）

摘要： 目的：建立肿瘤研究常用动物犬和猴病原菌的16s rDNA PCR检测方法。方法：提取犬病原菌布鲁杆菌、空肠弯曲杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌和猴病原菌志贺氏菌DNA，经过通用引物扩增，PCR产物为病原菌16s rDNA全长，经纯化后直接测序。利用BLAST软件从GenBank数据库中搜索相关菌株的序列进行序列比对和同源性分析，确定病原菌的种属。结果：测序结果与数据库中搜索到的相关菌株的序列进行序列比对显示，4种病原菌测序分别与布鲁杆菌、空肠弯曲杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌和志贺氏菌序列一致。结论：利用16s rDNA PCR方法可快速准确地检测肿瘤研究常用动物犬和猴病原菌，对保证肿瘤研究准确性有重要意义。%Objective:To establish the pathogen detection method in dog and monkey commonly used animal for cancer research. Methods:The DNA of Brucella spp,Campylobaceter jejuni,Yersinia enterocolitica and Shigella spp confirmed by conventional methods were extracted. The full length of 16s rDNA was amplified with a set of universal primers. The PCR products were purified and sequenced directly. The related sequences were obtained from the Gen-Bank database using BLAST search software and the species of the pathogen were identified according to the sequence analysis and homology comparison of the 16s rDNA sequences. Results:The 16s rDNA sequences of the four pathogen were 100% concordance with the known standard nueleotide sequences of Brucella spp,Campylobaceter jejuni, Yersinia enterocolitica and Shigella spp. Conclusion:The PCR method based on 16s rDNA was reliable and could i-dentify dog and monkey the pathogen rapidly and accuracy.

摘要： 目的：探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)基因多态性对中国汉族人群左室肥厚(LVH)的影响。方法：本研究回顾了2004-07～2005-12广州南方医院心内科住院病人,共531例,男性282例,女性249例,平均年龄61.6±11.7岁,应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测LVH患者(LVH组,n=157)、高血压患者(n=204)和健康对照者(对照组,n=170)的RAGE基因3种多态性(-429T/C,1704G/T和G82S)基因型。结论：携带有RAGE基因G82S多态性的我国汉族人群发生LVH的危险性增加，提示该基因多态性与LVH的发生有明显相关性。

摘要： 应用多聚酶链反应(PCR)的方法扩增出ADOL-4817毒株的囊膜蛋白env基因，并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明，env基因的大小为1 746 bp，其中gp85和gp37由1 554bp组成，可翻译成517个氨基酸，分子量为57.7 kD。根据糖基化位点N-X-S/T的特点，发现ADOL-4817的env蛋白有15个潜在的糖基化位点。同源性分析证明，ADOL-4817的env基因与其它ALV-J的env基因序列同源性为88.8％～92.4％，而与外源性ALVs的相应序列的同源性仅为40.5％～51.4％，然而，与内源性的EAV-HP毒株的类env基因的同源性高达91.2％；另外，ADOL-4817毒株的gp37在C末端多了13个氨基酸。这些结果提示，ALV-J的env基因存在广泛的变异性，env基因可能来源于内源性和外源性ALVs的重组。

摘要： 目的：探讨2型糖尿病(T2DM)下肢血管病变与ACEI/D基因多态性及中医血瘀证的关系。rn 方法：采用多聚酶链反应(PCR)技术，对115例汉族T2DM患者的ACE基因插入/缺失(I/D)多态性进行检测;对115例2型糖尿病患者的临床资料并进行中医血瘀证的辨证;根据ABI检测结果，确定下肢血管病变组与非下肢血管病变组，并进行统计分析。rn 结果：中医血瘀证与2型糖尿病患者ACEI/D基因多态性未见有明显的统计学意义P>0.05;2型糖尿病患者ACEI/D基因多态性与下肢血管病变未见有明显的统计学意义P>0.05。rn 结论：ACEI/D基因多态性与糖尿病下肢血管病的发病无关联;T2DM血瘀证的产生与ACEI/D基因多态性无关联。

摘要： 多聚酶链反应(PCR)的问世，引起了一场分子生物学的革命，它大大加快了各种生物基因组结构研究的过程，有力地推动了现代医学由细胞水平向分子水平、基因水平的发展。由于PCR技术具有快速、简便、特异、敏感等优点，使该技术广泛应用于临床诊断、医学遗传学、法医鉴定、微生物学、植物学等生命科学的各个领域。PCR技术作为一项临床医学实验诊断方法，为临床疾病的诊断从基因角度提供更加准确的诊断依据。本文介绍了PCR技术的基本原理，指出目前国内外的PCR仪主要的变温方式有三种:变温铝块、水浴式及变温气流式，并对这几种方式进行了简述。提出随着科学技术的不断发展，各学科之间的相互渗透，以及先进的电子技术和计算机在仪器中的广泛使用，PCR技术和仪器将获得极大发展，自动化程度、测量精度和速度大大提高，它将在临床和基础研究中起着重要作用，有力的促进科学技术的进步。

摘要： 小肠结肠炎耶尔森菌(YE菌)和空肠弯曲杆菌(空弯菌)是一种在世界范围内广泛流行的人畜共患病的病原菌,主要引起人类的急性肠炎.YE菌能在冷藏温度下(0—4°C)生长繁殖,俗称"冰箱菌".韩国和加拿大对我国出口的实验猴提出了YE菌检疫要求.空弯菌已经取代沙门氏菌成为发达国家最常见的腹泻病病原菌之一,将来某些国家很可能提出该菌的检疫要求.猴YE菌GB标准检验耗时过长,仅增菌步骤需要3周时间.空弯菌是微需氧菌,培养条件苛刻,难以培养成功.以上两种细菌的检验方法存在着较大的技术上的缺陷和操作上的困难,难以适应实验动物检疫准确快捷的要求.

摘要： 小肠结肠炎耶尔森菌(YE菌)和空肠弯曲杆菌(空弯菌)是一种在世界范围内广泛流行的人畜共患病的病原菌,主要引起人类的急性肠炎.YE菌能在冷藏温度下(0—4°C)生长繁殖,俗称"冰箱菌".韩国和加拿大对我国出口的实验猴提出了YE菌检疫要求.空弯菌已经取代沙门氏菌成为发达国家最常见的腹泻病病原菌之一,将来某些国家很可能提出该菌的检疫要求.猴YE菌GB标准检验耗时过长,仅增菌步骤需要3周时间.空弯菌是微需氧菌,培养条件苛刻,难以培养成功.以上两种细菌的检验方法存在着较大的技术上的缺陷和操作上的困难,难以适应实验动物检疫准确快捷的要求.

摘要： 小肠结肠炎耶尔森菌(YE菌)和空肠弯曲杆菌(空弯菌)是一种在世界范围内广泛流行的人畜共患病的病原菌,主要引起人类的急性肠炎.YE菌能在冷藏温度下(0—4°C)生长繁殖,俗称"冰箱菌".韩国和加拿大对我国出口的实验猴提出了YE菌检疫要求.空弯菌已经取代沙门氏菌成为发达国家最常见的腹泻病病原菌之一,将来某些国家很可能提出该菌的检疫要求.猴YE菌GB标准检验耗时过长,仅增菌步骤需要3周时间.空弯菌是微需氧菌,培养条件苛刻,难以培养成功.以上两种细菌的检验方法存在着较大的技术上的缺陷和操作上的困难,难以适应实验动物检疫准确快捷的要求.

摘要： 小肠结肠炎耶尔森菌(YE菌)和空肠弯曲杆菌(空弯菌)是一种在世界范围内广泛流行的人畜共患病的病原菌,主要引起人类的急性肠炎.YE菌能在冷藏温度下(0—4°C)生长繁殖,俗称"冰箱菌".韩国和加拿大对我国出口的实验猴提出了YE菌检疫要求.空弯菌已经取代沙门氏菌成为发达国家最常见的腹泻病病原菌之一,将来某些国家很可能提出该菌的检疫要求.猴YE菌GB标准检验耗时过长,仅增菌步骤需要3周时间.空弯菌是微需氧菌,培养条件苛刻,难以培养成功.以上两种细菌的检验方法存在着较大的技术上的缺陷和操作上的困难,难以适应实验动物检疫准确快捷的要求.

摘要： 建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法.根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列,设计特异性引物,建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法.试验结果表明,该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍,重复性良好,变异系数在1.01％以下,对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性,证明特异性良好.对32份临床样本进行检测,27份为阳性,高于普通RT-PCR方法.试验结果表明该方法可用于犬瘟热感染情况的检测.

摘要： 建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法.根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列,设计特异性引物,建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法.试验结果表明,该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍,重复性良好,变异系数在1.01％以下,对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性,证明特异性良好.对32份临床样本进行检测,27份为阳性,高于普通RT-PCR方法.试验结果表明该方法可用于犬瘟热感染情况的检测.

摘要： 在竞争PCR中能与目的基因等效扩增的内参照，是一种与目的片段长度相等且各碱基含量相同的突变片段，在第21-70位是突变部分。通过用突变引物和目的基因的下游引物进行PCR获得的突变片段，即是内参照，可应用于等效竞争PCR及PCR产物酶链杂交定量检测病毒基因。由于突变片段的长度和碱基含量与目的片段相同，因此保证两种模板在PCR过程中等效扩增，提高了定量分析的精确度，且内参照的制备方法简单、易行和经济。

摘要： 本发明涉及一种基于多孔材料的多聚酶链反应试剂的保存方法及试剂，所述的保存方法是在一种或几种多聚酶链反应反应液的组分中添加多孔材料进行保存。本发明方法处理后的多聚酶链反应液的组分可常温贮存和运输，使用时无需特殊处理，直接使用即可。本发明的方法具有工艺简单、成本低廉的特点，采用本发明方法处理后的多聚酶酶链反应试剂混合物在便利的贮存条件下具有活性稳定持久的优点，这在大大降低多聚酶链反应试剂的贮运成本的同时，还为多聚酶链反应的实际操作带来极大的便利。该发明必将有力促进多聚酶链反应技术在科研、医疗、检验和检疫等领域的运用和基于该技术的诊断或检测试剂产品的大规模推广应用。

摘要： 本发明提供了一种使用TaqMan探针的实时荧光定量多聚酶链反应(FQ-PCR)技术。该方法针对一个待测DNA点突变位点，对一个待测样品，分别用特异引物和非特异引物进行FQ-PCR检测，通过两次反应Ct值大小的比较及两者差值ΔCt的大小，判断该突变位点是野生型纯合子、突变型纯合子和杂合子三者之一。本发明方法的特点在于，使用特殊的PCR体系，独特的PCR反应过程，特征性的检测有效性标准，以及明确的结果判断方式，提高了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测单点突变的准确性和稳定性，适合临床实验室使用。

摘要： 本发明涉及一种“系统置换多聚酶链反应”，其特征在于通过待测模板—指示模板杂交连接酶反应，将待测PCR扩增置换成包括一套以上的指示PCR系统的扩增，包括如下步骤，(1)将与待测模板无关的指示模板两端加上部分待测模板基因保留序列形成指示模板加首尾DNA；(2)指示模板利用所加首尾与待测模板中不同区域保留序列互补杂交，(3)通过T4或Taq连接酶反应连上指示模板首尾缺口形成环状指示模板；(4)通过反向PCR扩增环状指示模板。待测模板既可是DNA也可RNA标本，且因杂交匹配依赖性修复扩增使其适合基因突变遗传病的检测，与荧光分子信标联用还适用于待测模板的定量测定。

摘要： 一种多聚酶链反应检测试剂盒Taq酶固相载体单人份检测管及生产方法，是在单人份检测管中，采用固相载体，使高浓度的Taq酶按一定量附着其上，加入隔离相将其与扩增反应液水相分开，使Taq酶在检测实验前保持原始未稀释的状态，使试剂盒中Taq酶的稳定性达到与未实行单人份检测管技术前的技术指标，试剂盒稳定性和保存期都得到改善。

摘要： 本发明涉及一种基于多孔材料的多聚酶链反应试剂的保存方法及试剂，所述的保存方法是在一种或几种多聚酶链反应反应液的组分中添加多孔材料进行保存。本发明方法处理后的多聚酶链反应液的组分可常温贮存和运输，使用时无需特殊处理，直接使用即可。本发明的方法具有工艺简单、成本低廉的特点，采用本发明方法处理后的多聚酶酶链反应试剂混合物在便利的贮存条件下具有活性稳定持久的优点，这在大大降低多聚酶链反应试剂的贮运成本的同时，还为多聚酶链反应的实际操作带来极大的便利。该发明必将有力促进多聚酶链反应技术在科研、医疗、检验和检疫等领域的运用和基于该技术的诊断或检测试剂产品的大规模推广应用。

摘要： 本发明提供了一种使用TaqMan探针的实时荧光定量多聚酶链反应(FQ－PCR)技术。该方法针对一个待测DNA点突变位点，对一个待测样品，分别用特异引物和非特异引物进行FQ－PCR检测，通过两次反应Ct值大小的比较及两者差值△Ct的大小，判断该突变位点是野生型纯合子、突变型纯合子和杂合子三者之一。本发明方法的特点在于，使用特殊的PCR体系，独特的PCR反应过程，特征性的检测有效性标准，以及明确的结果判断方式，提高了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测单点突变的准确性和稳定性，适合临床实验室使用。

摘要： 本发明涉及一种“系统置换多聚酶链反应”，其特征在于待测PCR系统置换成一套以上的指示PCR系统，所述每套指示PCR系统扩增的是无关的指示模板与待测模板中不同区保留的一小部分杂交序列，所述指示模板的基因序列是与待测模板无关不同源的序列。将待测标本PCR转换成数十套互不干扰独立的指示PCR系统轮换使用，一套污染了就换一套工作，避免PCR产物的再污染。指示DNA既可与待测DNA杂交也可与待测RNA杂交直接扩增，适用于RNA标本的直接检测，而且杂交匹配依赖性修复扩增使其适合基因突变遗传病的检测。与荧光分子信标(Molecular beacon)联用还适用于待测模板的定量测定。

摘要： 本发明公开了一种罗氏沼虾病毒复合反转录多聚酶链反应检测的方法，其步骤是：首先设计两种病毒的特异引物；其次是组织RNA提取；第三是反应体系；第四是扩增体系。本发明灵敏度高，检测时间短，可以同时检测两种病毒，适合于罗氏沼虾肌肉白浊病的病原诊断及亲虾、幼苗和成虾的健康监测。

摘要： 本实用新型涉及一种核酸多聚酶链反应(PCR)和探针杂交于一体的多聚酶链反应(PCR)毛细管柱基因芯片。现有的常规PCR毛细管仅是作为核酸扩增的反应容器，若要对PCR扩增产物做进一步基因芯片分析，则要将PCR产物吸出，加到基因芯片上进行芯片探针杂交分析，操作繁琐。本实用新型由PCR毛细管反应管和毛细柱基因芯片组成，PCR毛细管中央固定有毛细柱基因芯片，毛细柱基因芯片上标记有核酸探针。检测时，将配好的PCR反应液加到PCR毛细管柱基因芯片中，再将PCR毛细管柱基因芯片放入专用核酸扩增与杂交检测仪中，进行PCR扩增和探针杂交检测，达到核酸扩增与芯片探针杂交分析一体化，使基因芯片杂交分析更加简便快速。