摘要：目的：建立一种铂类耐药性稳定人卵巢上皮癌(EOC)的裸鼠移植瘤模型,分析其抵抗顺铂生物学特性及其分子机制,为研究体内微环境下耐药机制奠定基础.方法：GFP标记的EOC细胞株SKOV3-GFP分别采用在祼鼠的皮下成瘤后,体内外交叉和连续活体内诱导两种方法,分别建成两株顺铂(DDP)耐药的EOC细胞株SKOV3/DDPⅡ和SKOV3/DDPⅠ,应用MTT法和流式细胞术检测它们对DDP半数抑制浓度(IC50值),应用高效液相和流式细胞术法动态检测分析用药浓度与细胞周期、凋亡和胞内药物浓度关系.分别采用电镜和时实荧光定量PCR方法体内动态观察移植瘤细胞亚结构改变和耐药基因PTEN、STAT5、XIAP、BRCA1和MDR1基因表达.结果：MTT法和流式细胞术测得SKOV3/DDPⅡ耐药指数分别为2.8和3.8,SKOV3/DDPⅠ耐药指数为2.2和3.4;29.7μmoL/L和39.6μmoL/LDDP处理36h的SKOV3/DDPⅠ和SKOV3/DDPⅡ凋亡率显著低于SKOV3-GFP(P1=0.024,P2=0.001);SKOV3/DDPⅡ和SKOV3/DDPⅠ细胞内DDP积累量始终显著低于SKOV3-GFP细胞.DDP作用于体内移植瘤5次后,大部份SKOV3-GFP细胞器降解,细胞核膜不完整,但SKOV3/DDPⅡ细胞在8次用药后才出现细胞器降解;体内SKOV3/DDPⅡ细胞的STAT5和BRCA1基因表达随用药次数递增而增大,XIAP和与DDP用药次数呈正相关(R=0.964).DDP作用体内移植瘤8次后,STAT5、XIAP和BRCA1在SKOV3/DDPⅡ的相对表达分别显著高于对应处理的SKOV3-GFP细胞3.86倍,28.1倍和14.6倍,PTEN则降低3.77倍.结论：建立卵巢癌铂类耐药体内模型,所获耐药细胞SKOV3/DDPⅡ具有稳定的耐DDP指数,SKOV3/DDPⅡ耐药潜在的分子机制包括过度表达BRCA1促进细胞DNA损伤修复,提高XIAP表达降低肿瘤细胞凋亡,上调STAT5表达则促进肿瘤细胞的增殖,而降低PTEN的表达则减弱了对细胞增殖的抑制,促进肿瘤细胞的生长,符合临床上铂类耐药分子机制,为卵巢癌临床个体化治疗及耐药逆转研究等提供了良好的实验动物平台.
