基因重排

摘要： 目的:探讨采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测免疫球蛋白重链(IgH)基因重排残留量在多发性骨髓瘤(MM)治疗中的应用价值。方法:选取近年来江门市人民医院收治的65例MM患者作为研究对象。在这些患者经治疗病情达到临床完全缓解(CCR)后,采用RT-PCR法检测其IgH基因重排残留量,总结检测IgH基因重排残留量在MM治疗中的应用价值。结果:65例患者经6个周期的化疗后,其中病情达到CCR的患者有54例,达到部分缓解(PR)的患者有9例,未缓解(NR)的患者有2例。在经治疗达到CCR的54例患者中,有31例患者的IgH基因重排呈阳性。这31例患者在治疗前及经治疗达到CCR后,其IgH基因重排拷贝数无显著变化(P>0.05),其骨髓瘤细胞的比例有显著变化(P<0.01)。在65例患者中,免疫球蛋白分型为IgG型和IgA型的患者经治疗达到CCR后,其IgH基因重排拷贝数偏高。结论:采用RT-PCR法检测MM患者治疗后的IgH基因重排残留量能指导临床治疗,有助于预防其病情复发,提高其临床疗效。

摘要： 绒螨目是一个数量庞大且分散的类群,许多绒螨目螨类具有医学和经济学意义。本文从线粒体基因组的一般结构及基因重排、蛋白质编码基因、rRNA基因、tRNA基因、控制区、系统发育关系六个方面对绒螨目螨类线粒体基因组进行回顾,综述了当前已测序的绒螨目螨类线粒体基因组,系统总结了近年来报道的绒螨目线粒体全序列的基因特征、绒螨目的系统发育关系。

摘要： 涎腺肌上皮癌是一类目前尚未被充分认识的涎腺恶性肿瘤,其组织形态广泛,常与涎腺良恶性肿瘤形态交叉,易被误诊、忽视。肌上皮癌通常具有侵袭性和高复发率,其遗传特征和预后标志尚不明确。作者收集94例具有显著透明细胞的涎腺肌上皮癌,行FISH检测EWSR1重排,EWSR1基因重排阳性者再行NGS检测,NGS阳性者再经RT-PCR或FISH验证。检测结果显示26例(26/94,27.6%)透明细胞肌上皮癌FISH显示EWSR1信号断裂,其中6例(6/26,23%)EWSR1基因扩增。

摘要： 格氏束腰蟹(Somanniathelphusa grayi(Alcock,1909))(=Parathelphusa(Parathelphusa)chongi Wu,1935)是一种分布于中国云南和印度Moung Sal的束腰蟹属淡水蟹物种.本文使用高通量测序技术首次获得了该物种的线粒体基因组近全长序列,测定的线粒体基因组为一个未闭合的环状DNA,长度为17654 bp,包括37个基因(22个tRNA基因,13个蛋白质编码基因和2个rRNA基因),AT含量为72.8%(35.1%A,18.4%C,8.8%G,37.7%T).除trnS1-AGN缺少一个稳固的双氢尿嘧啶(DHU)臂外,其余tRNA基因的二级结构均为典型的三叶草结构.与短尾下目线粒体基因组的祖先排列顺序比较发现,该种线粒体基因组共涉及6个tRNA基因(trnR,trnN,trnF,trnP,trnQ和trnC)和1个蛋白质编码基因(nad5)的顺序变化,与此前报道的两种束腰蟹的基因排列顺序一致.这些基因的重排可以用置换和复制/随机丢失(TDRL)模型进行解释.研究发现,这种重排的线粒体基因组顺序还见于两种在我国江西和海南岛异域分布的束腰蟹种类.提示这种线粒体基因组基因排序是束腰蟹属重要的共近裔特征.本研究可以为格氏束腰蟹的分类厘订,以及束腰蟹属近缘物种的系统分类和拟地蟹科类群的分子进化研究提供新的分子证据.

摘要： 线粒体基因组是系统发育常用的分子标记,本研究旨在对猎蝽科昆虫的线粒体基因组进行比较研究,着重分析基因重排、碱基组成、密码子使用偏好性等特征,并构建基于13个蛋白编码基因的系统发育关系。在GenBank数据库下载猎蝽科11亚科30属代表物种的线粒体基因组序列,通过Geneious 8.0.4抽提各编码基因的序列。利用MEGA 7.0统计碱基组成、氨基酸和核苷酸序列信息位点、起始密码子、终止密码子、相对密码子使用频率(RSCU)等序列基本信息。另外,利用DnaSP 6.0计算蛋白编码基因的非同义替换率(K_(a))和同义替换率(K_(s)),并通过K_(a)/K_(s)值比较基因的核苷酸进化速率。通过jModelTest选择进化模型,在MrBayes 3.2.2软件中构建基于贝叶斯法(BI)的系统发育树。结果表明:猎蝽科线粒体基因组均呈共线性结构,没有发现大面积的基因重排现象,只有部分序列中rrnS和trnT基因编码方向与原始序列编码方向相反,trnR和cytb基因出现多拷贝的现象。猎蝽科线粒体最常使用ATN起始密码子和TAA终止密码子。BI系统发育树对猎蝽科各亚科之间的关系进行了一定的解析,光猎蝽亚科(Ectrichodiinae)和猎蝽亚科(Reduviinae)为并系群,真猎蝽亚科(Harpactorinae)和锥猎蝽亚科(Triatominae)为单系群。本研究为猎蝽科昆虫的线粒体基因组进行了比较分析,为后续研究该科系统发生关系奠定了科学基础。

摘要： 髓外浆细胞瘤(EMP)指原发于骨髓和骨骼以外的浆细胞肿瘤,由浆细胞单克隆异常增生形成的恶性肿瘤,又称原发性软组织浆细胞瘤,多以局限性肿块为主要临床特征,多发生于头颈部,也可发生在全身各部位,最常见的部位包括鼻腔、鼻窦、鼻咽部等,男性发病率高于女性。由于该疾病无特异性临床表现,其影像学表现缺乏特征性,也因发病部位不同而表现出多样性,目前对其生物学行为及诊疗的认识还不够深入,常常导致临床误诊、漏诊而影响患者的预后。该疾病在临床上十分罕见,对其合理的治疗可延长生存期,本文根据此罕见病例的临床资料结合文献对该病的临床特点、影像学表现、诊断与鉴别和治疗方法进行分析总结,旨在提高耳鼻喉科医师对该疾病的认识,以减少临床误诊漏诊。

摘要： 目的·分析儿童CIC重排肉瘤(CIC-rearranged sarcoma,CRS)的临床、病理及分子遗传学特点,以提高对2020年第5版WHO软组织和骨肿瘤分类新提出的小圆细胞肉瘤的认识。方法·收集上海交通大学医学院附属儿童医院2019年1月—2021年4月确诊的54例小圆细胞未分化肉瘤患者资料,筛选出有完整的临床、影像、病理及随访资料的儿童CRS 5例,分析其临床病理学特征。结果·5例CRS中,男性3例,女性2例,年龄为5个月~10岁。无症状患儿3例,首发症状为胸背部疼痛1例,喷射性呕吐1例。CT影像学:均表现有大小不等的囊性、实性或混合性不规则软组织团块影。病理学检查:肿瘤平均长径12.5 cm,切面灰白色或灰褐色,外观呈烂鱼肉样。组织病理学:主要为小圆形细胞弥漫片状分布。免疫组织化学:CD99呈弥漫膜阳性或局灶阳性,WT1呈弥漫核阳性,并不同程度地表达BCL2、CD56、FLI1、ERG等免疫标志物。5例荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测显示EWSR1(22q12)阴性,CIC(19q13)基因重排,同时部分患儿还检测出CIC融合基因突变,包括2例CIC-DUX4融合和1例CIC-NUTM1融合。所有病例均行手术治疗,并术后辅助化疗。5例都获得随访,平均随访21.4个月,其中1例患儿死亡、2例带瘤生存、2例无肿瘤残留。结论·儿童CRS是临床上少见的恶性软组织肿瘤,多表现无症状或症状非特异,易转移且预后极差;对组织学形态表现为尤文肉瘤样改变的软组织肿瘤,结合免疫组织化学并加做EWSR1和CIC重排等相关分子检查有助于诊断,同时CIC融合基因的进一步检测对估计预后可能有提示意义。

摘要： 目的 探讨浆膜腔积液淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病(LBL/ALL)的细胞病理学诊断线索及意义.方法 收集郑州大学第一附属医院2011年8月至2019年12月确诊为LBL/ALL的浆膜腔积液标本45例,观察并总结其临床特点及细胞形态学特征,其中22例标本被制成细胞块并行免疫细胞化学检测,3例行流式细胞术检测,5例行T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白(Ig)基因重排分析.结果 45例病例中男性35例,女性10例,男女比为3.5:1.0,中位年龄15岁.39例(86.7％)患者有纵隔肿块,34例(75.6％)患者伴有血清乳酸脱氢酶(LDH)的增高;显微镜下,细胞量较为丰富,弥漫散在分布;细胞成分相对单一,小至中等大小;细胞核形不规则或曲核,可见核裂或乳头状突起,染色质细,核仁不明显;核分裂象易见;胞质少或无,背景均可见到核碎裂及凋亡小体.22例细胞块免疫表型为19例(86.4％)表达末端脱氧核苷酸转移酶(TdT),20例(90.9％)表达CD99,Ki-67阳性指数65％～95％.行流式细胞术检测的3例标本均显示TdT、CD2、CD3和CD7高表达的异常T细胞,行基因重排检测的5例标本中,4例呈TCR单克隆重排,1例同时发现TCR和IgK单克隆重排.结论 结合临床特征(青少年男性伴有纵隔肿块)和细胞形态特点(大量散在分布的形态单一的中小淋巴细胞,明显的核形不规则,染色质细腻,易见核分裂象、核碎裂及凋亡小体),可以对浆膜腔积液LBUALL进行初步诊断,辅以免疫细胞化学结果及其他辅助检测技术可进一步提高LBL/ALL诊断的准确性和可靠性.

摘要： 目的 观察肺动脉内膜肉瘤的临床病理特征,了解其基因改变情况.方法 分析中日友好医院2017年1月至2020年1月间行肺动脉内膜剥除术病例60例,收集其中5例肺动脉内膜肉瘤患者临床资料,采用HE染色、免疫组织化学染色及荧光原位杂交进行病理形态学观察,通过RNA测序方法分析肿瘤融合基因改变.结果 肺动脉内膜肉瘤检出率为8.3％(5/60),中位年龄49岁,女性多于男性,临床表现不特异.肿瘤由异型梭形细胞或上皮样细胞组成,可出现骨肉瘤及平滑肌肉瘤分化.肿瘤细胞可表达血小板源性生长因子受体o、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)及MDM2,并伴有MDM2、CDK4及表皮生长因子受体基因共扩增.RNA测序检出多种框内融合基因改变.结论 肺动脉内膜肉瘤是一类罕见、高度异质性并伴有多基因复杂改变的低～未分化肉瘤,治疗效果不佳,预后差.

摘要： cqvip:高级别B细胞淋巴瘤(high grade B-cell lymphomas,HGBL)是一种形态学和遗传学特征介于弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse Large B-Cell Lymphomas,DLBCL)和Burkitt淋巴瘤之间的高度侵袭性B细胞淋巴瘤。2016年世界卫生组织将其定义为一种独立的疾病^([1]),包括两种类型:伴有myc和bcl-2和/或bcl-6重排的双打击或三打击淋巴瘤(double/triple-hitlymphomas,D/THL);不伴myc和bcl-2或bcl-6重排的非特指型淋巴瘤(high grade B-cell lymphoma,not otherwise specified,HGBL,NOS)[1]。依据细胞起源又可将其分为生发中心B细胞(germinal center B-cell-like,GCB)和活化B细胞(activated B-cell-like,ABC)两种亚型(基因表达谱分型)^([2])。D/THL约占DLBCL的7.9%,多数为GCB亚型[3,4],好发年龄60~70岁,也可见于30岁左右的年轻人,男性多于女性。多数患者起病时即表现为广泛的疾病侵犯,如累及多个结外病变,骨髓及中枢侵犯。HGBL目前尚无标准的治疗方案,患者中位生存时间为0.2~1.5年,预后极差。本文报道利妥昔单抗联合来那度胺(R2)方案治疗高级别B细胞淋巴瘤1例并进行文献复习。

摘要： 70％以上的婴儿白血病、10％左右的成人AML和许多继发性急性白血病的患者中都存在MLL基因重排现象。MLL基因重排通常提示预后不良。目前已知有超过60种与疾病表型和预后有关的MLL融合基因。在正常血细胞生成的过程中，最常见的融合基因可以导致由野生型MLL基因调控的Hox基凶异常表达。MLL基因重排型白血病的基因组稳定性强，极少有染色体某区域缺失或扩增的现象。这也可以用最近的一些研究结果来解释——研究表明MLL基因重排型白血病大多数可能由表观基因调控失衡所导致。一些修饰DNA或组蛋白的基因调节物(包括DNA的甲基化、组蛋白的乙酞基化及甲基化)与MLL融合基因导致的白血病的发病有关。最近发现组蛋白甲基转移酶DOT1L是一种MLL融合基因所致的白血病发病的重要介质。因此，这些基因调节物的靶向抑制剂的临床研发在MLL基因重排白血病的治疗中具有很好的应用前景。

摘要： 报告1例红皮病型蕈样肉芽肿.患者男,86岁.全身反复红斑、脱屑伴瘙痒2年.根据组织病理、免疫组化及基因重排等结果,诊断为红皮病型蕈样肉芽肿.

摘要： 患者女,63岁,全身起斑块30年,左肩痛性溃疡6月余,加重20天就诊.皮肤科情况:躯干、四肢出现鳞屑性斑块,左侧肩部见大小约10×15cm的脓性溃疡面,左侧腹部见鸽子蛋大小的暗紫色肥厚性斑块、结节.结合临床表现、皮肤组织病理、免疫组织化学、基因重排均符合:蕈样肉芽肿伴大细胞转化.

摘要： 目的：探讨EML4-ALK融合基因阳性与阴性非小细胞肺癌患者在应用不同治疗方案后的临床疗效. 方法：对有自主意愿进行EML4-ALK基因检测的21例ALK阳性、50例ALK阴性与75例未行ALK检测的非小细胞肺癌患者,对3组患者给予不同的治疗方法,并对疗效、无疾病生存期及不良反应做出统计学分析. 结果：对于EML4-ALK阳性患者,应用克唑替尼后的PFS明显延长,其客观缓解率为61.9％,明显高于应用化疗药物之后的客观缓解率.对比与EML4-ALK阴性及未测组的二线治疗方案,其客观缓解率及疾病控制率也有显著统计学差异. 结论：克唑替尼对EML4-ALK阳性患者具有更好的疗效,EML4-ALK基因重排与否对化疗药物并无影响.

摘要： 目的:探讨原发性渗出性淋巴瘤的诊断要点及其鉴别诊断.方法:对1例原发性渗出性淋巴瘤进行组织病理学、免疫组化染色、基因重排检测,并随访.结果:肿瘤来源于胸腔渗出液,于确诊2月后死亡.镜检:肿瘤细胞形态较一致,核大,呈圆形、不规则形,核仁明显,胞质丰富、深嗜碱性,部分细胞胞浆内见小空泡.瘤细胞核常表达CD45、HHV8,不表达CD20、BCL-6、Ig.结论:原发性渗出性淋巴瘤极为罕见,容易漏诊和误诊,熟悉其临床病理特点,依靠免疫组化及基因重排检查可确诊.

摘要： Burkitt淋巴瘤往往具有单独的MYC基因重排，而DLBCL和BCLC还可发生BCL-2、BCL-6、CCND1等基因的易位，称为所谓的double-hit淋巴瘤(DHL)甚至是triple-hit淋巴瘤。近年来的研究表明，DHL的发生率或检出率有所上升，且在临床表现方面，MYC/BCL2 DHL的发病年龄通常较晚，男性多见，小部分既往有滤泡性淋巴瘤的病史，提示BCL2在疾病转化方面的作用。DHL在肿瘤形态方面缺乏特征，但往往具有生发中心来源B细胞淋巴瘤的免疫表型。研究表明，DHL的预后极差，中位生存期介于0.2-1.5年，并且没有证据证明治疗高度侵袭性淋巴瘤的方案如CODOX-M-IVAC等能够改善疗效。

摘要： 菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中一个含有新奇的E基因突变体(命名为mE)，由5`端74-bp非编码序列和201bp的△E基因组成，能明显提高对大肠杆菌和沙门氏菌的溶菌效率。而且，溶菌细菌的OD600值最高可达到1.0(109cfu)，解决了菌蜕研究和生产中菌液浓度低和菌蜕数量少等技术瓶颈问题。本结果对于加快菌蜕疫苗的研制具有重要的意义。

摘要： 近年来我国流行的G57基因型H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物感染性增强,而且H9N2病毒作为基因供体参与重排形成的新型H7N9、H10N8亚型禽流感病毒能够直接跨越种间屏障感染人.通过对病毒基因序列统计分析发现,G57基因型H9N2亚型禽流感病毒与早期H9N2病毒相比,PB2基因发生重排,重排病毒的PB2基因由早期的F/98-like分支替换为DK1分支.但PB2基因片段的改变是否影响H9N2亚型禽流感病毒及其重排病毒对哺乳动物的感染性以及通过何种机制产生影响尚不清楚.本研究通过体内外实验发现,DK1分支PB2可以显著提高H9N2亚型禽流感病毒在哺乳动物细胞及小鼠体内的复制力,增强对小鼠的毒力.进一步研究发现,DK1分支PB2通过增强病毒的聚合酶活性和抑制宿主细胞β干扰素的表达促进病毒在哺乳动物中的高效复制.总之,研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒PB2基因的重排提高病毒对哺乳动物的感染性.

摘要： 近年来我国流行的G57基因型H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物感染性增强,而且H9N2病毒作为基因供体参与重排形成的新型H7N9、H10N8亚型禽流感病毒能够直接跨越种间屏障感染人.通过对病毒基因序列统计分析发现,G57基因型H9N2亚型禽流感病毒与早期H9N2病毒相比,PB2基因发生重排,重排病毒的PB2基因由早期的F/98-like分支替换为DK1分支.但PB2基因片段的改变是否影响H9N2亚型禽流感病毒及其重排病毒对哺乳动物的感染性以及通过何种机制产生影响尚不清楚.本研究通过体内外实验发现,DK1分支PB2可以显著提高H9N2亚型禽流感病毒在哺乳动物细胞及小鼠体内的复制力,增强对小鼠的毒力.进一步研究发现,DK1分支PB2通过增强病毒的聚合酶活性和抑制宿主细胞β干扰素的表达促进病毒在哺乳动物中的高效复制.总之,研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒PB2基因的重排提高病毒对哺乳动物的感染性.

摘要： 近年来我国流行的G57基因型H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物感染性增强,而且H9N2病毒作为基因供体参与重排形成的新型H7N9、H10N8亚型禽流感病毒能够直接跨越种间屏障感染人.通过对病毒基因序列统计分析发现,G57基因型H9N2亚型禽流感病毒与早期H9N2病毒相比,PB2基因发生重排,重排病毒的PB2基因由早期的F/98-like分支替换为DK1分支.但PB2基因片段的改变是否影响H9N2亚型禽流感病毒及其重排病毒对哺乳动物的感染性以及通过何种机制产生影响尚不清楚.本研究通过体内外实验发现,DK1分支PB2可以显著提高H9N2亚型禽流感病毒在哺乳动物细胞及小鼠体内的复制力,增强对小鼠的毒力.进一步研究发现,DK1分支PB2通过增强病毒的聚合酶活性和抑制宿主细胞β干扰素的表达促进病毒在哺乳动物中的高效复制.总之,研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒PB2基因的重排提高病毒对哺乳动物的感染性.

摘要： 本发明公开了组合物和方法，所述组合物和方法用于在来自淋巴样细胞的DNA(或mRNA或由其逆转录而成的cDNA)样品中，独特地标记编码T细胞受体(TCR)和/或免疫球蛋白(Ig)的每个重排基因区段。这些和相关实施例允许对不同TCR和/或Ig编码序列执行准确的高通量定量。本发明还提供了一些组合物和方法，这些组合物和方法用于对编码单个细胞中的TCR或Ig异源二聚体的两条链的基因进行定量测序，例如以表征样品中的T或B细胞克隆性的程度。

摘要： 本发明提供了一种特异地扩增基因组的重排免疫球蛋白基因的方法，包括：裂解成熟的B细胞；用多重置换扩增的方法，通过能够特异地扩增抗体重链和/或轻链的可变区的引物扩增所述B细胞的基因组基因，从而相对特异地从基因组扩增包含重链和/或轻链的可变区的序列；以所述多重置换扩增所得的反应液为底物，用特异地结合所述抗体重链和/或轻链的可变区的引物进行PCR扩增，以获得所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列；对所得到的PCR产物测序，以确定PCR扩增得到所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列。通过本发明的方法获取重排的免疫球蛋白基因并利用该基因生产抗体。

摘要： 本公开内容提供与前列腺癌有关的染色体3q13区域的基因组排列，例如ZBTB20和LSAMP基因之间的重排，包括ZBTB20基因和LSAMP基因之间的基因融合和跨越2个基因的缺失。ZBTB20/LSAMP基因组重排用作前列腺癌的生物标志物，并可根据种族性或前列腺癌的严重程度或侵袭性用于对前列腺癌进行分层和/或鉴定适于前列腺癌治疗的患者。另一方面包括在高加索血统受试者的前列腺癌中占优势地观察到PTEN基因缺失的发现。还提供用于诊断和预测前列腺癌的试剂盒。

摘要： 本发明公开了组合物和方法，所述组合物和方法用于在来自淋巴样细胞的DNA(或mRNA或由其逆转录而成的cDNA)样品中，独特地标记编码T细胞受体(TCR)和/或免疫球蛋白(Ig)的每个重排基因区段。这些和相关实施例允许对不同TCR和/或Ig编码序列执行准确的高通量定量。本发明还提供了一些组合物和方法，这些组合物和方法用于对编码单个细胞中的TCR或Ig异源二聚体的两条链的基因进行定量测序，例如以表征样品中的T或B细胞克隆性的程度。

摘要： 本发明提供了一种特异地扩增基因组的重排免疫球蛋白基因的方法，包括：裂解成熟的B细胞；用多重置换扩增的方法，通过能够特异地扩增抗体重链和/或轻链的可变区的引物扩增所述B细胞的基因组基因，从而相对特异地从基因组扩增包含重链和/或轻链的可变区的序列；以所述多重置换扩增所得的反应液为底物，用特异地结合所述抗体重链和/或轻链的可变区的引物进行PCR扩增，以获得所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列；对所得到的PCR产物测序，以确定PCR扩增得到所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列。通过本发明的方法获取重排的免疫球蛋白基因并利用该基因生产抗体。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种精确控制基因重排的基因元件及其重组质粒和应用。本发明所述基因元件由pGAL1启动子、Cre‑EBD融合蛋白基因以及终止子顺次拼接而成。本发明通过pGAL1启动子、Cre‑EBD融合蛋白基因以及终止子共同组成控制基于SCRaMbLE的基因重排的“开关”，能够控制Cre的表达，精确控制基因重排的开启和关闭，避免泄漏表达的问题。并且能够应用于后续重组质粒和重组酵母菌株的构建中以及优势表型酵母菌株的筛选中。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种精确控制基因重排的基因元件及其重组质粒和应用。本发明所述基因元件由pGAL1启动子、Cre‑EBD融合蛋白基因以及终止子顺次拼接而成。本发明通过pGAL1启动子、Cre‑EBD融合蛋白基因以及终止子共同组成控制基于SCRaMbLE的基因重排的“开关”，能够控制Cre的表达，精确控制基因重排的开启和关闭，避免泄漏表达的问题。并且能够应用于后续重组质粒和重组酵母菌株的构建中以及优势表型酵母菌株的筛选中。

摘要： 本发明公开了一种经基因重排后获得的PhiX174噬菌体mE基因以及含有该基因的打孔质粒载体及其构建方法，本发明还进一步涉及该孔质粒载体在制备菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明利用基因重排技术，对PhiX174噬菌体E基因进行重排，通过缺失第1位起始密码子ATG的A，使阅读框架为276个核苷酸的E突变成阅读框架为201个核苷酸的mE(从第76位ATG)。将所制备的mE基因与pBV220载体可操作性的相连接得到打孔载体pBV－mE，该打孔载体pBV－mE能够有效提高对细菌的打孔效率，裂解效率可高达99.9613％，比现有打孔质粒载体在同株大肠杆菌的裂解效率高出了3个数量级。

摘要： 本发明公开了一种快速检测RET基因重排探针、FISH试剂盒以及方法。本发明所获得的快速检测RET基因重排探针，包括dcas9蛋白和sgRNA，dcas9蛋白由绿色或者红色荧光染料标记，sgRNA分为第一组sgRNA和第二组sgRNA，第一组sgRNA包括21条sgRNA，第一组sgRNA在RET基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.21所示，第二组sgRNA包括21条sgRNA，第二组sgRNA在RET基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.22‑SEQ ID NO.42所示。本发明提供的快速检测RET基因重排FISH试剂盒采用dCas9介导的FISH技术利用CRISPR系统进行DNA快速杂交，具有检测时间短（约1小时），准确性高，特异性好、假阳性低、操作条件温和（室温和37°C，可更好地维持细胞形态和DNA结构）、操作简便灵活、成本低等优点。

摘要： 本发明公开了一种快速检测ROS1基因重排探针、FISH试剂盒以及方法。本发明所获得的快速检测ROS1基因重排探针，包括dcas9蛋白和sgRNA，dcas9蛋白由绿色或者红色荧光染料标记，sgRNA分为第一组sgRNA和第二组sgRNA，第一组sgRNA包括17条sgRNA，第一组sgRNA在ROS1基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.17所示，第二组sgRNA包括17条sgRNA，第二组sgRNA在ROS1基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.18‑SEQ ID NO.34所示。本发明提供的快速检测ROS1基因重排FISH试剂盒采用dCas9介导的FISH技术利用CRISPR系统进行DNA快速杂交，具有检测时间短（约1小时），准确性高，特异性好、假阳性低、操作条件温和（室温和37°C，可更好地维持细胞形态和DNA结构）、操作简便灵活、成本低等优点。