体细胞杂种

摘要： 植物体细胞杂交是植物种质资源创制的重要方法。体细胞杂种在原生质体再生的过程中染色体会产生非常多的遗传变异。研究体细胞杂种的染色体行为为马铃薯体细胞杂种的创制和利用提供理论基础。本研究采用rDNA和端粒重复序列作为探针进行原位杂交(fluorescence in situ hybridization),并结合基因组原位杂交(genomic in situ hybridi-zation),对马铃薯和茄子体细胞杂种染色体组成和变异进行了分析。原位杂交结果表明,体细胞杂种中存在马铃薯和茄子融合的染色体和双着丝粒染色体,并发现部分融合染色体是由马铃薯和茄子2号染色体末端对末端融合得到的。重排的双着丝粒染色体的着丝粒一个来源于马铃薯,一个来源于茄子。此外,体细胞杂种中来源于茄子的5S rDNA在体细胞杂种再生及稳定的过程中全部丢失。研究结果表明马铃薯与茄子在进行体细胞杂交的过程中,染色体是不稳定的,容易造成融合后代出现双着丝粒和染色体重排等现象。体细胞杂种的染色体会通过染色体重排、双着丝粒、rDNA均一化等多种形式使其染色体趋于稳定。

摘要： 马铃薯(Solanum tuberosum L.)青枯病是由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一种毁灭性的细菌性土传病害。马铃薯青枯病抗性资源主要存在于一些野生种中，体细胞杂交是创制马铃薯青枯病抗性资源的一种有效途径。本研究以具有对青枯病抗性的体细胞杂种与栽培种杂交产生的100个后代为材料，对其进行青枯病抗性评价，旨在筛选可供育种利用的青枯病抗性资源。青枯病抗性鉴定结果表明，在试管苗组培鉴定中100个杂交后代共有6个基因型表型抗青枯病，温室钵栽接种鉴定有8个基因型表现为抗病，在两种接种鉴定中均表现为抗病的有3个基因型(07SF.3-79、07SF.6-8和07SF.6-5)。选用本实验室前期筛选的与青枯病抗性相关的4对SSR标记引物（STI0051、STI0054、STI0056、STI0057），对100个基因型进行分子标记检测，结果显示，有3个标记（STI0051.180、STI0054.180、STI0056.205）可以明确鉴定抗感基因型，它们表现为抗病稳定的3个基因型的标记位点与抗病对照的带型一致，而在感病对照中缺失，与表型鉴定结果吻合，表明筛选的SSR标记可以用于具有S. chacoense遗传背景材料的青枯病抗性辅助选择。%Ralstonia solanacearum, the causal pathogen of potato (Solanum tuberosum L.) bacterial wilt, is soil-borne and destructive for potato production. Somatic hybridization between S. tuberosum and wild relatives is an effective way to obtain germplasm possessing resistance to R. solanacearum. Evaluation of resistance to R. solanacearum on 100 progenies derived from somatic hybridization between S. tuberosum and wild relatives were conducted in this study to screen for germplasms that possess resistance to R. solanacearum and are relevant to breeding. The results showed that six clones exhibited resistance to the pathogen in vitro inoculation and eight clones performed resistance to the pathogen by the inoculation with greenhouse grown plants among the 100 progenies. Noticeably, three resistant clones (07SF.3-79, 07SF.6-8 and 07SF.6-5) were consistent for resistance level in the two tests. Four SSRs (STI0051, STI0054, STI0056 and STI0057) previously identified were used to test al of the 100 clones mentioned above. The results demonstrated that three markers (STI0051.180, STI0054.180 and STI0056.205) could differentiate resistant genotype from susceptible ones. The three clones considered resistant in the two inoculations amplified the same bands as resistant control while they were absent in susceptible control. These were in accordance with the disease phenotyping and suggest an application potential of these SSRs in marker-assistant selection of bacterial wilt resistance introgressed from S. chacoense.

摘要： ACC-1-1和ACC-1-2再生株系由来自马铃薯二倍体栽培种（Solanum tuberosum）品系AC142-01（2n=2x=24）和二倍体野生种S. chacoense的一个无性系C9701（2n=2x=24）经原生质体融合获得，经鉴定为体细胞杂种。流式细胞仪分析和染色体计数显示，ACC-1-1为混倍体，ACC-1-2为八倍体。两个株系均能正常开花但花粉活力较低。花粉母细胞减数分裂观察显示，两个系在减数分裂各个时期均出现广泛的异常染色体行为，可能是花粉活力低的原因。青枯病接种鉴定表明，ACC-1-2对青枯病表现为高抗，而ACC-1-1表现为中感，同时这两个株系均具有“低温糖化”抗性，证明体细胞融合加上适当选择可以有效聚合有性杂交不亲和双亲的优良性状。%Two potato clones ACC-1-1 and ACC-1-2, derived from the protoplast fusion of diploid Solanum tuberosum AC142-01 (2n=2x=24) and an S. chacoense clone C9701 (2n=2x=24), were identified as somatic hybrids. ACC-1-1 proved to be a mixoploid and ACC-1-2 be an octoploid by low cytometer analysis and chromosome counting. These two hybrids could bloom, but a high frequency of abnormal meiosis of the pol en mother cells was observed in each phase of the pol en development, which might be the reason for a lower pol en vitality. The results also demonstrated that ACC-1-2 exhibited high resistance to bacterial wilt and ACC-1-1 performed a moderate resistance in addition to that they were both resistant to cold-induced sweetening of the tubers, strongly suggesting that protoplast fusion, combined with suitable selection, could stack elite traits of two genetic distant parents which are sexual y incompatible.

摘要： 对已开花结果的4个柑桔体细胞杂种砧木资源,于秋季收集体细胞杂种成熟果实,剥取种子统计单果平均种子数,离体播种观察是否具有多胚特性,以期筛选具有应用潜力的新型体细胞杂种砧木。体细胞杂种哈姆林甜橙+粗柠檬、朋娜脐橙+粗柠檬、朋娜脐橙+枸头橙的单果平均种子数较高,分别为19.9、20.0和19.7粒,且种子饱满、多胚,播种后容易萌发,实生苗生长健壮、整齐一致,从种子特性角度可作为首选砧木应用。Page桔柚+枳的单果平均种子数仅为3.0。

摘要： 以38个组合的柑橘体细胞杂种（或胞质杂种）为试验材料,综合应用RFLP、CAPS和cpSSR分子标记技术,对这些杂种的线粒体和叶绿体遗传组成进行了分析;同时对试验技术体系进行了完善与拓展,开发了柑橘叶绿体SSR标记;并对柑橘愈伤组织长期继代保存过程中胞质基因组遗传变异进行了分析,主要结果如下：

摘要： 根据增加棉花基因库多样性的迫切需要,棉花改良计划正在转向于多种分子育种技术的应用和资源的利用。丰富的棉花野生种（Gossypiumspp.）是栽培棉遗传改良重要的种质资源和更新资源,并成为宝贵的遗传资源库,

摘要： 以3个柑橘异源四倍体体细胞杂种(即四倍体粗柠檬与哈姆林甜橙体细胞杂种,简称"HR";酸柚与粗柠檬体细胞杂种,简称"SR";墨西哥来檬与伏令夏甜橙体细胞杂种,简称"KV")为父本,分别与二倍体单胚性沙田柚进行有性杂交,在有性胚还没有完全败育以前,通过胚抢救技术进行三倍体植株培养(以四季柚花粉亲本为对照).结果表明,处理的杂交组合直接成苗率极显著低于对照(P＜0.01),其中又以沙田柚×HR组合成苗率相对较高,达10.1%;较适合瘪籽沙田柚幼胚离体培养的培养基是MT+GA31.0 mg/L+蜂皇浆200 mg/L+水解乳蛋白250 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂0.7%;流式细胞分析仪检测结果显示,本试验成功获得了柑橘三倍体植株.

摘要： 以3个柑橘异源四倍体体细胞杂种(即四倍体粗柠檬与哈姆林甜橙体细胞杂种,简称"HR";酸柚与粗柠檬体细胞杂种,简称"SR";墨西哥来檬与伏令夏甜橙体细胞杂种,简称"KV")为父本,分别与二倍体单胚性沙田柚进行有性杂交,在生产上获得瘪籽沙田柚果实,并对果实品质进行分析(以四季柚花粉亲本为对照).结果表明:授予柑橘异源四倍体杂种花粉的果实种子败育十分明显,果实瘪籽率达41.4%～96.0%,与对照间的差异极显著(P＜0.01);但果实单果重、果肉重、果皮重、果皮厚和果形指数与对照间无显著性差异(P＞0 05);果实可溶性固形物、全糖、Vc和可滴定酸含量与对照也无明显变化,且较适合于瘪籽沙田柚果实生产的体细胞杂种是HR和SR.

摘要： 本文利用SRAP标记对黑芥与花椰菜体细胞杂种回交一代到回交三代(BC1、BC2、BC3)及自交二代到自交四代(S2、S3、S4)的遗传变异进行了分析。20个引物组合共产生528条扩增带,其中多态性条带168条,平均每组引物产生8.4条多态性标记。结果表明,杂种后代各世代间都存在着不同程度的遗传变异,但变异的程度较小于预期值。在聚类图中,自交后代和回交后代被明显的区分成为两个类群。自交后代与黑芥的遗传距离较近,回交后代与花椰菜的遗传距离较近;自交后代的不同世代间变异程度要小于回交后代,但各世代间遗传距离的差异性并不显著(P>0.05)。

摘要： 概述了当前国内外柑橘砧木生物技术尤其是基因工程技术和体细胞杂交技术在柑橘砧木种质改良和品种选育的研究现状与进展,为中国柑橘砧木资源的研究与开发利用提供参考。基因工程在柑橘育种中的应用起步较晚,但近年来发展迅速,通过运用农杆菌介导法、附体腋芽转化—离体扩繁鉴定法、DNA直接导入法等基因工程技术对培育新型抗性柑橘砧木品种取得了一定的成果;在体细胞杂种的运用方面,通过原生质体融合,获得了大量具有优良性状的杂种体细胞,并建立了多个抗病杂交后代群。目前,柑橘砧木生物技术的研究方兴未艾,现代生物技术在柑橘砧木资源多样性研究与种质改良方面仍是今后的主攻方向。

摘要： 以花椰菜-黑芥体细胞杂种自交及回交后代为材料,结合形态学特征,流式细胞仪DNA含量分析,分子标记和荧光原位杂交(FISH)等群体分析技术,筛选获得了12份花椰菜类型渐渗系材料。其细胞DNA含量测定(FLC)在1.29 pg cell-1左右, 双色FISH结果表明：12份渐渗系材料染色体数为18条,均来源于花椰菜;形态学调查显示植株除茎、叶等营养器官特征与花椰菜近似外,已具有较正常的白色花球形成.SSR分子标记检测表明,渐渗系材料除扩增到数量不等的黑芥多态性位点外,也存在一定量的亲本花椰菜多态性位点的缺失。

摘要： 来自不同愈伤组织的三个体细胞杂种植株(Nos.98，100，101)均雄性不育，个别雌性部分可育。杂种98和101具有相似的植株形态，表现诸葛菜的花叶、多分枝和基部分枝特性，黄色花瓣间红色条纹。杂种100表型偏甘蓝型油菜，花瓣红条纹稀少。三个杂种都是混倍体(2n=51-67)，包含19～28条诸葛菜染色体。减数分裂终变期诸葛菜染色体主要形成二价体。用华双三号为101授粉后获得20个BC1后代，其中11株叶型偏甘蓝型油菜，9株偏花叶。这些BC1后代都是雄性部分可育，雌性完全败育。所有BC1植株都是混倍体(2n=41～54)，包含9～16条诸葛菜染色体。减数分裂终变期有大约一半的诸葛菜染色体参与了部分同源配对。

摘要： 用体细胞杂种细胞系技术进行染色体定位具有更为简便、快捷的优势,本文通过对GFAP和PDE6G基因在猪×啮齿类体细胞杂种板(SCHP)中PCR分型的结果分析,探讨了一种能够快速、准确地获得分子型结果的方法.

摘要： 应用原生质体电融合技术,获得茄子近缘野生种植物S.torvum、S.aethiopicum与栽培种S.melongena(六叶茄、Dourga)种间体细胞融合四倍体再生植株,染色体检测表明植株为四倍体(2N=4X=48),荧光免疫检测证明为种间体细胞杂种.青枯病抗性鉴定表明四倍体杂种植株带有抗病基因.再生植株田间生长表现为倾向野生亲本和中间类型.

摘要： 应用原生质体电融合技术,获得茄子近缘野生种植物S.torvum、S.aethiopicum与栽培种S.melongena(六叶茄、Dourga)种间体细胞融合四倍体再生植株,染色体检测表明植株为四倍体(2N=4X=48),荧光免疫检测证明为种间体细胞杂种.青枯病抗性鉴定表明四倍体杂种植株带有抗病基因.再生植株田间生长表现为倾向野生亲本的中间类型.

摘要： 针对我国棉花育种资源缺乏问题,从细胞工程角度开展了棉花资源创新工作,从多个方面介绍了华中农业大学在棉花细胞工程方面的研究工作,包括在国际上首次从野生棉获得再生植株,首次获得栽培棉种和野生棉种之间的体细胞杂种植株,对杂种进行了广泛的验证和评价.

摘要： 以Coker 201(G.hirsutum L.)的细胞悬浮系来源的原生质体和野生棉克劳茨基棉(G.klotzschianum A.)体细胞幼胚分离的原生质体在电场下融合得到对称体细胞杂种.融合产物在改良的KMP培养基培养,添加2.685μM NAA(α-naphthylacetic acid),0.269μM 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic)和0.465μM KT(kinetin),持续分裂并形成愈伤.对再生植株进行形态、细胞学和分子生物学进行检测.用流式细胞仪对再生植株进行DNA相对含量测定表明所检测的再生植株DNA相对含量是双亲之后.随机选择18株进行RAPD鉴定,至少16株是体细胞杂种,其中随机选择7株作染色体观察,它们染色体数目从72到81变化.而杂种的形态和双亲及从Coker 201原生质体再生的植株差异很大.这是首例报道通过原生质体融合得到棉花体细胞杂种.

摘要： 普通小麦(Triticum aestivum L.2n=42)济南 177原生质体与经紫外线照射的高冰草(A-gropyron elongatum 2n=70)原生质体用PEG法融合,获杂种再生植株.杂种当代及后代均用形态学、染色体、同功酶、RAPD及5S-rDNA分析验证为杂种.至今已经选育至五代(F).杂种表型一开始便基本与小麦相似而多样,较明显的有3种主要的类型.类型Ⅰ及Ⅲ主茎相对较高(75～85cm)、大穗、大粒,但Ⅰ型较松散,Ⅲ型较紧凑;Ⅱ型矮杆(平均55cm),多分孽,穗粒较小.早代杂种根尖及PMC MI染色体数目分布范围较广,以后逐渐集中,其变化总趋势是向普通小麦组型或相当于小麦的异附加系、易位系或代换系数变化.部分植株在F～F有小染色体或染色体片段存在.杂种特性在不同株系间不完全一致,但它们都比小麦亲本有较高的种子蛋白质含量,部分株系的面粉具有优良的加工品质.各类型杂种都具有比亲本小麦高的耐盐性.本实验在国际上首次报道体细胞杂交技术应用于小麦育种实践.

摘要： 细胞融合技术可以有效地克服柑橘有性杂交过程中所遇到的珠心胚干扰、雄雌性败育、童期较长、远缘有性／嫁接不亲和等障碍。近10年来，国际上已获得大约150例柑橘种间、属间体细胞杂种植株，其中30余例种间及少数属间体细胞杂种已开花结果，其花粉育性较 高，果实皮厚、味酸、可食性差，有种子，种子多胚。针对无核品种培育，以体细胞杂交已获得一大批三倍体植株；柑橘体细胞杂种抗性介于双亲之间，对接穗品种具有一定的矮化效果，作为砧木应用较具潜力。

摘要： 本文着重论述了非对称融合的优缺点以及非对称融合在育种上的应用.

摘要： 本发明公开了一种高效诱导杂种檀香体细胞胚胎发生与植株再生的方法。本发明选用优良栽培杂种檀香幼嫩茎作为外植体，采用分次消毒程序进行外植体的表面消毒可获得较高的成功率。消毒成功的无菌外植体在含有2，4‑D的胚性愈伤组织培养基上进行培养，诱导出纤维状胚性愈伤组织，再转移到体细胞胚诱导、成熟、萌发、植株再生培养基上培养，3个月后可以获得再生植株，繁殖周期短、数量多，稳定性高特点，解决杂种檀香组织培养繁殖种苗中存在的繁殖效率不高，将为开展杂种檀香种苗快速繁殖提供育苗技术，也可为高效的基因转化提供再生途径。本发明具有操作性强，繁殖效率和应用价值高等优点。

摘要： 本发明公开了一种高效诱导杂种檀香体细胞胚胎发生与植株再生的方法。本发明选用优良栽培杂种檀香幼嫩茎作为外植体，采用分次消毒程序进行外植体的表面消毒可获得较高的成功率。消毒成功的无菌外植体在含有2，4-D的胚性愈伤组织培养基上进行培养，诱导出纤维状胚性愈伤组织，再转移到体细胞胚诱导、成熟、萌发、植株再生培养基上培养，3个月后可以获得再生植株，繁殖周期短、数量多，稳定性高特点，解决杂种檀香组织培养繁殖种苗中存在的繁殖效率不高，将为开展杂种檀香种苗快速繁殖提供育苗技术，也可为高效的基因转化提供再生途径。本发明具有操作性强，繁殖效率和应用价值高等优点。

摘要： 一种湿地松与加勒比松杂种体细胞胚胎发生和植株再生方法，其特征是采用湿地松与加勒比松杂种的未成熟合子胚进行体细胞胚胎发生和植株再生，其体细胞胚胎发生和植株再生过程中使用多次液体和固体改良P6培养基相交替组合调控培养的方法，附加适量的植物激素组合。本发明提供了一种工业化快速繁育湿地松和加勒比松杂种苗木的成套技术，可以解决当前湿地松和加勒比松杂种造林中苗木的紧缺问题。

摘要： 本发明公开了一种利用原生质体不对称融合技术获得香蕉体细胞杂种的方法，该方法是采用将香蕉胚性悬浮细胞在酶解液中进行酶解获得原生质体，受体原生质体用碘乙酰胺进行处理，供体原生质体用紫外灯进行照射处理，将供体原生质体和受体原生质体混合后，用聚乙二醇法进行融合。融合产物悬浮于原生质体液体培养基中进行看护培养，获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上进行培养至体胚萌发进行培养即获得完整的体细胞杂种植株。本发明只有融合产物能够再生植株，减少了在培养过程中的工作量及获得苗后的筛选、鉴定的工作量；同时本发明所采用的培养基配方简单，便宜，解决了香蕉原生质体融合后融合产物培养过于繁琐的问题。

摘要： 本发明提供一种可育抗病植物体细胞杂种的制备方法，是采用紫外线照射对供体亲本中的DNA进行消减和通过植物不对称原生质体融合的方法将目的基因从野生种转移到商用作物中，使受体和供体的原生质体融合率达100%，使融合原生质体的植株再生能力提高，并使体细胞杂种具有可育性和抗病性，通过紫外线对供体原生质体照射处理能避免未与受体原生质体融合的细胞的分裂以及细胞团的形成。本发明的方法可广泛地应用于抗病性农作物新品种的选育，对提高农作物的品质、减少农药的使用、降低农业生产成本和保护环境有着重要的意义。

摘要： 本发明公开了小麦(Triticum aestivum)体细胞杂种来源的低分子量谷蛋白亚基1－62的编码序列与应用。本发明所提供的小麦低分子量谷蛋白亚基1－62的编码序列包括：1)序列表中SEQID NO.1的DNA序列；2)编码序列表SEQID NO.2中蛋白质序列中的多核苷酸；3)与序列表中SEQID NO.1限定的DNA序列具有98％以上的同源性，且编码相同功能的DNA序列。小麦低分子量谷蛋白亚基氨基酸序列是基于其编码序列推导的氨基酸序列，指的是具有SEQID NO.2的氨基酸残基序列的蛋白质。该基因可用于转基因小麦优质育种工作。

摘要： 本发明公开了小麦(Triticum aestivum)体细胞杂种来源的低分子量谷蛋白亚基1－94的编码序列与应用。本发明所提供的小麦低分子量谷蛋白亚基1－94的编码序列包括：1)序列表中SEQID NO.1的DNA序列；2)编码序列表SEQID NO.2中蛋白质序列中的多核苷酸；3)与序列表中SEQID NO.1限定的DNA序列具有98％以上同源性，且编码相同功能的DNA序列。小麦低分子量谷蛋白亚基氨基酸序列是基于其编码序列推导的氨基酸序列，指的是具有SEQID NO.2的氨基酸残基序列。该基因可用于转基因小麦优质育种工作。

摘要： 本发明公开了一种利用原生质体不对称融合技术获得香蕉体细胞杂种的方法，该方法是采用将香蕉胚性悬浮细胞在酶解液中进行酶解获得原生质体，受体原生质体用碘乙酰胺进行处理，供体原生质体用紫外灯进行照射处理，将供体原生质体和受体原生质体混合后，用聚乙二醇法进行融合。融合产物悬浮于原生质体液体培养基中进行看护培养，获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上进行培养至体胚萌发进行培养即获得完整的体细胞杂种植株。本发明只有融合产物能够再生植株，减少了在培养过程中的工作量及获得苗后的筛选、鉴定的工作量；同时本发明所采用的培养基配方简单，便宜，解决了香蕉原生质体融合后融合产物培养过于繁琐的问题。

摘要： 本发明公开了小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列和对应的氨基酸序列，以及基于该序列通过生物技术方法改良小麦加工品质的应用。本发明涉及的高分子量麦谷蛋白类似小麦13亚基基因是出现在优质小麦体细胞杂种种子的一种储藏蛋白亚基，该亚基与小麦的面筋弹性呈正相关。根据该基因序列设计特异简并PCR引物，可以通过基于PCR分子标记方法进行定向育种，培育出优质小麦。根据该基因序列克隆了该基因，构建了真核表达载体，可以通过基因枪转化、农杆菌介导、花粉管通道等方法将该基因导入小麦等作物，以培育出加工品质优良的小麦品质及种质。

摘要： 本发明提供一种可育抗病植物体细胞杂种的制备方法，是采用紫外线照射对供体亲本中的DNA进行消减和通过植物不对称原生质体融合的方法将目的基因从野生种转移到商用作物中，使受体和供体的原生质体融合率达100％，使融合原生质体的植株再生能力提高，并使体细胞杂种具有可育性和抗病性，通过紫外线对供体原生质体照射处理能避免未与受体原生质体融合的细胞的分裂以及细胞团的形成。本发明的方法可广泛地应用于抗病性农作物新品种的选育，对提高农作物的品质、减少农药的使用、降低农业生产成本和保护环境有着重要的意义。