体细胞胚胎发生

摘要： 植物细胞的全能性是指每个细胞均具有该植物的全部遗传信息,其离体组织或细胞在适当培养条件下具有发育成完整植株的潜能。植物体细胞胚胎发生是最能体现植物细胞全能性的一种方式,其在人工种子、单倍体育种、无性繁殖和种质保存等领域具有广阔的应用前景,其发生的机制也是基础研究领域的热点。近年来,随着技术的进步及研究的深入,植物体细胞胚胎发生的分子调控机制取得了重要进展。植物体细胞胚胎发生是一系列基因在时空顺序上表达调控的结果。本文系统综述了体细胞胚胎发生过程中激素及逆境胁迫信号转导、胚胎发育相关转录因子、胞外蛋白和表观遗传调控的作用,并对本领域未来的研究重点及方向进行了展望。

摘要： 以野蔷薇为材料,提取内源多胺,用高效液相色谱法HPLC进行腐胺、亚精胺、精胺含量测定.结果表明,多胺提取过程中,样品用量0.2 g、冰浴浸提液300μL、苯甲酰化反应37°C,提取效率最高.HPLC检测参数:流动相为V(甲醇)∶V(水)(60∶40),进样量15μL,流速1 mL·min^(-1),柱温30°C,检测波长254 nm,保留时间15 min时,3种内源多胺可完全分离并定量测定,相关系数均大于0.99,测定加标回收率为87.17%~103.64%,表明该方法可靠.在野蔷薇体细胞胚胎发生过程中,叶片培养3 h,内源多胺无明显变化,培养3 d后,多胺总量和腐胺含量显著增加,5 d后,亚精胺和精胺含量显著增加,亚精胺含量最高,精胺其次,腐胺含量极显著下降,同时多胺总量下降,说明在野蔷薇体细胞胚胎发生的启动阶段,腐胺向下游产物亚精胺和精胺发生了转化;在培养25 d的愈伤组织中,多胺总量显著下降,腐胺和精胺含量很低,说明在野蔷薇愈伤组织增殖阶段,可能精胺作用不大.该试验建立了内源多胺的2 mL提取体系,该方法降低了样品材料的用量,多胺提取过程更简便高效,并初步探索了野蔷薇体细胞胚胎发生过程中内源多胺的变化规律.

摘要： [目的]建立和优化火炬松体胚发生技术体系,为火炬松优良基因型体胚繁育及遗传转化体系建立提供技术支撑。[方法]以火炬松优良基因型的未成熟合子胚为材料,从基因型、球果采集期、基本培养基、植物外源激素组合及浓度等方面对胚性愈伤组织诱导条件进行优化;选取增殖效果好、具有胚性胚柄细胞团(ESM)的胚性愈伤组织开展体胚成熟的正交试验,选择发育正常的子叶胚进行萌发,8周后移栽。[结果]基因型、球果采集期、基本培养基和外源激素(PGR)组合及浓度等因子均对胚性愈伤组织诱导有不同程度的影响。火炬松6种基因型中荣山52胚性愈伤组织诱导率最高,达63.33%;处于裂生多胚期的合子胚为外植体的最佳采样期(7月20日左右);6种基本培养基中,在DCR基本培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达40.00%;不同PGR组合及浓度中,以0.5 mg·L^(−1)6-BA+1.0 mg·L^(−1)2,4-D+2.0 mg·L^(−1) NAA+5.0 mg·L^(−1) ABA的胚性愈伤组织诱导率最高,达50.00%。胚性愈伤组织在基本培养基MLP上培养14 d后,转入含有ABA 8.0 mg·L^(−1)、PEG 8000140 g·L^(−1)以及麦芽糖40.0 g·L^(−1)的体胚成熟分化培养基上,体胚发生数平均为411个·g^(−1),体胚萌发率可达93.33%;体胚苗移栽成活率可达86.30%。[结论]本研究优化了火炬松胚性愈伤组织诱导与体胚发生技术体系,体胚诱导率显著提升,为火炬松良种规模化繁育及遗传转化提供技术支撑。

摘要： 为研究微管蛋白(tubulin)家族成员在龙眼体胚发生早期的表达模式,基于龙眼基因组数据库,采用生物信息学方法对龙眼tubulin家族蛋白理化性质、系统进化关系、基因扩张、进化选择模式、染色体分布、基因结构、蛋白保守基序和启动子顺式作用元件进行分析.基于龙眼体胚发生早期转录组数据库,分析tubulin家族成员在体胚发生早期的表达模式,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行验证.结果表明:龙眼tubulin家族共有15个成员,其中,α-tubulin类型成员6个,β-tubulin类型成员8个,γ-tubulin类型成员1个(TUBG2),所有成员均包含tubulin和tubulin_C两个保守结构域.同一类型tubulin家族成员间的亲缘关系较近,不同类型间的亲缘关系较远.龙眼tubulin家族15个成员分布在10条染色体上,氨基酸数目为197~473个,分子质量为21.88~53.25 ku,等电点为4.44~5.67,为酸性蛋白.龙眼tubulin家族基因外显子数目为3~11个,其编码的蛋白具有高度保守的基序.龙眼tubulin家族基因启动子区域存在光、激素、细胞周期、分生组织和抗逆境胁迫等响应元件.对tubulin家族基因在龙眼体胚发生早期的表达模式进行分析发现,龙眼tubulin家族大多数成员在体胚发生早期呈下调表达趋势,在胚性愈伤组织阶段的表达量高于球形胚阶段.以上结果表明,龙眼tubulin家族成员高度保守,且在胚性愈伤组织中大量累积,可能在龙眼胚性愈伤组织的胚性维持中发挥重要作用.

摘要： 为了解决红松(Pinus koraiensis)胚性愈伤组织增殖过程中生长状态差、体胚产量不高等问题,本研究利用红松胚性愈伤组织1-100细胞系为材料,通过调节红松增殖培养基中激素、碳源和增殖培养周期,探索其对红松体胚发生能力的影响及其生理生化特性变化。结果如下:①红松胚性愈伤组织最佳增殖条件激素浓度为1 mg·L^(-1) NAA+0.25 mg·L^(-1)6-BA,最佳碳源为蔗糖,最佳增殖培养周期为14 d,在此条件下获得的体胚产量最多(166个·g^(-1));②在优化增殖培养过程中,储藏物质为红松体胚发生提供了能量来源;激素种类及其浓度、碳源种类、增殖培养周期之间可溶性蛋白质量分数没有显著差异;③红松愈伤组织中CAT活性过高不利于愈伤组织的体胚发生,可能是H_(2)O_(2)等代谢产物积累过多,产生毒害作用。

摘要： 早熟棉在我国棉花生产中占有很大的比重(75%以上),常年连作造成了病虫害的发生和棉田杂草危害日趋严重,通过基因工程解决这些问题迫在眉睫。根据国内近30年早熟棉体细胞再生研究和早熟棉转基因研究进展,遴选出能够作为早熟棉转基因受体的优选品种,从筛选早熟棉高频再生纯合系作为转基因受体和建立农杆菌介导的早熟棉高效转化体系2个方面对早熟棉转基因研究提出了展望,为创制抗病虫、抗除草剂、抗旱和耐盐碱的早熟棉新种质奠定基础。

摘要： [目的]研究脱落酸(Abscisic acid,ABA)对棉花体细胞胚胎发生过程中下胚轴脱分化和再分化的影响,优化体细胞胚胎发生体系和初步解析脱落酸调控棉花体细胞胚胎发生分子机制.[方法]以棉花品种中棉所24(CCRI 24)下胚轴为外植体,设置5个ABA浓度0、0.02、0.04、0.06、0.08μmol·L-1,分别以A0、A1、A2、A3、A4表示,添加至MSB(MS培养基+B5维生素)培养基诱导愈伤和胚性愈伤,研究ABA对棉花下胚轴初始细胞脱分化、愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导的影响.[结果]ABA促进下胚轴初始细胞脱分化;显著提高愈伤组织的脱分化率和增殖率;0.02μmol·L-1 ABA显著提高胚性愈伤分化率,0.04～0.08μmol·L-1 ABA显著降低胚性愈伤分化率.ABA处理后胚性愈伤和非胚性愈伤的增殖率均显著提高且质地受到影响.0.02～0.08μmol ABA处理下,LBD和LBD在愈伤起始期上调表达.0.02μmol·L-1 ABA处理下,在愈伤增殖早期和中期BBM、LEC1和AGL15上调表达,愈伤增殖后期FUS3、LEA、ABI3基因上调表达.[结论]脱落酸调控的棉花体细胞胚胎发生与相关标记基因的时空性表达密切相关,这些基因表达水平的增加是ABA调控愈伤和胚性愈伤分化的分子基础.

摘要： 为使速生湿地松良种快速大规模繁殖,对其胚性愈伤组织进行诱导和增殖优化研究.该文以1代湿地松种子园中10个速生湿地松优良无性系(基因型)的未成熟合子胚为外植体,系统研究基因型、合子胚发育阶段、基本培养基、植物生长调节剂种类和浓度等不同因子对胚性愈伤组织诱导效率的影响,探讨胚性愈伤组织的增殖条件.结果表明:基因型、合子胚发育阶段、基本培养基及植物生长调节剂种类和浓度等均对胚性愈伤组织诱导有不同程度的影响.10个基因型均诱导出了胚性愈伤组织,其中以2号基因型诱导率最高,达到25.37％;合子胚发育阶段中,以处于多胚阶段的球果诱导率最高;四种基本培养基中,以在DCR基本培养基上诱导效果最佳;植物生长调节剂浓度及组合中以2,4-D 2.0 mg·L-1+KT 2.5 mg·L-1诱导率最高,达到27.78％.湿地松胚性愈伤组织增殖的最佳培养基为在DCR基本培养基上添加0.5 mg·L-12,4-D、1.0 mg·L-1 KT、500 mg·L-1 CH和300 mg·L-1 L-谷氨酰胺.综上研究结果,为湿地松良种进一步开展成熟胚诱导及植株再生奠定了基础.

摘要： 本文综述了针叶树体胚发生的影响因素,并提出了展望,以期为今后针叶树体细胞胚胎发生体系研究及应用提供参考.

摘要： 【目的】探究褪黑素在酿酒葡萄种子体细胞胚发生及循环诱导中的作用,建立以种子为外植体的体细胞胚诱导体系,为缩短葡萄属植物体胚诱导周期提供依据。【方法】以花后60、70、80 d的欧洲酿酒葡萄品种霞多丽、马瑟兰与美乐种子为外植体,研究不同切种和放置方法下,5种不同质量浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·L^(-1))褪黑素对其初生子叶胚萌发及二次胚循环诱的作用。【结果】花后80 d种子诱导率为18.33%,明显高于70 d和60 d,采用纵切法正放接种外植体30 d时,初生子叶胚萌发率达到最高,为33.07%,纵切倒放、横切正放和横切倒放的萌发率依次降低,为10.98%、5.71%和3.24%。褪黑素诱导3个酿酒葡萄品种萌发初生子叶胚的作用均强于2,4-D,其中,霞多丽种子在MS+0.6mg·L^(-1)褪黑素+2.0 mg·L^(-1)6-BA+30 g·L^(-1)蔗糖+3 g·L^(-1)植物凝胶+0.5 g·L^(-1)活性炭的培养基诱导30 d时,其初生子叶胚诱导率最高,为18.33%。利用霞多丽初生子叶胚切段循环诱导二次体细胞胚60 d时,开始出现二次体细胞胚,进一步诱导形成球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚。诱导至90 d时,在添加0.6 mg·L^(-1)褪黑素的培养基上诱导率最高,为14.40%,0.4 mg·L^(-1)次之,为3.13%,0.2 mg·L^(-1)诱导率为1.89%,而0.8、1.0 mg·L^(-1)褪黑素培养基和2,4-D诱导下无次生胚的形成。【结论】种子成熟度与初生子叶胚的萌发率呈正相关;种子纵切正放接种有利于初生子叶胚萌发;低质量浓度褪黑素对霞多丽种子萌发初生子叶胚及二次胚发生具有缩短诱导时间的作用。

摘要： 以椰子成熟合子胚为外植体,研究不同激素配比对椰子胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生的影响,并对体细胞胚胎的发生过程进行组织细胞学观察.结果表明:2,4-D对椰子胚性愈伤组织的诱导具有重要作用,诱导椰子胚性愈伤组织的最适合2,4-D浓度为25mg/L;将胚性愈伤组织转接到添加2mg/L 2,4-D和10 mg/L 6-BA的Y3培养基上培养可形成体细胞胚胎.组织细胞学观察表明,体细胞胚胎的形态发生经历了与合子胚形态发生相似的阶段,即经过球形胚、子叶形胚等.

摘要： 体细胞胚胎发生是国际上林木优良基因型大规模扩繁的有效方法，其与液氮冷冻保存相结合，大大缩短了林木新品种的产生周期，提高育种效率。本文在综述马尾松无性繁殖研究进展、林木体细胞胚胎发生应用于高效人工林营建现状基础上。重点探讨如何在马尾松体细胞胚胎发生获得初步成功的基础上，把马尾松体细胞胚胎发生应用于马尾松高效人工林营建的潜力及程序实现要求，并指出当前马尾松体胚发育所面临的挑战，为今后马尾松高效人工林发展中新品种的产生提供了一条新途径。

摘要： 胚胎相关基因表达与蛋白质的研究、细胞起源以及激素和渗透调节物质的作用是当前国际上植物体细胞胚胎发生的研究热点。我国在相关基因的表达与调控、人工种子制备等方面较国际上先进水平存在一定差距。基因表达与调控、胚胎发生与相应细胞分裂调控变化的信号途径、生物反应器改进和应用等在一段时间内将成为研究的重点。

摘要： 该文介绍近年来研究人员在龙眼体细胞胚胎发生方面的系列研究工作。研究人员以龙眼细长胚或花药为直始材料，建立了可长期继代保持的胚性愈伤组织系及其高频率体细胞胚胎发生和植株再生体系；由松散型的胚性愈伤组织系快速建立了具有强烈体细胞胚胎发生能力的胚性悬浮细胞系，并由之进一步建立了单细胞和原生质体的体胚发生系统。

摘要： 竹子在促进经济发展和保护环境方面起到重要作用,被称为“绿色黄金”.但因其特殊的开花习性,传统育种困难;营养繁殖又因诸多因素,造林成本太高.离体组织培养可以有效解决这些问题.该文对影响竹子体细胞胚胎发生和器官发生的主要因素进行了探讨.外植体材料的选择以及植物激素的种类和浓度是主要的影响因素.添加其它的外源添加物质可以有效提高组培的诱导效率及减轻褐化现象.

摘要： 以原产南非的“蓝色大花”蓝百合为研究对象，利用其无菌苗茎基部为外植体接种在MS培养基上，分别添加不同浓度的外源激素诱导愈伤组织，并将其愈伤组织继代培养，产生胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转至成熟胚胎诱导培养基上，从而产生棒状胚状体。在不加激素的1/2MS培养基上胚状体萌发并健壮生长，一个月后可获得再生植株。

摘要： 以原产南非的‘蓝色大花’蓝百合为研究对象,利用其无菌苗茎基部为外植体接种在MS培养基上,分别添加不同浓度的外源激素诱导愈伤组织,并将其愈伤组织继代培养,产生胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转至成熟胚胎诱导培养基上,从而产生棒状胚状体。在不加激素的1／2MS培养基上胚状体萌发并健壮生长,一个月后可获得再生植株。

摘要： 通过抑制性扣除杂交法(SSH)建立了日本落叶松体细胞胚胎发生特异表达的相关基因扣除文库，Drivei为在2,4-D 0.1 mg·L-1保持与增殖培养基上保持的日永69胚性愈伤组织(日永69细胞系)，Tester为在PEG4000100 g.L-1、ABA 15 mg.L。体胚成熟培养基上诱导30d的日永69胚性愈伤组织(日永69细胞系)，从文库中克隆的32个cDNA片段有28个获得了GenBank注册号，为DN927721至DN927748。试验获得的28个cDNA片段序列经过与NCBI的GenBank(nr database)已知基因同源比较，其中与已报道的体细胞胚胎发生相关基冈匹配的有：(1)热激蛋白基因，NO.010，NO.43；(2)细胞壁蛋白基因，NO.8,NO.Z47；(3)氧化酶基因，NO.013，NO.Z71；共6个cDNA片段在GenBank(nr database)找到了匹配。28个cDNA片段序列经过与NCBI的EST(EST others database)同源比较，其中有20个cDNA片段序列与已注册的火炬松体胚发生相关基因的EST具有高度同源性，占全部克隆的71.4％。可见，这28个cDNA片段具有了日本落叶松体胚发生相关基因的特性。

摘要： 通过控制2,4-D、蔗糖浓度和培养时间,获得了龙眼胚性愈伤组织体胚发生各个阶段高度同步化的胚性培养物;采用倒置显微镜观察结合直接观察发现,龙眼胚性愈伤组织的体细胞胚胎发生依次经历球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶形胚、成熟体胚等阶段.对龙眼体胚发生主要发育阶段的胚性培养物进行了DNA、RNA提取方法研究,获得了完整、高质量的DNA和RNA,摸索出了一套简便、快捷、有效的DNA提取方法,并对提取的RNA进行了反转录及PCR扩增试验,为龙眼体细胞胚胎发生的分子生物学研究奠定了重要基础.

摘要： 本发明提供了椰子体细胞胚性愈伤组织诱导培养基和椰子体细胞胚胎发生与植株再生的方法，属于椰子组培技术领域。椰子体细胞胚性愈伤组织的诱导培养基，以Y3培养基为基本培养基，每升基本培养基中还含有2,4‑D 20～100mg、TDZ 0～10mg、蔗糖20～30g和植物凝胶1～3g。本发明选用椰子幼嫩花序作为外植体，采用体细胞胚发生途径培养获得椰子再生植株，培养的后代具有与母树完全一致的遗传信息，具有繁殖数量多，稳定性高特点，解决了椰子种子苗后代性状分离，遗传性状不稳定的问题，将为开展优良椰子种苗快速繁殖提供育技术，也可为高效的基因转化提供再生途径。

摘要： 一种杂交鹅掌楸无性系营养体悬浮细胞系诱导体细胞胚胎发生和植株再生的方法，采用母树不同部位的芽、茎尖、叶、花器官及新枝为体细胞胚胎发生诱导材料，经历愈伤组织诱导，悬浮细胞系建立和增殖，悬浮细胞胚胎发育诱导，胚胎发育成熟、体胚萌发和植株再生阶段获得幼苗。本方法突破了无法直接用杂交鹅掌楸成年树营养体诱导体细胞胚胎发生和植株再生技术的难关，为工厂化育苗提供了一种周期短、繁殖率高、成本低廉的新方法。

摘要： 本发明公开了一种冰灯玉露体细胞胚胎发生及植株再生方法，该方法为：通过消毒清洗、叶片胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织成熟与分化、分化芽生根诱导和移栽驯化获得冰灯玉露，本发明以上部分叶为外植体，胚性愈伤诱导的适宜培养基为MS+6‑BA（1.0‑2.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+2,4‑D（0.2mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30mg·L‑1）；体细胞胚胎成熟分化培养基为MS+6‑BA（1.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30g·L‑1），1/2MS培养基中添加IBA1.0g·L‑1、琼脂6g·L‑1和蔗糖30g·L‑1对体胚分化苗进行生根诱导，诱导率最高为76%，培养基中添加活性炭不利于生根诱导。

摘要： 本发明提供一种普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法，所述方法包括以下步骤：取7月中旬普通油茶幼胚于4°C保存，消毒后切块接种至愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导培养；挑选生长良好的愈伤组织继代至分化培养基进行胚状体分化；将出现胚状体的外植体转入胚状体发育及植株再生培养基，进行胚状体发育和植株再生；将具有明显子叶的胚状体转至生根培养基，进行生根培养；最后将获得的完整植株驯化移栽至至营养钵内继续生长。通过本发明所提供的方法，普通油茶能够在6个月内通过体细胞胚胎发生方式获得再生植，为普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株提供了一种方便、快捷和有效的方法，具有较好的社会效益和经济效益。

摘要： 本发明公开了一种樟树体细胞胚胎发生与组织培养的方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括以下步骤：采集未成熟的果实作为外植体，经消毒后，切开果实，取出未成熟的合子胚；经体细胞胚和胚性愈伤组织的诱导培养，体细胞胚和胚性愈伤组织的增殖、成熟与萌发、体胚苗的繁育培养和生根培养得到种苗；体细胞胚和胚性愈伤组织的增殖、成熟与萌发是通过体胚增殖、成熟和萌发通用培养基在同一阶段实现樟树体细胞胚和胚性愈伤组织转化生成体胚苗。本发明提供的体胚增殖、成熟和萌发通用培养基可在3‑4个月实现樟树胚性愈伤组织转化生成体胚苗，约6个月便可获得大量生根樟树体胚苗，具有操作工序节省、效率高、使用简便的优点。

摘要： 本发明公开了一种栾树体细胞胚胎发生及植株再生的培养方法；所述方法包括：(1)以栾树种子为外植体进行培养获得栾树无菌苗；(2)将栾树无菌苗的叶片及茎段接种到愈伤诱导培养基中培养获得胚性愈伤组织；(3)将胚性愈伤组织在体细胞胚发育培养基中进行体细胞胚的分化培养获得栾树体细胞子叶胚；(4)将栾树体细胞子叶胚在成熟发育培养基中进行子叶胚的成熟发育培养；(5)将发育成熟的子叶胚在种子发芽培养基中进行发芽培养获得完整植株；(6)完整植株茎杆的片段接种至生根培养基进行生根培养。本发明培养方法的栾树体胚发生率高、产生的体胚数量多、提高了栾树的再生植株数量，本发明为栾树无性繁殖培养和分子辅助育种等提供了基础。

摘要： 本发明提供了椰子体细胞胚性愈伤组织诱导培养基和椰子体细胞胚胎发生与植株再生的方法，属于椰子组培技术领域。椰子体细胞胚性愈伤组织的诱导培养基，以Y3培养基为基本培养基，每升基本培养基中还含有2,4‑D 20～100mg、TDZ 0～10mg、蔗糖20～30g和植物凝胶1～3g。本发明选用椰子幼嫩花序作为外植体，采用体细胞胚发生途径培养获得椰子再生植株，培养的后代具有与母树完全一致的遗传信息，具有繁殖数量多，稳定性高特点，解决了椰子种子苗后代性状分离，遗传性状不稳定的问题，将为开展优良椰子种苗快速繁殖提供育技术，也可为高效的基因转化提供再生途径。

摘要： 一种杂交鹅掌楸无性系营养体悬浮细胞系诱导体细胞胚胎发生和植株再生的方法，采用母树不同部位的芽、茎尖、叶、花器官及新枝为体细胞胚胎发生诱导材料，经历愈伤组织诱导，悬浮细胞系建立和增殖，悬浮细胞胚胎发育诱导，胚胎发育成熟、体胚萌发和植株再生阶段获得幼苗。本方法突破了无法直接用杂交鹅掌楸成年树营养体诱导体细胞胚胎发生和植株再生技术的难关，为工厂化育苗提供了一种周期短、繁殖率高、成本低廉的新方法。

摘要： 本申请公开了一种调控植物体细胞胚胎发生的方法，以植物未成熟合子胚为外植体，通过控制茎尖分生组织干细胞调控因子miR394和WUS的共同表达，诱导体胚发生。本申请的试验结果显示WUS促进体胚发生具有剂量效应和阶段效应，并且miR394不仅可以促进WUS调控茎尖分生组织发育，同时也可以提高WUS对体胚发生的诱导效率，进而将不易体胚发生的Ler拟南芥转化为可高效进行体细胞胚胎发生的植物。本申请不仅可以有效调控植物体胚发生，而且对重要经济植物的快速育种具有重要意义。

摘要： 本发明适用于植株培育技术领域，提供了一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：步骤S1：外植体选择与预处理；步骤S2：胚性愈伤组织的诱导；步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养；步骤S4：体细胞胚胎萌发培养。本发明使用植物材料少，不受季节限制，可以在较短时间内达到繁殖系数的最大化，不仅能够提高育苗效率，节约生产成本，而且操作简单易行，可重复性强，适宜于周年试验或生产；确保了苗木的移栽成活率，保证了苗木质量；实现了绿色生产，优化了栀子苗木生产流程，值得推广和应用。