悬浮细胞

摘要： 对山西平陆野生葛根悬浮细胞培养过程所涉及的基本培养基、植物激素、pH值等3个影响因素进行了优化。结果表明,最适宜悬浮细胞生长的培养条件为:B5+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L KT+30 g/L蔗糖;最适宜野葛根悬浮细胞合成总黄酮的最佳培养条件为:B5+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+40 g/L蔗糖,pH为5.8。

摘要： 红景天苷是红景天属植物中一种重要的次生代谢产物,因其具有多种生理功能而广受人们的青睐。目前,红景天苷需求量不断增长,传统的天然提取和化学合成已难满足市场需求,因而亟待新方法解决这一困境。前期研究发现,益母草具有转化酪醇合成红景天苷的能力,故本研究对益母草水培和悬浮细胞培养转化酪醇生成红景天苷的条件进行探讨。结果显示,以喷洒0.5%(36.2 mmol·L^(-1))酪醇溶液为主,再辅之以低浓度(<2 mmol·L^(-1))的酪醇水培液,可较好地促进益母草转化酪醇生成红景天苷。另外,对于益母草悬浮细胞系,3 mmol·L^(-1)的酪醇浓度是最佳的培养浓度,对其转化48 h后可达红景天苷最高转化率(63%),而且相较水培方式,益母草悬浮细胞在转化时间和空间上都有较好的优势。综上所述,益母草转化酪醇合成红景天苷的研究,不仅进一步证明益母草具有转化酪醇生成红景天苷的能力,而且还为红景天苷的生物转化,以及益母草相关医药保健产品的开发奠定了基础。

摘要： 近年来,随着我国中医药事业的持续发展,药用植物次生代谢产物的应用途径逐渐增多,药用价值和经济价值逐年上升,其市场需求量也持续增长,而药用植物野生资源蕴藏量下降、生态环境破坏等问题使得药用植物面临着严重的市场供需矛盾.药用植物人工栽培面临着栽培困难、品种退化、成本高昂等难题.采用植物悬浮细胞培养技术,可快速获得成熟的植物细胞、积累植物中的活性成分,为获得药用植物资源开辟了新途径.简要介绍了悬浮细胞的最优培养条件和方法、大规模生产悬浮细胞的研究以及悬浮细胞培养技术的前景.

摘要： 白桦是我国重要的用材和造林树种,其含有的三萜化合物具有重要的医学应用价值,但是产量极低.在收集大量文献的基础上,该文从白桦三萜概况、提取纯化、检测、积累特点、组织培养和白桦细胞悬浮培养等方面进行综述,对研究中存在的问题提出建议,以期为白桦三萜的后续研究提供参考.

摘要： [目的]建立良好的百蕊草悬浮细胞培养体系,为后续利用基因工程改造百蕊草代谢途径获得高次生代谢产物新品种,实现野生资源的替代奠定基础.[方法]以百蕊草愈伤组织为材料,探寻百蕊草悬浮细胞生长与营养消耗规律的基础上,优化培养液氮和磷的初始投入量及铵态氮和硝态氮的比例(NH4+/NO3-).[结果]在30 d的培养过程中,悬浮细胞生长曲线出现较明显的延滞期(0～6 d)、对数生长期(7～ 15 d)、稳定生长期(16～24 d)和衰亡期(24 d后);百蕊草悬浮细胞培养28 d时,起始总氮浓度70 mmol/L、磷酸盐浓度1.3 mmol/L情况下,悬浮细胞干物质量均达最大值,低于或高于此两浓度都不利于细胞的健康生长;在此基础上进行悬浮培养细胞对硝态氮、铵态氮的需求探究.结果 发现,培养过程中悬浮细胞生长对硝态氮的消耗多于铵态氮,铵态氮的利用消耗先于硝态氮,铵态氮的浓度过高会抑制细胞生长,NH4+/NO3-为20/50最适于细胞生长.[结论]在培养周期内百蕊草悬浮细胞生长曲线呈"S"形;以MS为基本培养基,氮浓度为70 mmol/L,磷酸盐浓度为1.3 mmol/L,NH4+/NO3-为20/50较有利于百蕊草细胞的悬浮培养;培养基总糖、蔗糖、还原糖以及硝态氮、无机磷的消耗均在其对数生长期较快,铵态氮在生长初期消耗快于硝态氮.

摘要： [目的]雷公藤甲素是雷公藤主要药用活性成分之一,具有抗肿瘤、免疫抑制和抗炎等多种作用.应用植物细胞培养技术生产雷公藤甲素具有重要意义,而诱导子是提高植物细胞培养中次生代谢产物积累的有效途径之一.研究通过探究非生物和生物诱导子对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累的影响,以期提高雷公藤甲素产量,为雷公藤悬浮细胞规模化生产雷公藤甲素等药用活性物质提供基础.[方法]以水杨酸(SA)、LaCl3以及雷公藤内生真菌NS-5、NS-17作为诱导子,研究不同类型及不同浓度诱导子添加对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累及细胞活力、细胞生长、总糖消耗、PAL活性的影响.[结果]SA、LaCl3和内生真菌NS-5、NS-17诱导子均可促进雷公藤悬浮细胞培养物中雷公藤甲素的积累.非生物诱导子的效应大小受其浓度的影响,0.1 mg/L的SA诱导作用最好,可提高细胞活力,促进细胞生长,总糖消耗增加,升高PAL活性,雷公藤甲素产量最高是对照的3.5倍.随着浓度的降低,LaCl3对雷公藤甲素的诱导作用增强,20 mg/L LaCl3诱导下的最高含量是对照的2.0倍,同时20 mg/L LaCl3也提高了PAL活性和总糖消耗,但对细胞活力和细胞生长影响不大.内生真菌诱导子的效应大小即与诱导子种类和添加时间有关.细胞培养第4天添加NS-5、NS-17菌丝体提取物,第8天添加任一内生真菌诱导子均提高了雷公藤甲素的积累,其中NS-5菌丝体提取物的诱导效果相对最强,细胞培养第8天添加时雷公藤甲素产量最高,是对照的2.4倍,但雷公藤甲素的积累与细胞生长及PAL活性无明显的关联.[结论]诱导子的添加能够提高雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素的积累,诱导效应的大小与诱导子种类、添加浓度及添加时间有关.本研究中的0.1 mg/L SA、20 mg/L LaCl3及内生真菌NS-5菌丝体提取物显示了良好的诱导效果,在利用细胞培养技术进行雷公藤甲素生产中具有较好的应用前景.

摘要： 为了研究茶条槭悬浮细胞中没食子酸的合成,该研究进行了茉莉酸甲酯诱导试验.通过添加茉莉酸甲酯,利用HPLC检测诱导后细胞中没食子酸的含量变化情况,同时利用电导仪、酸度计、分光光度计法和激光共聚焦显微镜对培养液和细胞进行电导率、pH值、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性以及细胞形态等进行分析.结果 表明:(1)相对于正常培养的细胞,添加100 μμmol· L-1的茉莉酸甲酯诱导24 h时,没食子酸的含量达到最高为12.49 mg·g-1,其含量是对照的2倍左右.(2)茉莉酸甲酯的添加导致细胞培养液的pH值和电导率成波动趋势,细胞膜受损,通透性增大,细胞核分散,出现多个细胞核现象.(3)细胞内可溶性蛋白含量在诱导24 h、72 h和5d时达到高峰,其含量分别是对照的1.4、1.67、2.07倍左右.(4)苯丙氨酸解氨酶活性在诱导24 h和5d时分别出现一次高峰,其活性分别是对照的2倍和3.75倍.研究认为,茉莉酸甲酯处理短时间内促进了茶条槭细胞内没食子酸含量的积累,细胞内PAL活性和可溶性蛋白含量有所增加,对细胞液中的pH值和电导率影响不显著.

摘要： 目的:探索不同配方的冻存液对细胞短期冻存复苏后存活率及增殖活性的影响,进而对细胞短期冻存液配比进行优化.方法:将多种贴壁细胞及悬浮细胞分别用4种不同配比冻存液冻存[(A)10％二甲基亚砜(DMSO)+10％胎牛血清(FBS)+80％DMEM/1640培养基;(B)10％DMSO+20％FBS+70％DMEM/1640培养基;(C)10％DMSO+50％FBS+40％DMEM/1640培养基;(D)10％DMSO+90％FBS],程序性降温(平均降温速率-1°C/min)至-80°C,冻存4 d后以相同方法复苏细胞并观察细胞生长形态学变化,分别拍摄细胞在复苏后24、30、48、72、96 h时的生长状态,并根据台盼蓝染色进行细胞计数,绘制细胞生长曲线.结果:冻存液中的不同血清浓度配比对贴壁细胞短期冻存复苏后的生长形态及增殖无明显影响;而对于悬浮细胞,高血清配比的冻存液(C、D组)短暂冻存后复苏细胞的存活率明显高于低血清配比组(A、B组),并且其生长增殖能力也明显减弱.结论:对于贴壁细胞的短期冻存与复苏,冻存液中DMEM:FBS:DMSO比例为8:1:1;而对于悬浮细胞的短期冻存与培养,FBS:DMSO为9:1的冻存效果最好.

摘要： 目的 建立益母草悬浮细胞系,并对其转化生成熊果苷的条件进行优化.方法 以前期实验优选出的愈伤组织为材料建立悬浮细胞系,加入氢醌并培养一段时间后,测定胞内与胞外熊果苷产量,计算转化率.结果 建立的益母草悬浮细胞系分散性良好,通过生长曲线的测定,确定加入氢醌的最佳时期为接种培养的第6日;通过对不同浓度氢醌、不同转化时间的研究,结合熊果苷产生的动力学研究,优选出加入3 mmol/L氢醌转化12 h的熊果苷总产量及胞内产量最高,氢醌转化率也较高.结论 益母草悬浮细胞生长速度快,转化氢醌生成熊果苷的能力较强,有望开发成为新的生物转化体系.

摘要： 目的：探索药用植物雷公藤悬浮细胞原生质体提取的最优条件,并建立雷公藤原生质体瞬时转化体系. 方法：以雷公藤悬浮细胞为材料,对酶解液配比、酶解时间、甘露醇浓度、处理转速等因素进行考察.用PEG介导瞬时转化法将外源基因转化到雷公藤原生质体中. 结果：雷公藤悬浮细胞为材料提取原生质体的最佳条件是：酶液配比为2.0％纤维素酶+0.5％果胶酶+0.5％离析酶,甘露醇浓度0.6mol/L,酶解时间10h,处理转速67×g;PEG介导含有编码GFP的植物表达载体转化雷公藤悬浮细胞原生质体,激光共聚焦扫描显微镜下细胞显示绿色荧光. 结论：筛选得到了雷公藤悬浮细胞原生质体的最佳提取条件,建立了雷公藤悬浮细胞原生质体的瞬时转化体系,为进一步开展雷公藤功能基因及合成生物学等研究奠定了基础.

摘要： 为建立以获取呋喃香豆素为目的的明党参悬浮细胞培养体系,本研究以细胞生长量和3种呋喃香豆素含量为指标,进行了细胞株系、接种量、光周期、温度、蔗糖量和pH的考察和筛选.结果表明源于叶柄的P717为最佳株系,以2.0 g·L-1DW接种于含蔗糖30 g·L-1,pH5.8的培养基中,在25°C,全光照条件下培养可获得生长旺盛且香豆素含量较高的悬浮细胞体系,生长曲线为S型,周期约为14d,生长周期内细胞活力逐渐下降而3种呋喃香豆素产量持续上升.该培养体系可用于进一步结合诱导子作用研究呋喃香豆素的调控.

摘要： 茶条槭悬浮培养细胞经过10％浓硫酸.甲醇提取后，用HPLC法测定其没食子酸含量。色谱条件为：流动相为甲醇/水(4，6)，流速0.5ml，min，waters C1BMS柱，检测波长为270nm。实验测得的线性范围为20.0-100ug.mL-1(R=0.9996，n=5)。平均加样回收率为99.86％，RSD为0.09％。样品稳定性、实验的精密度及重复性三者的RSD均小于1.5％。表明本法是一种测定茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量的好方法。

摘要： 用白叶枯菌(HB84-17)、10μg/ml中生菌素和10μg/ml中生菌素+白叶枯菌处理水稻抗、感白叶枯病近等位基因系CBB4和沈农1033悬浮细胞,采用斑点杂交的方法研究了中生菌素对水稻悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶基因转录表达的影响.结果表明,白叶枯菌、中生菌素和中生菌素+白叶枯菌处理都能诱导悬浮细胞中苯丙氨酸解氨酶基因的转录表达.对于CBB4,白叶枯菌处理3h时苯丙氨酸解氨酶基因开始诱导转录表达,6h达到高峰,诱导表达时间持续至48h;中生菌素处理3h时开始大量表达,大量表达持续至48h.对于沈农1033,白叶枯菌处理12h时苯丙氨酸解氨酶基因才开始诱导转录表达,诱导表达持续至24h;中生菌素处理,3h就开始大量转录表达,并持续至48h.中生菌素+白叶枯菌处理的感、抗品种苯丙氨酸解氨酶基因的诱导转录表达强度和模式与单用中生菌素处理相同.

摘要： 关于慢病毒的高效包装还仍然是慢病毒转基因技术研究的一个关键技术环节。为提高慢病毒包装效率,比较了贴壁和悬浮293T细胞的磷酸钙法慢病毒的包装效果.结果表明:利用悬浮细胞获得的病毒滴度较贴壁细胞高近3.5倍,同时这种方法具有很好的重复性,且悬浮细胞可直接用于病毒包装,节省了24h的细胞培养时间.

摘要： 优化细胞的保存方法,了解细胞在慢速降温过程中受到的损伤机制及低温保护剂的保护机制非常重要.本文分别以贴壁和悬浮状态下的人胚肾上皮293T细胞为对象.拫据相平衡状态图模拟未冻结通道内的液体状况,设计"不冻结"实验并与"冻结"实验对比,定量研究溶液效应和冰晶的机械挤压对细胞的损伤.应用甘油作细胞冻存保护剂,通过改变NaCl溶液的初始浓度获得与甘油-NaCl溶液降温至某一温度相同的未冻结分数和NaCl浓度,定量研究甘油对机械损伤的保护机制.结果显示:当温度≥-10°C,胞外冰晶引起的机械损伤是造成细胞死亡的主要原因;而随着温度的降低,多数细胞死亡是由于溶液效应造成;贴壁细胞与悬浮细胞相比较,前者更容易受到胞外冰晶引起的机械性损伤.

摘要： 目的:用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞的增殖情况,研究欧洲花楸悬浮细胞生长动力学参数.方法:测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液的pH值的变化.利用细胞的鲜重和干重值来对欧洲花楸悬浮细胞的进行生长曲线拟合.结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随着培养时间的增加而越来越大.在对细胞鲜重及干重的拟合中得到,Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线的变化.对拟合得到的函数求一阶及二阶导数,得到了欧洲花楸悬浮细胞的生长速率及生长加速度变化曲线.结论:通过对欧洲花楸悬浮细胞生长特性的研究,得到了欧洲花楸悬浮细胞的生长函数符合logistic曲线,该函数为f(x)=5.044/(1+23.34*exp(-0.3887*x)),细胞在14d时进入增长平台期,在8d时生长速率达到最大,在细胞生长至第5d时可添加诱导子进行处理.

摘要： 本文以银杏悬浮培养细胞系为材料,通过测定其相对电导率、细胞活力、相对含水量、可溶性蛋白、POD活性、MDA含量、PAL活性以及总黄酮量等生理指标,探讨不同浓度的稀土铈对银杏悬浮细胞培养的生理影响,筛选适合的处理浓度,为稀土在银杏悬浮细胞培养中的应用提供依据.结果如下:0.05mmol/L稀土铈处理,样品的可溶性蛋白含量最大,比0天、CK增加了5.6％、10.47％;0.5mmol/L处理,样品电导率最小、PAL的活力最高、总黄酮量最大,与0d和CK相比,分别降低了81.14％和67.85％,升高了72.55％和29.36％,增加了82.39％和41.36％;1mmol/L处理的样品的细胞活力、含水量最大,与CK相比增加了5.67％、3.37％.处理稀土铈浓度大于1mmol/L时,细胞相对电导率增加,含水量、可溶性蛋白含量、细胞活力、POD活性、PAL活力、总黄酮量都下降了.综合各项指标结果,适当浓度的稀土铈处理可有效增强培养细胞活力,促进次生代谢物黄酮的积累,前者最适浓度为1.0mmol/L,后者最适浓度为0.5mmol/L.

摘要： 细胞悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。苜蓿细胞悬浮培养不仅可直接用于原生质体分离和培养、生产次生代谢物等，还可以在细胞水平筛选预期突变。以多叶苜蓿等不同性状苜蓿单株和杂交F1代花药愈伤组织为材料，采用固-液培养基结合的方式，建立苜蓿花药悬浮培养细胞系，并植株再生。通过探索苜蓿花药悬浮培养体系建立的基础条件及其影响因素，建立适宜的苜蓿花药细胞悬浮培养体系，为创造苜蓿新种质和建立苜蓿加倍单倍体群体(DH)，开展苜蓿基因组学研究提供可靠途径。

摘要： 细胞悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。苜蓿细胞悬浮培养不仅可直接用于原生质体分离和培养、生产次生代谢物等，还可以在细胞水平筛选预期突变。以多叶苜蓿等不同性状苜蓿单株和杂交F1代花药愈伤组织为材料，采用固-液培养基结合的方式，建立苜蓿花药悬浮培养细胞系，并植株再生。通过探索苜蓿花药悬浮培养体系建立的基础条件及其影响因素，建立适宜的苜蓿花药细胞悬浮培养体系，为创造苜蓿新种质和建立苜蓿加倍单倍体群体(DH)，开展苜蓿基因组学研究提供可靠途径。

摘要： 本发明提供了一种全悬浮MDCK细胞和利用全悬浮MDCK细胞培养猪流感病毒的方法，属于医学或兽医学技术领域，所述全悬浮MDCK细胞为全悬浮MDCK细胞D11‑F11‑D1。本发明提供的全悬浮MDCK细胞能高滴度增殖猪流感病毒，为SI疫苗的研发和生产提供良好的培养介质以及为开发SI疫苗生产的细胞培养工艺奠定基础。

摘要： 本发明提供细胞的培养方法，其包括：(1)应用于含悬浮的细胞的第1培养基，应用于细胞培养模块的工序、(2)维持在能培养细胞的温度，向上述细胞培养模块吸附上述细胞的工序、及，(3)将使上述细胞吸附的上述细胞培养模块在培养容器中，用第2培养基培养的工序，其中，上述聚合物多孔质膜是有具有多个孔的表面层A及表面层B和夹在上述表面层A及表面层B之间的大空隙层的三层结构的聚合物多孔质膜，其中存在于上述表面层A的孔的平均孔径比存在于上述表面层B的孔的平均孔径小，上述大空隙层有与上述表面层A及B结合的隔壁和被所述隔壁以及上述表面层A及B包围的多个大空隙，在上述表面层A及B中的孔与上述大空隙连通。

摘要： 本发明公开一种细胞全悬浮驯化方法、DF‑1细胞全悬浮驯化方法及应用，本发明将在含血清培养基中贴壁培养的贴壁培养型细胞直接转到无血清培养基中悬浮培养，培养几代后再次用含血清培养基进行贴壁培养，如此反复多次培养后即可获得全悬浮培养型细胞，该方法成功的驯化出了全悬浮DF‑1细胞，本发明的DF‑1细胞全悬浮驯化方法应用于禽源病毒疫苗的研发和生产中，极大地降低了疫苗生产过程中的污染风险和疫苗的生产成本，同时也能够保证病毒的效价，在实际生产中具有潜在的优势和巨大的应用价值，对疫苗的规模化生产具有重要的意义。

摘要： 本发明公开了一种可降低干细胞悬浮液注射剪切力损伤的添加剂，其特征在于由以下重量份数的原料组成：透明质酸0.1～5份、II型胶原蛋白水解物1～5份、胆固醇0.01～0.1份、谷胱甘肽0.1～2份和神经酰胺0.1～1份。一种干细胞悬浮液，添加有所述的添加剂。本发明添加了所述添加剂的干细胞悬浮液，不管是通过何种规格的针管，其细胞活率和细胞完整率相对于对照组均得到大幅提升，从而说明添加剂能够保护细胞，降低针头剪切力的损害，进一步保证了细胞的活性，维持较高的细胞活性，能够在到达人体后更好的发挥作用，提升治疗效果，进而说明其在治疗疾病过程中具有重要作用。

摘要： 本发明提供了一种全悬浮MDCK细胞和利用全悬浮MDCK细胞培养猪流感病毒的方法，属于医学或兽医学技术领域，所述全悬浮MDCK细胞为全悬浮MDCK细胞D11‑F11‑D1。本发明提供的全悬浮MDCK细胞能高滴度增殖猪流感病毒，为SI疫苗的研发和生产提供良好的培养介质以及为开发SI疫苗生产的细胞培养工艺奠定基础。

摘要： 本发明涉及一种细胞悬浮培养生物反应器及细胞悬浮培养的方法，所述细胞悬浮培养生物反应器包括柔性材质的罐体，所述罐体包括第一腔体和第二腔体，所述第一腔体为柱体或台体，所述第二腔体为倒椎体，所述第一腔体上设有接种口、培养基入口和出气口，所述第二腔体上设有进气口，安装在所述第二腔体内的空气分布装置与所述进气口连接，所述进气口连接通气装置，使得无菌气体经所述通气装置进入所述空气分布装置后，分散成均匀的气泡。本发明通过所述细胞悬浮培养生物反应器，在较小通气比条件下，实现细胞悬浮培养的最佳效果，且体系氧传质系数适宜，剪切力适宜，空气成本低，产品收率高，适合细胞的大规模标准化培养的产业化应用。

摘要： 本发明提供了一种印楝细胞悬浮培养基及细胞悬浮培养方法。所述印楝细胞悬浮培养基是在基本培养基的基础上优化组分配比，并添加了一定量的钒酸钠、L‑半胱氨酸、酪氨酸、烟酰胺、二硫苏糖醇、β‑D‑半乳糖、环己六醇磷酸酯、胺鲜酯、6‑BA、蜕皮激素、硝普钠、二辛基磺基琥珀酸钠、辣蓼草汁和地黄连汁；所述细胞悬浮培养方法包括以下步骤：1）无菌试管苗的获得，2）愈伤组织诱导与继代培养，3）细胞悬浮培养。应用本发明的培养基及培养方法不仅能获得稳定的印楝细胞悬浮培养体系，还能显著提高悬浮细胞的生物量和印楝素含量，为印楝细胞规模化培养生产印楝素提供了技术支撑，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种番石榴叶悬浮细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)采集番石榴成熟叶片，洗净后进行表面灭菌处理，切块得到外植体；(2)将外植体接种至愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养得到愈伤组织；(3)将愈伤组织接种至愈伤组织增殖培养基中进行继代培养得到增殖愈伤组织；(4)将增殖愈伤组织接种至液体培养基中进行继代培养，培养过程中保持振荡，继代培养更换培养液时，用吸管取出单细胞或小细胞团进行下一代振荡培养；最终得到只含有单细胞或小细胞团的培养物，将这些培养物混匀即得到番石榴叶悬浮细胞。本发明还提供一种上述番石榴叶悬浮细胞的应用。本发明的方法具有生产成本低、生产周期短、生产效率高等优点。

摘要： 本发明提供了一种印楝细胞悬浮培养基及细胞悬浮培养方法。所述印楝细胞悬浮培养基是在基本培养基的基础上优化组分配比，并添加了一定量的钒酸钠、L‑半胱氨酸、酪氨酸、烟酰胺、二硫苏糖醇、β‑D‑半乳糖、环己六醇磷酸酯、胺鲜酯、6‑BA、蜕皮激素、硝普钠、二辛基磺基琥珀酸钠、辣蓼草汁和地黄连汁；所述细胞悬浮培养方法包括以下步骤：1）无菌试管苗的获得，2）愈伤组织诱导与继代培养，3）细胞悬浮培养。应用本发明的培养基及培养方法不仅能获得稳定的印楝细胞悬浮培养体系，还能显著提高悬浮细胞的生物量和印楝素含量，为印楝细胞规模化培养生产印楝素提供了技术支撑，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种番石榴叶悬浮细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)采集番石榴成熟叶片，洗净后进行表面灭菌处理，切块得到外植体；(2)将外植体接种至愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养得到愈伤组织；(3)将愈伤组织接种至愈伤组织增殖培养基中进行继代培养得到增殖愈伤组织；(4)将增殖愈伤组织接种至液体培养基中进行继代培养，培养过程中保持振荡，继代培养更换培养液时，用吸管取出单细胞或小细胞团进行下一代振荡培养；最终得到只含有单细胞或小细胞团的培养物，将这些培养物混匀即得到番石榴叶悬浮细胞。本发明还提供一种上述番石榴叶悬浮细胞的应用。本发明的方法具有生产成本低、生产周期短、生产效率高等优点。