原生质体培养

摘要： 我国是世界上使用和出口药用植物资源最多的国家,到目前为止,大多数中草药仍然依靠传统的大田栽培及野生资源的采挖等手段获取,这些获取方法不仅生产周期长,而且会导致部分特色植物资源因过度采挖而濒临灭绝,造成药用植物的产量与其活性成分无法满足人们日益增长的需求.原生质体培养技术是利用植物细胞快速增殖的一种种质资源保护方法,可以有效解决药用植物资源紧缺问题,对于保护濒危野生植物资源、提高其利用效率具有重要的经济价值和参考价值.本综述从原生质体培养技术的原理、方法、在药用植物资源中的应用及其存在的问题等方面进行了阐述和分析,旨在为药用植物资源可持续发展与高效开发利用提供理论参考.

摘要： 马铃薯是最早成功迸行离体培养并获得体细胞杂种植株的农作物之一.原生质体培养及再生是体细胞杂交的关键环节,体细胞杂交技术可以避免马铃薯因倍性水平和胚乳平衡数造成在常规育种上的难点.本文在介绍马铃薯原生质体培养影响因素和体细胞杂交技术及其在马铃薯遗传育种应用的基础上,主要分析了影响原生质体培养的重要因素,包括基因型、外植体、预处理、分离技术和培养方法等,并且总结了体细胞杂交技术在马铃薯遗传育种中的应用,同时针对存在的问题提出建议与相应对策并迸行了展望.

摘要： 以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响.结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响.在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6～0.7 mol·L-1时分离效果最佳.以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-O.7 mol·L-1甘露醇+1.0％(w/v)纤维素酶R-10+ 1.5％(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×105个·g-1和72.74％.以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L-1甘露醇+2.0％(w/v)纤维素酶R-10+0.5％(w/v)果胶酶,酶解12～14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×105个·g-1、59.15％和53.87×105个·g-1、63.92％.以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×105个·mL-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3～5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织.

摘要： 王海波男,1958年8月出生,河北保定人。博士,博导,二级研究员,国家突贡专家,享受国务院特殊津贴专家。1982年2月毕业于河北农大农学系,1994年毕业于中国农科院研究生院。1996年至今任河北省农林科学院副院长、河北省植物基因工程中心主任。曾任农业部科技委委员、中国农科院学术委员会委员、中国科协常委、全国政协委员,现任河北省人大常委。攻克小麦原生质体培养世界难题,创建细胞培养通用分析公式,提出细胞状态调控理论,1993年获河北省科技进步一等奖。

摘要： 禾本科牧草与草坪草在可持续农业发展、城市绿化、生态保护等方面起着至关重要的作用.植物体细胞杂交是有性杂交的重要补充,在转移由多基因控制和尚未克隆目标基因控制的性状方面具有极大的潜力.本文综述了禾本科牧草及草坪草的原生质体培养与融合技术,包括原生质体分离材料的选择、培养基成分、培养密度及培养方式、融合的方法与方式.同时,对禾本科牧草及草坪草体原生质体培养与融合技术的应用前景作出展望.

摘要： 为了研究利用体细胞融合技术培育新型林木品种,综述了国内外近10多年的林木原生质体培养、体细胞融合技术以及其在林木育种工作中的应用研究,发现前人在原生质体的材料选择、解离和培养技术方法上获得了较大的进展,并在体细胞融合方法、方式和后期杂种细胞筛选方面取得了丰硕的成果,但相关研究还存在不足,今后还需在林木体细胞融合技术的可融合物种范围、影响因素和生理生化机制等方面开展更加深入的系统研究。

摘要： 原生质体培养与融合技术是蔬菜作物遗传改良的重要手段.该文对蔬菜原生质体的分离、培养、融合的研究现状及原生质体培养与融合技术在蔬菜作物上的应用做了综述,同时做出展望.

摘要： 松科树种的离体培养技术相关研究从20世纪70年代开始至今一直备受关注,并取得了不断的突破。笔者综述了松科树种离体培养的研究进展,对松科树种在直接器官发生、间接器官发生、体细胞胚胎发生、原生质体培养等不同离体培养方式所取得的研究结果进行了总结,并介绍了外植体、培养基、激素等影响离体培养的因素和条件,对松科树种离体培养中有待进一步开展的机理性研究、成年母树营养器官离体培养技术、褐化问题、诱导生根和再生植株移栽技术、商业化生产应用、离体材料的超低温保存研究等方面进行了展望。

摘要： 全蕾金银花是山东省临沂市平邑县临丰现代农业科技有限公司依托中国农科院、山东中医药大学等科研单位，以平邑优质大毛花为亲本，利用现代高新育种技术，通过原生质体培养融合，加以诱导单倍体，筛选多倍体的方法选育而出，是目前国内唯一一个不开花的新品种。全蕾金银花花蕾不开放、花针硕大、药效高、采摘期长，每667平方米种植收益可达8000元以上。

摘要： 以花椰菜5个DH系(DH1-5)无菌苗下胚轴为材料,对影响原生质体分离、纯化与培养的主要因素进行研究,建立适合花椰菜原生质体游离、纯化、培养以至再生出完整植株的技术体系,为其体细胞融合及种质创新等研究奠定基础.结果表明：0.1％离析酶R-10+1.0％纤维素酶R-10的混合酶液，从5d苗龄的下胚轴分离出相对高产率的原生质体.采用浅层液体培养,DH2材料获得了最高的细胞分裂频率。在MS+1.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+8g/L琼脂的固体培养基上，原生质体培养形成的愈伤组织芽诱导率最高。同时，原生质体游离产量、细胞分裂及芽再生频率在不同实验条件及基因型间存在差异。

摘要： 苜蓿原生质体培养已在多个种上取得成功,以紫花苜蓿最多.本文对苜蓿原生质体培养的基本技术研究现状进行了综述,并进一步对其存在的问题和发展趋势进行了探讨,以期为苜蓿基因工程和细胞工程研究提供有益的借鉴.

摘要： 以山杏种胚愈伤组织为试材,研究了硝酸银对原生质体培养效果的影响.结果表明,在酶解液中加入硝酸银,可提高原生质体的活力,但对原生质体产量无明显作用,在培养基中加入硝酸银,对提高原生质体的分裂能力和愈伤组织再生芽的能力具有显著的效果.

摘要： 综述了近年来原生质体技术的研究进展及其在果树育种上的应用成果,并讨论了原生质体技术存在的问题及应用前景。

摘要： 原生质体培养和植株再生技术在观赏植物育种中起重要作用。原生质体的来源、原生质体的分离、培养基的成分、培养方法等,都对原生质体的培养有重要影响。近年来,观赏植物原生质体在细胞融合、遗传转化上有了一定发展,为创造观赏植物新种质提供了新途径和方法。

摘要： 基因工程技术已成为改良作物性状的重要手段.原生质体为受体的遗传转化是其中重要途径之一,但目前棉花在这方面的研究还很少.本研究以陆地棉C312(珂字312)为材料,分离胚性愈伤组织原生质体作为转化受体,选用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,电击穿孔转化法将外源质粒(pBINm-gfp5-ER)DNA转入棉花原生质体中,成功获得了4株转化植株.

摘要： 基因工程技术已成为改良作物性状的重要手段.原生质体为受体的遗传转化是其中重要途径之一,但目前棉花在这方面的研究还很少.本研究以陆地棉C312(珂字312)为材料,分离胚性愈伤组织原生质体作为转化受体,选用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,电击穿孔转化法将外源质粒(pBINm-gfp5-ER)DNA转入棉花原生质体中,成功获得了4株转化植株.

摘要： 基因工程技术已成为改良作物性状的重要手段.原生质体为受体的遗传转化是其中重要途径之一,但目前棉花在这方面的研究还很少.本研究以陆地棉C312(珂字312)为材料,分离胚性愈伤组织原生质体作为转化受体,选用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,电击穿孔转化法将外源质粒(pBINm-gfp5-ER)DNA转入棉花原生质体中,成功获得了4株转化植株.

摘要： 基因工程技术已成为改良作物性状的重要手段.原生质体为受体的遗传转化是其中重要途径之一,但目前棉花在这方面的研究还很少.本研究以陆地棉C312(珂字312)为材料,分离胚性愈伤组织原生质体作为转化受体,选用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,电击穿孔转化法将外源质粒(pBINm-gfp5-ER)DNA转入棉花原生质体中,成功获得了4株转化植株.

摘要： 本研究拟利用非对称融合技术向芸薹属花椰菜中转移野生抗逆性状.供体Brassicaspi-nescens具有光合效率高、抗白锈病、蚜虫、黑斑病和耐盐等优良特性.用经UV处理的B．spinescens叶肉原生质体与花椰菜的下胚轴原生质体通过聚乙二醇(PEG)融合,培养后获得379株再生植株.对其中的120株进行过氧化物同工酶分析和RAPD分子标记检测,证明有23株为杂种植株.流式细胞仪倍性分析表明,杂种植株核DNA含量全部高于供、受体亲本核DNA含量总和,植株倍性在4倍和8倍之间.实验还对供体UV射线处理的不同剂量进行了初步探索,结果表明0．0750J·cm-2为最大辐射剂量.

摘要： 本发明提供了一种芥菜原生质体的提取方法及芥菜杂种原生质体的融合方法。所述提取方法包括：使用酶解液将芥菜无菌苗的真叶酶解；所述酶解液由酶液与SCW液组成，所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、甘露醇和CaCl2，pH为5.6；所述SCW液包括山梨醇、CaCl2和MES，所述SCW液的pH为5.8；向酶解产物中的上清液中加入W5溶液，离心取沉淀，向所述沉淀中加入含有MES的蔗糖溶液，离心取原生质体沉淀，再向其中加入W5溶液，离心取层析液，所述层析液即为含有所述芥菜原生质体的溶液。本发明克服了提取过程中原生质体量少、易破裂且提取效果不稳定的缺点，并且该方法融合效率比较高，原生质体仍能保持较高的细胞活性。

摘要： 本发明属于丝状真菌的工程细胞的制备技术领域，具体涉及一种茶树菇原生质体的制备方法及原生质体单核体菌株的制备方法。本发明提供了一种茶树菇原生质体的制备方法，本发明制备得到的茶树菇原生质体得率高、制备时间短，将所述茶树菇原生质体悬浮液涂布于再生培养基平板上获得茶树菇原生质体单核体菌株，茶树菇原生质体单核化率高，经单核体菌株对峙培养后，获得两种原生质体单核体菌株交配型；测定茶树菇原生质体单核体菌株交配型为开展茶树菇的杂交育种、融合育种、诱变育种、遗传转化和功能基因挖掘等奠定基础。

摘要： 本发明属于原生质体制备技术领域，具体涉及猕猴桃原生质体提取液和猕猴桃原生质体及其制备方法和应用。每升本发明所述猕猴桃原生质体提取液中，包括1.3％～2％W/V混合酶液，300～900mM甘露醇，50～65mM CaCl2，1～2mMDTT和10～20mM MES；所述混合酶液包括纤维素酶R‑10和果胶酶Y‑23。利用本发明猕猴桃原生质体提取液对猕猴桃果肉进行酶解，能够缩短酶解时间，使制备的原生质体保持长时间的活力，增大提取效率。

摘要： 本发明公开了一种制备异叶水蓑衣原生质体的酶解液、异叶水蓑衣原生质体的制备及瞬时转化方法，涉及植物生物技术领域。其中，所述酶解液包括0.5‑4％纤维素酶、0.1‑1.2％离析酶、0.2‑1.0M D‑甘露醇、10‑30mM且pH为4‑7的吗啉乙磺酸、5‑15mM CaCl2、和0.05‑0.15％BSA。采用上述酶解液制备的原生质体及原生质体瞬时转化，可运用于检测转基因的表达效果、启动子分析、转录后基因沉默、抑制子功能鉴定、亚细胞定位、基因相互作用等，通常在瞬时表达载体上插入可以在特定荧光下观察的蛋白质的基因，方便目的基因的识别，多用于快速、高效的检测方法。

摘要： 本发明属于农业生物技术领域，具体涉及小麦原生质体的制备方法及小麦原生质体介导的转化方法。本发明的小麦原生质体制备方法包括以下步骤：培养小麦种子；剪取三叶期的小麦苗叶片，利用酶解液酶解；固液分离，得到小麦原生质体。本发明建立了小麦原生质体制备及转化体系，方法简单、有效，可以用于小麦蛋白亚细胞定位，小麦蛋白互作和蛋白纯化以及荧光素酶标记的基因表达等方面的研究。

摘要： 本发明提供了一种芥菜原生质体的提取方法及芥菜杂种原生质体的融合方法。所述提取方法包括：使用酶解液将芥菜无菌苗的真叶酶解；所述酶解液由酶液与SCW液组成，所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、甘露醇和CaCl

摘要： 本发明公开了一种高粱原生质体的制备方法及制备的原生质体的转化方法，包括以下步骤：(1)取高粱种子于水中催芽，并将芽播种、培育成黄化苗；(2)剪取生长良好的高粱黄化苗，用甘露醇预处理后，取中间的叶鞘部分，用刀片切成细条；(3)对切好的叶鞘用原生质体酶解液进行酶解处理，裂解高粱原生质体；(4)对裂解的高粱原生质体进行固液分离，即得高粱原生质体；本发明首次建立了高粱原生质体制备及转化体系，其方法简单、有效，可以用于高粱蛋白亚细胞定位，高粱蛋白互作和蛋白纯化以及荧光素酶标记的基因表达等方面的研究。

摘要： 本发明公开了一种食用菌原生质体的制备方法以及原生质体，涉及丝状真菌的工程细胞的制备技术领域。本发明提供的食用菌原生质体的制备方法包括：将食用菌菌种接种于含固体培养基的容器中进行菌丝培养，得到长有菌丝的菌落；将菌落进行细胞壁酶解，得到原生质体粗溶液；以及原生质体粗溶液经过滤、离心以及重悬后得到原生质体溶液。本发明提供的制备方法可快速获得大量原生质体。与现有的常规方法相比，本发明提供食用菌原生质体的制备方法速度有很大提高，并且步骤简单，操作更方便。

摘要： 本发明提供了一种杨树腐烂病病原菌原生质体的制备及其遗传转化的方法，属于分子植物病理学领域。原生质体的制备方法包括将杨树腐烂病菌接种到YEPD液体培养基中进行菌丝培养，然后将杨树腐烂病菌菌丝进行酶解处理，即得。且利用PEG介导的方法对制备的原生质体进行遗传转化，获得突变体。本发明方法制备原生质体效率高，酶解后的原生质体可高达10

摘要： 本发明公开了一种花椒原生质体培养再生植株的方法，将来源于花椒无菌试管苗叶片的原生质体悬浮于原生质体培养基中，调整密度后经液体浅层静置培养形成细胞团和小愈伤组织；愈伤组织经增殖培养后，接种到分化培养基上培养分化出不定芽，再转接到生根培养基上培养形成完整植株。本发明对花椒原生质体培养过程中的重要环节进行了深入的研究，尤其是摸索出了专用的原生质体培养基，大大提高了原生质体的细胞分裂频率以及细胞团形成频率。本发明成功获得了原生质体再生植株，初步建立了完整的花椒原生质体再生体系，对开展花椒体细胞杂交育种、原生质体遗传转化等相关生物技术研究具有重要意义。