造血干/祖细胞

摘要： 急性髓细胞白血病(AML)是源于造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病,其发生发展过程中常伴多种染色体和基因异常,且与发病机制、疾病诊断、预后密切相关。然而,除基因突变外,转录后和翻译水平的修饰在AML的发病中也发挥着重要作用。肾母细胞瘤基因1(Wilm’s tumor gene1,WT1)具有抑癌基因和原癌基因的双重功能,是一种有效的转录调控因子,在细胞凋亡、存活及促进细胞增殖、生长、转移、分化和发育等方面起着至关重要的作用,在80%~90%的AML患者骨髓和外周血存在高表达,目前已作为AML患者微小残留病(MRD)监测的指标之一,在AML的免疫治疗方面也具有前景。本文就其功能及在AML中的作用作一综述。

摘要： 目的探讨枸杞多糖(LBP)对人脐血CD34^(+)造血干/祖细胞(UCB CD34^(+)HSPCs)体外扩增的效力。方法利用CCK-8法检测不同浓度LBP对CD146^(+)hMD-PCs增殖率的影响;流式细胞术检测LBP对CD146^(+)hMD-PCs细胞周期的影响;UCB CD34^(+)HSPCs的体外共培养实验分为LBP^(+)CD146^(+)hMD-PCs组、LBP组、CD146^(+)hMD-PCs组和空白对照组,于培养的1、2、4周分别对各组扩增后细胞数量、集落数量和免疫表型进行分析比较。结果CCK-8及流式细胞周期检测显示,与未添加LBP组比较,当LBP浓度为150 mg·L^(-1)时,CD146^(+)hMD-PCs细胞活力升高,G0/G1期细胞比例减少,S期、G2/M期细胞比例升高(P均<0.01)。共培养第1、2、4周后,LBP^(+)CD146^(+)hMD-PCs组细胞数量均多于CD146^(+)hMD-PCs组及LBP组,CD45^(+)、CD34^(+)CD33^(-)、CD10^(+)CD19^(+)、CD14^(+)细胞比例均高于LBP组,且LBP^(+)CD146^(+)hMD-PCs组集落形成单位数量均多于CD146^(+)hMD-PCs组(P均<0.05);与CD146^(+)hMD-PCs组相比,LBP组在共培养第1、2、4周后细胞数量均降低,CD45^(+)、CD34^(+)CD33^(-)、CD14^(+)细胞比例均降低;CD10^(+)CD19^(+)细胞比例在共培养第2、4周后均降低(P均<0.05);在共培养第2周时,LBP组细胞数量多于空白对照组(P<0.01)。结论LBP可以通过促进CD146^(+)hMD-PCs的增殖从而促进UCB CD34^(+)HSPCs的体外扩增。

摘要： 造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)体外扩增过程中,HSPCs的命运取决于HSPCs的对称或不对称分裂,而HSPCs分裂模式的选择与细胞因子有关。为此,以脐带血CD34^(+)细胞为研究对象,采用SCF+TPO+FL(STF)、SCF+IL-3+IL-6(S36)和SCF+TPO+FL+IL-6(STF6)三种细胞因子组合进行体外扩增,分析了CD34^(+)细胞扩增倍数、扩增后CD34^(+)细胞的集落形成能力等HSPCs扩增特性;并以CD34^(+)CD48-细胞的含量、Numb在子细胞中的分布以及numb和musashi-2的基因表达水平为评价指标,多角度评价细胞因子组合对HSPCs的分裂模式的影响。结果发现,与S36相比,STF和STF6均能够通过显著增加HSPCs自我更新的对称分裂比例提高HSPCs的体外扩增效果和集落形成能力。该研究结果可为HSPCs体外扩增过程的优化提供技术支持。

摘要： 脐血移植(cord blood transplantation,CBT)已广泛地应用于儿童及成人恶性及非恶性血液病的治疗.与其他来源的造血干/祖细胞移植相比,行CBT后造血系统及免疫系统重建较缓慢且存在一定的植入失败率,从而增加了患者感染等导致的移植相关死亡率.因此,如何促进脐血造血干/祖细胞的植入是CBT多年来研究的热点.该文就近年来在促进脐血造血干/祖细胞植入策略的研究进展方面作一综述.

摘要： 目的 利用小鼠盲肠结扎穿刺模型探讨脓毒症晚期髓系造血情况.方法 将C57 BL/6小鼠分成假手术组和脓毒症组,采用盲肠结扎穿刺术(CLP)建立小鼠脓毒症模型.利用流式细胞仪检测CLP术后12 d脓毒症小鼠骨髓和脾脏造血前体细胞比例的变化情况.结果 与假手术组相比,CLP术后12d小鼠骨髓中的GMPs(粒-单核细胞祖细胞)、MPPs(多潜能祖细胞)、LSKs(造血干细胞Lin-Sca-1+c-Kit+)的比例显著增加;脾脏中GMPs、LSKs的比例也明显增加.结论 脓毒症晚期小鼠髓系造血显著增加.

摘要： 目的:基于流式细胞仪光路系统的硬件配置情况,探讨多色流式细胞术实验方案的优化设计.方法:选用6～8周B6小鼠的骨髓细胞作为实验材料,在已有流式抗体的基础上,通过变更BD AriaⅢ流式细胞仪中的滤光片,分别检测各荧光通道信号的相对变异系数％rCV和荧光强度中位值(median of fluorescence intensity,MFI)以及小鼠骨髓中的造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)、造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)和多能祖细胞(mul-tipotent progenitor cell,MPP)的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.结果:通过优化光路系统配置,滤光片变更前后各荧光通道的％rCV无明显差异;HSC、HPC、MPP等细胞亚群在PerCP-Cy5.5通道的MFI(ROS水平)均增大;各亚群PerCP-Cy5.5通道的荧光信号(ROS水平)整体右移,实现了多参数流式分析.结论:在多色流式细胞术实验方案设计中,如相关荧光素抗体搭配受限,可通过灵活搭配使用流式细胞仪中的滤光片,合理优化光路系统的硬件配置,达到完成多色流式细胞术检测的目的.

摘要： 目的探讨造血干祖细胞在缺乏造血因子作用下细胞的死亡方式以及细胞铁死亡关键调控蛋白GPX4表达水平的变化;探索铁死亡抑制剂Fer-1(Ferrostatin-1)联合造血因子作用对造血细胞增殖的影响,为造血干祖细胞体外扩增提供理论依据。方法采用CCK-8增殖实验检测细胞的增殖;不同浓度的小分子化合物Erastin(1,2.5,5,7.5,10μmol/L)以及Fer-1(1μmol/L)作用于细胞,检测细胞的存活率;流式细胞术测定TF-1细胞铁死亡相关脂质活性氧(ROS)的表达;Western印迹测定铁死亡相关蛋白GPX4的表达。结果CCK-8细胞增殖实验显示,TF-1细胞在Erastin诱导及缺乏粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的诱导下均会发生死亡,Fer-1可逆转细胞死亡;流式和Western印迹结果表明,Fer-1抑制TF-1细胞内脂质ROS的产生,促进GPX4蛋白的表达。原代造血干祖细胞增殖实验结果表明,Fer-1可逆转人脐带血CD34+细胞在低剂量造血因子作用下诱导的细胞铁死亡,同时促进细胞的增殖;Western印迹结果显示,在人脐带血CD34+细胞低剂量造血因子的作用下,GPX4随Fer-1浓度增加而表达上调。结论造血细胞在体外扩增的过程中会出现细胞铁死亡,通过铁死亡抑制剂Fer-1结合造血因子可促进细胞的增殖。造血因子联合铁死亡抑制剂将是提高造血干、祖细胞扩增效率的新策略。

摘要： 目的:以急性T淋巴细胞白血病为模型，研究白血病宿主体内残留的正常造血细胞功能变化的相关机制。方法：将过表达Notch 1胞内结构域(ICN 1)的逆转录病毒载体MSCV-ICN 1-IRES-GFP感染C57BL/6小鼠骨髓Lin -Scal+细胞(CD45.2)。实验组将1×106过表达ICN 1-GFP的白血病细胞与107B6.SJL鼠(CD45.1)骨髓有核细胞尾静脉注入到9.5Gy照射后的C57BL/6受体小鼠，建立白血病小鼠模型。对照组以1×108C57BL/6小鼠的骨髓细胞替代白血病细胞。移植后流式细胞术检测外周血、骨髓中正常造血细胞和白血病细胞比例，HE染色检测白血病细胞在各种组织中的浸润。结果:100%白血病组小鼠在3周内发生白血病，中位生存时间13 d。10 d后，发病小鼠肝、脾肿大，13 d时外周血和骨髓中白血病细胞(GFP+细胞)占90%以上，CD4+CD8+细胞占80%左右，正常造血干祖细胞频率及绝对数下降。细胞周期分析发现在发病早期HPC增殖加快，发病晚期HSC大多处于静止期等等。结论：①基因芯片结果显示在白血病环境下，正常HSC中与细胞增殖、黏附、归巢相关的基因如CXCR4、 Mmp2、 Itgb3、 Hesl、p21表达改变，使HSC处于更稳定的周期状态中。②Hes 1在白血病中HSC和HPC的差异表达提示HSC和HPC中Hes1对白血病环境的不同反应造成造血干祖细胞的不同命运。③体外实验显示Hes 1对HPC的细胞周期有抑制作用，体内试验也说明Hes 1过表达对于白血病环境下造血干祖细胞数量的维持有一定的保护作用，提示Hes1高表达是白血病环境下正常造血干细胞功能可逆性受抑的机制之一。

摘要： TGF-β1作为造血负调控因子,主要是通过抑制处于静止期的早期造血干祖细胞进入分裂期,从而选择性和可逆性的抑制造血组织中早期细胞的增殖.然而,TGF-β1在整个造血调控中的作用却极为复杂,不同时期不同发育阶段的细胞群体对TGF-β1的反应性不尽相同.本文就TGF-β1对小鼠胚胎干细胞来源BL-CFC产生和分化的影响进行了研究.

摘要： 胎儿骨髓源Flk1+CD31-CD34-细胞属于一类原始的亚全能干细胞,在体内外均可向成骨及造血干祖细胞分化.本研究旨在探索BMP-4对该细胞成骨及造血分化的影响,并对其机制进行初步探讨.

摘要： 目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，并用RT-PCR法鉴定目的基因；采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞，流式细胞术检测纯度；将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养，流式细胞术检测各组增殖效果；用LIF因子激活的JAK/STAT信号通路的阻断剂AG490作用于共培养的各组细胞，流式细胞术检测阻断后各组的增殖效果。结果：建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光，RT-PCR法证实有目的基因表达，免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达92.9±4.51％，与饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干，祖细胞可扩增16.51倍，培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验，与转基因饲养层细胞共培养的干细胞，其诱导迁移率为40.76±1.69％，明显高于对照组，可以较好的保持其归巢能力。AG490阻断后干细胞的增殖能力明显下降。结论：建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效的扩增脐血CD34+造血干/祖细胞，延缓其分化，并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力，LIF因子通过激活JAK/STAT信号通路维持造血干/祖细胞的增殖和归巢能力。

摘要： 目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，并用RT-PCR法鉴定目的基因；采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞，流式细胞术检测纯度；将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养，流式细胞术检测各组增殖效果；用LIF因子激活的JAK/STAT信号通路的阻断剂AG490作用于共培养的各组细胞，流式细胞术检测阻断后各组的增殖效果。结果：建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光，RT-PCR法证实有目的基因表达，免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达92.9±4.51％，与饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干，祖细胞可扩增16.51倍，培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验，与转基因饲养层细胞共培养的干细胞，其诱导迁移率为40.76±1.69％，明显高于对照组，可以较好的保持其归巢能力。AG490阻断后干细胞的增殖能力明显下降。结论：建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效的扩增脐血CD34+造血干/祖细胞，延缓其分化，并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力，LIF因子通过激活JAK/STAT信号通路维持造血干/祖细胞的增殖和归巢能力。

摘要： 目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，并用RT-PCR法鉴定目的基因；采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞，流式细胞术检测纯度；将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养，流式细胞术检测各组增殖效果；用LIF因子激活的JAK/STAT信号通路的阻断剂AG490作用于共培养的各组细胞，流式细胞术检测阻断后各组的增殖效果。结果：建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光，RT-PCR法证实有目的基因表达，免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达92.9±4.51％，与饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干，祖细胞可扩增16.51倍，培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验，与转基因饲养层细胞共培养的干细胞，其诱导迁移率为40.76±1.69％，明显高于对照组，可以较好的保持其归巢能力。AG490阻断后干细胞的增殖能力明显下降。结论：建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效的扩增脐血CD34+造血干/祖细胞，延缓其分化，并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力，LIF因子通过激活JAK/STAT信号通路维持造血干/祖细胞的增殖和归巢能力。

摘要： 目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，并用RT-PCR法鉴定目的基因；采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞，流式细胞术检测纯度；将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养，流式细胞术检测各组增殖效果；用LIF因子激活的JAK/STAT信号通路的阻断剂AG490作用于共培养的各组细胞，流式细胞术检测阻断后各组的增殖效果。结果：建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光，RT-PCR法证实有目的基因表达，免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达92.9±4.51％，与饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干，祖细胞可扩增16.51倍，培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验，与转基因饲养层细胞共培养的干细胞，其诱导迁移率为40.76±1.69％，明显高于对照组，可以较好的保持其归巢能力。AG490阻断后干细胞的增殖能力明显下降。结论：建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效的扩增脐血CD34+造血干/祖细胞，延缓其分化，并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力，LIF因子通过激活JAK/STAT信号通路维持造血干/祖细胞的增殖和归巢能力。

摘要： 对免疫性血小板减少症、再生障碍性贫血、白细胞减少症等血细胞减少症，常用药物强的松、雄激素、免疫抑制剂等疗效不够理想，或虽有效，但继续或减量后失效，且伴诸多不良反应，而疗效可靠的中成药品种很少，故迫切需要研发安全有效的中药新药。在前期医院制剂升血灵胶囊（人参总皂苷），临床应用15年，疗效良好而无明显副反应。单用治疗ITP、再障和白细胞减少症的有效率分别为85.6%、69.7%和77.4%的基础上，进一步分离出人参二醇组皂苷，研制成派能达胶囊。

摘要： 对免疫性血小板减少症、再生障碍性贫血、白细胞减少症等血细胞减少症，常用药物强的松、雄激素、免疫抑制剂等疗效不够理想，或虽有效，但继续或减量后失效，且伴诸多不良反应，而疗效可靠的中成药品种很少，故迫切需要研发安全有效的中药新药。在前期医院制剂升血灵胶囊（人参总皂苷），临床应用15年，疗效良好而无明显副反应。单用治疗ITP、再障和白细胞减少症的有效率分别为85.6%、69.7%和77.4%的基础上，进一步分离出人参二醇组皂苷，研制成派能达胶囊。

摘要： 对免疫性血小板减少症、再生障碍性贫血、白细胞减少症等血细胞减少症，常用药物强的松、雄激素、免疫抑制剂等疗效不够理想，或虽有效，但继续或减量后失效，且伴诸多不良反应，而疗效可靠的中成药品种很少，故迫切需要研发安全有效的中药新药。在前期医院制剂升血灵胶囊（人参总皂苷），临床应用15年，疗效良好而无明显副反应。单用治疗ITP、再障和白细胞减少症的有效率分别为85.6%、69.7%和77.4%的基础上，进一步分离出人参二醇组皂苷，研制成派能达胶囊。

摘要： 本文提供了制备造血内皮细胞的方法和制备造血干细胞的方法，包括在将诱导多能干细胞向造血内皮细胞或造血干细胞转化过程中在特定时段诱导表达转录因子LCOR、HOXA9、HOXA5、RUNX1和ERG。本文提供的方法可提高制备造血内皮细胞和/或造血干细胞(包括长期造血干细胞)的效率。

摘要： 本发明涉及一种扩增造血干细胞和/或造血祖细胞的培养体系及其方法、造血干细胞以及造血祖细胞。所述培养体系包括：基础培养基，该基础培养基适于干细胞扩增；以及JNK信号通路抑制剂。本发明提供的培养体系能够在体外扩增造血干细胞，其扩增效果明显，能够将CD34+CD45RA‑标记的造血干细胞扩增近100倍。

摘要： 本发明涉及一种诱导体细胞重编程为造血干/祖细胞和/或促进造血干/祖细胞体外扩增的小分子化合物组合，所述的小分子化合物组合包含HDACs抑制剂、GSK‑3抑制剂和TGF‑β信号通路抑制剂。本发明还涉及上述小分子化合物组合的应用及诱导体细胞重编程为造血干/祖细胞和/或促进造血干/祖细胞体外扩增的方法。本发明将HDACs抑制剂、GSK‑3抑制剂、TGF‑β信号通路抑制剂这三类化合物联合应用于体细胞，使体细胞进入重编程并转分化为与造血干/祖细胞外形、性能特征极其相似的造血干/祖细胞。使用小分子化合物诱导成体细胞不经过多能干细胞阶段直接变成造血干/祖细胞，可以为本领域的临床应用带来良好的前景。

摘要： 本文提供了制备造血内皮细胞的方法和制备造血干细胞的方法，包括在将诱导多能干细胞向造血内皮细胞或造血干细胞转化过程中在特定时段诱导表达转录因子LCOR、HOXA9、HOXA5、RUNX1和ERG。本文提供的方法可提高制备造血内皮细胞和/或造血干细胞(包括长期造血干细胞)的效率。

摘要： 本发明涉及一种扩增造血干细胞和/或造血祖细胞的培养体系及其方法、造血干细胞以及造血祖细胞。所述培养体系包括：基础培养基，该基础培养基适于干细胞扩增；以及JNK信号通路抑制剂。本发明提供的培养体系能够在体外扩增造血干细胞，其扩增效果明显，能够将CD34+CD45RA‑标记的造血干细胞扩增近100倍。

摘要： 本发明涉及生物医学领域，具体地说是涉及一种体外诱导造血干/祖细胞向红系造血祖细胞分化的方法及其用途。本发明将基因工程与干细胞工程相结合，利用干细胞多向分化的潜能，以分泌活性WNT3a蛋白的骨髓基质细胞作为滋养层细胞，诱导造血干/祖细胞向红系造血祖细胞分化。该体外诱导体系的建立不仅为"成体干细胞可塑性"的理论提供佐证，而且可为制备临床上治疗各种原因导致的贫血、白血病等血液疾病、肿瘤放化疗的造血支持治疗、免疫系统疾病感染性疾病以及肝肾功能障碍等疾病的细胞制剂提供丰富的细胞来源。

摘要： 本发明公开了一种人骨髓造血干/祖细胞的单细胞转录组图谱及构建方法。所述方法包括以下步骤：(1)分选人骨髓造血干/祖细胞；(2)构建所述人骨髓造血干/祖细胞的单细胞转录组库；(3)对所述单细胞转录组库进行测序；(4)对所述测序的数据进行分析，构建所述人骨髓造血干/祖细胞的单细胞转录组图谱；本发明通过深度单细胞转录组测序，构建人骨髓造血干/祖细胞的单细胞转录组图谱来系统研究人造血干/祖细胞特征，获取更多信息量，可为探索人骨髓造血干/祖细胞的生理和病理造血提供理论基础。

摘要： 本文提供了制备造血干细胞或造血干祖细胞的方法、培养长期再生造血干细胞的方法，包括：1)提供造血中胚层细胞或包括造血中胚层细胞的细胞培养物；2)将所述造血中胚层细胞或包括造血中胚层细胞的细胞培养物置于造血内皮特化及内皮‑造血转换培养基中培养；以及3)让所述造血中胚层细胞表达或过表达转录因子OCT4。本文还提供了在培养基中培养长期再生造血干细胞或培养包括长期再生造血干细胞的细胞培养物的方法，包括让所述长期再生造血干细胞表达细胞因子OCT4。

摘要： 本文提供了制备造血干细胞或造血干祖细胞的方法、培养长期再生造血干细胞的方法，包括：1)提供造血中胚层细胞或包括造血中胚层细胞的细胞培养物；2)将所述造血中胚层细胞或包括造血中胚层细胞的细胞培养物置于造血内皮特化及内皮‑造血转换培养基中培养；以及3)让所述造血中胚层细胞表达或过表达转录因子OCT4。本文还提供了在培养基中培养长期再生造血干细胞或培养包括长期再生造血干细胞的细胞培养物的方法，包括让所述长期再生造血干细胞表达细胞因子OCT4。

摘要： 本发明公开了一种由造血干祖细胞向NK细胞分化的方法，在NK细胞分化阶段提高细胞分化培养基的渗透压。本发明方法通过对NK细胞分化过程中渗透压的调节，大幅度提高了NK细胞的生产比例和细胞总数，为后续的NK细胞分化和扩增提供了前期技术基础。同时，本发明方法的改造是在目前科研领域较为成熟的NK细胞分化方案的技术上进行的，技术改造操作简便，几乎不额外增加成本，在目前工业化NK细胞生产过程中具有较强的应用前景和显著的行业竞争力。