蛋白质分离

摘要： 现有自由流电泳(FFE)装置因不具备在线检测功能,其实用性仍然存在明显不足。针对这一问题,该工作发展了一种多通道电容耦合式非接触电导检测(MC-C^(4)D)装置并开发了自动测量软件。MC-C^(4)D装置采用了并行分时的非接触电导检测技术,即由多个同样的非接触电导检测模块并行排列,而单个电导检测模块又由多个非接触电导检测池组成,采用模拟开关切换这些检测池,能够分时检测流经相应检测池溶液的电导率。多个电导检测模块的检测池总数等于FFE的组分数,它们分别串行接入到FFE各流路中,这样MC-C^(4)D装置就可在线并行分时在线测量各组分溶液的电导率。为验证所设计MC-C^(4)D装置的检测性能,采用配制的氯化钾标准溶液作为检测对象对MC-C^(4)D装置进行了标定和测试。实验数据表明,MC-C^(4)D装置电导率检测范围为0.015~2.5 mS/cm,检出限(LOD)为0.002 mS/cm,日内相对标准偏差(RSD,n=3)为2.31%,测量相对误差(RE)为3.03%和通道间测量相对偏差为1.60%,这些参数表明该装置检测范围较大,LOD低,重复性好,准确性高,通道间测量相对偏差小。另外,将MC-C^(4)D装置应用于往复式自由流等电聚焦电泳(RFFIEF)在蛋白质聚焦过程中对各组分溶液电导率进行实时在线检测,结果表明,所开发的MC-C^(4)D装置不仅可实现对FFE各组分溶液电导率的实时在线检测,而且还可在RFFIEF实验中辅助掌握分离的实验进度,提高FFE装置的实用性。

摘要： 磁分离是一种借助外部磁场实现物质分离的技术,广泛应用于污水处理、生物医学及酶反应工程等领域。与传统的分离方法相比,磁分离技术具有反应条件温和、成本低廉、操作简便等优点。四氧化三铁基复合纳米粒子因具有高的比表面积、优秀的生物相容性和量子尺寸效应,且易于表面修饰,成为目前生物磁分离材料研究热点之一。功能化的四氧化三铁复合材料对细胞、病毒、蛋白、核酸等多种生物活性物质都有优秀的特异性和极高的分离效率。本文总结了四氧化三铁基复合材料在生物医学磁分离各个分领域的研究进展。

摘要： 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分离、纯化蛋白质的常用技术.传统的基于Laemmli方法(Laemmli胶)制备的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺电泳胶(SDS-PAGE)能够基于蛋白质分子量的不同分离蛋白质,蛋白质分离性能良好,但存在电泳时间长、保质期短等缺点,其应用有一定的局限性.本研究用三异丙醇胺、三乙醇胺等成分代替Laemmli胶中的三羟甲基氨基甲烷的盐酸盐(T ris-HCl)作为缓冲物质,获得I型和II型两种新型电泳胶.电泳实验的结果表明这两种新型电泳胶保持了Laemmli电泳胶优良的蛋白质分离性能,并能够耐受更高的电压,具有更快的电泳速度.加速寿命实验的结果表明这两种新型电泳胶具有比L aem m li胶和现在流行的商业预制胶更长的保质期.新型I电泳胶比新型II电泳胶分离性能更好,保质期更长,在37°C可储存15天,相当于在4°C的保质期15个月.

摘要： 毛细管电泳作为一种常见的液相分离技术,因其分析速度快、分离效率高、样品消耗量少等特点,在蛋白质分离分析领域有广泛应用.然而,常用的熔融硅毛细管容易吸附蛋白质,导致电渗流不稳定,分离结果重现性变差;此外,商用毛细管电泳中常用的紫外检测器由于光程短,使得毛细管电泳的检测灵敏度往往不能达到低丰度蛋白质的直接分析要求.因此寻找能够阻止蛋白质吸附、同时能够提高检测灵敏度的涂层是毛细管电泳分离分析蛋白质的重要课题之一.聚(2-甲基-2-口恶唑啉)(PMOXA)作为一种类肽类亲水性聚合物,具有与抗蛋白质吸附聚合物聚乙二醇类似的亲水性、抗蛋白质吸附性和生物相容性,而且其类肽结构使之具有较聚乙二醇更好的稳定性,因此近年来在生物质传递、药物载体和阻抗蛋白质吸附等领域得到越来越多的应用.该文主要从两个方面对聚(2-甲基-2-口恶唑啉)在毛细管电泳中的应用进行了阐述.一是利用多巴胺作为黏合层将其涂覆在毛细管内壁作为抗蛋白质吸附涂层,这种涂层不仅能成功分离多种蛋白质的混合物(如溶菌酶、细胞色素C、核糖核酸酶A和 α-胰凝乳蛋白酶原A),而且在定量检测奶粉中三聚氰胺、乳铁蛋白的过程中,能阻抗其他蛋白质的非特异性吸附,提高了毛细管电泳对奶粉中三聚氰胺、乳铁蛋白的检测效率.二是将其与具有刺激响应性的聚合物(如聚丙烯酸)构成二元混合刷涂层,在一定的pH和离子强度条件下,涂层可吸附目标蛋白质(如牛血清白蛋白、溶菌酶),在另一pH和离子强度条件下可将吸附的目标蛋白质全部释放,同时在释放过程中,处于涂层表面的聚(2-甲基-2-口恶唑啉)会进一步阻止蛋白质的吸附,释放的蛋白质在电渗流和电泳的双重作用下快速迁移,到达检测器的蛋白质瞬时浓度大大增加,使目标蛋白质得到富集,目标蛋白质的检测信号得到放大,从而达到了提高低丰度蛋白质检测灵敏度的目的.此外,该文还对聚(2-甲基-2-口恶唑啉)在毛细管电泳分离蛋白质中的未来发展趋势进行了展望.

摘要： 研究通过对溶胶-凝胶法制备的硅胶整体材料进行研磨、浮选、假晶相转换和水热处理,最终获得了粒径为2～5 μm、孔径为20 ～ 60 nm的硅胶颗粒.利用部分含氟的阴离子表面活性剂Capstone FS-66和常用的阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)组成的双胶束模板体系对硅胶基质进行假晶相转换处理;再采用碳酸钠溶液水热处理的方式,进一步扩大孔径.用扫描电镜(SEM)和N2吸附-解吸等温线测量对扩孔处理前后的硅胶整体材料研磨颗粒进行表征,结果清楚地显示了处理前后的形貌变化和差异.随后将含有长链聚乙二醇(PEG)的硅烷键合到扩孔后的硅胶颗粒表面,分别利用元素分析、红外光谱以及热重分析对固定相进行表征,并对固定相进行色谱性能评价.对键合固定相的元素分析和热重分析数据进行分析表明,硅胶表面键合PEG的含量约为8％.研究揭示了利用假晶相转换法与碳酸钠溶液水热处理和长链PEG硅烷修饰的硅胶整体材料颗粒在尺寸排阻色谱分离蛋白质方面的良好分离效果.同时进一步的高效液相色谱评价结果表明,该键合固定相还可用于疏水作用色谱模式分离核糖核酸酶A和溶菌酶,以及可用于亲水作用色谱模式分离吡啶甲酸、左旋多巴、三聚氰胺和邻苯二酚等极性比较强的化合物.研究显示了PEG键合固定相具有多功能性,及其在多模式高效液相色谱分离中的应用潜力.

摘要： 复杂生物体系中蛋白质的高效分离分析在生物分离、蛋白质纯化与检测等生命科学研究领域中具有重要的意义.本文以磁性荧光复合微球(Fe3O4MNP-ZnSQDs)为载体,利用表面印迹技术在Fe3O4MNP-ZnSQDs表面构建“核-壳”结构的磁性荧光蛋白印迹微球(Fe3O4MNP-ZnSQD@MIPs),并用于溶菌酶蛋白的快速分离.结果表明,制备的Fe3O4MNP-ZnSQD@MIPs具有分散性好、粒径均一、荧光发射强、磁响应明显等特点.在最优条件下,该印迹微球在15 min达到吸附平衡,最大吸附容量可达645.76 mg·g-1,饱和磁强度为40 emu·g-1,且具有良好的选择性,印迹因子为2.15.该磁性荧光分子印迹微球成本低、耗时短、使用简单、吸附量高且选择性好,可用于大批量样品检测中溶菌酶的快速分离与纯化.

摘要： 蛋白质组学以蛋白质组为研究对象,从整体水平上阐明蛋白质的总和及其作用方式.随着人类基因组计划的完成,蛋白质组学及其相关技术研究得到了快速发展.本文概述蛋白质组学研究涉及的样品制备、蛋白质分离及蛋白质鉴定技术及其研究进展.

摘要： 利用非离子表面活性剂Triton X-114对奶粉蛋白进行浊点萃取,实现了疏水性与亲水性蛋白质的分离,经MALDI-TOF MS鉴定证实了分离结果的有效性,表明Triton X-114在生命科学中蛋白质分离领域的应用潜力。

摘要： 毛细管等电聚焦技术(CIEF)具有分辨率高、灵敏度高、峰容量高和操作简单等优点,是一种常用的蛋白质分离技术。在常规的ClEF中,需要在缓冲液中添加两性电解质以建立稳定的pH梯度。然而两性电解质不仅会与蛋白质产生相互作用,影响其按照等电点进行分离,而且也干扰低波长下的紫外检测和质谱信号。在我们的前期工作基础上,利用光聚合和光接枝技术制备了固定化pH梯度整体(M-IPG)材料,有效地避免了上述问题。此外,还将该材料用于蛋白质的等电聚焦分离。实验结果表明,采用该技术不仅在一定程度上解决了毛细管等电聚焦中游离两性电解质存在所带来的问题,而且和热引发聚合反应相比,具有制备简单快速、反应位置可控等优点,可以广泛用于透光毛细管和芯片微通道中整体材料的制备。本文探讨了光聚合和光接枝技术用于固定化pH梯度整体材料的制备。

摘要： 本文工作将离子液体作为动态涂层的材料对毛细管内壁进行改性,使正向电渗流得到一定程度地抑制。此外,还作为单一电解液考察了对蛋白质分离的影响。结果表明,在20 kV的条件下,酸性蛋白碳酸酐酶、碱性蛋白细胞色素C和中性肌红蛋白均得到了有效分离。

摘要： 为制备粒径较大、尺寸均一的介孔SiO2 微球,将介孔分子筛应用于大规模分离过程，本文利用“聚合反应辅助凝胶”技术,采用微流体设备实现了对单分散介孔SiO2 微球的生产。同时,考察了介孔SiO2 微球对牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(LYS)的吸附性能。结果表明这种SiO2 硅球可实现很高的蛋白质吸附量和较快的吸附速率,所以在实现快速、大规模的蛋白质分离方面有巨大的应用潜力。

摘要： 实验研究了溶菌酶和牛血清蛋白(BSA)在再生纤维素膜(RC膜)、经荷电改性成负电的RC膜以及Biomax聚醚砜膜上的分离行为。实验结果表明,由于静电相互作用的存在,膜的荷电性、溶液pH值和离子强度对蛋白质的透过率存在一定的影响。此外,膜的亲疏水性对蛋白质混合液的分离性能也存在较大的影响。

摘要： 以羧基为功能基的吸附材料是一类重要的吸附材料。rn 本文利用原子基团转移聚合技术可在固体表面接枝高密度聚合物分子刷的特点，以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚氯甲基苯乙烯-二乙烯基苯(P_(CMS/DVB))微球为引发剂[2],氯化亚铜(CuCl)和自合成的三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me6Tren)组成的混合体系为催化体系,将丙烯酸(HPAA)高密度地修饰在微球表面,得到端基为氯原子的聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物,并对聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物的相对分子质量进行控制,而且此高聚物是很好的高吸附容量羧酸型弱阳离子(WCX)交换填料。用元素分析等表征产物的结构。以溶菌酶、细胞色素-C等5种碱性蛋白为研究对象,用色谱法测定丙烯酸修饰的微球对生物样品的吸附选择性、吸附容量等。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、流动相盐种类,柱压以及pH对标准蛋白保留的影响。此高聚物是对目前制备弱阳离子交换剂技术的发展,在化工、医药等领域内具有重要的应用价值,并且有望获得更高吸附容量的离子交换剂。

摘要： 以羧基为功能基的吸附材料是一类重要的吸附材料。rn 本文利用原子基团转移聚合技术可在固体表面接枝高密度聚合物分子刷的特点，以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚氯甲基苯乙烯-二乙烯基苯(P_(CMS/DVB))微球为引发剂[2],氯化亚铜(CuCl)和自合成的三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me6Tren)组成的混合体系为催化体系,将丙烯酸(HPAA)高密度地修饰在微球表面,得到端基为氯原子的聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物,并对聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物的相对分子质量进行控制,而且此高聚物是很好的高吸附容量羧酸型弱阳离子(WCX)交换填料。用元素分析等表征产物的结构。以溶菌酶、细胞色素-C等5种碱性蛋白为研究对象,用色谱法测定丙烯酸修饰的微球对生物样品的吸附选择性、吸附容量等。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、流动相盐种类,柱压以及pH对标准蛋白保留的影响。此高聚物是对目前制备弱阳离子交换剂技术的发展,在化工、医药等领域内具有重要的应用价值,并且有望获得更高吸附容量的离子交换剂。

摘要： 以羧基为功能基的吸附材料是一类重要的吸附材料。rn 本文利用原子基团转移聚合技术可在固体表面接枝高密度聚合物分子刷的特点，以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚氯甲基苯乙烯-二乙烯基苯(P_(CMS/DVB))微球为引发剂[2],氯化亚铜(CuCl)和自合成的三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me6Tren)组成的混合体系为催化体系,将丙烯酸(HPAA)高密度地修饰在微球表面,得到端基为氯原子的聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物,并对聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物的相对分子质量进行控制,而且此高聚物是很好的高吸附容量羧酸型弱阳离子(WCX)交换填料。用元素分析等表征产物的结构。以溶菌酶、细胞色素-C等5种碱性蛋白为研究对象,用色谱法测定丙烯酸修饰的微球对生物样品的吸附选择性、吸附容量等。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、流动相盐种类,柱压以及pH对标准蛋白保留的影响。此高聚物是对目前制备弱阳离子交换剂技术的发展,在化工、医药等领域内具有重要的应用价值,并且有望获得更高吸附容量的离子交换剂。

摘要： 以羧基为功能基的吸附材料是一类重要的吸附材料。rn 本文利用原子基团转移聚合技术可在固体表面接枝高密度聚合物分子刷的特点，以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚氯甲基苯乙烯-二乙烯基苯(P_(CMS/DVB))微球为引发剂[2],氯化亚铜(CuCl)和自合成的三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me6Tren)组成的混合体系为催化体系,将丙烯酸(HPAA)高密度地修饰在微球表面,得到端基为氯原子的聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物,并对聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物的相对分子质量进行控制,而且此高聚物是很好的高吸附容量羧酸型弱阳离子(WCX)交换填料。用元素分析等表征产物的结构。以溶菌酶、细胞色素-C等5种碱性蛋白为研究对象,用色谱法测定丙烯酸修饰的微球对生物样品的吸附选择性、吸附容量等。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、流动相盐种类,柱压以及pH对标准蛋白保留的影响。此高聚物是对目前制备弱阳离子交换剂技术的发展,在化工、医药等领域内具有重要的应用价值,并且有望获得更高吸附容量的离子交换剂。

摘要： 以羧基为功能基的吸附材料是一类重要的吸附材料。rn 本文利用原子基团转移聚合技术可在固体表面接枝高密度聚合物分子刷的特点，以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚氯甲基苯乙烯-二乙烯基苯(P_(CMS/DVB))微球为引发剂[2],氯化亚铜(CuCl)和自合成的三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me6Tren)组成的混合体系为催化体系,将丙烯酸(HPAA)高密度地修饰在微球表面,得到端基为氯原子的聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物,并对聚丙烯酸(PHPPA-Cl)高聚物的相对分子质量进行控制,而且此高聚物是很好的高吸附容量羧酸型弱阳离子(WCX)交换填料。用元素分析等表征产物的结构。以溶菌酶、细胞色素-C等5种碱性蛋白为研究对象,用色谱法测定丙烯酸修饰的微球对生物样品的吸附选择性、吸附容量等。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、流动相盐种类,柱压以及pH对标准蛋白保留的影响。此高聚物是对目前制备弱阳离子交换剂技术的发展,在化工、医药等领域内具有重要的应用价值,并且有望获得更高吸附容量的离子交换剂。

摘要： 本发明涉及耐碱性提高了的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法、将该蛋白质固定于载体而得的抗体的吸附剂、以及使用该吸附剂分离抗体的方法。

摘要： 提供：Fc结合性蛋白质的稳定性、特别是对热、酸的稳定性提高了的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法、使用该蛋白质的抗体吸附剂和使用该吸附剂的抗体的分离方法。通过将在人FcγRIIIa中、位于细胞外区域中的特定位点的氨基酸残基置换为其他确定的氨基酸而对热、酸的稳定性提高了的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法、使用该蛋白质的抗体吸附剂和使用该吸附剂的抗体的分离方法，由此解决前述课题。

摘要： 本发明提供了在复合体混合物中分离和鉴定参与蛋白质－蛋白质相互作用的蛋白质的方法。该方法使用化学反应性支持基质来分离蛋白质，蛋白质随后非共价结合其它蛋白质。分离支持基质，随后将非共价结合的蛋白质释放用于分析。由于在结合和释放步骤中都可通过化学操作影响蛋白质，鉴定非共价结合蛋白产生关于特定相互作用蛋白质种类的信息，如钙依赖或底物依赖性蛋白质相互作用。这允许在特定相互作用标准基础上从复合体混合物中选择蛋白质亚群。此方法优势是能同时筛选完整蛋白质组，不像双杂交系统或噬菌体展示方法，它们每次仅能检测结合单一钓饵蛋白。该方法可应用于研究活组织切片和尸体解剖样本中的蛋白质－蛋白质相互作用，研究信号分子、药物试剂或毒素存在时的蛋白质－蛋白质相互作用，用于比较患病和正常组织或癌和未转化细胞。

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明提供能够以优异的安全性将蛋白质导入到细胞中的蛋白质导入方法。通过使目标蛋白质承载在由粘土矿物构成的蛋白质导入用载体上并将其添加到细胞中，可以将所述目标蛋白质导入到所述细胞内中。所述粘土矿物优选为层状粘土矿物，可以使用蒙脱石、蛭石、伊利石等。

摘要： 本发明涉及与粉碎或切断洋葱等植物时发生催泪成分的生成有关的表现出将1－丙烯次磺酸转变为催泪成分的作用的蛋白质或多肽、编码该蛋白质或多肽的DNA(催泪成分合成酶基因)、使用用于属于葱属植物的催泪成分合成酶基因分离的引物以及使用该引物分离该基因的方法、含有上述DNA的重组载体、包含含有上述DNA的重组载体的转化体、对用含有上述DNA的重组载体转化的宿主细胞进行培养制造具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的方法、具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽、以及具有抑制具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的mRNA翻译的功能的核酸分子。

摘要： 本发明涉及制备可溶性天然油菜籽蛋白质分离物的方法和通过该方法获得的可溶性天然油菜籽蛋白质分离物。

摘要： 本发明公开了改进蛋白质分离物，特别是大豆蛋白质浓缩物的口味质量和降低吸水性的方法。该方法包括用含有多糖的水溶液表面处理蛋白质分离物以包裹蛋白质分离物，并封闭蛋白质分子的气味及作为防湿屏障。然后将经过处理的蛋白质分离物干燥成粉末形式。所得蛋白质分离物与未处理蛋白质分离物相比，无气味，吸水率降低，可用于广泛的食品而不会气味逆转。