甘草素

摘要： 目的筛选与雌激素受体(ER)α结合力最好的中药成分并验证其抗胃腺癌效果。方法通过生物信息学比较雌激素受体基因与胃腺癌中的相关性并评估雌激素受体1基因表达量与胃腺癌患者预后的关系。借助分子对接对比20种中药成分与ER-α结合性能,采用噻唑兰(MTT)实验验证甘草素抗胃腺癌效果并通过抗体封堵实验验证甘草素的作用靶标蛋白。结果ESR1在肿瘤组织比正常组织中表达低,是影响患者首次进展生存期的独立因素。20种黄酮类物质中与ER-α对接能力最好的为甘草素。与空白对照相比,300μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L甘草素组胃癌细胞抑制率均升高[分别为18.0±4.8、16.9±2.5、54.1±4.7;均P<0.05],甘草素+ER抗体组与甘草素组相比,胃癌细胞抑制率降低[分别为31.3±0.7、46.2±0.3;P<0.05]。结论甘草素与ER-α对接能力最强,可激活ER-α抑制胃腺癌进展,有望成为胃腺癌治疗的新药物。

摘要： 利用同源序列比对和分子进化树分析从胀果甘草转录组数据库中挖掘并成功克隆到2个黄酮合酶基因:Gur.gene26505和Gur.gene26116。经表征Gur.gene26505为黄酮合酶Ⅱ,具有催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮的特性,而Gur.gene26116为黄烷酮2位羟化酶,可催化甘草素生成包括7,4′-二羟基黄酮在内的三种产物。进一步通过蛋白质结构预测、分子对接和分子动力学模拟探究了黄酮合酶Ⅱ(Gur.gene26505)催化合成7,4′-二羟基黄酮特异性的原因。由于Gur.gene26505活性口袋附近特有的刚性结构β片层使大位阻苯丙氨酸残基翻转至羟化中心下方,消除了羟化产物2-羟基甘草素进入脱水中心的阻力进而发生C_(2)-C_(3)位的脱水反应特异性生成7,4′-二羟基黄酮。最后通过基因过表达、反应条件优化和强化菌体生长建立了7,4′-二羟基黄酮特异性合成的最佳细胞催化工艺,使甘草素转化率达到了76.67%。

摘要： 研究甘草素对小鼠黑色素瘤(B16F10)细胞中黑色素合成的影响及其机制。取0,10,20,40,60,80μmol/L异甘草素作用B16F10细胞48 h,MTT法检测甘草素对细胞增殖率的影响。根据增殖活性,筛选出浓度分别为0(对照组),10,20,40μmol/L的甘草素处理B16F10细胞48 h,采用氢氧化钠裂解法、Masson-Fontana氨银染色法、Western印迹方法研究甘草素对B16F10细胞黑色素合成的作用及相关机制。与对照组相比:20,40μmol/L可以显著促进黑色素合成,促进黑色素合成相关蛋白TYR,TRP-1,MITF的表达;40μmol/L甘草素可以激活B16F10细胞中的p38通路。p38通路抑制剂SB203580可以阻断甘草素的促黑色素合成作用。研究结果表明:甘草素通过激活p38信号通路,促进黑色素合成相关蛋白TYR,TRP-1,MITF的表达,进而促进黑色素合成。

摘要： 目的研究甘草素通过微RNA-486-3p(microRNA-486-3p,miR-486-3p)靶向盘蛋白结构域受体-1(discoidin domain receptor 1,DDR1)抑制口腔鳞状细胞癌及其作用机制。方法采用不同浓度甘草素处理人口腔鳞状细胞癌SCC-15细胞48 h,MTT法检测甘草素对细胞生存率的影响。将细胞分为对照组、甘草素组、miR抑制剂组、病毒对照组、抑制慢病毒组和过表达慢病毒组,RT-PCR检测miR-486-3p和DDR1表达;5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)染色检测细胞增殖情况;Western blot检测cleaved Caspase-3和Caspase-3表达。将细胞分为转染对照组和转染组,使用包含野生型或突变型DDR13'-UTR的双荧光素酶报告基因检测系统检测miR-486-3p和DDR1的结合情况。结果与0μmol/L甘草素比较,100、120、150μmol/L甘草素能明显抑制SCC-15细胞的生存率(P<0.05)。与对照组比较,甘草素组miR-486-3p的相对表达量、cleaved Caspase-3/Caspase-3相对比率均明显升高(P<0.05),DDR1的相对表达量、EdU阳性细胞相对比值均明显降低(P<0.05)。与甘草素组比较,miR抑制剂组miR-486-3p的相对表达量、cleaved Caspase-3/Caspase-3相对比率均明显降低(P<0.05),DDR1的相对表达量、EdU阳性细胞相对比值均明显升高(P<0.05)。与病毒对照组比较,抑制慢病毒组EdU阳性细胞相对比率明显降低(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3相对比率明显升高(P<0.05);过表达慢病毒组EdU阳性细胞相对比率明显升高(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3相对比率明显降低(P<0.05)。miR-486-3p与DDR1存在结合位点。与转染对照组比较,转染组相对荧光素酶活力明显降低(P<0.05),野生型DDR13'-UTR相对荧光素酶活力明显降低(P<0.05)。结论甘草素通过miR-486-3p靶向DDR1抑制SCC-15细胞增殖,促进细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤作用。

摘要： 目的建立LC-MS/MS法同时测定麻杏口服液中麻黄碱、甲基麻黄碱、苦杏仁苷、甘草素和阿魏酸5种成分的含量。方法麻杏口服液甲醇稀释液直接加入内标溶液后经过KLP-SPZ-002色谱柱分离,流动相为甲醇-乙腈-水(含0.1%甲酸,48.75∶16.25∶35,v/v/v),流动相流速为500μL·min-1,质谱监测器采用ESI源,多反应监测模式,正负离子切换进行扫描。结果5种成分在测定浓度范围内线性关系良好,回收率在95.6%~106.4%之间。结论本方法快速,灵敏,可以应用于麻杏口服液的常规质量控制。

摘要： 目的:运用多指标-响应曲面法建立甘草汁的最优制备工艺.方法:以甘草苷、甘草素、甘草酸铵含量为综合评价指标,运用响应曲面法考察浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数对甘草汁制备工艺的影响,优选出最优的甘草汁制备工艺.结果:甘草汁的最优制备工艺为:甘草加16倍量水,浸泡30 min,煎煮2次,每次70 min.结论:采用响应面法建立的模型相对准确,可以较好地预测甘草苷、甘草素、甘草酸铵的含量;优选的甘草汁制备工艺方法可行,为制定甘草汁的质量标准和现代研究提供了科学依据.

摘要： 目的 建立参茯消甘饮的HPLC指纹图谱,为其质量评价提供理论依据.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,体积流量:0.9 mL·min-1,柱温:40°C,检测波长:254 nm.用国家药典委员会编"相似度评价软件(2004A)"处理分析,建立参茯消甘饮的HPLC指纹图谱.结果 确立了16个共有峰的共有模式,8个批次参茯消甘饮样品指纹图谱各色谱峰的分离较好,符合指纹图谱检测要求.结论 本研究所建立的方法可靠、简便易行,为参茯消甘饮的质量控制提供了科学依据.

摘要： 目的 建立同时测定甘草总黄酮口腔贴膜中甘草查尔酮A和甘草素含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Aglient HC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B),梯度洗脱(0～10 min时20％A～30％A,10～30 min时30％A～45％A,30～40 min时45％A～60％A,40～50 min时60％A～90％A),流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm(0～30 min)、365 nm(30～50 min),柱温为30°C,进样量为10μL.结果 甘草查尔酮A、甘草素的质量浓度分别在4.16～166.40μg/mL和0.384～15.360μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3％;平均加样回收率分别为99.04％和98.81％,RSD分别为1.06％和1.13％(n=9).结论 该方法操作简便、专属性强、准确度高,可用于甘草总黄酮口腔贴膜中甘草查尔酮A和甘草素的含量测定.

摘要： 目的:研究甘草素熔融的转变产物和溶液中的转变产物及其转变动力学.方法:通过硅胶柱层析色谱柱分离转变产物,运用紫外光谱、液质联用、核磁共振波谱等技术,确定甘草素转变产物的结构;通过高效液相色谱法法研究温度和pH对甘草素在溶液中转变动力学的影响.结果:甘草素经过熔融和溶液中的转变产物均是异甘草素.一定时间范围内,溶液中的甘草素向异甘草素的转变与时间成正向的线性关系,转变速率与温度和pH有关.结论:甘草素在制剂和分析过程中应避免高温,其溶液也应避免受热并维持较低的酸性环境.

摘要： 目的 利用斑马鱼模型结合网络药理学,研究甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性及作用机制,探讨附子-甘草配伍减毒的现代科学内涵.方法 选用受精后48 h(48 hpf)的健康野生型AB系斑马鱼,脱膜后随机移入6孔板中,每孔30枚.对照组加入新鲜养鱼水;模型组和各药物处理组均给予乌头碱溶液,终浓度均为10 μmol/L;各药物组同时分别给予低、中、高浓度(10、50、100 μmol/L)的甘草酸、甘草素、甘草苷和低、中、高浓度(1、5、10μ.mo l/L)的异甘草素,各组斑马鱼处理后放入恒温光照培养箱中培养至72 hpf,在显微镜下记录斑马鱼20 s心跳并拍照,计算心率,并利用Image-Pro Plus 5.0软件计算心包面积,筛选甘草中拮抗乌头碱心脏毒性的成分.通过心脏结构与功能分析、活性氧(ROS)和凋亡细胞检测,进一步验证甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性作用.基于PharmMapper、Swiss Target Prediction、STITCH数据库收集乌头碱毒性作用靶点,利用CTD、GeneCards、DisGeNET数据库,以"心脏毒性""心脏损伤""心衰"为关键词检索靶点,将上述两组靶点导入Draw venn在线绘图取交集,得到乌头碱心脏毒性作用靶点集;从PharmMapper数据库中收集甘草酸活性靶点集;将2个靶点集共有靶点导入String数据库进行蛋白互作分析;使用Cytoscape 3.6.0软件对结果进行拓扑分析,以节点度值中位数为标准筛选重要靶点;得到的靶点导入DAVID数据库,进行GO和KEGG分析.结果 与对照组比较,模型组幼鱼心包水肿显著(P＜0.01),心率显著升高(P＜0.01);与模型组比较,甘草酸与异甘草素各浓度组、甘草苷高浓度组心包面积显著下降(P＜0.01),甘草酸效果更加明显且呈浓度相关性;甘草酸低和高浓度、甘草素高浓度和异甘草素低浓度拮抗乌头碱所致心率加快效果显著(P＜0.05、0.01).甘草酸可浓度相关性地拮抗乌头碱导致的斑马鱼心室短轴缩短率降低,且高浓度组具有显著性差异(P＜0.01);甘草酸显著抑制乌头碱诱导的斑马鱼体内活性氧生成(P＜0.01);明显减弱乌头碱导致的细胞凋亡.甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性的作用机制可能与MAPK、 GRB2、CDC42、EGFR、GSK3B、SRC等关键靶点,以及PI3K-Akt、Ras、FoxO等信号通路相关.结论 甘草酸可以显著拮抗乌头喊心脏毒性,可能通过调控PI3K-Akt、 Ras信号通路等发挥作用.

摘要： 目的：研究甘草素(liquirigenin,LQ)增强顺铂(CDDP)抑制黑色素瘤B16F10侵袭转移的作用.rn 方法：采用四甲偶氮唑盐(MTT)比色法观察不同剂量LQ与CDDP联合作用对B16F10细胞生长能力的影响;采用划痕实验检测其对细胞迁移的影响;Transwell小室实验进行细胞侵袭能力的检测;蛋白质印迹法分析侵袭转移相关蛋白和通路的影响.同时,为了进一步证实体外实验,建立实验性肺转移模型,随机将C57BL/6小鼠分为空白对照组,阴性对照组,顺铂对照组(低、高剂量);联合实验组(低、中、高剂量LQ分别与低剂量CDDP联合),21天加药处理后处死,称重,取肺,拍照,计算肺指数;应用ELISA方法检测MMP-2/9表达水平.rn 结果：1、与单独低剂量CDDP组相比,不同剂量的LQ联合CDDP均能够明显抑制B16F10细胞生长,其差异具有统计学意义(p＜0.05).2、中、高剂量LQ联合CDDP组明显降低了细胞迁移率与穿透基底膜的能力(p＜0.01),并且高剂量LQ联合CDDP组的细胞侵袭转移能力明显低于单独高剂量CDDP组,差异具有统计学意义(p＜0.05).3、中、高剂量LQ联合CDDP组细胞MMP-2和MMP-9蛋白水平较单独低剂量CDDP组明显降低.4、与单独高剂量CDDP组相比,高剂量组LQ联合CDDP组PI3K,p-AKT蛋白表达,明显下调,而PTEN蛋白表达则呈现显著上升(p＜0.05).5、动物实验与细胞实验结果一致,中、高剂量LQ联合CDDP组能明显降低接种B16F10黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移数量,显著减少血清中MMP-2/9含量,与低剂量CDDP组相比,差异具有统计学意义(p＜0.05).rn 结论：LQ可增强CDDP抑制黑色素瘤B16F10细胞的侵袭转移作用,其机制可能通过调控PI3K/PTEN/AKT信号通路,下调MMP-2和MMP-9的蛋白表达,从而抑制细胞侵袭转移.

摘要： 目的:建立裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤模型,探讨甘草素是否具有抑制裸鼠人宫颈癌HeLa细胞移植瘤血管生成作用,并初步研究其对血管生成相关靶向因子的调节作用.方法:本研究经体外培养HeLa细胞,建立裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤模型.随机将裸鼠分为4组,每天经口给药,四周后处死.应用免疫组织化学的方法检测人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤中CD31、SMA的表达水平.应用免疫组织化学的方法、ELISA方法、Western blot方法检测荷瘤裸鼠VEGF、TSP-1蛋白表达水平.结果:甘草素组裸鼠的瘤重和瘤体积与对照组相比均有降低,并呈剂量依赖效应.免疫组化显示,随甘草素剂量增加CD31、SMA、VEGF表达均逐渐下降,而TSP-1蛋白表达无明显变化.ELISA方法和Western blot方法检测VEGF/TSP-1表达水平,甘草素组与对照组相比VEGF表达下调,呈剂量依赖效应,TSP-1表达无明显变化.结论:甘草素能够抑 制裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤的生长并可抑制移植瘤的血管生长作用,其作用机制可能与甘草素抑制血管生成相关因子VEGF的表达有关.

摘要： 本研究将HeLa细胞培养于含体积分数为10%的小牛血清,100U/ml的青霉素和链霉素的DMEM培养液的培养瓶里,并孵育在含5%CO2的37°C培养箱里。使用0.25%胰蛋白酶溶液进行消化、传代,取生长良好的细胞进行实验。探讨甘草素对人宫颈癌HeLa细胞抑制及诱导凋亡的机制,为甘草素抗肿瘤提供科学依据。

摘要： 选择在预备试验中肝损伤明显、酶学指标变化显著的CU2+浓度0．15mg／L作为本试验草鱼肝损伤模型的浸泡浓度，在饲料中分利添加0mg／kgBW(对照组)、20mg／kgBW(试验Ⅰ组)、40mg／kgBW(试验Ⅱ组)、60mg/kgBW(试验Ⅲ组)和80mg／kgBW(试验Ⅳ组)的“甘草素”，造模7d后，连续投喂草鱼28d后，通过测定供试草鱼血清的吞噬活性、溶菌酶活性和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)，以及草鱼攻毒后的免疫保护率和肝脏的组织切片，研究结果表明：“甘草素”可以有效的提高草鱼非特异性免疫功能，显著降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平，提高肝组织抗氧化酶的活性，改善肝损伤，提高抗病力。

摘要： 本文选择在预备试验中肝损伤明显、酶学指标变化显著的CU2+浓度0．15mg/L作为本试验草鱼肝损伤模型的浸泡浓度，在饲料中分利添加0mg/kgBW(对照组)、20mg/kgBW(试验Ⅰ组)、40mg/kgBW(试验Ⅱ组)、60mg/kgBW(试验Ⅲ组)和80mg／kgBW(试验Ⅳ组)的“甘草素”，造模7d后，连续投喂草鱼28d后，通过测定供试草鱼血清的吞噬活性、溶菌酶活性和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)，以及草鱼攻毒后的免疫保护率和肝脏的组织切片，研究结果表明：“甘草素”可以有效的提高草鱼非特异性免疫功能，显著降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平，提高肝组织抗氧化酶的活性，改善肝损伤，提高抗病力。

摘要： 从甘草中提取甘草甜素、甘草黄酮及甘草多糖的方法，所述从甘草中提取甘草甜素的方法，包括以下步骤：（1）将干燥的甘草根或根茎粉碎，投入渗漉器中，压紧，加水，在室温下，渗漉提取，得渗漉液；（2）超滤，收集超滤膜透过液；（3）上阴离子交换树脂柱，用洗脱剂洗脱，洗脱液减压浓缩，调节pH值至酸性，在室温下，搅拌析晶，离心过滤，冰水洗晶，干燥，得甘草甜素。本发明方法还公开了提取甘草黄酮及甘草多糖的方法。本发明方法所得甘草甜素、甘草黄酮和甘草多糖的纯度和收率高；本发明方法可提取多种活性成分，工艺过程可操作性强，成本低，不使用有毒有害化工溶剂、绿色环保，甘草资源高效综合利用，适宜于工业化生产。

摘要： 本发明涉及一种产纤维素酶的菌株及方法，特别涉及一种耐受甘草药渣的草酸青霉菌及应用于甘草药渣产纤维素酶的方法，属于微生物技术领域。该菌株为草酸青霉菌(Penicillium Oxalicum G2)，命名为草酸青霉菌G2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017418。本发明还提供了草酸青霉菌G2利用甘草药渣产纤维素酶的方法。本发明所提供的菌株，可有效处置甘草药渣。以甘草药渣为发酵原料，药渣中部分小分子芳香化合物、糖苷类物质可有效诱导剂菌种分泌纤维素酶发酵周期大大缩短。产品纤维素酶性质稳定，具有广泛的工业推广前景。

摘要： 本发明公开了一种产纤维素酶的甘草内生菌及其所产酶在提取甘草中甘草酸的应用，所述甘草内生菌为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum，保藏号为CGMCC No:16968，其所产纤维素酶可用于甘草中甘草酸的提取。本发明将内生菌所产专属性纤维素酶应用于提取甘草中甘草酸，可使甘草酸更好地从甘草中溶出，从而使甘草酸得率提高34%。

摘要： 从甘草中提取甘草甜素、甘草黄酮及甘草多糖的方法，所述从甘草中提取甘草甜素的方法，包括以下步骤：（1）将干燥的甘草根或根茎粉碎，投入渗漉器中，压紧，加水，在室温下，渗漉提取，得渗漉液；（2）超滤，收集超滤膜透过液；（3）上阴离子交换树脂柱，用洗脱剂洗脱，洗脱液减压浓缩，调节pH值至酸性，在室温下，搅拌析晶，离心过滤，冰水洗晶，干燥，得甘草甜素。本发明方法还公开了提取甘草黄酮及甘草多糖的方法。本发明方法所得甘草甜素、甘草黄酮和甘草多糖的纯度和收率高；本发明方法可提取多种活性成分，工艺过程可操作性强，成本低，不使用有毒有害化工溶剂、绿色环保，甘草资源高效综合利用，适宜于工业化生产。

摘要： 本发明涉及一种产纤维素酶的菌株及方法，特别涉及一种耐受甘草药渣的草酸青霉菌及应用于甘草药渣产纤维素酶的方法，属于微生物技术领域。该菌株为草酸青霉菌(Penicillium Oxalicum G2)，命名为草酸青霉菌G2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017418。本发明还提供了草酸青霉菌G2利用甘草药渣产纤维素酶的方法。本发明所提供的菌株，可有效处置甘草药渣。以甘草药渣为发酵原料，药渣中部分小分子芳香化合物、糖苷类物质可有效诱导剂菌种分泌纤维素酶发酵周期大大缩短。产品纤维素酶性质稳定，具有广泛的工业推广前景。

摘要： 本发明公开了一种产纤维素酶的甘草内生菌及其所产酶在提取甘草中甘草酸的应用，所述甘草内生菌为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum，保藏号为CGMCC No:16968，其所产纤维素酶可用于甘草中甘草酸的提取。本发明将内生菌所产专属性纤维素酶应用于提取甘草中甘草酸，可使甘草酸更好地从甘草中溶出，从而使甘草酸得率提高34%。

摘要： 本发明属于中药提取领域，尤其涉及一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法。以碱提酸沉法提取甘草酸后的剩余废渣为原料，超声提取后，降温酶解；酶解液真空抽滤，滤液浓缩至干后，用乙醇溶解，得到浓缩液；将浓缩液注射于CHEETAH中高压快速制备液相色谱柱，分析色谱检测含甘草素浓度最大的馏分及前、后两侧共三个馏分合并，减压浓缩干燥后，得到高纯度甘草素产品。从甘草废渣中快速提取甘草素的方法，该方法操作简单、环保无污染、得到的产品纯度高。

摘要： 本发明涉及包含甘草提取物或自其衍生的甘草素的组合物，其显著增加胆汁流速率和胆汁酸、GSH和胆红素的胆汁排泄。与这些结果相符，当本发明的提取物或本发明的化合物口服给药和静脉内给药时，包含甘草提取物或自其衍生的甘草素的本发明的组合物减少了包括作为保肝标志的ALT和作为胆汁淤积标志的ALP和γ-GTP的血化学标志，以及包括半乳糖胺/脂多糖-诱导的肝中毒动物模型中的中心坏死和炎症的组织化学标志。

摘要： 本发明公开了一种从甘草中提取纯化甘草素和甘草次酸的方法，包括如下步骤：称取过35目筛的甘草粉末，依次加入无水乙醇、浓盐酸和蒸馏水，液体中无水乙醇的体积分数为70%，浓盐酸的浓度为0.5~2.5mol/l，料液比为1:10~1:30；回流1~3h，提取1~3次，冷却后抽滤，滤液用甲醇定容，然后利用液相色谱对定容后的滤液进行定量分析，再利用逆流色谱进行纯化，得的高纯度甘草素和甘草次酸。本发明利用盐酸同时水解甘草酸和甘草苷分别得到甘草次酸和甘草素，通过大量的实验得到了的甘草中同时提取纯化甘草素和甘草次酸的最佳工艺路线，水解率超过97.5%，提取量大大提高；利用逆流色谱技术进行纯化，甘草素和甘草次酸纯度均达到96%以上，制备量远超其他色谱方法。

摘要： 本发明公开了一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及将水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂加入步骤1中提取得到的含甘草苷的产物中，向溶液中加入酸或碱，水解混合物以制备含甘草素的产物(步骤2)。