方法学评价
方法学评价的相关文献在1991年到2022年内共计278篇,主要集中在临床医学、基础医学、内科学
等领域,其中期刊论文272篇、会议论文6篇、专利文献10224268篇;相关期刊138种,包括标记免疫分析与临床、国际检验医学杂志、实验与检验医学等;
相关会议6种,包括中华医学会第十八次全国儿科学术会议、2010中国长江医学论坛——检验与医学发展、2007年浙江省检验医学学术年会等;方法学评价的相关文献由877位作者贡献,包括黄山、令狐颖、刘志琴等。
方法学评价—发文量
专利文献>
论文:10224268篇
占比:100.00%
总计:10224546篇
方法学评价
-研究学者
- 黄山
- 令狐颖
- 刘志琴
- 许健
- 宋耀虹
- 张蓉
- 徐国宾
- 袁军
- 邹燕
- 郑春苏
- 闫素英
- 代洪
- 伍严安
- 冉玉平
- 刘建平
- 周欢
- 张秀明
- 戴婉如
- 李喜兵
- 杨盛清
- 汪盛
- 沈芊
- 涂植光
- 温冬梅
- 田禾
- 苏甦
- 蒋献
- 蔡杏珊
- 许中
- 郭广宏
- 鄢盛恺
- 陈娟
- 陈洁
- 黄清松
- 丛辉
- 于华
- 何伟
- 侯晓峰
- 俸家富
- 冯仁丰
- 冯品宁
- 刘存丽
- 刘敏
- 卢建明
- 吴元健
- 吴文毅
- 吴明
- 吴晓
- 吴畏
- 周光平
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牛婧;
李娇;
李娜;
孙婧;
张静;
王亚文
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摘要:
目的针对Nugent评分方法在采样检测过程中的不定量、不精准带来的诊断结果差异的问题,建立改良细菌性阴道病(BV)的分泌物涂片的定量检测方法,通过与传统采样方法的诊断结果进行比较,探讨分析前操作规范在Nugent评分方法诊断BV的重要作用。方法通过选取不同重量的阴道分泌物在规定的面积下进行涂布,对菌群镜下分布情况进行评价,制定标准化阴道分泌物取样及涂片方案,建立改良BV诊断方法。随机选取233例女性作为研究对象,分别使用改良方法及传统方法同步进行检测,比较两种方法在菌群密集度、多样性、Nugent评分的差异,并对这两种方法进行方法学评价。结果建立改良方法为取样一平勺(约重0.01 g),涂片面积20 mm×20 mm。改良方法与传统方法的菌群密集度比较,差异有统计学意义(P<0.05);改良方法与传统方法多样性比较,差异有统计学意义(P<0.05);改良方法与传统方法Nugent评分结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。改良方法与传统方法对BV的诊断结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法的方法学评价结果显示,改良方法优于传统方法(P<0.05)。结论建立分析前的定量操作规范,是对Nugent评分标准在诊断细菌性阴道病的准确性的前提条件,改良方法的建立和使用可提高BV诊断的一致性和准确性。
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卫丽;
刁晓艳;
梁涯
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摘要:
目的评价罗氏Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪模块定量检测白细胞介素-6(IL-6)的分析性能。方法对罗氏全自动电化学发光免疫分析仪定量检测IL-6的准确度、精密度和线性进行验证,并进行交叉污染率评估实验。结果经不同批次校准品检测,测定值与靶值的相对偏差为-3.01%~3.84%。批内变异系数(CV)为1.84%~2.80%,批间CV为0.67%~1.43%,检测的准确度和精密度均符合性能标准。IL-6检测回归分析呈一次线性,线性回归方程为y=1.0081x-1.0009(R^(2)=0.99996,P<0.05)。IL-6检测的交叉污染率为0.077%。结论罗氏Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪对IL-6检测性能的验证结果与仪器生产厂家提供的说明基本一致,符合临床实验室检验的要求,可用于临床标本测定。
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唐宁波;
刘冠财;
刘晓雨;
杨丰繁;
龚志梅;
孙可其
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摘要:
目的建立一种基于同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱(ID-UPLC-MS/MS)的血清洋地黄毒苷检测候选参考方法,并对此方法进行性能评价。方法在血清中加入内标物质洋地黄毒苷-21,23,23-d_(3),采用0.5 mol/L硫酸锌溶液进行蛋白沉淀,采用叔丁基甲基醚对样本进行液液萃取,上清液采用氮气吹干,流动相复溶后采用ID-UPLC-MS/MS检测。采用五点包括法计算血清洋地黄毒苷水平。参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件和CLSI EP15-A3文件对建立的ID-UPLC-MS/MS方法进行性能评价(基质效应、特异性、携带污染、精密度、准确度),同时评估其检测洋地黄毒苷的测量不确定度。结果建立的ID-UPLCMS/MS方法检测血清洋地黄毒苷的线性范围为2.8~94.9 nmol/L,批内变异系数(CV)为0.44~1.98%、总CV为0.41%~1.06%;加标回收率为100.03%~100.48%;检测限[信噪比(R_(SN))=3]及定量限(R_(SN)=10)分别为0.032和0.095 nmol/L;检测2020 RELA-A、2020 RELA-B样本,相对偏移分别为0.62%、0.29%,其中2020 RELA-A样本的不确定度为0.35 nmol/L。结论建立了检测血清洋地黄毒苷的ID-UPLC-MS/MS方法。该方法灵敏度高,重复性好,准确度高,有望作为人血清洋地黄毒苷测定的候选参考方法。
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周爱娥;
湛晓琴;
赵世巧;
张娟;
贾双荣
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摘要:
目的评估4种抗环瓜氨酸肽(抗CCP)抗体检测方法,并筛选出符合临床要求的检测方法。方法分别用酶联免疫法、免疫胶体金法、免疫透色比浊法和化学发光法检测该院有关节炎症状的100例患者血清抗CCP抗体。以国家卫生健康委临床检验中心室间质评采用的定性方法(酶联免疫法)作为参比方法,分别比较其他3种方法与其检测结果的符合率。根据WS/T505-2017指南对符合率较高的方法进行精密度和准确度评价。结果免疫胶体金法、免疫透色比浊法和化学发光法与酶联免疫法的阳性符合率分别为:100.0%[95%CI(83.9%,100.0%)]、90.0%[95%CI(69.9%,97.2%)]和100.0%[95%CI(83.9%,100.0%)];阴性符合率分别为:62.5%[95%CI(51.6%,72.3%)、82.5%[95%CI(72.7%,89.3%)]和98.8%[95%CI(93.1%,99.8%)];总体符合率分别为:70.0%[95%CI(60.4%,78.1%)]、84.0%[95%CI(75.6%,89.9%)]和99.0%[95%CI(94.4%,99.8%)];κ值分别为:0.40、0.59和0.97。化学发光法的精密度和准确度满足厂家说明及临床要求。结论化学发光法与酶联免疫法有良好的结果一致性,化学发光法的精密度和准确度满足临床要求,适用于抗CCP抗体的临床检测。
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吴丽萍;
兰喜红
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摘要:
目的 对Mlabs-m-101型干式荧光免疫分析仪检测抗苗勒管激素(AMH)进行性能研究,评价其是否能满足临床需求。方法 参照美国临床和实验室标准协会文件要求,对Mlabs-m-101型干式荧光免疫分析仪检测AMH的精确度、准确度、线性范围、对比性能进行验证。结果 测定AMH低值、高值的批内精密度分别为4.07%、3.02%;批间精密度分别为9.56%、5.83%,均符合规定要求;高、中、低三个水平的偏倚值在-3.00%~2.16%之间,满足相对偏倚0.05),同时对两组数据进行回归分析R^(2)=0.9294,具有高度相关性。结论Mlabs-m-101型干式荧光免疫分析仪测定AMH性能稳定,不但能为临床提供准确、可靠的结果 ,而且具有检测时间短、检测标本灵活等优势,适合中小型实验室开展AMH的检测,方便快捷的为临床服务。
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林丽珍;
王建伟
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摘要:
目的评估Cobas e601全自动免疫分析仪检测白细胞介素6(IL-6)的性能。方法对Cobas e601全自动免疫分析仪检测IL-6进行系统的方法学评价,包括精密度评价、线性范围验证、准确度评价及参考范围验证等。结果Cobas e601全自动免疫分析仪检测IL-6的低水平批内、批间精密度分别1.73%、1.82%;高水平批内、批间精密度分别为1.40%、1.48%;2.92~4504.50 pg/ml内线性关系良好(Y=0.9951X+6.0447,R^(2)=0.9999);回收率为103.0%;参考区间<7.0 pg/ml。结论基于Cobas e601全自动免疫分析仪对IL-6的检测性能良好,准确度高,精密度好,线性范围宽,值得临床实验室推广。
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吕柳;
薛晓雪;
梅曼;
王拓然;
刘春平;
李威;
朱华超;
朱振红;
王海隆
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摘要:
目的:基于雷达图对雷公藤治疗类风湿关节炎的系统评价/Meta分析文献的方法学质量进行多元评价,为临床研究提供直观的证据参考。方法:计算机检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、Cochrane Library、Pubmed、Embase。从出版年份、研究类型、系统评价方法学质量评分、系统评价和Meta分析优先报告条目发表质量评分、同质性、发表偏倚风险6个方面评估纳入文献质量,运用Excel 2019将各项目秩数绘制成雷达图,进行可视化直观分析。结果:纳入11篇系统评价/Meta分析,雷达图多元评价显示,纳入研究质量秩平均分8.06分,主要存在未进行研究方案注册、单个研究存在偏倚、未提供前期研究设计方案、多数文献缺少发表偏倚、质量评价结果可能存在偏倚等问题。结论:雷公藤治疗类风湿关节炎有确切疗效,但缺乏高级别循证医学证据支持,希冀今后的研究者能够为雷公藤治疗类风湿关节炎提供更高质量的循证医学支持。
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孙晓;
吕礼应
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摘要:
目的 比对血清脂蛋白(a)[Lp(a)]颗粒浓度与质量浓度检测方法,并评价其临床应用价值.方法 采用针对血清Lp(a)颗粒浓度(nmol/L)的检测方法与2种针对Lp(a)质量浓度(mg/L)的检测方法分别检测719例血清标本的Lp(a)水平,并进行相关性和一致性比较.以颗粒浓度结果分组,Ⅰ组为Lp(a)<75 nmol/L,Ⅱ组为Lp(a)≥75 nmol/L.根据厂家说明书提供的转换因子,将颗粒浓度检测结果转化为质量浓度.在Ⅰ、Ⅱ组内,分别比较2种质量浓度检测方法结果及转化后的质量浓度结果.结果 德赛、科华质量浓度检测方法与德赛颗粒浓度检测方法间的相关性均较好,相关系数分别为0.984(P<0.01)、0.990(P<0.01);但在Lp(a)<75 nmol/L时,质量浓度与颗粒浓度检测方法分别有6.7%、8.5%的样本结果不一致.在Ⅰ组和Ⅱ组内,德赛质量浓度与科华质量浓度检测方法结果差异均有统计学意义(P<0.05),但其偏差中位数为13.7%(4.6%,25.1%),在临床允许总误差(30%)范围内,且在Ⅱ组内即Lp(a)≥75 nmol/L时其偏倚明显减小,偏差中位数为4.4%(0.03%,10.2%)(<1/3临床允许总误差).相同的结果也存在于德赛质量浓度与转化后的质量浓度结果之间.结论 相对于颗粒浓度检测方法,质量浓度检测方法对Lp(a)存在一定的高估现象,且检测结果存在一定的不准确性,尤其当样本Lp(a)水平较低(<75 nmol/L)时.同时,不建议对颗粒浓度与质量浓度检测方法结果间进行转化.
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李杰;
郑桂喜;
赵瑞;
刘敏;
张建
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摘要:
目的:评价DXI800检测系统乙酸乙酯萃取法检测尿游离皮质醇的性能,探索建立乙酸乙酯萃取尿游离皮质醇的规范流程.方法:参考美国临床实验室标准化协会(NCCLS)文件,制定性能验证的方案.评价DXI800检测系统测定尿游离皮质醇的正确度、检测范围、批内精密度及批间精密度;并分析换溶复溶剂、震荡时间、离心速度、储存时间等因素对乙酸乙酯游离皮质醇萃取效率中的影响.结果:检测系统测量正确度,最大偏倚为3.11%;标准物质批间精密度为4.38%;乙酸乙酯萃取游离皮质醇最大效率为93.39%;低、高两水平尿液游离皮质醇萃取批内精密度分别为2.17%、1.92%;批间精密度分别为3.30%、2.61%;分析不同换溶复溶剂对萃取效率的影响,结果显示20%分析纯乙醇溶液复溶回收率最高(P0.05).结论:DXI800检测系统测定尿游离皮质醇正确度高,精密度好,检测性能可满足临床需求.乙酸乙酯可有效萃取尿游离皮质醇,20%乙醇溶液是较好的游离皮质醇换溶复溶剂.
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郑健;
李馨;
穆红;
周春雷
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摘要:
目的 对API 3200MD质谱仪检测脂溶性维生素的方法 学特征进行评价.方法 利用岛津高效液相色谱仪与API 3200MD串联,建立同时检测血清脂溶性维生素(维生素A1、25羟维生素D2、25羟维生素D3、α维生素E和维生素K1)的方法 ,评价该检测体系的定量限、精密度和准确度.结果 API 3200MD检测维生素A1、25羟维生素D2、25羟维生素D3、α维生素E和维生素K1的定量限分别为<5.0 ng/mL、0.5 ng/mL、0.5 ng/mL、<0.1μg/mL和0.1 ng/mL.高中低三个浓度的日内CV为2.7%~11.9%,日间CV为3.3%~12.3%,均小于15.0%.两个浓度的正确度为88.3%~115.0%,偏差均未超过15.0%.结论 API 3200MD质谱仪可用于脂溶性维生素的临床检测.
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李传保;
吴煦;
袁家颖;
汪润;
屈晨雪;
王建中
- 《第四届全国临床检验学术会议》
| 2006年
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摘要:
目的:建立利用微球捕获技术检测血小板微粒(platelet derivedmicroparticles,PMP)的方法并对其进行初步的方法学评价.rn 方法:采用包被针对血小板膜糖蛋白Ⅲa(CD61)单克隆抗体的检测微球捕获PMP,用CD41 PE结合捕获的PMP,利用流式细胞仪对微球-PMP-CD41 PE复合物进行检测.通过试验优化检测条件;并对方法的重复性和检测线性进行评价.对45例健康人PMP水平进行检测.rn 结果:检测微球在4°C可以稳定保存90d以上,变异系数0.65%,基本可以满足临床检测的要求.应用CTAD抗凝管采集标本可以有效的抑制PMP的体外释放;室温孵育4h可以达到PMP最大的结合;利用PBS洗涤可以去除检测微球对PMP的非特异性吸附.该方法批内变异系数6.8%;批间变异系数10.4%,有较好的重复性;利用该方法检测血小板活化上清中的PMP。在0~200μ1之间有较好的线性(r=0.9962).45例正常健康成人血液PMP参考范围为1.031~1.766(相对荧光强度).rn 结论:利用微球捕获技术可以简便、快捷、准确地检测PMP,对于临床出血、血栓性疾病的诊治具有重要意义.
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张传宝
- 《第二届自动生化分析仪应用研讨会暨生化分析仪应用第二届专业委员会成立大会》
| 2005年
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摘要:
同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)于1932年由DeVgneaud首次发现;1962年在先天性智力障碍儿童中发现同型半胱氨酸尿症(Homocystinuria),约两年后人们认识到同型半胱氨酸尿症的病因为胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-β-Synthase,CBS)缺陷,并发现这些患者易患血栓栓塞性疾病.之后,人们发现严重的亚甲基四氢叶酸还原酶(N5N10-methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)缺陷、细胞内维生素B12代谢障碍均可以引起与同型半胱氢酸尿症相似的临床表现.同型半胱氨酸尿症患者的血管病变特征指出无论这些患者的代谢障碍存在于哪一步,Hcy是引起这些临床表现的原因,并且同型半胱氨酸可能与动脉粥样硬化有关.国内外学者围绕这一问题开展了大量的研究,约有80个临床资料显示高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HH(e))是冠心病的一个新的独立危险因素,并成为研究冠心病病因及预防等方面的一个新的热点.本文介绍了同型半胱氨酸测定方法,评价项目和依据以及评价实验方法和结果。
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董妞妞;
苏犁云;
叶丽静;
于蕙;
徐锦
- 《中华医学会第十八次全国儿科学术会议》
| 2013年
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摘要:
目的:本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法:确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果:本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74%和1.39%;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04%和1.84%.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论:成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.
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董妞妞;
苏犁云;
叶丽静;
于蕙;
徐锦
- 《中华医学会第十八次全国儿科学术会议》
| 2013年
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摘要:
目的:本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法:确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果:本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74%和1.39%;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04%和1.84%.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论:成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.
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董妞妞;
苏犁云;
叶丽静;
于蕙;
徐锦
- 《中华医学会第十八次全国儿科学术会议》
| 2013年
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摘要:
目的:本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法:确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果:本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74%和1.39%;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04%和1.84%.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论:成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.
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董妞妞;
苏犁云;
叶丽静;
于蕙;
徐锦
- 《中华医学会第十八次全国儿科学术会议》
| 2013年
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摘要:
目的:本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法:确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果:本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74%和1.39%;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04%和1.84%.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论:成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.
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董妞妞;
苏犁云;
叶丽静;
于蕙;
徐锦
- 《中华医学会第十八次全国儿科学术会议》
| 2013年
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摘要:
目的:本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法:确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果:本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74%和1.39%;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04%和1.84%.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论:成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.
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