心肌细胞损伤

摘要： 目的:探讨麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,实验分为心肌细胞未行任何干预的对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D组(H/R+OpD组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)过表达组(H/R+OpD+PI3K组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+pcDNA空载体对照组(H/R+OpD+pcDNA组)。噻唑蓝法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒法检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,酶联免疫吸附试验检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测各组心肌细胞中PI3K的表达量。结果:与对照组相比,H/R组心肌细胞中CK-MB、TNF-α、IL-1β、LDH和MDA含量、凋亡率和PI3K的表达量均明显升高,心肌细胞存活率和SOD活力明显降低(P均0.05)。结论:麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制PI3K基因的表达有关。

摘要： 目的探讨飞燕草素葡萄糖苷(DPg)对缺氧复氧(H/R)引起的心肌细胞损伤的影响及其机制。方法2018年4月至2019年10月,用H9C2细胞建立心肌细胞H/R损伤模型,用常规培养的细胞作为对照组;用终浓度为50μmol/L、100μmol/L、1000μmol/L的DPg培养液处理H9C2细胞24 h,而后进行H/R处理,分别记为H/R+50μmol/LDPg组、H/R+100μmol/LDPg组、H/R+1000μmol/LDPg组;抗微小RNA-106a(anti-miR-106a)阴性对照(anti-miR-con)、anti-miR-106a质粒转染至H9C2细胞后进行H/R处理记为H/R+anti-miR-con组,H/R+anti-miR-106a组。miR-106a阴性对照(miR-con)、miR-106a分别转染至H9C2细胞中同时用100μmol/L的DPg处理24 h,而后进行H/R处理,记为H/R+DPg+miR-con组,H/R+DPg+miR-106a组。MTT法检测细胞活性;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-106a表达水平。结果与对照组相比,H/R组心肌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高[(18.35±1.83)%比(7.05±0.71)%],cleaved-caspase-3表达水平显著升高,miR-106a表达水平显著升高[(3.56±0.36)比(1.00±0.11)](P<0.05);DPg处理的心肌细胞存活率显著升高;且100μmol/LDPg组于H/R组,细胞凋亡率显著降低[(10.25±1.03)%比(18.35±1.83)%],cleaved-caspase-3表达水平显著降低,miR-106a表达水平显著降低[(1.53±0.15)比(3.56±0.36)](P<0.05)。miR-106a低表达抑制H/R引起的心肌细胞凋亡;高表达miR-106a逆转了DPg对H9C2细胞增殖促进和凋亡抑制的作用。结论DPg可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,保护H/R引起的心肌细胞损伤;其机制可能与miR-106a有关。

摘要： 目的探讨苦荞黄酮通过JHDM1D反义RNA1(JHDM1D-AS1)对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响及机制。方法将心肌细胞H9c2分为Con组、缺氧/复氧(H/R)组、H/R+苦荞黄酮低剂量组、H/R+苦荞黄酮中剂量组、H/R+苦荞黄酮高剂量组、H/R+pcDNA组、H/R+pcDNA-JHDM1D-AS1组、H/R+苦荞黄酮+si-NC组、H/R+苦荞黄酮+si-JHDM1D-AS1组;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western Blot)法检测蛋白表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测JHDM1D-AS1和miR-421的表达水平;双荧光素酶报告实验检测JHDM1D-AS1和miR-421的靶向关系。结果缺氧/复氧诱导的心肌细胞的凋亡率升高,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低,SOD活性降低,MDA水平升高,JHDM1D-AS1表达水平降低,miR-421表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);不同剂量苦荞黄酮处理后,心肌细胞凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,SOD活性升高,MDA水平降低,JHDM1D-AS1表达水平升高,miR-421表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。过表达JHDM1D-AS1后,心肌细胞凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,SOD活性升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。JHDM1D-AS1靶向调控miR-421;抑制JHDM1D-AS1逆转了苦荞黄酮对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响。结论苦荞黄酮通过调控JHDM1D-AS1/miR-421抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

摘要： 冠心病是一种冠状动脉粥样硬化性心脏病,严重危害人类健康,已成为全球亟待解决的健康问题之一。目前,流行病学研究认为,脂质代谢异常是一种危险因素在冠心病过程中具有重要作用,对该危险因素进行积极预防可显著降低冠心病的发病率及死亡率。大量研究发现,脂质过氧化贯穿于整个冠心病的疾病过程中。为了深入了解脂质过氧化对冠心病发病机制的影响,该文从ALOX15介导的磷脂过氧化角度总结了冠心病的发病进程的作用机制,关注ALOX15抑制剂的作用,为更好地预防、治疗冠心病及其并发症提供新的思路与策略。

摘要： 目的探讨普鲁卡因(PCA)通过调控Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法选择H9c2心肌细胞通过体外培养进行实验,并建立H/R细胞模型,将细胞分为对照组(Con组)、H/R组、PCA低剂量组(H/R+PCA-L组)、PCA中剂量组(H/R+PCA-M组)、PCA高剂量组(H/R+PCA-H组)、H/R+PCA组和H/R+PCA+二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组(H/R+PCA+PDTC组)。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术实验检测各组细胞活力和凋亡情况;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测Bcl-2、Bax和TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果与Con组比较,H/R组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、LDH、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达、磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)p65蛋白表达、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)蛋白表达明显增加(P<0.05);与H/R组比较,H/R+PCA-L组、H/R+PCA-M组和H/R+PCA-H组细胞活力、Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、LDH、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达、p-NF-κB p65蛋白表达、p-IκBα蛋白表达降低(P<0.05)。与H/R+PCA组比较,H/R+PCA+PDTC组细胞活力、Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、LDH、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论PCA通过抑制TLR4/NF-κB通路减缓H/R诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应,并促进细胞的活力。

摘要： [目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR43′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。

摘要： 目的:探讨蒲公英总黄酮对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及可能的机制。方法:将H9C2细胞分为对照组、高糖组,高糖+蒲公英总黄酮低、中、高浓度组,高糖+miR-NC、miR-129-5p组,高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC、anti-miR-129-5p组,后4组转染24 h后进行高糖损伤和(或)蒲公英总黄酮干预。CCK-8法检测细胞活性,试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)含量,流式细胞术评估凋亡率,Western blotting分析凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-129-5p表达。结果:与对照组比较,高糖组心肌细胞的MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平升高,细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平、miR-129-5p表达水平降低(均P<0.05)。与高糖组比较,高糖+蒲公英总黄酮低、中、高浓度组心肌细胞的MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平逐渐降低,细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平、miR-129-5p表达水平逐渐升高,呈浓度依赖性(均P<0.05)。高糖+miR-129-5p组心肌细胞中miR-129-5p表达水平、细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平高于高糖+miR-NC组,MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平低于高糖+miR-NC组(均P<0.05)。高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-129-5p组较高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC组心肌细胞中miR-129-5p表达水平、细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平低,MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平较高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC组高(均P<0.05)。结论:在高糖诱导的心肌细胞损伤中,蒲公英总黄酮通过上调miR-129-5p提高细胞活性,改善氧化应激,并减少细胞凋亡。

摘要： 目的:观察不同浓度生脉饮对阿霉素(adriamycin,ADM)损伤大鼠心肌细胞的干预作用并初步探讨其可能机制。方法:以H9c2大鼠心肌细胞为研究对象,应用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度生脉饮对H9c2细胞的毒性作用,筛选ADM损伤H9c2细胞最适浓度确定损伤模型,设正常对照组、ADM组、ADM+不同浓度生脉饮组,CCK-8检测生脉饮对损伤细胞的保护作用,应用WST-1法检测各组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的变化,应用TBA法检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)的变化。结果:生脉饮(25、200、1600μg/mL)作用H9c2细胞72 h能够促进细胞增殖(P<0.05),1.5625~100μmol/L ADM作用H9c2细胞均呈现明显的毒性并存在时间依赖关系(P<0.01),生脉饮400μg/mL对ADM(1μmol/L)损伤24 h H9c2细胞有保护作用(P<0.05),ADM(1μmol/L)损伤48 h、生脉饮100、200μg/mL组细胞内SOD活力高于ADM组(P<0.05),ADM(1μmol/L)损伤72 h、生脉饮50、200μg/mL组细胞内SOD活力增加(P<0.05,P<0.01),不同时间点生脉饮各剂量组MDA含量均较ADM组降低(P<0.01)。结论:生脉饮对ADM损伤H9c2细胞具有一定的保护作用,可能与其增加SOD活力、降低MDA含量相关。

摘要： 目的研究NEAT1/miR-193a-3p对脂多糖(LPS)诱导的心肌H9c2细胞损伤的作用,并探讨其影响炎性损伤的潜在机制。方法采用双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究NEAT1和miR-193a-3p相互关系。利用脂多糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将pcDNA-NEAT1、miR-193a-3p mimic、阴性对照转染到H9c2细胞。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子水平;通过实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测mRNA水平;通过蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测定蛋白水平。结果双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究证明NEAT1可以作为竞争性内源RNA(ceRNA)靶向结合miR-193a-3p。脂多糖诱导使H9c2细胞活力降低(P<0.01),miR-193a-3p mRNA水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA水平明显升高(P<0.01)。miR-193a-3p mRNA过表达可使NEAT1 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA过表达时可使miR-193a-3p mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。过表达miR-193a-3p可改善H9c2细胞因脂多糖刺激导致的细胞活力降低和细胞凋亡增加,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对细胞活力和凋亡的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的Toll样受体-4(TLR-4)、骨髓分化主要反应蛋白(MYD88)、磷酸酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TLR-4、MYD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平的调节作用。结论NEAT1通过miR-193a-3p可影响脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和炎症反应,提示NEAT1可作为竞争性内源RNA海绵miR-193a-3p参与心肌损伤过程,并且与调控TLR-4/NF-κB信号通路有关。

摘要： 目的探讨橄榄苦苷(OL)对心源性休克(CS)大鼠心功能和心肌细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(结扎左冠状动脉前降支近心端,生理盐水)、OL组[400 mg/(kg·d)]及左西孟旦组[1 mg/(kg·d)],每组各15只,连续给药7 d。检测心功能参数;HE染色观察心肌组织形态;TTC染色观察心肌梗死情况;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡指数;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、肌钙蛋白T(TnT)水平及肌酸激酶MB(CK-MB)活性;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κBp65)、磷酸化NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白相对表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室压最大增率(+dp/dt max)及左心室压最大减率(-dp/dt max)降低,左心室舒张末期压(LVEDP)、血清TNF-α、IL-6、TnT水平及CK-MB活性升高(P<0.05),心肌组织大范围梗死,心肌细胞结构不完整,排列无序,组织见间质水肿,炎性细胞浸润,心肌细胞凋亡严重,心肌组织中TRL4、MyD88、p-NF-κBp65蛋白相对表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,OL组及左西孟旦组大鼠LVSP、+dp/dt max及-dp/dt max升高,LVEDP、血清TNF-α、IL-6、TnT水平、CK-MB活性、心肌梗死面积比、心肌细胞凋亡指数降低(P<0.05),心肌结构形态逐渐变得完整,细胞排列逐渐规则,炎性细胞浸润逐渐减轻,心肌组织中TRL4、MyD88、p-NF-κBp65蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。结论OL可改善CS大鼠心功能障碍及心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,减轻炎性反应有关。

摘要： 目的:探讨当归超滤膜提取物对阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能机制.rn 方法:用阿霉素诱导Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立损伤模型,不同浓度的当归超滤膜提取物进行干预,实验分正常对照组、阿霉素损伤模型组、当归超滤膜提取物不同浓度(3.75、7.5、15g/L)干预组.MTT法检测各组心肌细胞的存活率,生化法检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,Ca2+-ATP酶活性,蛋白印迹半定量测定各组细胞内Casepase-3、Casepase-12蛋白的表达.rn 结果:与阿霉素损伤模型组比较,当归超滤膜提取物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低(p＜0.05),Ca2+-ATP酶活性显著提高(p＜0.05),Casepase-3、Casepase-12表达显著降低(p＜0.05).rn 结论:当归超滤物对阿霉素致心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其降低细胞内LDH含量、增强细胞ATP酶活性、抑制细胞凋亡因子的释放而发挥其保护作用.

摘要： 目的:探讨当归红芪超滤物抗辐射致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制.rn 方法:用X线照射心肌细胞建立辐射损伤模型,当归红芪超滤物进行干预,实验分正常对照组、辐射损伤模型组、当归红芪超滤物不同浓度(3、6、9mg/mL)干预组.MTT法检测各组心肌细胞的生长抑制率,激光共聚焦(laser confocal microscope,LSCM)检测各组心肌细胞线粒体功能,试剂盒检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,蛋白印迹半定量测定各组细胞Bax蛋白的表达.rn 结果:与辐射损伤模型组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞的生长抑制率明显降低(p＜0.05),线粒体功能明显改善(p＜0.05),SOD活性显著提高(p＜0.05),Bax表达显著降低(p＜0.05).rn 结论:当归红芪超滤物具有拮抗辐射致心肌细胞损伤的作用,其机制与清除自由基有关.

摘要： 本研究探讨麦冬皂苷D对多柔比星诱导心肌损伤的保护作用.结果表明,多柔比星可诱导H9c2细胞内质网应激相关蛋白的表达量显著上升,并导致细胞活性氧含量增加,活力下降.而麦冬皂苷D预处理可部分逆转多柔比星引起的上述变化,抗氧化剂NAC预处理或siRNA干扰促凋亡转录因子CHOP也有类似效应.研究表明,麦冬皂苷D对多柔比星诱导的心肌细胞损伤有保护作用,这一作用与其降低多柔比星诱导的ROS累积、进而缓解内质网应激有关.

摘要： 目的:观察富含氢气(H2)的培养基对血清-葡萄糖剥夺(SGD)致心肌细胞损伤的保护效应,探讨血红素加氧酶1(HO-1)在其中的作用.方法:用SGD的方法处理H9c2心肌细胞,建立缺血性心肌病的细胞模型.在SGD处理后,分别给予正常培养基和富含H2的培养基以观察H2的心肌细胞保护作用,给予选择性HO-1抑制剂锌原卟啉IX(ZnPP IX)以抑制HO-1的作用;各处理因素完成后,检测细胞存活率、羟基自由基(OH·)的含量及HO-1蛋白的表达.结果：SGD处理6-30 h，时间依赖性地降低H9c2心肌细胞的存活率，相关性分析显示r为-0.94。SGD处理6h后再正常培养24 h可明显增加细胞内OH的含量，并上调HO-1蛋白的表达，与对照组比较，均P<0.01。ZnPP IX通过抑制HO-1的作用能明显加重SGD处理诱导的心肌细胞存活率降低(P<0.05)。在SGD处理后给予富含H2的培养基能减轻SGD引起的细胞损伤，使细胞存活率明显提高(P<0.05)，胞内OH的含量显著降低(P<0.01)。富含H:的培养基还能使SGD诱导的HO-1表达进一步上调，而ZnPP IX部分取消了Hz诱导的细胞保护作用(P<0.05)。结论:富含H2的培养基可减轻血清一葡萄糖剥夺引起的心肌细胞损伤，其机制不仅与直接清除OH有关而且还与上调抗氧化酶系统HO-1的表达有关。

摘要： 目的：通过观察慢性间歇低氧对高脂喂养大鼠心肌细胞组织病理学、氧化应激及细胞凋亡指标影响,探讨慢性间歇低氧诱导的心肌细胞损伤的可能的发病机制.方法：24只雄性Wistar大鼠随机均分为3组,空白对照组普通鼠料喂养,高脂组高脂饲料喂养,高脂+间歇低氧组高脂饲料喂养,同时给予7h/d间歇低氧处理.观察3组大鼠9周末心肌组织病理学、心肌细胞超微结构变化,心肌组织凋亡调控因子Caspas-3和氧化应激指标髓过氧化物酶(MPO)活性变化。结果：空白对照组大鼠心肌结构未见异常，高脂组心肌细胞出现多种病理损害，高脂+间歇低氧组心肌细胞损伤更为明显。高脂+间歇低氧组心肌Caspas-3, MPO活性明显高于空白对照组和高脂组(P<0.01)。结论：慢性间歇低氧加高脂复合条件下对心肌细胞病理损伤较单纯高脂组更为明显，氧化应激诱导的细胞凋亡可能在其发病机制中起重要作用。

摘要： 目的：探索游离脂肪酸是否可以诱导心肌细胞发生程序性坏死(necroptosis),及其可能的作用机制.rn 方法：本研究以体外培养的H9c2心肌细胞为靶细胞,用200μmol/L棕榈酸(Palmitic acid,PA)刺激24h以诱导心肌细胞损伤,并且在内质网应激(endoplasmic reticulum-stress,ERS)的阻断剂普伐他汀和激动剂毒胡萝卜素预处理的基础上再用PA干预24h以进行机制探讨.采用实时荧光定量RT qPCR法检测necroptosi:标志基因一受体相互作用丝氨酸苏氨酸激酶1(receptor (TNFRSF)-interacting serine-threonine kinase1, RIPKl)及受体相互作用丝氨酸苏氨酸激酶3 (receptor (TNFRSF)-interacting serine-threonine kinase 3, RIPK3), ERS标志基因GRP78,CHOP的表达水平。rn 结果：200Eunol/L浓度的棕搁酸作用H9c2心肌细胞24小时后，心肌细胞necroptosis标志基因RIPK 1, RIPK3表达明显增加(P＜0.05); ERS基因GRP78, CHOP表达明显增加(P＜0.05)。使用Necrostatin-1(necroptosis特异性抑制剂)预处理2小时，再用200pmoUL棕搁酸作用心肌细胞24小时，和棕桐酸单独处理的心肌细胞比，其RIPK1、RIPK3基因表达明显降低(P＜0.05)。同样，GRP78, CHOP基因表达也明显降低(P＜0.05)。ERS阻断剂普伐他丁预处理能明显降低心肌细胞RIPKI及RIPK3 mRNA表达水平，而应用ERS激动剂毒胡萝卜素预处理能显著增加RIPK1及RIPK3 mRNA表达水平。rn 结论：棕搁酸可能引起H9c2心肌细胞发生necroptosis，同时necroptosis的发生可能与ERS信号通路相关。

摘要： 目的：以高糖刺激的乳鼠心肌细胞模拟糖尿病诱导心肌细胞损伤,给予胰高血糖样多肽-1(GLP-1)预处理,观察其对高糖引起的心肌细胞凋亡的影响,以及细胞内硫氧还蛋白(Trx)系统的变化.rn 方法：将分离培养48h的大鼠乳鼠心肌细胞分为三组，1)正常对照组:使用含葡萄糖5.5mmol/L的DMEM培养基加入甘露醇20mmol/L作为对照培养基进行培养;2)高糖组:使用含葡萄糖25mmo1/L的DMEM培养基作为高糖培养基进行培养模拟糖尿病;3)高糖+GLP-1组:以含葡萄糖25mmo1/L的DMEM培养基加入终浓度10nmol/L的GLP-I继续培养模拟糖尿病GLP-1干预，心肌细胞分别在三种培养基中培养24h后测定指标。rn 结果：1)与正常组比较，高糖组细胞乳酸脱氢酶活性、细胞凋亡率、p38激酶活性均显著升高，Trx活性明显降低(p＜0.05);硫氧还蛋白表达无明显变化，但细胞内蛋白硝基化的标志物3一硝基酪氨酸生成量增加，Trx的内源性抑制蛋白硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表达明显上调，活性氧(ROS)生成、丙二醛(MDA)的含量均明显升高(P均＜0.05); 2)与高糖组比较，高糖+GLP-1组乳酸脱氢酶活性、细胞凋亡率、p38激酶活性明显降低，Trx活性明显恢复(p＜0.05)，3-硝基酪氨酸生成、TXNIP表达、活性氧(ROS)生成和丙二醛的产生量均明显降低(P均＜0.05)。rn 结论：高糖可引起培养的乳鼠心肌细胞发生损伤和凋亡，这种损伤与高糖引起的Trx活性和功能下降有关;蛋白的硝基化、TXh1IP的表达上调均可抑制Trx的活性，使其抗自由基和抗凋亡功能减弱，自由基生成增加，p38激酶介导的凋亡途径加强，进而引起心肌细胞损伤和凋亡;GLP-1处理可使高糖引起的TXNIP的表达明显下调，蛋白硝基化减轻，Trx活性得到改善，细胞自由基损伤和凋亡减轻，通过对Trx系统的保护而逆转高糖引起的细胞损伤和凋亡。

摘要： 目的:高原缺氧性疾病是高原地区特殊环境下的一类特殊性疾病,严重危害高原人民生命健康.藏药红景天治疗高原缺氧症疗效确切,藏医古代医典《秘诀真宝》中就有藏药索罗玛宝(大花红景天)治疗"腊毒证"的记载.本文从细胞水平研究红景天5种单体成分(红景天苷、酪醇、没食子酸、德钦红景天苷、草质素-7-O-(3'-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷)对乳鼠心肌缺氧损伤的抗缺氧保护作用,初步揭示其药效物质基础.rn 方法:建立体外乳鼠缺氧缺糖心肌细胞损伤模型,分别测定细胞MTT、LDH和MDA的变化观察红景天5种单体成分对心肌细胞损伤的保护作用.rn 结果：心肌细胞经缺氧缺糖处理后，心肌细胞活力明显下降，镜下观察到正常心肌细胞搏动规律连接成片，而缺糖缺氧4h后细胞部分脱落死亡，细胞搏动减弱且不规律，经红景天苷、酪醇、没食子酸、德钦红景天苷、草质素-7-O-(3'-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷5种成分预处理后，心肌细胞活力均有不同程度的提高，心肌细胞中LDH和MDA的含量明显升高均有不同程度的降低，以此减轻心肌细胞损伤程度，有效保护心肌细胞，其中尤以红景天苷和酪醇2种成分作用最为明显，能显著对抗高原缺氧引起的心肌损伤。rn 结论：红景天抗缺氧疗效确切，红景天中红景天苷、酪醇、没食子酸、德钦红景天苷、草质素-7-O-(3'-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷5种成分均有不同程度的提高心肌细胞活力，降低损伤心肌细胞LDH和MDA的含量，减轻心肌细胞损伤程度，有效保护心肌细胞的作用。

摘要： 目的：通过对C-反应蛋白(CRP)对大鼠心肌细胞的作用，探讨CRP是否对心肌细胞有直接地损伤作用。方法：从受到创伤的大鼠血清中分离、纯化CRP;分离培养的大鼠心肌细胞：分组观察100μg/ml CRP10 ml、缺氧6h、100μg/mlCRP10 ml和缺氧6h对体外培养的大鼠心肌细胞的干预影响。结果：单独缺氧干预6h组、100μg/ml CRP10 ml和缺氧6h共同干预心肌细胞组，均可以使心肌细胞线粒体中色素C外流，且共同干预组心肌细胞线粒体破坏更显著。结论：CRP可以直接破坏心肌细胞，使心肌细胞线粒体中细胞色素C外流，并使其发生凋亡。

摘要： 目的：通过观察体外培养新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放情况以及线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial KATP channel)开放剂二氮嗪干预后对MPTP开放的影响作用,以探讨二氮嗪在心肌细胞缺氧/复氧早期抑制MPTP开放的可能参与机制。方法：分离新生大鼠心肌细胞进行体外培养,给予95％N2+5％CO2气体密闭缺氧法进行缺氧处理1h,继之以5％CO2气体复氧2h干预(为H/R组),观察心肌细胞超微结构变化、细胞凋亡情况,MPTP开放度、线粒体膜电位(△ψm)变化、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成量,细胞内Ca2+量、ATP量,线粒体凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、细胞色素C(cytochrome c,CytC)蛋白量,加用二氮嗪(Diaz)干预后观察是否可通过减轻钙超载以抑制MPTP开放从而减轻心肌缺氧/复氧损伤。抑制MPTP开放从而减轻心肌缺氧/复氧损伤。结果二氮嗪干预组心肌细胞凋亡减少(21.93±3.26% in Diaz vs32.82±3.02% in H/R, p<0.05), MPTP开放度降低(0.96±0.02 in Diaz vs0.72±0.04 in H/R, p<0.O1)，线粒体△Ψm丢失减轻(0.88±0.07 in Diaz vs0.75±0.01 in H/R, p<0.01), ROS生成减少(1.16±0.15 in Diaz vs1.67±0.28 in H/R，p<0.05)、细胞内Ca2+降低(1.29±0.03 in Diaz vs1.79±0.24 in H/R, p<0.O1)、细胞内ATP水平升高(34.58±9.67 in Diaz vs8.47±2.15 in H/R, p<0.01 )，线粒体AIF及CytC蛋白表达减少。结论二氮嗪对缺氧/复氧损伤心肌细胞有保护作用，通过减轻钙内流以抑制MPTP开放，从而减轻心肌线粒体损伤、抑制细胞凋亡、恢复细胞内能量供应，以起到细胞保护作用。

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明涉及产生胚胎干细胞来源的心肌细胞的方法和由所述方法产生的心肌细胞、由心肌细胞产生心肌细胞聚集体的方法和由所述方法产生的心肌细胞聚集体、用于治疗心脏病的包含所述心肌细胞聚集体作为活性成分的细胞治疗产品、使用所述细胞治疗产品治疗心脏病的方法、以及心肌细胞和心肌细胞聚集体用于产生细胞治疗产品的用途。通过使用本发明的产生心肌细胞的方法，可以容易地纯化胚胎干细胞来源的心肌细胞，并且心肌细胞聚集体可以由纯化的心肌细胞产生，因此可用作可以用于治疗心脏病的细胞治疗产品。因此，本发明可以广泛用于开发用于预防或治疗多种心脏病的制剂。

摘要： 本发明公开了一种诱导干细胞往心肌细胞方向分化及心肌细胞传代与纯化的方法及药剂，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控及维持技术领域。该诱导干细胞往心肌细胞方向分化的方法包括：将人多能干细胞置于含烟酰胺的第一培养基中培养，第一培养基为E5培养基。心肌细胞的传代方法包括：将心肌细胞置于含烟酰胺的第二培养基中培养，第二培养基为E6培养基。心肌细胞的纯化方法包括：将传代处理后的心肌细胞置于含烟酰胺的第三培养基中培养，第三培养基为E6培养基。上述方法能够为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生和传代培养提供有效可行的新方法，且效率稳定，费用较低，利于大规模生产。相应的药剂应用前景较广。

摘要： 本发明公开了一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控技术领域，其包括以下步骤：于含有分化第3‑5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂以诱导干细胞向心肌方向分化。该方法的特点是采用氯离子阻断剂来诱导干细胞向心肌方向分化。本申请详细阐述了该方法的具体操作步骤，并对分化的心肌细胞进行了鉴定和功能分析，为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生提供了新思路。

摘要： 本发明涉及细胞片的制造方法，所述方法包含下述工序：在使动物细胞朝培养液的中央方向集中的同时对培养液中分散的动物细胞进行悬浮培养，在所述培养液中形成悬浮的细胞片。

摘要： 公开了用于从多能干细胞产生心肌细胞群体的方法。群体可以对于心房心肌细胞或心室心肌细胞进行富集，并且所得到的心室群体可以基本上不含起搏细胞。该方法包括使在合适的培养基中的多能干细胞与BMP组分和激活素组分一起温育，激活素的量可以改变以富集心房心肌细胞或心室心肌细胞。公开了富集的群体，以及使用其治疗需要心脏修复的患者的方法。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。