小分子干扰RNA

摘要： 目的:探讨肝癌衍生生长因子(HDGF)的小分子干扰RNA(siRNA)对BALB/c小鼠结直肠癌肝转移的影响。方法:选择78只SPF级BALB/c雄性小鼠,应用盲肠造疝原位接种瘤块法建立小鼠结直肠癌肝转移模型。将成功建模的小鼠随机分为3组,即HDGF-siRNA组、NS-siRNA组与生理盐水(NS)组。根据分组情况,分别于肿瘤原位注射HDGF-siRNA、非特异性siRNA(NS-siRNA)及生理盐水,剂量均为0.15 ng/kg,连续治疗30 d。分时间点记录各组小鼠体质量的变化。治疗结束3 d后处死小鼠,肉眼及肝脏切片苏木素-伊红(HE)染色观察各组结直肠癌肝转移情况。结果:治疗5、10、15、20、25和30 d后,HDGF-siRNA组的体质量均明显高于NS-siRNA组与NS组,NS-siRNA组的体质量均明显高于NS组(P0.05)。结论:HDGF-siRNA可靶向抑制HDGF,从而降低小鼠结直肠癌肝转移的发生,HDGF在结直肠癌肝转移中可能起了重要作用。

摘要： 为探讨单纯疱疹病毒-2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27、UL54基因的重组表达载体shRNA(small hairpin RNA,shRNA)联合干扰对HSV-2复制的影响,将重组质粒表达载体转染HEK293细胞,利用流式细胞术检测重组质粒转染HEK293的效率,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测UL27、UL54基因及其蛋白的表达情况.此外,采用TICD50(50％tissue culture infective dose,TCID50)法和噻唑蓝(methyl thiazolyl terazolium,MTT)比色法检测病毒的滴度变化和HEK293细胞的存活率.结果检测显示:UL27 shRNA75+UL54shRNA1081联合干扰组的UL27、UL54基因mRNA的表达抑制率分别为(88.10±1.95)％和(85.53±2.28)％,gB蛋白、ICP27蛋白表达及子代病毒滴度均明显降低,HEK293细胞的存活率为(97.30±2.91)％,与单干扰组比较差异均有统计学意义(P<0.05).说明UL27shRNA75和UL54 shRNA1081这两个靶点联合干扰能显著抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为今后的HSV-2多基因的治疗提供研究基础.

摘要： 磷酸钙纳米粒(CaPNPs)作为基因载体具有良好的生物相容性;然而,CaPNPs通常表现出较低的转染效率。细胞穿透肽(TAT)可以增加纳米颗粒的摄取,但由于其非特异性而受到限制。纳米载体表面接枝细胞黏附肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸,RGD)可增强其靶向性。Plekho1基因编码酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(CKIP-1)可负调控成骨分化。在此基础上,本研究通过水热合成法、硅烷化法和吸附法制备了Mg-CaPNPs-RGD-TAT-CKIP-1 siRNA载体系统。通过体外细胞培养,评价了该载体系统对细胞胞吞及生物学效应的影响。结果表明,掺镁7%的CaPNPs(粒径60 nm,短棒形,分散性好)适合作为基因载体。载体系统促进了MG63细胞的内吞作用,有利于促进成骨细胞的分化,且双配体系统具有协同作用。结果表明,Mg-CaPNPs-RGD-TAT-CKIP-1 siRNA载体系统在高效转运进入细胞和诱导成骨方面具有巨大的潜力。

摘要： 本研究旨在构建一种智能型荧光纳米载体用于肿瘤细胞的示踪,同时通过物理吸附和静电吸附作用,完成模型药物多柔比星(DOX)和小分子干扰RNA (siBcl-2)的负载,实现对肿瘤细胞的协同抑制.本文采用溶胶凝胶法制备介孔硅纳米粒(MSN),共价修饰乙醛化胱氨酸(AC)及聚乙烯亚胺(PEI),所制备的纳米载体MSN-AC-PEI分散均匀,粒径为235.53 nm,电位为14.63 mV;载体材料对siRNA负载比例可达到60:l(质量比),且载体材料可保护siRNA不受RNA酶降解;为模拟肿瘤微环境,DOX在pH 5、10 mmol·L-1谷胱甘肽(GSH)中的释放行为被研究,结果证明,DOX在120h的累积释放率为正常生理环境的35倍,为其在肿瘤细胞内的智能释放奠定了基础.细胞实验结果表明:MSN-AC-PEI载体材料具有显著的绿色荧光,被肿瘤细胞(MCF-7)摄取后,24 h仍具有示踪能力.纳米递药系统MSN-AC-PEI@DOX/siBcl-2给药24 h后,对肿瘤细胞增殖抑制率可达到40.91％,晚期凋亡率为60.84％.Western blot实验结果表明:与单独DOX及siBcl-2相比,纳米递药系统能显著降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而提升其抗肿瘤能力.

摘要： Objective To investigate the effects of siRNA interference with chromosomal space recombination factor 1 (Rsf-1/HBXAP) on the chemosensitivity of cervical adenocarcinoma cells, and provide experimental evidence for gene-targeted therapy of cervical adeno-carcinoma. Methods Human cervical adenocarcinoma HeLa cells were transfected with Rsf-1/HBXAP-specific small interfering RNA (siRNA). The Rsf-1/HBXAP mRNA expression in HeLa cells was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR). The proliferation of HeLa cells was detected by CCK-8 assay. The clone formation of HeLa cells was detected by plate cloning assay. The apoptosis of HeLa cells was detected by flow cytometry. Results Rsf-1/HBXAP-specific siRNA-1 significantly inhibited the expression of the Rsf-1/HBXAP gene. The IC50 of paclitaxel against siRNA-1 in the Rsf-1/HBXAP and non-interfering groups was 7.24 nM [95% CI:(3.14, 18.60)] and 3.66 nM [95% CI: (1.65, 7.86)], respectively. Plate cloning experiments showed that siRNA-1 interference with Rsf-1/HBXAP gene improved the radiosensitivity. Flow cytometry results showed that siRNA-1 interference with Rsf-1/HBXAP gene accelerated the apoptosis of HeLa cells. Conclusion The down-regulation of Rsf-1/HBXAP gene expression may increase the sensitivity of cervical ad-enocarcinoma cells to chemoradiotherapy. It may become a potential target for the treatment of cervical adenocarcinoma.%目的 探讨siRNA干扰染色体空间重组因子1(Rsf-1/HBXAP)对宫颈腺癌细胞放化疗敏感性的影响,为宫颈腺癌的基因靶向治疗提供实验依据.方法 采用Rsf-1/HBXAP特异性的小分子干扰RNA(siRNA)转染人宫颈腺癌HeLa细胞,通过荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HeLa细胞Rsf-1/HBXAP mRNA的表达,CCK-8实验检测HeLa细胞增殖情况,平板克隆实验检测HeLa细胞克隆形成情况,流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡情况.结果 Rsf-1/HBXAP特异性的siRNA-1可显著抑制Rsf-1/HBXAP基因的表达.紫杉醇对siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP组与非干扰组的IC50分别为7.24 nM [95% CI: (3.14, 18.60)]和3.66 nM [95% CI: (1.65, 7.86)].平板克隆实验结果表明siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP基因可提高放疗敏感性.流式细胞术结果显示siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP基因可促进HeLa细胞凋亡.结论 Rsf-1/HBXAP基因表达下调可增强宫颈腺癌细胞对放化疗的敏感性,可能成为宫颈腺癌治疗的潜在靶点.

摘要： 目的:探讨Yes相关蛋白1(YAP1)在结直肠癌组织中的表达,以及沉默YAP1基因对结直肠癌SW620细胞增殖和侵袭的影响.方法:选取2015年5月—2017年5月行手术治疗的结直肠癌患者108例,免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中YAP1蛋白表达,培养SW620细胞并分为siR-NA-YAP1组、siRNA-对照组和空白组,分别转染YAP1干扰物、阴性对照序列和不作任何处理.实时荧光定量PCR技术检测细胞中YAP1表达,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖力,Transwel法检测细胞侵袭力.结果:YAP1蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率为74.07％,高于癌旁组织的21.30％,差异有统计学意义(χ2=60.296,P<0.001);YAP1蛋白阳性表达率在不同TNM分期和是否发生淋巴结转移的结直肠癌组织中差异有统计学意义(P<0.05);siRNA-YAP1组细胞中YAP1 mRNA相对表达量低于siRNA-对照组和空白组(P<0.05);siRNA-YAP1组细胞吸光度值(24、48、72和96 h时)及细胞克隆形成数均低于siRNA-对照组和空白组(P<0.05);siRNA-YAP1组侵袭细胞数少于siRNA-对照组和空白组(P<0.05).结论:YAP1蛋白在结直肠癌组织中呈高表达,且与肿瘤发生及恶性进展有关,沉默结直肠癌SW620细胞中YAP1基因表达可明显减少细胞增殖,抑制细胞侵袭力.

摘要： 目的 探讨小分子干扰RNA (siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80％～90％时进行转染.将Hela细胞随机分为空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组,空白对照组Hela细胞不作处理,control siRNA组Hela细胞转染control siRNA,EZH2 siRNA组Hela细胞转染EZH2 siRNA.收集3组转染后Hela细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Hela细胞中EZH2 mRNA表达,Western blot法检测Hela细胞中EZH2蛋白表达,流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期.收集3组转染后Hela细胞,分别加入不同质量浓度(0.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 g·L-1)的顺铂,48 h后采用四甲基偶氮唑蓝法检测Hela细胞在顺铂作用下的体外存活率.结果 Control siRNA和EZH2 siRNA可高效转染Hela细胞,转染率均达90％以上.空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量分别为396.7±88.4、389.2±70.6和98.5±20.3,EZH2siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.057、2.015,P＜0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.476,P＞0.05).空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量分别为509.4±110.7、497.5±80.4和120.4±31.3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.682、2.597,P＜0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.943,P＞0.05).EZH2 siRNA组G0/G1期细胞比例显著高于空白对照组和control siRNA组(t=2.893、3.087,P＜0.05),EZH2 siRNA组S期、G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和control siRNA组(EZH2 siRNA组与空白对照组比较:t=2.526、5.462,P＜0.05;EZH2 siRNA组与control siRNA组比较:t=2.498、5.417,P＜0.05),空白对照组与control siRNA组Go/G1期、S期及G2/M期细胞比例比较差异均无统计学意义(t=0.926、1.017、0.947,P＞0.05).不同质量浓度顺铂作用48 h后,同一质量浓度下EZH2 siRNA组Hela细胞的存活率明显低于空白对照组及control siRNA组(P＜0.05),且随着顺铂浓度的增加,3组Hela细胞的存活率均呈逐渐下降趋势.结论 沉默EZH2表达可提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,而阻滞细胞周期可能是其主要作用机制之一.

摘要： Objective:To observe apoptosis of human breast cancer Bcap37 cells by siRNA of β-arrestin2 in vitro.Methods:The vector PGPU6/GFP/Neo cloned β-arrestin2 small interfering RNA(siRNA)was transformed in-to human breast cancer Bcap37 cells.The transfected PGPU6/GFP/NC was used as a negative control and the non-transfected vector served as a blank control.The expression of β-arrestin2 gene was monitored by Western blot.Cell apoptosis was examined by Flow cytometry.Results:Our study showed that β-arrestin2-siRNA efficiently downreg-ulated the expression of β-arrestin2 in β-arrestin2-siRNA group compared with the negative and blank control(P<0.05).Bcap37 cells in low expression of β-arrestin2 caused by siRNA represented an upward trend of apoptosis, but not in the negative and blank controls.Conclusion:Our results suggested that β-arrestin2-siRNA can effective-ly inhibit the expression of β-arrestin2,promote the apoptosis of human breast cancer Bcap37 cells.These results demonstrate that suppression of β-arrestin2 activity by siRNA may be an effective strategy for gene therapy in human breast cancers.%目的:通过体外实验观察β-arrestin2的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响.方法:针对β-arrestin2基因设计siRNA序列,克隆到空载体PGPU6/GFP/Neo,转化DH5α菌株,提取质粒,进行测序分析.在脂质体lipofectamineTM2000的介导下转染Bcap37细胞,同时转染空白对照组及阴性对照组.转染后用定量Western blot检测Bcap37细胞β-arrestin2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测Bcap37细胞的凋亡情况.结果:我们的研究表明,β-arrestin2的siRNA能有效下调β-arrestin2的表达,与对照组相比,β-arrestin2干扰组 β-arrestin2的表达明显下降(P <0.05);β -arrestin2干扰组Bcap37细胞凋亡率显著高于对照组.结论:β-arrestin2干扰组能有效降低β-arrestin2的表达,有效促进Bcap37细胞凋亡;β-arrestin2可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.

摘要： 目的：观察真核表达载体介导siRNA对小鼠移植心脏的免疫保护作用. 方法：在C57/BL6J→Balb/C组合(主要组织相容性复合体不合,MHC不合),DBA/2→Balb/C组合(次要组织相容性复合体不合,mHC不合)中分别于小鼠心脏移植术后第1天,第4天胸腺注射生理盐水,pRNAT-CTL阴性对照载体和pRNAT-OX40siRNA,观察移植心脏存活情况.术后第7天取移植心脏行病理学检查,取血清检测心肌酶谱,取脾脏行RT-PCR和Western Blot检测OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达. 结果：在C57/BL6J→Balb/C组合中(MHC不合),pRNAT-OX40siRNA组移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组无明显延长,移植心脏病理学检查无明显改善.而在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合),pRNAT-OX40siRNA组小鼠移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组显著延长,病理改变显著减轻,乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌钙蛋白(Tn)以及脾脏OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达与空白对照组和阴性对照组相比明显下降. 结论：在DBA/2-Balb/C组合中(mHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏有保护作用.在C57/BL6J→Balb/C的组合中(MHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路未发现对移植心脏的保护作用.

摘要： 目的：观察真核表达载体介导siRNA对小鼠移植心脏的免疫保护作用. 方法：在C57/BL6J→Balb/C组合(主要组织相容性复合体不合,MHC不合),DBA/2→Balb/C组合(次要组织相容性复合体不合,mHC不合)中分别于小鼠心脏移植术后第1天,第4天胸腺注射生理盐水,pRNAT-CTL阴性对照载体和pRNAT-OX40siRNA,观察移植心脏存活情况.术后第7天取移植心脏行病理学检查,取血清检测心肌酶谱,取脾脏行RT-PCR和Western Blot检测OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达. 结果：在C57/BL6J→Balb/C组合中(MHC不合),pRNAT-OX40siRNA组移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组无明显延长,移植心脏病理学检查无明显改善.而在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合),pRNAT-OX40siRNA组小鼠移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组显著延长,病理改变显著减轻,乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌钙蛋白(Tn)以及脾脏OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达与空白对照组和阴性对照组相比明显下降. 结论：在DBA/2-Balb/C组合中(mHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏有保护作用.在C57/BL6J→Balb/C的组合中(MHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路未发现对移植心脏的保护作用.

摘要： 目的：观察真核表达载体介导siRNA对小鼠移植心脏的免疫保护作用. 方法：在C57/BL6J→Balb/C组合(主要组织相容性复合体不合,MHC不合),DBA/2→Balb/C组合(次要组织相容性复合体不合,mHC不合)中分别于小鼠心脏移植术后第1天,第4天胸腺注射生理盐水,pRNAT-CTL阴性对照载体和pRNAT-OX40siRNA,观察移植心脏存活情况.术后第7天取移植心脏行病理学检查,取血清检测心肌酶谱,取脾脏行RT-PCR和Western Blot检测OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达. 结果：在C57/BL6J→Balb/C组合中(MHC不合),pRNAT-OX40siRNA组移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组无明显延长,移植心脏病理学检查无明显改善.而在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合),pRNAT-OX40siRNA组小鼠移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组显著延长,病理改变显著减轻,乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌钙蛋白(Tn)以及脾脏OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达与空白对照组和阴性对照组相比明显下降. 结论：在DBA/2-Balb/C组合中(mHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏有保护作用.在C57/BL6J→Balb/C的组合中(MHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路未发现对移植心脏的保护作用.

摘要： 目的：观察真核表达载体介导siRNA对小鼠移植心脏的免疫保护作用. 方法：在C57/BL6J→Balb/C组合(主要组织相容性复合体不合,MHC不合),DBA/2→Balb/C组合(次要组织相容性复合体不合,mHC不合)中分别于小鼠心脏移植术后第1天,第4天胸腺注射生理盐水,pRNAT-CTL阴性对照载体和pRNAT-OX40siRNA,观察移植心脏存活情况.术后第7天取移植心脏行病理学检查,取血清检测心肌酶谱,取脾脏行RT-PCR和Western Blot检测OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达. 结果：在C57/BL6J→Balb/C组合中(MHC不合),pRNAT-OX40siRNA组移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组无明显延长,移植心脏病理学检查无明显改善.而在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合),pRNAT-OX40siRNA组小鼠移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组显著延长,病理改变显著减轻,乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌钙蛋白(Tn)以及脾脏OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达与空白对照组和阴性对照组相比明显下降. 结论：在DBA/2-Balb/C组合中(mHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏有保护作用.在C57/BL6J→Balb/C的组合中(MHC不合),单独阻断OX40/OX40L通路未发现对移植心脏的保护作用.

摘要： 探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响.siNotch 1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后，可以降低其分泌TGF-β的含量，从而降低其对淋巴细胞的抑制作用，增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润，促进IFN-γ的分泌，降低Treg细胞的比例，增强机体抗肿瘤免疫功能。

摘要： 探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响.siNotch 1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后，可以降低其分泌TGF-β的含量，从而降低其对淋巴细胞的抑制作用，增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润，促进IFN-γ的分泌，降低Treg细胞的比例，增强机体抗肿瘤免疫功能。

摘要： 探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响.siNotch 1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后，可以降低其分泌TGF-β的含量，从而降低其对淋巴细胞的抑制作用，增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润，促进IFN-γ的分泌，降低Treg细胞的比例，增强机体抗肿瘤免疫功能。

摘要： 探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响.siNotch 1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后，可以降低其分泌TGF-β的含量，从而降低其对淋巴细胞的抑制作用，增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润，促进IFN-γ的分泌，降低Treg细胞的比例，增强机体抗肿瘤免疫功能。

摘要： 目的：探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的小分子干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β,IL-1β)的抑制作用.rn 方法：合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告因子,荧光显微镜和流式细胞仪下观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率.以pLKO1.1为载体构建针对TREM-1的pLKO1.1-TREM1-shRNA干扰质粒.将小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为4组:空白组(Control);内毒素组(LPS组);空质粒组(pLKO1.1组):采用脂质体法将pLKO 1.1转染细胞;干扰组(siRNA组):将pLKO 1.1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM-1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α.、IL-1β含量.rn 结果：与LPS组比较,siRNA组中TREM-1、TNF-α、IL-1β的mRNA显著下降(P＜0.05),上清液中TNF-α、IL-1β 含量明显降低(P＜0.05).rn 结论：小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264.7中TNF-α、IL-1β 的分泌.

摘要： 目的：探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的小分子干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β,IL-1β)的抑制作用.rn 方法：合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告因子,荧光显微镜和流式细胞仪下观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率.以pLKO1.1为载体构建针对TREM-1的pLKO1.1-TREM1-shRNA干扰质粒.将小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为4组:空白组(Control);内毒素组(LPS组);空质粒组(pLKO1.1组):采用脂质体法将pLKO 1.1转染细胞;干扰组(siRNA组):将pLKO 1.1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM-1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α.、IL-1β含量.rn 结果：与LPS组比较,siRNA组中TREM-1、TNF-α、IL-1β的mRNA显著下降(P＜0.05),上清液中TNF-α、IL-1β 含量明显降低(P＜0.05).rn 结论：小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264.7中TNF-α、IL-1β 的分泌.

摘要： 本发明提供了一种用于敲低CD317的小分子干扰RNA、shRNA、shRNA的编码DNA、重组载体和宿主细胞及其应用，所述小分子干扰RNA具有与CD317的信使RNA互补的核苷酸序列，长度为19～27bp。本发明提供了一种靶向CD317的促进肿瘤细胞凋亡的新方法，主要涉及一种高效沉默人CD317基因的小干扰RNA序列及其抗肿瘤应用，特别涉及CD317siRNA与抗肿瘤血管生成药物或放、化疗等能造成肿瘤细胞营养剥夺的治疗策略的联合应用。

摘要： 本发明公开了一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰TGM2基因的小分子RNA及其制备方法及其应用。该干扰TGM2基因的小分子RNA为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明设计对胶质瘤增殖有促进作用的干扰TGM2基因的小分子RNA，应用胶质瘤细胞(U373细胞)模型研究其对胶质瘤增殖的抑制作用，为胶质瘤的基因治疗提供了一种新分子药物。

摘要： 本发明公开了一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰MCM7基因的小分子RNA及其应用。该干扰MCM7基因的小分子RNA为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明设计对胶质瘤增殖有促进作用的干扰MCM7基因的小分子RNA，应用胶质瘤细胞(U373细胞)模型研究其对胶质瘤增殖的抑制作用，为胶质瘤的基因治疗提供了一种新分子药物。

摘要： 本发明提供了一种用于敲低Syntaxin7的小分子干扰RNA、shRNA、shRNA的编码DNA、重组载体、重组慢病毒和宿主细胞及其应用，所述小分子干扰RNA具有与翻译突触融合蛋白Syntaxin7的信使RNA互补的核苷酸序列，长度为19～27bp。本发明提供的重组慢病毒载体能在宿主细胞内转录得到Syntaxin7‑shRNA；本发明提供的Syntaxin7‑shRNA经过宿主细胞加工后可生成能沉默Syntaxin7表达的小分子干扰RNA；本发明提供的小分子干扰RNA能靶向突触融合蛋白Syntaxin7的mRNA，并导致所述mRNA降解，并导致基因沉默效应，降低Syntaxin7的表达水平。

摘要： 本发明提供了一种用于敲低VPS11的小分子干扰RNA、shRNA、shRNA的编码DNA、重组载体、重组慢病毒和宿主细胞及其应用，所述小分子干扰RNA具有与翻译突触融合蛋白VPS11的信使RNA互补的核苷酸序列，长度为19～27bp。本发明提供的重组慢病毒载体能在宿主细胞内稳定、长期地转录得到VPS11‑shRNA；本发明提供的VPS11‑shRNA经过宿主细胞加工后可生成能沉默VPS11表达的小分子干扰RNA；本发明提供的小分子干扰RNA能靶向突触融合蛋白VPS11的mRNA，并导致所述mRNA降解，并导致基因沉默效应，降低VPS11的表达水平。

摘要： 本发明公开了一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA、其制备方法及其应用。该小分子干扰RNA为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明设计对抑制胶质瘤增殖并促其凋亡有作用的基因的小分子干扰RNA，应用胶质瘤细胞模型研究其对胶质瘤增殖的抑制作用和其对胶质瘤凋亡的促进作用，为胶质瘤的基因治疗提供了一种新方法。

摘要： 本发明公开了一种减少中性粒细胞抗菌肽产量的小分子干扰RNA，其特征在于：使双链RNA会形成很多小片段，称为小片段抑制RNA(siRNA)，siRNA与信使RNA(mRNA)的同源序列互补结合，使mRNA降解成小片段RNA，从而导致mRNA失去功能，不能被翻译成蛋白质；其制作步骤如下：(1)设计siRNA，5′-AGGCACUGCUCUCCAAGAU-3；(2)应用化学合成法体外制备siRNA小片段；(3)将siRNA小片段保存于含有RNA稳定剂的溶液中。本发明的优点是可以有效地减少中性粒细胞产生HNP，有效降低同源互补HNP蛋白，可以治疗细菌感染引起的败血症和其他各类疾病。

摘要： 本发明提供了一种用于敲低CD317的小分子干扰RNA、shRNA、shRNA的编码DNA、重组载体和宿主细胞及其应用，所述小分子干扰RNA具有与CD317的信使RNA互补的核苷酸序列，长度为19～27bp。本发明提供了一种靶向CD317的促进肿瘤细胞凋亡的新方法，主要涉及一种高效沉默人CD317基因的小干扰RNA序列及其抗肿瘤应用，特别涉及CD317siRNA与抗肿瘤血管生成药物或放、化疗等能造成肿瘤细胞营养剥夺的治疗策略的联合应用。

摘要： 本发明公开了一种干扰体内小分子RNA的蒙药复方制剂，包括以下重量分的原料药制备而成：草乌叶1‑5份、黑云香10‑15份、诃子5‑10份、磨香3‑7份、茜草4‑8份、多叶棘豆10‑15份、天南星2‑4份、苦参2‑4份、银珠0.5‑1份，安息香2‑6份，三颗针1‑4份。本发明能有效能有效抑制端粒酶的活性表达，对干扰体内小分子RNA起到显著作用。

摘要： 本发明涉及小分子RNA干扰端粒酶逆转录酶质粒抑制视网膜、脉络膜新生血管新制剂，主要用于医学领域中，眼科视网膜、脉络膜新生血管的防控与治疗。目前，视网膜新生血管生物药物治疗主要是抗VEGF靶分子治疗，作用时间较短，易复发。因此，有必要从分子和基因水平探寻其它潜在的治疗靶目标，寻找更有效方法治疗和预防视网膜新生血管的发生。1.本发明以端粒酶逆转录酶(TERT)为靶点，以小分子RNA（siRNA）干扰为基础，通过TERT干扰性RNA视网膜、脉络膜新生血管中TERT蛋白质的表达下调，降低视网膜、脉络膜新生血管内皮细胞的端粒酶活性并抑制视网膜、脉络膜新生血管内皮细胞的增殖。2.siRNA 的设计和质粒的构建。根据基因库中TERT基因的mRNA序列设计siRNA作用靶点，化学合成。