血友病B

摘要： 目的:探讨血友病性关节炎与骨质疏松症的关系。方法:回顾性分析2019年12月至2020年12月收治的40例男性血友病性关节炎患者(血友病性关节炎组)和60例门诊健康体检男性(健康体检组)的病例资料。比较2组受试者的血清骨代谢指标及血液生化指标,前者包括25-羟基维生素D、甲状旁腺激素、总Ⅰ型胶原氨基端前肽(total N-terminal propeptide of type Ⅰ collagen,TPⅠNP)、骨钙素、降钙素、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-C-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,β-CTX),后者包括钙、磷、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、超敏C反应蛋白(supersensitive C-reaction protein,SCRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR);比较2组受试者的左侧股骨颈和腰椎(L_(1)~L_(4))骨密度T值。根据血友病的病情程度将40例血友病性关节炎患者分为轻度、中度、重度3组,比较3组患者的左侧股骨颈和腰椎(L_(1)~L_(4))骨密度T值。结果:①血清骨代谢指标。血友病性关节炎组的血清TPⅠNP、骨钙素、β-CTX含量均高于健康体检组[(76.8±31.1)ng·mL^(-1),(56.9±16.4)ng·mL^(-1),t=-3.391,P=0.001;(19.8±6.1)ng·mL^(-1),(16.0±4.5)ng·mL^(-1),t=-3.944,P=0.001;(780.6±336.1)pg·mL^(-1),(528.9±174.4)pg·mL^(-1),t=-4.489,P=0.001]。2组受试者血清25-羟基维生素D、甲状旁腺激素、降钙素含量比较,组间差异均无统计学意义[(20.7±10.3)ng·mL^(-1),(19.2±8.4)ng·mL^(-1),t=0.814,P=0.418;(39.1±18.0)pg·mL^(-1),(40.2±12.3)pg·mL^(-1),t=-1.175,P=0.240;(2.5±2.8)pg·mL^(-1),(2.9±2.4)pg·mL^(-1),t=-1.468,P=0.142]。②血液生化指标。血友病性关节炎组的血清钙含量低于健康体检组[(2.28±0.12)mmol·L^(-1),(2.33±0.11)mmol·L^(-1),t=-2.089,P=0.039],血清SCRP含量高于健康体检组[(7.99±12.85)mg·L^(-1),(3.42±4.51)mg·L^(-1),t=-2.232,P=0.026]。2组受试者血清磷含量、血清ALP含量、ESR比较,组间差异均无统计学意义[(1.21±0.19)mmol·L^(-1),(1.23±0.22)mmol·L^(-1),t=-0.631,P=0.529;(74.78±12.52)单位·L^(-1),(76.40±16.30)单位·L^(-1),t=-0.493,P=0.622;(5.13±6.77)mm·h^(-1),(5.47±13.87)mm·h^(-1),t=-1.660,P=0.097]。③骨密度T值。血友病性关节炎组的股骨颈骨密度T值低于健康体检组(-1.18±1.17,0.48±1.21,t=-5.814,P=0.001),2组受试者腰椎骨密度T值比较,差异无统计学意义(0.04±1.25,0.17±0.93,t=-1.577,P=0.115)。40例血友病性关节炎患者按照血友病的病情程度分为3组,其中轻度组10例、中度组16例、重度组14例。3组患者股骨颈骨密度T值比较,差异无统计学意义(-1.09±1.22,-0.87±1.31,-1.78±0.85,F=2.424,P=0.103)。3组患者腰椎骨密度T值总体比较,差异有统计学意义(0.01±1.23,0.41±1.44,-0.73±0.81,F=3.277,P=0.049);进一步两两比较发现,中度组的腰椎骨密度T值大于重度组(P=0.015),轻度组的腰椎骨密度T值与中度组和重度组比较差异无统计学意义(P=0.700,P=0.138)。结论:血友病性关节炎可能继发骨质疏松症,但血友病病情程度与骨质疏松程度无明确关系。

摘要： 血友病是一种遗传性凝血功能异常的出血性疾病,根据患者缺乏凝血因子的类型,可以分为血友病A(血友病甲)、血友病B(血友病乙)。患者多为男性,女性发病较罕见,多为血友病基因携带者。

摘要： 血友病是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病,可分为凝血因子Ⅷ(FⅧ)缺乏的血友病A和凝血因子Ⅸ(FⅨ)缺乏的血友病B两种。同为血友病,虽然血友病A和血友病B的遗传方式和出血表现类似,治疗上也有很多共性,但血友病B的治疗并不能完全照搬血友病A。为此在2020年组建了一个国际作者团,使用改良的Delphi方法制定一套血友病B管理的共识建议。鉴于共识中某些临床场景或者实验室检查可及性在国内有所不同,我们对该共识建议结合国情进行解读。

摘要： 血友病是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病,其发病原因为凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因(F 8)或凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因(F9)缺陷而导致FⅧ或FⅨ缺乏[1],分为血友病A(hemophilia A,HA)和血友病B(hemophilia B,HB)两种。HB和HA的临床表现基本相同,主要表现为关节出血(70%~80%)、肌肉出血(10%~20%)、其他部位(深部组织、胃肠道、泌尿道)出血(5%~10%)及中枢神经系统出血(<5%)等[2],并发症多为可导致严重关节畸形的慢性出血性关节病变、假瘤形成等[1,3]。

摘要： 本文报告1例表现为左上肢肿胀、淤青、凝血因子Ⅸ活性低下的新生儿.有血友病B家族史.患儿全外显子组高通量测序提示F9基因1-6号外显子缺失,患儿母亲F9基因一代测序未见变异,诊断新生儿重型血友病B.对高度怀疑基因异常的患儿应选择适宜的检测技术和策略.

摘要： 目的 了解及分析重庆地区血友病患者的现状,为更针对性开展血友病防治工作提供依据.方法 选取2017年1月至2019年12月该院康复医学科进行血友病评估调查的123例患者的相关资料,调查内容包括患者基本情况、治疗情况、血友病关节健康评分等.结果 123例患者中血友病A型92例(74.8％),血友病B型31例(25.2％);未成年人58例,成年人65例;均为男性;患者年龄2～67岁,未成年患者平均年龄(10.9±4.1)岁,90.0％的患者累及关节,48.3％的患者存在步态问题,58.3％的患者从未接受过治疗;成年患者平均年龄(32.1±11.7)岁,95.6％的患者累及关节,72.3％的患者存在步态问题,68.6％的患者从未接受过治疗.关节受损程度与年龄相关(r=0.541,P<0.05).结论 重庆地区血友患者关节累及率较高,诊治水平需进一步提高,推行血友病诊治十分迫切.

摘要： 本文报告1例表现为左上肢肿胀、淤青、凝血因子Ⅸ活性低下的新生儿。有血友病B家族史。患儿全外显子组高通量测序提示F9基因1-6号外显子缺失,患儿母亲F9基因一代测序未见变异,诊断新生儿重型血友病B。对高度怀疑基因异常的患儿应选择适宜的检测技术和策略。

摘要： 目的 用Ion Torrent半导体测序技术对11个血友病B(HB)家系的F9基因进行序列分析,寻找致病突变,并为遗传咨询和产前诊断提供依据.方法 采集11个HB家系先证者及女性成员的外周血样本,抽提基因组DNA,利用Ion Torrent半导体测序技术检测F9基因致病突变,对发现的致病突变进行Sanger测序验证.进一步对7例高危家系孕妇进行羊膜腔穿刺,采集胎儿羊水样本,并进行产前诊断.结果 13例HB患者均存在F9基因致病性突变,共发现10种突变,其中1种为新的突变类型.对8例胎儿进行产前诊断,其中1例为半合子突变,2例为杂合突变,5例不携带母源致病突变.结论 用Ion Torrent半导体测序技术检测F9基因的突变谱,对于HB家系携带者的产前诊断具有一定的临床意义.

摘要： 目的 探讨全膝关节置换术在重度血友病性膝关节炎的临床治疗效果.方法 选取2013年10月至2019年12月间深圳市第二人民医院骨关节科收治的血友病性膝关节炎并行全膝关节置换术的病例6例(6膝),患者均为男性.对其膝关节活动度、畸形程度及功能评分等数据用t检验分析.结果 所有患者治疗过程顺利,未出现关节脱位、松动、感染、骨折等并发症,膝关节的屈曲或外翻畸形予以纠正.经过平均(48±21)个月随访,膝关节活动度由术前的为(34±29)°提高到术后的(96±18)°(t=-8.357,P<0.001);膝关节外翻畸形程度由术前的(14.3±3.4)°降低到术后的(3.7±2.2)°(t=7.854,P<0.001);膝关节HSS评分也由术前的(34±13)分提高到术后的(89±6)分(t=-9.294,P<0.001).结论 全膝关节置换术应用于血友病性关节炎可明显增加膝关节活动度,改善膝关节功能,矫正膝关节畸形,提高患者的生活质量,是治疗膝关节疾患的有效方法.

摘要： 血友病是一组X连锁隐性遗传性出血性疾病.以自发性出血或者轻微外伤后过度出血为主要临床表现,其中关节出血最常见.反复的关节出血可引起退行性关节病,因此早期进行关节评估极为重要.目前,凝血因子替代治疗仍是血友病的首选治疗,但是患者经反复多次替代治疗后,可产生相应的凝血因子抑制物,影响疗效.多项针对血友病的新治疗方案已取得显著进展,但其安全性仍待进一步研究.笔者拟就血友病多种关节评估及治疗方法进行综述,分析其优、缺点,以期为血友病患者选择合适的诊疗方案提供参考.

摘要： 目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.

摘要： 目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.

摘要： 目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.

摘要： 目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.

摘要： 目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.

摘要： 血友病B为凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)基因突变或缺失导致的FⅨ蛋白功能异常或缺失引发的凝血功能障碍.传统上,血友病小鼠的模型构建采用同源重组的方法,该方法虽能大片段地造成基因缺失,抑制FⅨ活性,但其耗时长,筛选纯合小鼠难度高.CRISPR为RNA介导的靶向基因编辑系统,向导RNA(guideRNA,gRNA)可以通过与靶标DNA序列结合,形成三链结构,诱导核酸内切酶Cas9对DNA进行双链切割,造成目标基因的突变.本文利用CRISPR系统,在FⅨ基因第八外显子核心功能区设计靶标,通过体外转录cas9酶及gRNA并显微注射小鼠一细胞期受精卵进行FⅨ定点的基因编辑.取出生后三周龄小鼠尾尖0.5cm抽提DNA,采用HRM(高分辨率溶解曲线)辅以Sanger测序法检测出生小鼠FⅨ基因突变情况.通过检测FⅨ蛋白表达量、激活的部分凝血活酶时间(APTT)及促凝活性(FⅨ:C)进行突变小鼠表型鉴定.纯合突变小鼠中，有两对雌雄个体具有相同的基因突变，可以直接交配得到纯合突变的子代小鼠，即显微注射两代内可获得血友病B突变纯合小鼠，构建纯和突变小鼠高效、快速。

摘要： 血友病B为凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)基因突变或缺失导致的FⅨ蛋白功能异常或缺失引发的凝血功能障碍.传统上,血友病小鼠的模型构建采用同源重组的方法,该方法虽能大片段地造成基因缺失,抑制FⅨ活性,但其耗时长,筛选纯合小鼠难度高.CRISPR为RNA介导的靶向基因编辑系统,向导RNA(guideRNA,gRNA)可以通过与靶标DNA序列结合,形成三链结构,诱导核酸内切酶Cas9对DNA进行双链切割,造成目标基因的突变.本文利用CRISPR系统,在FⅨ基因第八外显子核心功能区设计靶标,通过体外转录cas9酶及gRNA并显微注射小鼠一细胞期受精卵进行FⅨ定点的基因编辑.取出生后三周龄小鼠尾尖0.5cm抽提DNA,采用HRM(高分辨率溶解曲线)辅以Sanger测序法检测出生小鼠FⅨ基因突变情况.通过检测FⅨ蛋白表达量、激活的部分凝血活酶时间(APTT)及促凝活性(FⅨ:C)进行突变小鼠表型鉴定.纯合突变小鼠中，有两对雌雄个体具有相同的基因突变，可以直接交配得到纯合突变的子代小鼠，即显微注射两代内可获得血友病B突变纯合小鼠，构建纯和突变小鼠高效、快速。

摘要： 血友病B为凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)基因突变或缺失导致的FⅨ蛋白功能异常或缺失引发的凝血功能障碍.传统上,血友病小鼠的模型构建采用同源重组的方法,该方法虽能大片段地造成基因缺失,抑制FⅨ活性,但其耗时长,筛选纯合小鼠难度高.CRISPR为RNA介导的靶向基因编辑系统,向导RNA(guideRNA,gRNA)可以通过与靶标DNA序列结合,形成三链结构,诱导核酸内切酶Cas9对DNA进行双链切割,造成目标基因的突变.本文利用CRISPR系统,在FⅨ基因第八外显子核心功能区设计靶标,通过体外转录cas9酶及gRNA并显微注射小鼠一细胞期受精卵进行FⅨ定点的基因编辑.取出生后三周龄小鼠尾尖0.5cm抽提DNA,采用HRM(高分辨率溶解曲线)辅以Sanger测序法检测出生小鼠FⅨ基因突变情况.通过检测FⅨ蛋白表达量、激活的部分凝血活酶时间(APTT)及促凝活性(FⅨ:C)进行突变小鼠表型鉴定.纯合突变小鼠中，有两对雌雄个体具有相同的基因突变，可以直接交配得到纯合突变的子代小鼠，即显微注射两代内可获得血友病B突变纯合小鼠，构建纯和突变小鼠高效、快速。

摘要： 血友病B为凝血因子Ⅸ(FactorⅨ,FⅨ)基因突变或缺失导致的FⅨ蛋白功能异常或缺失引发的凝血功能障碍.传统上,血友病小鼠的模型构建采用同源重组的方法,该方法虽能大片段地造成基因缺失,抑制FⅨ活性,但其耗时长,筛选纯合小鼠难度高.CRISPR为RNA介导的靶向基因编辑系统,向导RNA(guideRNA,gRNA)可以通过与靶标DNA序列结合,形成三链结构,诱导核酸内切酶Cas9对DNA进行双链切割,造成目标基因的突变.本文利用CRISPR系统,在FⅨ基因第八外显子核心功能区设计靶标,通过体外转录cas9酶及gRNA并显微注射小鼠一细胞期受精卵进行FⅨ定点的基因编辑.取出生后三周龄小鼠尾尖0.5cm抽提DNA,采用HRM(高分辨率溶解曲线)辅以Sanger测序法检测出生小鼠FⅨ基因突变情况.通过检测FⅨ蛋白表达量、激活的部分凝血活酶时间(APTT)及促凝活性(FⅨ:C)进行突变小鼠表型鉴定.纯合突变小鼠中，有两对雌雄个体具有相同的基因突变，可以直接交配得到纯合突变的子代小鼠，即显微注射两代内可获得血友病B突变纯合小鼠，构建纯和突变小鼠高效、快速。

摘要： 血友病B( hemophilia B，HB)是凝血因子Ⅸ（factorⅨ，FⅨ）基因突变引起的x连锁隐性遗传性出血性疾病。本研究采用DNA直接测序法对6个山西籍汉族无关HB家系先证者及其家系成员的FⅨ基因进行了全部外显子及其侧翼序列的检测，探讨HB家系先证者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变及分子发病机制，对进行携带者诊断。

摘要： 本发明涉及用于治疗凝血障碍的包含截短的血管性血友病因子(von Villebrand Factor，VWF)的多肽，其中所述多肽携带半衰期延长部分，并且以相对于因子VIII和/或内源性VWF摩尔过量施用。

摘要： 一种治疗外伤淤血所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：生黄芪18‑48、当归6‑15、赤芍9‑24、川芎6‑15、桃仁6‑15、红花6‑15、牡丹皮6‑15、鸡血藤6‑24、忍冬藤9‑24、土鳖虫4‑10、地龙4‑10、川牛膝9‑24。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度大大提高，而且有助于药物的吸收，从而能够提高其生物利用度。另外，本发明的药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗血热妄行所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：生地黄18‑48、知母9‑24、黄柏6‑15、黄芩6‑15、黄连4‑10、炒栀子6‑15、牡丹皮6‑15、紫草6‑15、茜草6‑15、仙鹤草9‑24、侧柏叶6‑15、生甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度大大提高，且有助于药物的吸收，从而能提高其生物利用度。另外，药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗气血双亏所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：生黄芪18‑48、党参6‑15、生白术9‑24、茯苓9‑24、陈皮6‑15、当归6‑15、阿胶6‑15、枸杞子6‑15、补骨脂6‑15、石榴皮6‑15、大枣9‑24、炙甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分溶出度大大提高，且有助于药物的吸收，从而能够提高其生物利用度。另外，药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗气虚不摄所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：生黄芪18‑48、生白术9‑24、茯苓9‑24、陈皮6‑15、当归6‑15、牡丹皮6‑15、仙鹤草18‑48、棕榈炭6‑15、艾叶炭6‑15、阿胶6‑15、侧柏叶6‑15、炙甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度大大提高，而且有助于药物的吸收，从而能够提高其生物利用度。另外，本发明的药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗虚热出血所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：生地黄12‑32、知母9‑24、玄参9‑24、黄柏6‑15、黄芩6‑15、女贞子6‑15、墨旱莲6‑15、秦艽6‑15、地骨皮6‑15、茜草9‑24、侧柏叶6‑15、牡丹皮6‑15、紫草6‑15、生甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度大大提高，而且有助于药物的吸收，从而能够提高其生物利用度。另外，本发明的药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗瘀血出血所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：当归6‑15、赤芍9‑24、川芎6‑15、丹参9‑24、三七6‑15、鸡血藤9‑24、红花6‑15、桃仁6‑15、牡丹皮6‑15、仙鹤草18‑48、茜草6‑15、生甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取的方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度大大提高，而且有助于药物的吸收，从而能提高其生物利用度。另外，药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 一种治疗热郁血分所致血友病及血管性假血友病的制剂及方法。制剂由用量为重量比的下列药物原料制成：炒栀子6‑15、牡丹皮6‑15、生大黄6‑15、白茅根18‑48、萹蓄6‑15、大蓟6‑15、小蓟6‑15、茜草9‑24、仙鹤草18‑48、侧柏叶6‑15、荆芥炭6‑15、生甘草4‑10。本发明制剂是采用水煮提取方法来提取原料药物中的有效成分，并保持其活性，这样不仅可使药物中有效成分的溶出度提高，而且有助于药物的吸收，从而能提高其生物利用度。另外，药物为纯中药复方制剂，因而患者长期服用后不会产生毒副作用，所以安全性好。此外，本发明的制备方法工艺简单，操作方便。

摘要： 用于治疗血友病的治疗产品或者药物可以通过包括如下的简单方法生产：将用于治疗血友病的凝血因子VIII(IX)的基因埋入由表达具有粒子形成能力的蛋白获得的空纳米粒子中，所述蛋白为真核细胞中的诸如乙型肝炎病毒表面抗原蛋白。如此产生的药物能够将凝血因子的基因有效地最小副作用危险地引入肝细胞。

摘要： 本主题涉及由血浆组分III制造并纯化出凝血酶原复合物浓缩剂(PCC)的静脉注射剂的方法，包括在缓冲液中将组分III糊剂复原以产生组分III悬浮液；调节组分III悬浮液的pH和温度；进行PEG沉淀；将组分III悬浮液离心并收集上清液；过滤上清液；对上清液进行溶剂去污剂病毒灭活；进行上清液的弱阴离子交换层析；两次冲洗以及两到三次洗脱；超滤上清液；调节上清液的pH；调节上清液中人因子IX的活性；进行无菌过滤和纳米过滤以去除病毒；以及填装和冻干以获得PCC的静脉注射剂。