细胞标记

摘要： 目的:探讨氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)荧光染料体外标记人牙龈间充质干细胞(hGMSCs)对其增殖、分化能力的影响以及在体内荧光标记持续时间.方法:组织块法原代培养hGMSCs,采用流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物,然后以CM-Dil标记hGMSCs,CCK-8检测标记后细胞的增殖;标记及未标记的细胞进行成骨及成脂诱导培养21 d后,分别进行茜素红染色和油红O染色.大鼠颅骨缺损实验检测CM-Dil标记的hGMSCs体内标记效果.结果:原代培养的hGMSCs高表达CD105、CD90和CD73,而阴性表达CD14、CD34、CD19、CD45和人类白细胞DR抗原(HLA-DR),符合间充质干细胞表面特征.与对照组相比,CM-Dil并不影响hGMSCs的增殖和成骨、成脂分化能力(P>0.05).体内移植的CM-Dil标记hGMSCs在第8周时仍可检测到红色荧光.结论:CM-Dil在体外标记hGMSCs不会影响hGMSCs的干细胞特性,且体内标记时间长达8周,可作为干细胞体内标记示踪的方法之一.

摘要： 目的 通过体外实验,对比氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)这两种不同细胞标记物对大鼠牙髓干细胞生物学性能的影响,为需要进行细胞标记的实验研究提供理论参考依据.方法 采用酶解组织块法培养大鼠牙髓细胞并对其进行纯化,通过免疫组化鉴定细胞来源,并进行细胞体外多向诱导分化能力实验.利用5μg/ml浓度的CM-DiI和DAPI对第3代大鼠牙髓干细胞进行体外标记,通过比较细胞增殖情况以及细胞乳酸脱氢酶释放率,评价标记后细胞生物学状态.结果 利用酶解组织块法可获得克隆集落状生长的大鼠牙髓细胞.免疫组化法确定细胞为间充质来源,且具有向脂肪细胞、成骨细胞以及成牙本质细胞分化的潜能.CM-DiI标记后细胞膜及核膜均呈现出红色荧光,DAPI则细胞核蓝染.与未进行细胞标记比较,CM-DiI和DAPI标记后细胞形态、上清液乳酸脱氢酶含量及CCK-8值均无明显变化,两组差异无统计学意义.结论 CM-DiI和DAPI操作简便、染色速度快,都可用于标记大鼠牙髓干细胞.相较DAPI而言,CM-DiI对大鼠牙髓干细胞的细胞毒性更小.

摘要： 细胞治疗作为肿瘤学研究和临床实践中的新型疗法,通过修复受损组织或替换身体缺陷细胞,在多种疾病治疗中发挥着越来越重要的作用.但对细胞治疗产品治疗疾病的机制和细胞移植后的宿主体内的分布和迁移情况并不非常清楚.细胞治疗产品的组织分布和存续时间是影响其有效性和安全性的重要因素,需进行动态观察.目前可选择的示踪技术包括影像学、聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学等技术.PCR技术和免疫组织化学技术的缺点是需要在细胞移植后处死动物,取出相应组织进行检测,存在一定的局限性.随着影像学技术的发展,正电子发射计算机断层成像、单光子发射计算机断层成像、磁共振成像和光学成像等手段为细胞移植后无创和实时评估移植细胞的分布、迁移和归巢提供了新选择.近年来,已有大量关于细胞非临床无创性示踪方法的研究.本综述主要对细胞非临床活体示踪方法的研究进展进行综述,从而为细胞治疗产品的组织分布、迁移和归巢研究提供参考.

摘要： 由于红光/近红外发射具有深层组织穿透力强、自体荧光小、对生物组织损伤小等特点,具有上述特性的碳点的制备与生物成像应用备受关注.本文以磺化四苯基卟啉为前驱体,采用溶剂热法合成近红外发射的荧光碳点(NIR-CDs).NIR-CDs的最大发射峰位于692 nm,其荧光发射具有激发波长非依赖性,经分析NIR-CDs的近红外荧光发射主要源于分子态发光.此外,NIR-CDs还具有良好的水溶性和生物相容性、丰富的表面官能团、低毒性和优异的细胞标记能力,证实了NIR-CDs在细胞近红外成像中的应用潜力.本研究有望促进面向生物应用的近红外荧光碳点的发展,推动新型碳点的研究与实际应用.

摘要： 桃李不言,下自成蹊;梅贞竹韵,不争不艳。她是北京化工大学一位普通的人民教师,又是一位杰出的青年女科学家。她寄情于新型荧光高分子材料的研究,开创性地将"荧光示踪"和"纳米载体"功能合二为一,并将其应用于细胞标记、抗癌和农业害虫防治等多个领域。

摘要： 树突状细胞(DCs)是目前已知的体内功能最强的抗原递呈细胞,是唯一能够激活初始T淋巴细胞反应的细胞,在先天性免疫、适应性免疫以及维持自身免疫耐受方面具有重要的作用,因此一直是免疫学研究的重要领域.本文简要综述了DCs的类型及其在动物体内的功能、各类DCs的细胞标记.总结了鱼类DCs的分离、纯化方法和形态学观察方法;现有研究表明,鱼类DCs具有吞噬细菌、刺激T细胞增殖、诱导CD4+T细胞的活化、表达DCs的标记基因、被Toll样受体的配体激活、迁移能力、引起混合淋巴细胞反应等生物学功能;不同鱼类DCs的分子标记并不完全一样;鱼类的头肾、肾、鳃、皮肤、胸腺、脾、肠等均有DCs的分布.目前,对鱼类DCs的研究虽然取得了一定进展,但仍有许多重要问题需要解决:①鱼类DCs目前缺乏明确的细胞标记,加强这方面的研究有助于提高鱼类DCs的分离、体内分布与功能的研究水平;②加强和完善鱼类DCs的分离、培养技术的研究,掌握各种鱼类DCs的分离培养方法;③加强鱼类DCs在抗原递呈中的功能研究,对深入分析鱼类免疫机理,合理设计和应用疫苗,具有重要的理论指导意义.

摘要： 活体细胞MR示踪成像技术能有效在体内实时、准确评价干细胞治疗心肌梗死的效果,可分为MR对比剂标记细胞成像和MR报告基因成像.自体移植干细胞治疗心肌梗死的疗法中,能标记干细胞的MR对比剂主要有以钆剂为主的顺磁性对比剂、化学交换饱和转移成像(CEST)相关对比剂以及氧化铁类对比剂;MR报告基因导入后能使细胞表达产生MR信号改变的蛋白质,以膜表面蛋白为主,包括铁蛋白受体、膜表面抗原、酶等.目前的MR细胞示踪技术对自体移植干细胞治疗的疗效评价、机制研究有一定的指导作用.

摘要： 干细胞疗法可以为多种疾病提供潜在的治疗方案.然而,限制其临床应用的主要原因在于缺乏一种长期、有效标记干细胞的手段,并能追踪移植后干细胞的行为且不损伤干细胞功能.本研究开发了一种基于NaYF4:Yb3+,Er3+上转换纳米颗粒的非侵入式荧光探针，通过表面改性可显著提高荧光探针的稳定性、生物相容性和干细胞标记效率。结果表明，50μg/mL纳米颗粒荧光探针具有最佳生物相容性，并能够在骨髓间充质干细胞的整个分化周期内对其进行长期、稳定地追踪。该研究为开发基于镧系元素掺杂的上转换纳米颗粒荧光探针应用于干细胞标记和追踪提供了有效的实验数据，有助于理解干细胞治疗以及组织工程应用中干细胞命运决定的机理。

摘要： 采用微波加热的方法，通过优化前驱体溶液中CdCl2、巯基乙酸、KTeH4的比例，改变前驱体溶液的pH值和微波加热的温度及时间，快速合成了水溶性CdTe/Cds核/壳结构的量子点。利用紫外-可见吸收光谱、荧光发射光谱、透射电子显微镜、X-射线光谱表征了量子点的光学特性、粒径和结构。利用该量子点作为荧光探针标记了狗肾细胞(MDCK)，并用流式细胞仪对用于标记细胞的量子点的浓度进行了选择，用荧光显微镜对标记后的细胞进行了表征。结果表明，该探针具有较好的细胞相容性，在生物标记方面具有良好的应用前景。

摘要： 带电荷的有机染料通过静电力作用复合到PMMA纳米球上，得到了光稳定性好、泄露小的荧光复合纳米球，这种复合纳米球在标记癌细胞时表现了很好的效果。

摘要： 本文阐述了生物分子(多肽或蛋白质)功能化的金-三氧化二铁壳核(Fe2O3@Au)纳米粒子对活细胞标记及成像研究。本研究中,利用生物素修饰的多肽,CALNNGK(biotin)G,来实现Fe2O3@Au纳米粒子的稳定性。通过生物素(biotin)与亲和素(avidin streptavidin)的亲和反应将具有特定功能的生物分子连接到粒子表面,实现粒子的功能化,利用明/暗场显微镜和透射电子显微镜(TEM)研究显示：(ⅰ)多肽RRRRRRRR(Rg)修饰的Fe2O3@Au磁性纳米粒子可作为低毒性的细胞传递探针；(ⅱ)标记了表皮生长因子受体抗体(anti-EGFR)的Fe2O3@Au磁性纳米粒子能与相应细胞表面抗原作用实现细胞的识别与分离。

摘要： 目的: 研究子宫血管周上皮样肿瘤的病理学特征、诊断、鉴别诊断和生物学行为.方法: 对5例子宫血管周上皮样细胞肿瘤进行常规组织学和免疫组化染色和观察,对患者进行随访,并广泛复习国内外文献.结果: 5例肿瘤光镜下均由透明或嗜酸细胞巢或宽窄不等的细胞索组成,间质有丰富的小血管和程度不等的透明变.免疫组化染色示5例瘤细胞均黑色素细胞标记阳性和程度不等的desmin和SMA阳性,CK和CD10阴性.5例患者随访时间不长,现均存活.结论: 子宫血管周上皮样细胞肿瘤是一种罕见的子宫间叶肿瘤,属PEComa范畴,有较特征的病理组织学和免疫组化特点,应与透明细胞癌和上皮样平滑肌肿瘤区别,黑色素细胞标记阳性对诊断有重要作用.复习文献知该肿瘤有良、恶性潜能不能确定和恶性3类.

摘要： 目的：拟通过标记间充质干细胞后检测细胞活性、染料标记率、光强度同细胞数线性关系等指标,对DiR染料标记细胞的方法进行验证.并应用此方法进行间充质干细胞在小鼠体内的生物分布的研究.rn 方法：实验主要从细胞活性、标记率等方面来对该方法的可行性进行验证。rn 结果：在本实验中随着染料浓度的增加，光强度先上升后下降。而阴性对照未见到明显发光现象。5ug/ml中光强度达到最大值，为最佳浓度。染料标记率实验中结果显示，DiR染料对间充质干细胞的标记率为99.59%。细胞活性实验中，染料阳性组同阴性对照(DiR-)组的细胞活性无明显差异(P>0.05 )。光强度一细胞数线性关系实验，光强度随着细胞数的增加而增加·，相关系数R2数值为0.9971，表明二者线性良好，体内检测时光强度的大小可表示细胞数的多少。体内可行性实验中，空白对照未见非特异性荧光，实验组动物可见清晰的荧光信号。rn 结论：利用DiR荧光染料标记细胞，结合小动物活体成像技术可以直观、灵敏地检测间充质干细胞在小鼠体内的生物分布情况。

摘要： 目的：拟通过标记间充质干细胞后检测细胞活性、染料标记率、光强度同细胞数线性关系等指标,对DiR染料标记细胞的方法进行验证.并应用此方法进行间充质干细胞在小鼠体内的生物分布的研究.rn 方法：实验主要从细胞活性、标记率等方面来对该方法的可行性进行验证。rn 结果：在本实验中随着染料浓度的增加，光强度先上升后下降。而阴性对照未见到明显发光现象。5ug/ml中光强度达到最大值，为最佳浓度。染料标记率实验中结果显示，DiR染料对间充质干细胞的标记率为99.59%。细胞活性实验中，染料阳性组同阴性对照(DiR-)组的细胞活性无明显差异(P>0.05 )。光强度一细胞数线性关系实验，光强度随着细胞数的增加而增加·，相关系数R2数值为0.9971，表明二者线性良好，体内检测时光强度的大小可表示细胞数的多少。体内可行性实验中，空白对照未见非特异性荧光，实验组动物可见清晰的荧光信号。rn 结论：利用DiR荧光染料标记细胞，结合小动物活体成像技术可以直观、灵敏地检测间充质干细胞在小鼠体内的生物分布情况。

摘要： 目的：拟通过标记间充质干细胞后检测细胞活性、染料标记率、光强度同细胞数线性关系等指标,对DiR染料标记细胞的方法进行验证.并应用此方法进行间充质干细胞在小鼠体内的生物分布的研究.rn 方法：实验主要从细胞活性、标记率等方面来对该方法的可行性进行验证。rn 结果：在本实验中随着染料浓度的增加，光强度先上升后下降。而阴性对照未见到明显发光现象。5ug/ml中光强度达到最大值，为最佳浓度。染料标记率实验中结果显示，DiR染料对间充质干细胞的标记率为99.59%。细胞活性实验中，染料阳性组同阴性对照(DiR-)组的细胞活性无明显差异(P>0.05 )。光强度一细胞数线性关系实验，光强度随着细胞数的增加而增加·，相关系数R2数值为0.9971，表明二者线性良好，体内检测时光强度的大小可表示细胞数的多少。体内可行性实验中，空白对照未见非特异性荧光，实验组动物可见清晰的荧光信号。rn 结论：利用DiR荧光染料标记细胞，结合小动物活体成像技术可以直观、灵敏地检测间充质干细胞在小鼠体内的生物分布情况。

摘要： 目的：拟通过标记间充质干细胞后检测细胞活性、染料标记率、光强度同细胞数线性关系等指标,对DiR染料标记细胞的方法进行验证.并应用此方法进行间充质干细胞在小鼠体内的生物分布的研究.rn 方法：实验主要从细胞活性、标记率等方面来对该方法的可行性进行验证。rn 结果：在本实验中随着染料浓度的增加，光强度先上升后下降。而阴性对照未见到明显发光现象。5ug/ml中光强度达到最大值，为最佳浓度。染料标记率实验中结果显示，DiR染料对间充质干细胞的标记率为99.59%。细胞活性实验中，染料阳性组同阴性对照(DiR-)组的细胞活性无明显差异(P>0.05 )。光强度一细胞数线性关系实验，光强度随着细胞数的增加而增加·，相关系数R2数值为0.9971，表明二者线性良好，体内检测时光强度的大小可表示细胞数的多少。体内可行性实验中，空白对照未见非特异性荧光，实验组动物可见清晰的荧光信号。rn 结论：利用DiR荧光染料标记细胞，结合小动物活体成像技术可以直观、灵敏地检测间充质干细胞在小鼠体内的生物分布情况。

摘要： 随着MR技术的进步，MR空间分辨率高进一步提高，在移植医学领域运用越来越多。本文分析了MR技术的运用对器官移植形态学评估发展的影响，并就其在移植医学的应用进行浅谈。MR在对移植细胞的分子成像方面，对比剂的运用为细胞移植做出了巨大的贡献；利用MR具有极高的空间分辨率，可以活体检测单个分子的体内信号变化，在体内分子成像上具有明显的优势，具有广泛的临床运用前景。针对于MR已经开发出多种MR靶向对比剂，特别是MR纳米对比剂的开发成了目前分子影像研究的热门课题，是分子影像研究的核心。

摘要： 一类共价键连接标记细胞的荧光探针和跟踪标记细胞的方法，涉及细胞荧光探针。一类共价键连接标记细胞的荧光探针由共价连接部分和荧光基团部分组成；荧光基团可以是任何荧光基团，所述荧光基团可以是任何文献报导过的荧光基团的衍生物，所述荧光基团的衍生物可选自罗丹明、香豆素、荧光素等中的一种，通过在荧光基团上引出一个伯胺基或仲胺基来实现与共价连接部分的键连，由此实现多色的、多功能的共价标记细胞。所述共价标记细胞的特异性为所述荧光探针只能够与细胞内蛋白反应而不与细胞培养基中的蛋白反应。所述共价连接部分中共价标记为探针与细胞内蛋白质形成化学键连接。可应用于长时间、特异性跟踪标记细胞，对细胞毒性小。

摘要： 一类共价键连接标记细胞的荧光探针和跟踪标记细胞的方法，涉及细胞荧光探针。一类共价键连接标记细胞的荧光探针由共价连接部分和荧光基团部分组成；荧光基团可以是任何荧光基团，所述荧光基团可以是任何文献报导过的荧光基团的衍生物，所述荧光基团的衍生物可选自罗丹明、香豆素、荧光素等中的一种，通过在荧光基团上引出一个伯胺基或仲胺基来实现与共价连接部分的键连，由此实现多色的、多功能的共价标记细胞。所述共价标记细胞的特异性为所述荧光探针只能够与细胞内蛋白反应而不与细胞培养基中的蛋白反应。所述共价连接部分中共价标记为探针与细胞内蛋白质形成化学键连接。可应用于长时间、特异性跟踪标记细胞，对细胞毒性小。

摘要： 本发明涉及细胞/配体特异性标记系统，所述系统的特征在于，它包含：(a)内皮前体细胞(EPC)，其含选自由Eph(尤其是EphB4或EphB1)组成的组的细胞标记物，和(b)L-K结构的蛋白材料，其由特异针对所述标记物、并与结合蛋白(K)相连或融合的配体(L)组成，所述系统能提供EPC-Eph-L-K结构的促血管生成的细胞材料。本发明还涉及作为能刺激血管生成的产品的细胞材料、其制备方法和其治疗用途，尤其用于血管机能不全方面。

摘要： 本发明涉及活细胞检测技术领域，尤其涉及一种RNA标记物及包含该标记物的活细胞标记方法和应用。所述方法包括标记待测基因，具体为使用RNA标记物一对一地标记待检测基因，所述RNA标记物包含多个茎环结构；其中，每个茎环结构独立地选自两种不同的茎环结构；任意两个不同的RNA标记物之间，所述两种不同的茎环结构中的任一种占自身茎环结构总数比例的差值为15～50％。本发明利用不同的RNA茎环结构标记基因后相对荧光强度和绝对荧光强度不同的原理实现了同时对更多种mRNA的标记和观测，拓展了可用的mRNA标记物数量，节约了所用荧光蛋白种类，对于复杂的基因网络的成像和生物学过程研究具有重要意义。

摘要： 本发明涉及细胞/配体特异性标记系统，所述系统的特征在于，它包含：(a)内皮前体细胞(EPC)，其含选自由Eph(尤其是EphB4或EphB1)组成的组的细胞标记物，和(b)L－K结构的蛋白材料，其由特异针对所述标记物、并与结合蛋白(K)相连或融合的配体(L)组成，所述系统能提供EPC－Eph－L－K结构的促血管生成的细胞材料。本发明还涉及作为能刺激血管生成的产品的细胞材料、其制备方法和其治疗用途，尤其用于血管机能不全方面。

摘要： 本发明提出了一种粒细胞和单核细胞标记系统，所述标记系统包括Ms4a3基因、IRES‑Cre重组酶和LoxP‑Stop‑LoxP‑reporter报告系统。所述Ms4a3基因为粒细胞和单核细胞前体所特异性表达的基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提出了所述标记系统的构建方法以及检测方法。本发明还提出所述系统在造血系统发育、免疫细胞发育和功能、肿瘤学研究等方面的广泛应用。

摘要： 本发明涉及医药技术研究领域，提出了前列腺癌干细胞标志物、抗体OV6在制备前列腺癌干细胞标记材料中的应用及标记方法。本发明的标记方法用小鼠源性OV6抗体标记前列腺癌细胞系或前列腺癌组织细胞；然后与大鼠抗小鼠IgG、磁性微珠一起孵育；接着置于MACS MS柱上进行过滤分离，得到OV6阳性前列腺癌细胞；最后，采用流式细胞术检测OV6阳性前列腺癌细胞标记效率。进一步地，在用小鼠源性OV6抗体标记前，用恩杂鲁胺进行药物刺激，以增强标记效果。本发明能够对前列腺癌干细胞进行显著标记，OV6阳性细胞具有高表达干性相关基因，高成球率和高成瘤率。本发明的标记方法具有较高的特异性和敏感性，具有重要的临床价值。

摘要： 本发明提供一种用于检测、分离识别间充质干细胞的标记以及采用该标记检测、分离识别间充质干细胞的方法。序列表所示基因在间充质干细胞中特异表达。该基因构成作为检测间充质干细胞的标记。尤其是，本发明含有用于检测该间充质干细胞标记基因的探针，以及在检测该间充质干细胞基因标记时扩增被检细胞所述基因的PCR所使用的引物，还含有本发明的间充质干细胞标记基因表达的多肽构成的用于检测间充质干细胞的多肽标记、用于检测该多肽标记的与该多肽标记特异结合的抗体，尤其是含有一种采用用于检测间充质干细胞标记基因的探针、与多肽标记特异结合的抗体对间充质干细胞进行识别、分离的方法。

摘要： 本发明提供一种用于检测、分离识别间充质干细胞的标记以及采用该标记检测、分离识别间充质干细胞的方法。序列表所示基因在间充质干细胞中特异表达。该基因构成作为检测间充质干细胞的标记。尤其是，本发明含有用于检测该间充质干细胞标记基因的探针，以及在检测该间充质干细胞基因标记时扩增被检细胞所述基因的PCR所使用的引物，还含有本发明的间充质干细胞标记基因表达的多肽构成的用于检测间充质干细胞的多肽标记、用于检测该多肽标记的与该多肽标记特异结合的抗体，尤其是含有一种采用用于检测间充质干细胞标记基因的探针、与多肽标记特异结合的抗体对间充质干细胞进行识别、分离的方法。

摘要： 本发明涉及活细胞检测技术领域，尤其涉及一种RNA标记物及包含该标记物的活细胞标记方法和应用。所述方法包括标记待测基因，具体为使用RNA标记物一对一地标记待检测基因，所述RNA标记物包含多个茎环结构；其中，每个茎环结构独立地选自两种不同的茎环结构；任意两个不同的RNA标记物之间，所述两种不同的茎环结构中的任一种占自身茎环结构总数比例的差值为15～50％。本发明利用不同的RNA茎环结构标记基因后相对荧光强度和绝对荧光强度不同的原理实现了同时对更多种mRNA的标记和观测，拓展了可用的mRNA标记物数量，节约了所用荧光蛋白种类，对于复杂的基因网络的成像和生物学过程研究具有重要意义。